2025屆高考生物一輪復習第11單元生物技術實踐第38講微生物的培養(yǎng)與應用教學案新人教版選修1

PAGE24-第38講微生物的培育與應用[考綱明細]1.微生物的分別和培育2.某種微生物數(shù)量的測定3.培育基對微生物的選擇作用4.微生物在其他方面的應用考點1培育基及微生物的純化培育技術1．培育基(1)概念：人們依據(jù)微生物對eq\x(\s\up1(01))養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求，配制出供其eq\x(\s\up1(02))生長繁殖的養(yǎng)分基質(zhì)。(2)養(yǎng)分組成：一般都含有eq\x(\s\up1(03))水、碳源、氮源和無機鹽。此外，還須要滿意微生物生長對eq\x(\s\up1(04))pH、氧氣以及eq\x(\s\up1(05))特別養(yǎng)分物質(zhì)的要求。(3)種類①依據(jù)物理性質(zhì)可分為eq\x(\s\up1(06))液體培育基、eq\x(\s\up1(07))固體培育基、eq\x(\s\up1(08))半固體培育基。②依據(jù)成分的來源可分為自然培育基和eq\x(\s\up1(09))合成培育基。③依據(jù)功能用途可分為eq\x(\s\up1(10))選擇培育基、eq\x(\s\up1(11))鑒別培育基等。1．(選修1P14資料卡片)瓊脂是一種從紅藻中提取的多糖。瓊脂在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，在常規(guī)培育條件下呈現(xiàn)固態(tài)。2．(選修1P15資料卡片)牛肉膏和蛋白胨來源于動物原料，含有糖、維生素和有機氮等養(yǎng)分物質(zhì)。2．無菌技術(1)含義：指在培育微生物的操作中，全部防止eq\x(\s\up1(01))雜菌污染的方法。(2)關鍵：防止eq\x(\s\up1(02))外來雜菌的入侵。(3)不同對象的無菌操作方法(連線)[措施] [操作對象] [主要方法] Ⅰ.培育基 ①灼燒滅菌a．消毒 Ⅱ.接種環(huán) ②干熱滅菌 Ⅲ.操作者雙手 ③巴氏消毒 Ⅳ.培育皿 ④紫外線消毒b．滅菌 Ⅴ.無菌室 ⑤化學消毒 Ⅵ.牛奶 ⑥高壓蒸汽滅菌答案a—Ⅲ—⑤a—Ⅴ—④a—Ⅵ—③b—Ⅰ—⑥b—Ⅱ—①b—Ⅳ—②3．大腸桿菌的純化培育(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培育基①操作步驟eq\x(計算)→eq\x(\x(\s\up1(01))稱量)→eq\x(溶化)→eq\x(\x(\s\up1(02))滅菌)→eq\x(\x(\s\up1(03))倒平板)②倒平板的方法及留意事項a．請用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：eq\x(\s\up1(04))丙→乙→甲→丁。b．乙中的滅菌方法是eq\x(\s\up1(05))灼燒滅菌。c．丁中的操作須要等待eq\x(\s\up1(06))平板冷卻凝固后才能進行。(2)純化大腸桿菌的兩種方法1)平板劃線法①概念：是通過eq\x(\s\up1(07))接種環(huán)在瓊脂固體培育基表面eq\x(\s\up1(08))連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基的表面。②留意事項：a.第一次灼燒每次劃線前灼燒劃線結束灼燒目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種干脆來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目削減殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避開細菌污染環(huán)境和感染操作者b．灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。c．其次次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端起先，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而漸漸削減，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。d．劃線時最終一區(qū)不要與第一區(qū)相連。e．劃線用力大小要適當，防止用力過大將培育基劃破。2)eq\x(\s\up1(09))稀釋涂布平板法①概念：是將菌液進行一系列的eq\x(\s\up1(10))梯度稀釋，然后將eq\x(\s\up1(11))不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的表面，進行培育。②操作過程(3)菌種的保存方法①對于頻繁運用的菌種，可以采納eq\x(\s\up1(12))臨時保藏的方法。②對于須要長期保存的菌種，可以采納eq\x(\s\up1(13))甘油管藏的方法。1.(選修1P15旁欄思索)無菌技術除了用來防止試驗室的培育物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？提示無菌技術還能有效避開操作者自身被微生物感染。2．(選修1P16旁欄思索)請你推斷以下材料或用具是否須要消毒或滅菌。假如須要，請選擇合適的方法。(1)培育細菌用的培育基與培育皿(2)玻棒、試管、燒瓶和吸管(3)試驗操作者的雙手提示(1)、(2)須要滅菌；(3)須要消毒。3．(選修1P18旁欄小資料改編)微生物的接種方法只有平板劃線法和稀釋涂布平板法嗎？微生物接種的核心是什么？提示不是。微生物的接種技術還包括斜面接種、穿刺接種等方法，其核心是防止雜菌污染，保證培育物的純度。4．(選修1P17探討T2)倒平板操作時為什么須要使錐形瓶的瓶口通過火焰？提示通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基。5．(選修1P17探討T3)平板冷凝后，為什么要將平板倒置？