尿中砷實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

尿中砷實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法尿中砷的原子熒光光譜法（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所，張敬、閆慧芳）1.適用范圍：對(duì)尿液中的砷進(jìn)行定量測(cè)定。2.原理：尿樣經(jīng)微波消解后，在酸性條件下，加入硫脲使五價(jià)砷還原成三價(jià)砷，再加入硼氫化鈉或硼氫化鉀使還原生成砷化氫，由氬氣帶入石英原子化器中分解為原子態(tài)砷，在砷空心陰極燈的發(fā)射光激發(fā)下產(chǎn)生原子熒光，其熒光強(qiáng)度在固定條件下與被測(cè)液中的砷濃度成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。3.方法重要參數(shù)3.1線性范圍：為0——100μg/L；3.2精確度：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.87%～1.75%（n=6）；尿樣加樣加標(biāo)回收率為95%～105%（加標(biāo)濃度2.0～16.0μg/L）3.3檢出限：為0.38μg/L（按取5ml尿樣計(jì)）。3.4全程測(cè)定時(shí)間：3h左右。4.器材與試劑具蓋聚乙烯塑料瓶,500ml；尿比重計(jì)；具蓋聚乙烯塑料離心管，15ml；電熱板；微波消化器，帶樣品消解罐；斷續(xù)流動(dòng)自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)；原子熒光光度計(jì)，具砷空心陰極燈。實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水或去離子水；硝酸，優(yōu)級(jí)純；鹽酸，優(yōu)級(jí)純；過(guò)氧化氫，優(yōu)級(jí)純；氫氧化鈉溶液，5g/L；硼氫化鉀或氫化鈉溶液，20g/L；硫脲-抗壞血酸混合液，100g/L（稱取10g硫脲加約80ml水，加熱溶解，待冷卻后加入10g抗壞血酸，加水稀釋到100ml，儲(chǔ)存在棕色瓶中，可保存1個(gè)月）；鹽酸溶液，5+95；砷標(biāo)準(zhǔn)溶液。5.操作步驟5.1儀器條件波長(zhǎng)193.7nm延遲時(shí)間0.5s原子化器溫度200℃讀數(shù)時(shí)間13s光電倍增管負(fù)高壓300V進(jìn)樣體積1ml原子化器高度8mm進(jìn)樣方式斷續(xù)流動(dòng)載氣（Ar）流量300ml/min測(cè)量方式標(biāo)準(zhǔn)曲線法屏蔽氣（Ar）流量900ml/min讀數(shù)方式峰面積輸陰極電流35mA燈電流70mA5.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取6個(gè)樣品消解罐，分別加入0、50、100、200、400、800μl標(biāo)準(zhǔn)溶液，各加5.0ml正常人混合尿，制備成0.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0μg/L砷標(biāo)準(zhǔn)系列。按樣品處理進(jìn)行消解，定容至25ml。參照儀器操作條件，將原子熒光光度計(jì)調(diào)節(jié)至最佳測(cè)定狀態(tài)。首先進(jìn)入空白值測(cè)量狀態(tài)，連續(xù)用第1管進(jìn)樣以獲得穩(wěn)定的空白值，并執(zhí)行自動(dòng)扣底后，再依次測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)管（此時(shí)第1管需要再測(cè)一次）。以測(cè)得的熒光強(qiáng)度值減去第1管的熒光強(qiáng)度值后與相應(yīng)的砷濃度（μg/L）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.3樣品前處理：將尿樣從冰箱中取出，放置恢復(fù)到室溫后，充分搖勻。取出5.0ml尿樣于樣品消解罐中加入3ml硝酸，于恒溫電熱板125℃加熱預(yù)處理30min后，加入3mlH2O2；在125度繼續(xù)加熱處理30min，放入密閉微波爐中硝化5min，卸壓后取出樣品消解罐于105℃趕酸1h，冷卻后定量轉(zhuǎn)移到25ml比色管中，同時(shí)加入1.25ml鹽酸（優(yōu)級(jí)純）和2.5ml抗壞血酸-硫脲混合液，并定容至25ml。室溫反應(yīng)30min，混勻供測(cè)定。同時(shí)取5.0ml水代替尿樣，按樣品同樣處理測(cè)定，作為空白對(duì)照。5.4樣品測(cè)定用測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管的操作條件測(cè)定樣品和空白對(duì)照。在測(cè)定樣品前，需要再進(jìn)入空白值測(cè)量狀態(tài)，先用標(biāo)準(zhǔn)第1管測(cè)試使讀數(shù)復(fù)原并穩(wěn)定后，再測(cè)定兩次空白對(duì)照，讓儀器取其均值作為扣底空白值，隨后依次測(cè)定樣品。由標(biāo)準(zhǔn)曲線得砷濃度（μg/L）。6.質(zhì)量控制 采用空白平行樣進(jìn)行質(zhì)量控制。7.結(jié)果報(bào)告計(jì)算下式計(jì)算尿中砷的濃度C=ckV/V0式中：C——尿中砷的濃度，μg/L；c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得砷濃度，μg/L；V——測(cè)定液定容體積，ml；V0——尿取樣體積，ml；k——尿樣換算成標(biāo)準(zhǔn)比重下濃度的校正系數(shù)。8.說(shuō)明8.1氫化物發(fā)生的條件和原子熒光的測(cè)定條件，應(yīng)根據(jù)使用的儀器調(diào)節(jié)至最隹測(cè)定狀態(tài)。鹽酸溶液和還原劑的濃度對(duì)氫化反應(yīng)的影響很大。氫化物發(fā)生反應(yīng)要求有適宜的酸度，當(dāng)鹽酸濃度在2%～20%（V/V）范圍內(nèi)，砷的熒光強(qiáng)度變化不大；當(dāng)鹽酸濃度低于2%（V/V）時(shí)，熒光強(qiáng)度顯著降低。硼氫化鉀的濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果有較大的影響，