第十一章 分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用課件

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用

1953年Watson和Crick提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型

1990年人類基因組計(jì)劃正式啟動(dòng)

2001年2月科學(xué)家宣布完成人類基因組的全部序列圖第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用

分子診斷不僅能早期對(duì)疾病作出確切的診斷，也能確定個(gè)體對(duì)疾病的易感性，判別致病基因攜帶者并對(duì)疾病的分期、分型、療效監(jiān)測(cè)和預(yù)后作出判斷?

分子診斷已成為實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的一個(gè)重要組成部分第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第一節(jié)標(biāo)本來(lái)源

第二節(jié)分子生物學(xué)技術(shù)在病原生物基因組相關(guān)疾病研究和診斷中的應(yīng)用

第三節(jié)分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在疾病研究和診斷中的應(yīng)用第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第一節(jié)標(biāo)本來(lái)源

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用DNA或RNA

來(lái)自外周血、體液、分泌物和組織如毛發(fā)、皮膚、肌肉、器官、腫瘤組織等產(chǎn)前基因診斷標(biāo)本：羊水細(xì)胞（16周～20周）絨毛膜細(xì)胞（7周～9周）第一節(jié)標(biāo)本來(lái)源

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第二節(jié)分子生物學(xué)技術(shù)在病原生物基

因組相關(guān)疾病研究和診斷中的應(yīng)用

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第二節(jié)分子生物學(xué)技術(shù)在病原生物基因組相關(guān)疾病研究和診斷中的應(yīng)用

一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

二、耐藥監(jiān)測(cè)與分子流行病學(xué)調(diào)查三、醫(yī)院獲得性感染的監(jiān)測(cè)與控制

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在感染性疾病中的應(yīng)用主要包括對(duì)病原生物進(jìn)行鑒定、分型、耐藥診斷和治療過(guò)程中的療效監(jiān)測(cè)等檢測(cè)核酸分子或蛋白質(zhì)分子目前已經(jīng)應(yīng)用于一些重要的感染性疾病，如結(jié)核病、病毒性肝炎、艾滋病、SARS、人禽流感等第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

（一）結(jié)核分枝桿菌（二）乙型肝炎病毒

（三）人類免疫缺陷病毒（四）SARS冠狀病毒（五）人禽流感病毒第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

（一）結(jié)核分枝桿菌1.生物學(xué)特性與致病性2.基因組特點(diǎn)3.結(jié)核分枝桿菌核酸的檢測(cè)第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（一）結(jié)核分枝桿菌1.生物學(xué)特性與致病性結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群包括人結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌和田鼠分枝桿菌，其中前三者對(duì)人類致病人型結(jié)核分枝桿菌感染的發(fā)病率最高一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)緩慢，增殖一代需15～20小時(shí)，生長(zhǎng)成可見菌落一般需4～6周在組織細(xì)胞內(nèi)大量繁殖引起炎癥，菌體成分和代謝物質(zhì)的毒性以及菌體成分誘發(fā)的機(jī)體免疫損傷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

2.基因組特點(diǎn)共價(jià)封閉環(huán)狀結(jié)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)株結(jié)核分枝桿菌基因組全長(zhǎng)4.4kb,包含4000個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因和50個(gè)RNA編碼基因

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

(1)重復(fù)序列：如IS6110，僅存于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群細(xì)菌染色體上長(zhǎng)1355bp的重復(fù)插入序列，具有復(fù)合群特異性