提示平板冷凝后，皿蓋上會凝聚水珠，凝固后的培育基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培育基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基造成污染。6．(選修1P17探討T4)在倒平板的過程中，假如不當心將培育基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培育微生物嗎？為什么？提示不能。因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培育基上滋生，可能會造成污染。題組一培育基及其制備方法分析1．下表為某培育基的配方，下列敘述正確的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊紅美藍蒸餾水含量10g10g2g0.4g0.065g定容至1000mLA．從物理性質(zhì)看該培育基屬于液體培育基，從用途看該培育基屬于鑒別培育基B．該培育基中屬于碳源的物質(zhì)是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨C．該培育基缺少供應生長因子的物質(zhì)D．該培育基調(diào)整合適的pH后就可以接種運用答案A解析從物理性質(zhì)看該培育基屬于液體培育基，從用途看該培育基屬于鑒別培育基，A正確；微生物的養(yǎng)分物質(zhì)主要包括氮源、碳源、水和無機鹽等，培育基中屬于碳源的物質(zhì)是葡萄糖和蛋白胨，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨，B錯誤；生長因子主要包括維生素、氨基酸和堿基等，蛋白胨可以供應維生素，因此該培育基可供應生長因子，C錯誤；該培育基調(diào)整合適的pH后經(jīng)滅菌后才可以接種運用，D錯誤。2．(2024·全國卷Ⅲ)回答下列與細菌培育相關的問題。(1)在細菌培育時，培育基中能同時供應碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制備培育基時要依據(jù)所培育細菌的不同來調(diào)整培育基的pH，其緣由是_______________________________。硝化細菌在沒有碳源的培育基上________(填“能夠”或“不能”)生長，緣由是_____________________________________________。(2)用平板培育細菌時一般須要將平板________(填“倒置”或“正置”)。(3)單個細菌在平板上會形成菌落，探討人員通常可依據(jù)菌落的形態(tài)、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，緣由是__________________。(4)有些運用后的培育基在丟棄前須要經(jīng)過________處理，這種處理可以殺死丟棄物中全部的微生物。答案(1)蛋白胨不同細菌生長繁殖所需的最適pH不同能夠硝化細菌可以利用空氣中的CO2作為碳源(2)倒置(3)在肯定的培育條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征(4)滅菌解析(1)蛋白胨中含有碳元素和氮元素，可為細菌生長供應碳源和氮源，葡萄糖只能供應碳源，NaNO3只能供應氮源。不同細菌生長繁殖所須要的最適pH不同，制備培育基時要依據(jù)所培育細菌種類的不同來調(diào)整pH。硝化細菌是自養(yǎng)生物，可通過化能合成作用利用空氣中的CO2合成有機物，所以在沒有碳源的培育基上也能生長。(2)用平板培育細菌時，一般將平板倒置，防止水滴倒流到培育基中造成污染。(3)在肯定的培育條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，因此探討人員可依據(jù)菌落的這些特征初步區(qū)分微生物的種類。(4)消毒僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物，滅菌可殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子。運用后的培育基丟棄前要進行滅菌處理，防止其中的微生物感染操作者或污染環(huán)境。1．培育基的配制原則(1)目的要明確：配制時應依據(jù)微生物的種類、培育目的等確定配制的培育基種類。(2)養(yǎng)分要協(xié)調(diào)：留意各種養(yǎng)分物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要相宜：細菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培育不同微生物所需的pH不同。2．不同微生物對主要養(yǎng)分物質(zhì)的需求特點(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要養(yǎng)分物質(zhì)是無機鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機鹽供應。(2)異養(yǎng)型微生物所需的養(yǎng)分物質(zhì)主要是有機物，即碳源必需由含碳有機物供應，氮源也主要是由有機物供應，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。題組二無菌技術的操作3．下列對滅菌和消毒的理解不正確的是()A．滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細胞、芽孢和孢子B．消毒和滅菌實質(zhì)上是完全相同的C．接種環(huán)用灼燒法滅菌D．常用滅菌方法有灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法答案B解析消毒是運用較為溫柔的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)，滅菌則是運用劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子，B錯誤。4．