DB33T 2333-2021 飼料中β-胡蘿卜素的測定 高效液相色譜法

CCSB20DB33浙江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB33/T2333—2021請注意本標準的某些內容可能涉及專利。本標準的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。本標準由浙江省畜牧獸醫(yī)和飼料標準化技術委員會（ZJQS/TC33本標準起草單位：浙江省動物疫病預防控制中心（浙江省獸藥飼料監(jiān)DB33/T2333—20211飼料中β-胡蘿卜素的測定高效液相色譜法本標準規(guī)定了飼料中β-胡蘿卜素的高效液相色譜本標準適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補充料、GB/T6682-2008分析實驗室用水規(guī)格和試驗5.1水：GB/T6682-2008，一級。5.5石油醚（沸程30℃~60℃)。5.10L-抗壞血酸乙醇溶液：稱取L-抗壞血酸0.5g，加4mL水加熱溶解，用無水乙醇稀釋至100mL混5.1150%氫氧化鉀溶液：稱取氫DB33/T2333—202125.13標準儲備溶液（500μg/mL稱取全反式β-胡蘿卜素標準品（CAS：7235-40-7，純度不低于95%）50mg（精確至0.01mg）至100mL棕色容量瓶中，加入10mL二氯甲烷（5.4）溶解，（5.4）稀釋并定容至刻度，混勻，每次臨用前按附錄A標定。-20℃保存，有效期5.14標準中間溶液（100μg/mL精確移取β-胡蘿卜素標準儲備溶液（5.13）10.0mL于506.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器/二極管陣6.2分析天平：感量分別為0.001g和0.0按GB/T20195制備試樣，至少200平行做兩份試驗。稱取試樣配合飼料、精料補充料、濃縮飼料2g～5g或添加劑預混合飼料0.2g~醇溶液（5.10）50mL使試樣完全分散、浸濕），加熱超聲皂化20min，不時振蕩防止試樣粘附在瓶底和瓶壁上，皂化結束后取出迅速冷卻至室DB33/T2333—202138.4.1.1色譜柱：SB-C18柱，柱長250mm，內徑4.6mm，粒徑5.0μm，或性能相當8.4.1.2流動相：甲醇+異丙醇+二氯甲烷=80+1準溶液的液相色譜圖見附錄B。以β-胡蘿卜素標準系列溶液中的濃度為橫坐標，色譜的相關系數(shù)應不低于0.999。試樣溶液與標準溶液中β-胡蘿卜素的響應值均應在儀器檢測的線性范圍內，如超出線性范圍，應將試樣提取液用流動相稀釋（稀釋倍數(shù)n）至線性范圍內，重新測定。單點校準定量時，試樣溶液中β-胡蘿卜素的濃度與標準溶液濃度相9試驗數(shù)據(jù)處理Wn……………………（1）式中:W——試樣中β-胡蘿卜素的含量，單位為毫克每千克（mg/kgC——從標準曲線查得的試樣溶液中β-胡蘿卜素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mLV——試樣提取溶液的總體積，單位為毫升（mLV1——旋轉蒸發(fā)時所用試樣提取液的體積，單位為毫升（mLV2——旋轉蒸發(fā)后復溶液的體積，單位為毫升（mLm——試樣質量，單位為克（gn——超出線性范圍后，需要進一步稀釋的倍數(shù)。DB33/T2333—2021Wn……………（2）W——試樣中β-胡蘿卜素的含量，單位為毫克每千克（mg/kgCS——標準溶液中β-胡蘿卜素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mLV——試樣提取溶液的總體積，單位為毫升（mLV1——旋轉蒸發(fā)時所用試樣提取液的體積，單位為毫升（mLV2——旋轉蒸發(fā)后復溶液的體積，單位為毫升（mLm——試樣質量，單位為克（gn——超出線性范圍后，需要進一步稀釋的倍數(shù)。9.2結果的表示在重復性條件下，兩次獨立測定結果與其算術平均值的絕對差值不大于該算術平均值的10%。DB33/T2333—20215混勻。比色皿厚度為1cm,以正己烷（5.6）為空白,用分溶液濃度按式(A.1)計算:式中:X——β-胡蘿卜素標準儲備溶液的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL)；A——β-胡蘿卜素標準儲備溶液的紫外吸光值；E——β-胡蘿卜素在正己烷中的比吸光系數(shù)為0.2620；——測定過程中稀釋倍數(shù)的