(2)蛋白質(zhì)編碼基因

(3)rRNA基因：每個(gè)細(xì)胞約含有103～104個(gè)rRNA，含有結(jié)核分枝桿菌高度保守的序列，也有分枝桿菌種特異性序列第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)3.結(jié)核分枝桿菌核酸的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢查手段主要包括標(biāo)本直接涂片染色鏡檢、分離培養(yǎng)鑒定以及血清學(xué)抗原檢測(cè)方法分子生物學(xué)理論和技術(shù)已經(jīng)用于分枝桿菌的分子結(jié)構(gòu)和功能的研究中，并開始用于臨床菌種和耐藥株的鑒定及監(jiān)測(cè)第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)PCR菌種鑒定法PCR直接測(cè)序鑒定法PCR-DNA探針鑒定法PCR-基因芯片法(1)結(jié)核分枝桿菌菌種鑒定：第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)(2)藥物敏感性試驗(yàn)與耐藥基因檢測(cè)：縮短培養(yǎng)和鑒定的時(shí)間，及時(shí)指導(dǎo)臨床選藥藥物敏感性試驗(yàn)直接檢測(cè)耐藥基因第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

（二）乙型肝炎病毒

1.生物學(xué)特性及致病性2.乙型肝炎病毒核酸的檢測(cè)

3.變異株與耐藥突變檢測(cè)第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用1.生物學(xué)特性及致病性HBV對(duì)外界環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)，且傳染性較強(qiáng)輸血或注射是重要的傳播途徑HBV感染后潛伏期約2～6個(gè)月，HBVDNA在肝細(xì)胞內(nèi)以游離DNA和整合到宿主細(xì)胞染色體的方式存在HBV分為8個(gè)基因型，A～H型一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用2.乙型肝炎病毒核酸的檢測(cè)

（1）熒光定量PCR技術(shù)：測(cè)定HBV病毒載量

HBVDNA

107拷貝/毫升，提示病毒復(fù)制活躍

HBVDNA<103拷貝/毫升、HBeAg轉(zhuǎn)為陰性，ALT

正常的病人預(yù)后相對(duì)較好一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用

（2）支鏈DNA（bDNA）技術(shù)：一種核酸探針雜交標(biāo)志信號(hào)放大技術(shù)。優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性和重復(fù)性較好，結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)單，將待測(cè)病毒裂解釋放核酸后變性為單鏈，即可進(jìn)行檢測(cè)。缺點(diǎn)：敏感性較低、檢測(cè)范圍窄而不適用于低水平病毒的檢測(cè)。一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用3.變異株與耐藥突變檢測(cè)

HBV可能發(fā)生自然變異HBV在人體活疫苗接種和抗病毒治療等壓力下發(fā)生變異HBV基因組的變異常引起病毒生物學(xué)特性的改變，從而導(dǎo)致HBV感染發(fā)病機(jī)制的變化、血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)的改變以及免疫逃逸，給乙型肝炎的診斷和治療帶來(lái)困難一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用HBV耐藥突變類型及其核苷酸、氨基酸變化第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

（三）人類免疫缺陷病毒1.形態(tài)結(jié)構(gòu)與致病性2.HIV核酸檢測(cè)第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用1.形態(tài)結(jié)構(gòu)與致病性HIV根據(jù)血清學(xué)反應(yīng)和病毒核酸序列分為

HIV-1型、HIV-2型HIV結(jié)構(gòu)分為包膜、核心一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用HIV直接或間接損傷CD4+T細(xì)胞HIV抑制抗原遞呈細(xì)胞功能HIV誘發(fā)自身免疫性疾病及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡HIV導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞喪失抗病毒活性等一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

HIV感染以侵犯CD4+T細(xì)胞為主第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用原位雜交PCRNASBA技術(shù)bDNA技術(shù)熒光定量RT-PCR技術(shù)一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

2.HIV核酸的檢測(cè)的分子生物學(xué)方法第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（四）SARS冠狀病毒

從SARS病人體內(nèi)分離到的冠狀病毒與任何以往確定特征的冠狀病毒關(guān)系不密切，且該病毒的有限區(qū)域的復(fù)制酶（rep）基因序列與其它冠狀病毒明顯不同，因而被稱為SARS相關(guān)冠狀病毒。一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用SARS相關(guān)冠狀病毒的檢測(cè)