為了獲得β－胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開展了產(chǎn)β－胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取試驗。請回答下列問題：(1)試驗用的培育皿常用的兩種滅菌方法是________________________________________；為了削減滅菌后器皿被污染，滅菌前應當__________________________________________________。(2)為了篩選出酵母菌，培育基中添加了青霉素，其目的是______________________________。(3)如圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是________(填序號)。①平安閥、放氣閥、壓力表②放氣閥、平安閥、壓力表③平安閥、放氣閥、溫度表④放氣閥、平安閥、溫度表(4)為了將分別到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見菌生長，最可能的緣由是______________________________。答案(1)干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)用牛皮紙(報紙)包扎器皿(2)抑制細菌(放線菌)的生長(3)①(4)接種環(huán)溫度過高，菌種被殺死解析(2)酵母菌是真菌，對青霉素具有反抗實力，青霉素主要抑制細菌、放線菌的生長。(4)該接種過程中的3塊平板相同，菌種來源相同，只有一塊平板接種培育后無菌落，對比知，問題最可能出現(xiàn)在接種過程中，最可能的緣由是接種環(huán)灼燒后未充分冷卻，菌種被殺死。全面比較消毒和滅菌條件結果常用方法應用范圍消毒較為溫柔的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源紫外線消毒法接種室、接種箱或超凈工作臺滅菌劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬用具高壓蒸汽滅菌法培育基及容器題組三微生物的培育與純化5．用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時()①可以用相同的培育基②都須要運用接種針進行接種③都須要在火焰旁進行接種④都可以用來計數(shù)活菌A．①② B．③④C．①③ D．②④答案C解析平板劃線法或稀釋涂布平板法可以用相同的固體培育基，①正確；平板劃線法采納接種環(huán)進行操作，而稀釋涂布平板法采納涂布器進行操作，②錯誤；純化時，要進行無菌操作，須要在火焰旁接種，避開空氣中的微生物污染培育基，③正確；平板劃線法一般用于分別而不能用于計數(shù)，④錯誤。6．為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某探討小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分別等工作?；卮鹣铝袉栴}：(1)該小組采納稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培育了一段時間，這樣做的目的是______________________；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當培育后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為________。(2)該小組采納平板劃線法分別水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過________滅菌，在其次次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端起先劃線，這樣做的目的是________________________________________。(3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培育后得到的結果。答案(1)檢測培育基平板滅菌是否合格3.8×107(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落(3)B解析(1)涂布接種前，滅菌后的空白平板先培育一段時間，若空白平板上無菌落形成，則說明培育基平板滅菌合格；平均每個平板上的菌落數(shù)目為38，稀釋了100倍，取樣為0.1mL，則每毫升水中的活菌數(shù)目為38×100÷0.1＝38000個，則每升水中的活菌數(shù)目為38000×1000＝3.8×107個。(3)示意圖A是用平板劃線法接種培育后得到的結果；示意圖B是用稀釋涂布平板法接種培育后得到的結果。兩種純化細菌方法的比較項目接種工具優(yōu)點缺點平板劃線法接種環(huán)可以視察菌落特征，對混合菌進行分別不能計數(shù)稀釋涂布平板法涂布器可以計數(shù)，可以視察菌落特征，對混合菌進行分別較麻煩，平板不干燥效果不好，簡單擴散考點2微生物的篩選和計數(shù)1．土壤中分解尿素的細菌的分別與計數(shù)項目具體內(nèi)容試驗原理(1)能合成eq\x(\s\up1(01))脲酶的細菌才能分解尿素(2)配制以eq\x(\s\up1(02))尿素為唯一氮源的培育基，能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌數(shù)量統(tǒng)計(1)eq\x(\s\up1(03))干脆計數(shù)法(顯微鏡下用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板)(2)間接計數(shù)法：eq\x(\s\up1(04))稀釋涂布平板法試驗流程土壤取樣→配制土壤溶液和制備培育基→eq\x(\s\up1(05))梯度稀釋→涂布平板與培育→菌落eq\x(\s\up1(06))計數(shù)(選修1P26資料卡片)細菌的數(shù)目還可以通過濾膜法來測定(以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例)。將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍培育基上培育。在該培育基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色。可以依據(jù)培育基上黑色菌落的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。2．分解纖維素的微生物的分別(1)纖維素酶①組成：纖維素酶是一種eq\x(\s\up1(01))復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即eq\x(\s\up1(02))C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。②作用纖維素eq\o(→,\s\up7(C1酶),\s\do5(CX酶))eq\x(\s\up1(03))纖維二糖eq\o(→,\s\up7(葡萄糖苷酶))葡萄糖(2)纖維素分解菌的篩選①原理纖維素分解菌↓eq\b\lc\\rc\}(\a\vs4\al\co1(剛果紅,纖維素))→eq\x(\s\up1(04))紅色復合物eq\o(→,\s\up7(纖維素酶))紅色消逝，出現(xiàn)eq\x(\s\up1(05))透亮圈②篩選方法：eq\x(\s\up1(06))剛果紅染色法，即通過是否產(chǎn)生eq\x(\s\up1(07))透亮圈來篩選纖維素分解菌。③培育基：以eq\x(\s\up1(08))纖維素為唯一碳源的選擇培育基。④試驗流程土壤取樣：富含eq\x(\s\up1(09))纖維素的環(huán)境↓選擇培育：用eq\x(\s\up1(10))選擇培育基培育，以增加纖維素分解菌的濃度↓eq\x(\s\up1(11))梯度稀釋：制備系列稀釋液↓涂布平板：將樣品涂布到eq\x(\s\up1(12))鑒別纖維素分解菌的鑒別培育基上↓選擇產(chǎn)生eq\x(\s\up1(13))透亮圈的菌落(3)結果分析與評價內(nèi)容現(xiàn)象結論有無雜菌污染的推斷空白比照的培育皿中無菌落生長未被雜菌污染培育物中菌落數(shù)偏高被雜菌污染菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高培育物中混入其他雜菌選擇培育基的篩選作用牛肉膏培育基上的菌落數(shù)目大于選擇培育基上的數(shù)目選擇培育基具篩選作用樣品的稀釋操作得到2個或2個以上菌落數(shù)目在30～300的平板操作勝利重復組的結果若選取同一種土樣，統(tǒng)計結果應接近(選修1P22正文)在進行微生物計數(shù)試驗時除設置比照組外，設置重復組的作用是什么？應如何設置重復組？提示設置重復組的作用是為解除偶然因素對試驗結果的干擾；在每一稀釋度下宜設置3個平板作重復組，選擇菌落數(shù)均在30～300且數(shù)目相差不大的三個平板，用“平均值”代入計數(shù)公式予以計算菌落數(shù)。3．分別微生物的兩種培育基的比較(1)選擇培育基：即允許特定種類的微生物生長，同時eq\x(\s\up1(01))抑制或阻擋其他種類微生物生長的培育基。如以eq\x(\s\up1(02))尿素為唯一氮源的選擇培育基，以eq\x(\s\up1(03))纖維素為唯一碳源的選擇培育基。其目的是eq\x(\s\up1(04))富集、分別目標微生物。(2)鑒別培育基：在培育基中加入某種試劑或化學藥品，使培育后發(fā)生某種改變，從而區(qū)分不同類型的微生物。如添加eq\x(\s\up1(05))酚紅指示劑鑒別分解尿素的微生物的培育基。1.(選修1P22旁欄思索)想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推想出每克樣品中的菌落數(shù)？提示統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板上的菌落數(shù)的平均值，然后通過公式即每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M進行計算，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。2．(選修1P28旁欄思索T1)為什么要在富含纖維素的環(huán)境中找尋纖維素分解菌？提示由于生物與環(huán)境的相互依存關系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于一般環(huán)境。3．(選修1P28旁欄思索T2)將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應當埋進土壤多深？提示將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，事實上是人工設置纖維素分解菌生存的相宜環(huán)境。一般應將紙埋于深約10cm左右的腐殖土壤中。4．(選修1P29旁欄思索T1)常用的剛果紅染色法有兩種，一種是先培育微生物，再加入剛果紅進行顏色反應，另一種是在倒平板時就加入剛果紅，這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足？提示方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點是顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混雜問題，缺點是由于纖維素粉和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應。但這種產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透亮圈較為模糊，因為培育基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透亮圈相區(qū)分；方法二的另一缺點是：有些微生物具有降解色素的實力，它們在長時間培育過程中會降解剛果紅而形成明顯的透亮圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。