WHO推薦SARS-CoV特異性檢測(cè)方法：分子生物學(xué)檢測(cè)免疫學(xué)檢測(cè)細(xì)胞分離培養(yǎng)一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)免疫學(xué)方法難以在感染的窗口期對(duì)病毒感染進(jìn)行早期檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)所需時(shí)間較長(zhǎng)，分離陽(yáng)性率不高PCR方法可以確診早期疑似病人，但PCR試驗(yàn)陰性并不能說(shuō)明沒(méi)有SARS-CoV感染第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（五）人禽流感病毒

人禽流行性感冒（簡(jiǎn)稱人禽流感）是由禽甲型流感病毒某些亞型的毒株引起的急性呼吸道傳染病，感染者大多因多臟器功能衰竭而死亡。一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（五）人禽流感病毒一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)

1.病原學(xué)特征及致病性2.人禽流感病毒的檢測(cè)第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)1.病原學(xué)特征及致病性禽流感病毒屬甲型流感病毒，基因組為單股負(fù)鏈RNA依外膜血凝素（H）和神經(jīng)氨酸酶（N）蛋白抗原性的不同，可分為15個(gè)H亞型和9個(gè)N亞型感染人的禽流感病毒亞型主要為H5N1、H9N2、H7N7，其中感染H5N1的患者病情最重第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測(cè)2.人禽流感病毒的檢測(cè)

(1)病毒核酸檢測(cè)：RT-PCR技術(shù)從病人呼吸道標(biāo)本中檢測(cè)禽流感病毒亞型特異性H抗原基因。

(2)病毒抗原蛋白質(zhì)分子檢測(cè)：取病人呼吸道標(biāo)本采用免疫熒光法檢測(cè)甲型流感病毒核蛋白抗原及禽流感病毒H亞型抗原。第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用二、耐藥監(jiān)測(cè)與分子流行病學(xué)調(diào)查（一）耐藥突變檢測(cè)（二）分子流行病學(xué)調(diào)查第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用二、耐藥監(jiān)測(cè)與分子流行病學(xué)調(diào)查PCR-RFLPSSCPDGGEPCR-反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)DNA序列分析芯片技術(shù)等（一）耐藥突變檢測(cè)第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用二、耐藥監(jiān)測(cè)與分子流行病學(xué)調(diào)查追蹤和控制傳染源及可能的傳播途徑確定同一病人反復(fù)感染是源于復(fù)發(fā)或再感染明確某一菌株是否與某些臨床表現(xiàn)相關(guān)，從而發(fā)現(xiàn)其特殊的傳播和致病機(jī)制（二）分子流行病學(xué)調(diào)查第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用二、耐藥監(jiān)測(cè)與分子流行病學(xué)調(diào)查1.IS6110RFLP2.間隔區(qū)寡核苷酸探針?lè)中图夹g(shù)

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用二、耐藥監(jiān)測(cè)與分子流行病學(xué)調(diào)查

1.IS6110RFLPIS6110重復(fù)序列探針被稱為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群分型的金標(biāo)準(zhǔn)。檢測(cè)步驟：細(xì)菌培養(yǎng)提取基因組DNAPvuⅡ限制性酶水解Southern印跡IS6110探針雜交第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用二、耐藥監(jiān)測(cè)與分子流行病學(xué)調(diào)查

2.間隔區(qū)寡核苷酸探針?lè)中图夹g(shù)直接重復(fù)序列只在結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群細(xì)菌染色體的某一位置出現(xiàn)，由多個(gè)高度保守的36bp的序列組成，其間被高度保守的34～41bp非重復(fù)的短序列間隔開36bp重復(fù)序列出現(xiàn)的次數(shù)和某些間隔序列的出現(xiàn)或消失在不同菌株表現(xiàn)出可變性第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用三、醫(yī)院獲得性感染的監(jiān)測(cè)與控制

醫(yī)院感染，又稱院內(nèi)感染，是指病人入院時(shí)尚未感染，也不處于感染的潛伏期，而是在入院以后（通常指入院48小時(shí)后）引起的感染，以及在醫(yī)院內(nèi)獲得但在出院后才發(fā)生的感染第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第三節(jié)分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在疾病研究