5．(選修1P29旁欄思索T2)為什么選擇培育能夠“濃縮”所需的微生物？提示在選擇培育的條件下，可以使那些能夠適應這種養(yǎng)分條件的微生物得到快速繁殖，而那些不適應這種養(yǎng)分條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。題組一土壤中分解尿素細菌的分別與計數(shù)1．下面關于土壤中分解尿素的細菌的分別與計數(shù)的敘述中正確的是()A．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B．篩選分解尿素的細菌時應以尿素作為培育基中的唯一養(yǎng)分物質(zhì)C．統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)目時一般用平板劃線法D．在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍，則表明篩選到了分解尿素的細菌答案A解析酶具有專一性，故只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A正確；篩選分解尿素的細菌的試驗中，采納的是以尿素為唯一氮源的培育基，B錯誤；統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)目時一般采納稀釋涂布平板法，平板劃線法不能用于統(tǒng)計樣品中的細菌數(shù)，C錯誤；在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑，培育某種細菌后，假如pH上升，指示劑將變紅，這樣就能初步鑒定該種細菌能夠分解尿素，D錯誤。2．人和哺乳動物的尿液中含有尿素，大量尿素的存在會對環(huán)境造成污染，土壤中有些細菌含有脲酶，可通過降解尿素作為其生長的氮源。某探討小組開展土壤中分解尿素的細菌的分別和培育試驗，請回答下列問題：(1)該試驗中，在以________為唯一氮源的培育基中加入________指示劑，能產(chǎn)生脲酶的細菌在該培育基上生長一段時間后，其菌落四周的指示劑將變成________色。(2)在接種前須要添加空白比照組以檢測培育基是否被污染，該空白比照組應實行的操作要求和視察指標是_______________________________。(3)某同學在五個培育基平板下均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1mL，培育一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程實行的接種方法是______________，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為______________個。答案(1)尿素酚紅紅(2)將已滅菌、未接種的培育基在相宜溫度下放置相應的時間，視察培育基上是否有菌落產(chǎn)生(3)稀釋涂布平板法1.75×108解析(1)分解尿素的細菌能合成脲酶將尿素分解成氨，氨會使培育基的堿性增加，在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑培育細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素。(2)在接種前須要添加空白比照組以檢測培育基是否被污染，該空白比照組應實行的操作要求和視察指標是將已滅菌、未接種的培育基在相宜溫度下放置相應的時間，視察培育基上是否有菌落產(chǎn)生。(3)某同學在五個培育基平板上均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1mL，培育一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程實行的接種方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計的菌落數(shù)應介于30～300之間，故選擇細菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計數(shù)，所以每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為eq\f(156＋178＋191,3)÷0.1×105＝1.75×108個。統(tǒng)計菌落數(shù)目的兩種方法(1)顯微鏡干脆計數(shù)法原理利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算肯定容積的樣品中微生物的數(shù)量方法用計數(shù)板計數(shù)缺點不能區(qū)分死菌與活菌(2)間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)原理當樣品的稀釋度足夠高時，培育基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推想出樣品中大約含有多少活菌計算公式每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)操作設置重復組，增加試驗的勸服力與精確性。同時為了保證結果精確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)題組二分解纖維素的微生物的分別3．分別纖維素分解菌的試驗過程中操作有誤的是()A．經(jīng)選擇培育后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上B．富集培育這一步可省略，但培育的纖維素分解菌少C．培育基長出菌落后，用剛果紅染色D．比照組可用同樣量的培育液涂布到不含纖維素的培育基上答案A解析經(jīng)選擇培育后，再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上，A錯誤；富集培育可省略，B正確；剛果紅染色法有兩種，其中一種是先培育微生物，再加入剛果紅進行顏色反應，即培育基上長出菌落后，用剛果紅染色，C正確；設置比照能證明經(jīng)富集培育的確得到了欲分別的微生物，D正確。4．(2024·重慶市一中月考)纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)，植物產(chǎn)生的纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，因為它們能產(chǎn)生纖維素酶。依據(jù)相關學問回答問題：(1)在微生物培育時，要獲得純凈培育物的關鍵是__________________；試驗室中常用的滅菌方法有灼燒滅菌、________和________。(2)纖維素酶是一種復合酶，至少包括三種組分，其中________酶能將纖維二糖分解成葡萄糖。(3)在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基之前可以通過________增加纖維素分解菌的濃度。(4)在含纖維素的培育基中加入剛果紅時，剛果紅可以與纖維素形成________復合物。當纖維素被分解后，剛果紅—纖維素的復合物就無法形成，用含剛果紅的該培育基培育纖維素分解菌時，培育基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的________。常用的剛果紅染色法有兩種，其中一種是先培育微生物，再加入剛果紅進行顏色反應，這種方法的缺點之一是加入剛果紅溶液會使____________________。答案(1)防止外來雜菌的入侵干熱滅菌高壓蒸汽滅菌(2)葡萄糖苷(3)選擇培育(4)紅色透亮圈菌落之間發(fā)生混雜解析(2)纖維素酶是一種復合酶，至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，其中葡萄糖苷酶能將纖維二糖分解成葡萄糖。(3)在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基之前可以通過選擇培育增加纖維素分解菌的濃度。微生物的篩選與鑒別方法(1)微生物的篩選方法單菌落挑取法利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培育基表面，干脆依據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物選擇培育法利用選擇培育基對微生物進行選擇培育，干脆獲得目的微生物鑒別培育法利用鑒別培育基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物(2)微生物的鑒別方法菌落特征鑒別法依據(jù)微生物在固體平板培育基表面形成的菌落的形態(tài)、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別指示劑鑒別法如在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑，培育某種微生物后，培育基變紅說明該種微生物能夠分解尿素染色鑒別法如利用剛果紅染色法，依據(jù)培育基中出現(xiàn)的透亮圈來篩選分解纖維素的微生物高考熱點突破1．(2024·全國卷Ⅰ)已知一種有機物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解，會造成環(huán)境污染。某小組用三種培育基篩選土壤中能高效降解X的細菌(目標菌)。Ⅰ號培育基：在牛肉膏蛋白胨培育基中加入X(5g/L)。Ⅱ號培育基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機鹽(適量)，X(15g/L)。Ⅲ號培育基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機鹽(適量)，X(45g/L)?；卮鹣铝袉栴}。(1)在Ⅰ號培育基中，為微生物供應氮源的是________________________。Ⅱ、Ⅲ號培育基中為微生物供應碳源的有機物是____________。(2)若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號液體培育基中，培育一段時間后，不能降解X的細菌比例會________，其緣由是____________________________。(3)Ⅱ號培育基加入瓊脂后可以制成固體培育基，若要以該固體培育基培育目標菌并對菌落進行計數(shù)，接種時，應采納的方法是______________________________。(4)假設從Ⅲ號培育基中得到了能高效降解X的細菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長供應________和__________________________________。答案(1)牛肉膏、蛋白胨X(2)下降不能降解X的細菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的細菌能夠增殖(3)稀釋涂布平板法(4)能量合成其他物質(zhì)的原料解析(1)Ⅰ號培育基中含有牛肉膏、蛋白胨和有機物X等，其中X僅含有C、H兩種元素，故為微生物供應氮源的是牛肉膏、蛋白胨。Ⅱ、Ⅲ號培育基中除無機鹽外，還含有有機物X，故為微生物供應碳源的有機物是X。(2)因Ⅱ號液體培育基中只有X含有碳元素，故培育一段時間后，不能降解X的細菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的細菌能夠增殖，故不能降解X的細菌比例會下降。(3)對微生物分別的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，但其中只有稀釋涂布平板法能夠計數(shù)。(4)能高效降解X的細菌能將X代謝為丙酮酸，丙酮酸在有氧條件下被降解時能釋放出大量能量，故丙酮酸可為該細菌的生長供應能量。丙酮酸還可以為該細菌中其他物質(zhì)的合成供應原料。2．(2024·全國卷Ⅱ)物質(zhì)W是一種含氮有機物，會污染土壤。W在培育基中達到肯定量時培育基表現(xiàn)為不透亮。