和診斷中的應(yīng)用第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用第三節(jié)分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在疾病研究和診斷中的應(yīng)用一、單基因遺傳性疾病的基因診斷三、多基因病的分子診斷四、在線粒體遺傳病中的應(yīng)用五、在白血病中的應(yīng)用六、分子生物學(xué)在HLA配型中的應(yīng)用二、單基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、單基因遺傳性疾病的基因診斷

（一）單基因疾病中常見的分子異常

（二）遺傳性疾病基因診斷的策略

（三）基因診斷所采用的技術(shù)

（四）遺傳標(biāo)志的選擇

（五）間接診斷的局限第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（一）單基因疾病中常見的分子異常由于一個(gè)（或數(shù)個(gè)）基因發(fā)生異常導(dǎo)致這些基因所載有的遺傳信息改變基因突變主要包括三大類：點(diǎn)突變、片段性突變和動(dòng)態(tài)性突變一、單基因遺傳性疾病的基因診斷

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、單基因遺傳性疾病的基因診斷

1.點(diǎn)突變2.片段性突變3.動(dòng)態(tài)性突變

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用

1.點(diǎn)突變點(diǎn)突變：DNA分子中單個(gè)堿基的替換終止密碼子突變：點(diǎn)突變導(dǎo)致提前產(chǎn)生終止密碼，或終止密碼突變而編碼一個(gè)氨基酸使肽鏈延長(zhǎng)一、單基因遺傳性疾病的基因診斷

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、單基因遺傳性疾病的基因診斷各種點(diǎn)突變所造成的后果：

蛋白質(zhì)分子量改變蛋白質(zhì)合成量下降無(wú)蛋白質(zhì)合成第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用2.片段性突變核苷酸的丟失和增多缺失：基因中堿基（遺傳物質(zhì)）的丟失插入：外來(lái)基因片段插入某一基因序列中倍增：基因內(nèi)部某一段序列發(fā)生重復(fù)一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用3.動(dòng)態(tài)性突變

以三核苷酸為單位的重復(fù)序列，在傳遞過(guò)程中不穩(wěn)定，會(huì)發(fā)生擴(kuò)展，即子代的重復(fù)次數(shù)往往較親代大為增加，因此又稱動(dòng)態(tài)性突變。脆性X綜合征：CGG重復(fù)。少年脊髓型共濟(jì)失調(diào)：GAA重復(fù)。

……一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、單基因遺傳性疾病的基因診斷（二）遺傳性疾病基因診斷的策略1.直接診斷策略2.間接診斷策略第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（二）遺傳性疾病基因診斷的策略1.直接診斷策略 基因診斷的直接策略就是通過(guò)各種分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)基因的遺傳缺陷，因此直接診斷的前提是被檢測(cè)基因的正常序列和結(jié)構(gòu)必須被闡明。直接診斷是直接揭示遺傳缺陷，因而比較可靠。

一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用2.間接診斷策略

間接診斷的實(shí)質(zhì)是在家系中進(jìn)行連鎖分析，通過(guò)分析可確定個(gè)體是否存在雙親同源染色體中的致病染色體間接診斷不是尋找DNA的遺傳缺陷，而是通過(guò)分析DNA的遺傳標(biāo)志的多態(tài)性估計(jì)被檢者患病的可能性一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用連鎖分析(linkageanalysis):

是通過(guò)用一系列覆蓋密度適當(dāng)?shù)倪z傳標(biāo)志在先證者家系中進(jìn)行分析，從而找到與某一遺傳標(biāo)志緊密連鎖的致病基因，并確定該基因在染色體上的位置一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（三）基因診斷所采用的技術(shù)一、單基因遺傳性疾病的基因診斷2.基因表達(dá)異常的檢測(cè)3.間接診斷所采用的技術(shù)1.直接診斷所采用的技術(shù)第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用1.直接診斷所采用的技術(shù)Southern印跡技術(shù)多重PCR技術(shù)PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）等位基因特異性寡核苷酸（ASO）DNA芯片技術(shù)（DNAchip）單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）變性梯度凝膠電泳（DGGE）DNA序列分析（DNAsequencing）一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用2.基因表達(dá)異常的檢測(cè)定量PCR技術(shù)DNA結(jié)合染料技術(shù)水解探針技術(shù)技術(shù)雜交探針技術(shù)一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用3.間接診斷所采用的技術(shù)