某探討小組欲從土壤中篩選出能降解W的細菌(目標菌)?；卮鹣铝袉栴}。(1)要從土壤中分別目標菌，所用選擇培育基中的氮源應當是________。(2)在從土壤中分別目標菌的過程中，發(fā)覺培育基上甲、乙兩種細菌都能生長并形成菌落(如圖所示)。假如要得到目標菌，應當選擇________菌落進一步純化，選擇的依據(jù)是_________________________________________。(3)土壤中的某些微生物可以利用空氣中的氮氣作為氮源。若要設計試驗進一步確定甲、乙菌能否利用空氣中的氮氣作為氮源，請簡要寫出試驗思路、預期結果和結論，即_______________________________________________________________________________________________________。(4)該小組將人工合成的一段DNA轉入大腸桿菌，使大腸桿菌產(chǎn)生能降解W的酶(酶E)。為了比較酶E與自然酶降解W實力的差異，該小組擬進行如下試驗，請完善相關內(nèi)容。①在含有肯定濃度W的固體培育基上，A處滴加含有酶E的緩沖液，B處滴加含有相同濃度自然酶的緩沖液，C處滴加________，三處滴加量相同。②一段時間后，測量透亮圈的直徑。若C處沒有出現(xiàn)透亮圈，說明____________________；若A、B處形成的透亮圈直徑大小相近，說明___________________________________________________________________。答案(1)W(2)乙乙菌落四周出現(xiàn)透亮圈，說明乙菌能降解W(3)將甲、乙菌分別接種在無氮源培育基上，若細菌能生長，則說明該細菌能利用空氣中的氮氣作為氮源(4)①緩沖液②緩沖液不能降解W酶E與自然酶降解W的實力相近解析(1)物質(zhì)W是一種含氮有機物，要分別能夠降解物質(zhì)W的細菌，需用以物質(zhì)W為唯一氮源的選擇培育基進行篩選。(2)由題圖可知，甲菌落四周沒有透亮圈，說明甲菌不能降解物質(zhì)W，乙菌落四周出現(xiàn)透亮圈，說明乙菌能降解物質(zhì)W，故要得到目標菌，應選擇乙菌落進一步純化。(3)要鑒定甲、乙菌能否利用空氣中的氮氣作為氮源，則培育基中不能添加氮源，所以將甲、乙菌分別接種在無氮源的培育基上(其他條件相同且相宜)，若細菌能生長，則說明細菌能利用空氣中的氮氣作為氮源。(4)試驗目的是比較自然酶和酶E降解物質(zhì)W的實力，做試驗時要設計空白比照試驗，所以C處應滴加緩沖液。C處沒有出現(xiàn)透亮圈，說明緩沖液不能降解物質(zhì)W，A、B處透亮圈的出現(xiàn)說明物質(zhì)W被降解，若兩個透亮圈直徑大小相近，則說明酶E與自然酶降解物質(zhì)W的實力相近。3．(2024·全國卷Ⅱ)在生產(chǎn)、生活和科研實踐中，常常通過消毒和滅菌來避開雜菌的污染。回答下列問題：(1)在試驗室中，玻璃和金屬材質(zhì)的試驗器具________(填“可以”或“不行以”)放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。(2)牛奶的消毒常采納巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點是________________________________。(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采納紫外線照耀消毒，其緣由是紫外線能__________________，在照耀前，適量噴灑____________，可強化消毒效果。(4)水廠供應的自來水通常是經(jīng)過________(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。(5)某同學在運用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達到設定要求，而鍋內(nèi)并沒有達到相應溫度，最可能的緣由是____________________。答案(1)可以(2)在達到消毒目的的同時，養(yǎng)分物質(zhì)損失較少(3)破壞DNA結構消毒液(4)氯氣(5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡解析(1)能耐高溫的、須要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培育皿)和金屬用具等可以放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。(2)煮沸消毒法即在100℃煮沸5～6min可以殺死微生物細胞和一部分芽孢；高溫瞬時消毒法即135～150℃加熱2～8s；巴氏消毒法即在70～75℃煮30min或在80℃煮15min，可以殺死微生物，并且保證養(yǎng)分物質(zhì)不被破壞。因此，與煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采納的巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法的優(yōu)點是在達到消毒目的的同時，養(yǎng)分物質(zhì)損失較少。(4)通常乙醇消毒有氣味，影響水質(zhì)，不相宜消毒自來水；高錳酸鉀本身有顏色，消毒后溶液呈紫紅色，無法運用；因此水廠供應的自來水通常是經(jīng)過氯氣消毒的。(5)采納高壓蒸汽滅菌時，鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣徹底解除后才能將鍋密閉。假如未將鍋內(nèi)冷空氣排盡，則會出現(xiàn)壓力達到設定要求，而鍋內(nèi)并沒有達到相應溫度的現(xiàn)象。4．(2024·全國卷Ⅰ)將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸肯定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入肯定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培育基?