間接診斷就是分析DNA的遺傳標(biāo)志的多態(tài)性（1）限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）第一代DNA的遺傳標(biāo)志，具雙等位基因多態(tài)性，所含信息量有限。檢測(cè)方法：Southern印跡技術(shù)、PCR-RFLP。一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用

（2）小衛(wèi)星序列串聯(lián)重復(fù)可變數(shù)目（VNTR），以6～70bp為單位，可重復(fù)數(shù)次至數(shù)十次，以串聯(lián)形式排列，構(gòu)成數(shù)量可變的串聯(lián)重復(fù)序列。等位基因常常達(dá)10個(gè)以上，信息量比RFLP大得多。檢測(cè)方法：Southern印跡技術(shù)、PCR技術(shù)。一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用一、單基因遺傳性疾病的基因診斷

（3）微衛(wèi)星序列

以2～6bp為單位，重復(fù)次數(shù)可達(dá)幾十次，又稱短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)，在基因組中出現(xiàn)的數(shù)目和頻率不同，分布廣泛，具高度多態(tài)性，屬于第二代的遺傳學(xué)標(biāo)志。檢測(cè)方法：PCR技術(shù)、基因掃描。一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（4）單核苷酸多態(tài)性(SNP)

第三代DNA的遺傳標(biāo)志，其多態(tài)性僅表現(xiàn)為單個(gè)核苷酸的變異，在人類基因組中的數(shù)目可達(dá)300萬(wàn)個(gè)，由3～4個(gè)相鄰的標(biāo)志便可構(gòu)成8～16種單倍型，是一種信息量非常大的標(biāo)志系統(tǒng)。檢測(cè)方法：DNA芯片技術(shù)。一、單基因遺傳性疾病的基因診斷一、單基因遺傳性疾病的基因診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（四）遺傳標(biāo)志的選擇

選擇離致病基因最近的遺傳標(biāo)志遺傳標(biāo)志離致病基因的距離越遠(yuǎn)，二者間發(fā)生重組的可能性越大，二者間距離為1cM(106bp)時(shí)，發(fā)生重組的概率為1%一、單基因遺傳性疾病的基因診斷

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（五）間接診斷的不確定性遺傳標(biāo)志所帶的信息有限新突變基因重組家系成員不夠完整一、單基因遺傳性疾病的基因診斷

第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用二、單基因病的分子診斷單基因遺傳病是由于某一基因結(jié)構(gòu)的變化或由其而引起的基因表達(dá)異常而導(dǎo)致的疾病第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（一）血友病A的分子診斷（二）珠蛋白合成障礙性貧血的分子診斷二、單基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用二、單基因病的分子診斷1.凝血因子Ⅷ基因的主要遺傳缺陷2.FⅧ基因的直接檢測(cè)（22號(hào)內(nèi)含子倒位檢測(cè)）3.FⅧ基因連鎖分析（FⅧ基因st14位點(diǎn)多態(tài)性檢測(cè)）（一）血友病A的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用血友病A1.凝血因子Ⅷ基因的主要遺傳缺陷主要為點(diǎn)突變和基因缺失 缺失 169種

插入 28種

點(diǎn)突變 347種第22號(hào)內(nèi)含子倒位:40%～50%重型HA二、單基因病的分子診斷第22號(hào)內(nèi)含子倒位的機(jī)制二、單基因病的分子診斷11kb/12kb/12kb/11kb/12kb2.FⅧ基因的直接檢測(cè)——22號(hào)內(nèi)含子倒位檢測(cè)二、單基因病的分子診斷長(zhǎng)距離PCR擴(kuò)增22號(hào)內(nèi)含子3.FⅧ基因連鎖分析——

FⅧ基因st14位點(diǎn)多態(tài)性檢測(cè)B/A/B/CB/CC/DC/B/D二、單基因病的分子診斷PCR檢測(cè)VNTR（st14）位點(diǎn)進(jìn)行家系連鎖分析第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用血紅蛋白異常包括兩大類結(jié)構(gòu)變異：珠蛋白鏈上氨基酸序列發(fā)生改變?nèi)珑牋罴?xì)胞貧血珠蛋白鏈合成障礙：一部分珠蛋白鏈合成過(guò)多，一部分珠蛋白鏈合成過(guò)少甚至不能合成，如地中海貧血二、單基因病的分子診斷（二）珠蛋白合成障礙性貧血的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用珠蛋白合成障礙性貧血的遺傳缺陷（1）α珠蛋白合成障礙性貧血主要基因缺陷：α珠蛋白基因缺失檢測(cè)方法：Southern印跡技術(shù)、PCR

二、單基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用α0珠蛋白合成障礙性貧血（α0--SEA型）基因缺失檢測(cè)引物部位

二、單基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（2）β珠蛋白合成障礙性貧血基因缺陷：點(diǎn)突變和移碼突變檢測(cè)方法：基因突變檢測(cè)方法、PCR二、單基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用點(diǎn)突變喪失了Mstll酶切位點(diǎn)RFLP檢測(cè)β珠蛋白基因點(diǎn)突變二、單基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用三、多基因病的分子診斷

多基因?。憾鄠€(gè)基因參與某一疾病的發(fā)生多基因病具一定的遺傳因素，家庭發(fā)病率高于人群發(fā)病率，但是疾病的產(chǎn)生都以一定的環(huán)境條件為誘因，遺傳因素在其中所起作用程度各異第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用

多基因病中的遺傳因素是若干個(gè)易感基因微小作用的累加，某一易感基因結(jié)構(gòu)的變化不足以導(dǎo)致疾病的產(chǎn)生人類基因組多態(tài)性是多基因病基因診斷的基礎(chǔ)，易感基因多態(tài)性的檢測(cè)能幫助我們理解多基因病發(fā)生的機(jī)制，有助于對(duì)疾病的診斷和分類三、多基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用高血壓候選基因多態(tài)性分析在EH中的應(yīng)用前景

臨床分型靶器官損傷個(gè)體化治療三、多基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用原發(fā)性高血壓相關(guān)基因的檢測(cè)(1)ACE基因I/D多態(tài)性檢測(cè)(2)AGT基因Thr174Met突變檢測(cè)三、多基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用ACE基因多態(tài)性與高血壓靶器官損傷疾病研究報(bào)告數(shù)IDDD冠心病 30 +11%+32%心肌梗死15 +12%+39%腦卒中 5+22%+94%高血壓腎病19 +10%+53%糖尿病腎病11 +40%+56%*與II型相比，DD型和ID型發(fā)生上述疾病的危險(xiǎn)性增高程度三、多基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用AGT基因研究目的：觀察AGT基因分型與限鈉鹽攝入及減輕體重后的血壓變化和高血壓發(fā)病率間的關(guān)系對(duì)象：1509例基因分析：AGT基因G-A多態(tài)性結(jié)果：三年后高血壓發(fā)生率（%）

對(duì)照組限鹽組減輕體重組

AA型452825GG型324132

三、多基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用

基因多態(tài)性檢測(cè)與個(gè)體化治療

根據(jù)病人易感基因的多態(tài)性設(shè)計(jì)有效的、個(gè)體化的治療方案，以達(dá)到最佳的治療效果三、多基因病的分子診斷第十一章分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用四、在線粒體遺傳病中的應(yīng)用（二）線粒體基因的檢測(cè)

（三）常見的線粒體疾病(一)線粒體遺傳病的遺傳特征第十一章分子生物學(xué)技