；卮鹣铝袉栴}：(1)M培育基若用于真菌的篩選，則培育基中應加入鏈霉素以抑制________的生長，加入了鏈霉素的培育基屬于__________培育基。(2)M培育基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長供應了多種養(yǎng)分物質(zhì)，養(yǎng)分物質(zhì)類型除氮源外還有________________(答出兩點即可)。氮源進入細胞后，可參加合成的生物大分子有________________(答出兩點即可)。(3)若在M培育基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培育，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是________，該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是_________________。(4)甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結果：甲同學涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133；乙同學涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。有人認為這兩位同學的結果中，乙同學的結果可信度低，其緣由是___________________________________________________________________________________________________________________________________。答案(1)細菌選擇(2)碳源、無機鹽蛋白質(zhì)、核酸(3)碘液淀粉遇碘液顯藍色，產(chǎn)淀粉酶的菌落四周淀粉被水解，形成透亮圈(4)乙同學的結果中，1個平板的計數(shù)結果與另2個相差懸殊，結果的重復性差解析(1)M培育基若用于真菌的篩選，則M培育基應滿意真菌的生長并抑制其他微生物的生長，鏈霉素是一種抗生素，可抑制細菌的生長；加入鏈霉素的培育基能篩選出真菌，該培育基屬于選擇培育基。(2)微生物生長所須要的養(yǎng)分成分除氮源外，還須要碳源、水、無機鹽及特別養(yǎng)分物質(zhì)；氮元素是蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的組成元素，因此氮源進入細胞后，可參加蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的合成。(3)依據(jù)淀粉遇碘液變藍色，產(chǎn)淀粉酶的菌落四周淀粉被水解，形成透亮圈，依據(jù)透亮圈篩選產(chǎn)生淀粉酶的微生物。(4)設計試驗時肯定要涂布至少3個平板作為重復組，才能增加試驗的勸服力和精確性，在分析試驗結果時，肯定要考慮所設置的重復組的結果是否相當，結果差距太大，意味著操作有誤，乙結果不合理。5．(2024·全國卷Ⅰ)空氣中的微生物在重力等作用下，可以肯定程度地沉降。某探討小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布狀況。試驗步驟如下：①配制培育基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；②制作無菌平板；③設置空白比照組和若干試驗組，進行相關操作；④將各組平板置于37℃恒溫箱中培育一段時間，統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)?；卮鹣铝袉栴}：(1)該培育基中微生物所需的氮來源于____________________。若要完成步驟②，該培育基中的成分X通常是__________。(2)步驟③中，試驗組的操作是_______________________________。(3)若在某次調(diào)查中，某一試驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白比照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了__________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法______________(填“正確”或“不正確”)。答案(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)將各試驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間(3)污染不正確解析(1)培育基中的牛肉膏和蛋白胨可為培育基中的微生物供應氮源；制備固體培育基需加入瓊脂。(2)該試驗的目的是了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布狀況，所以需在教室不同高度的位置分別用平板收集微生物即開蓋暴露一段時間。(3)該試驗中空白比照組不應出現(xiàn)菌落，若空白比照組出現(xiàn)了菌落，則說明此次調(diào)查中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象，試驗組的污染狀況不能確定，故不能用試驗組與空白比照組菌落數(shù)的差值作為試驗結果，而應重新進行試驗。課時作業(yè)1．(2024·成都龍泉二中月考)幽門螺桿菌簡稱Hp，主要寄生在胃幽門、胃竇等旁邊的黏膜上，是人類至21世紀初唯一的已知胃部細菌。Hp可產(chǎn)生高活性的脲酶，可將尿素分解成氨和CO2。(1)制備幽門螺桿菌培育基時，需將培育基的pH調(diào)至________性。培育皿進行滅菌的常用方法是________。倒平板時要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要緣由是________________________。(2)圖①表示的是用________法接種培育后得到的結果。圖②是在純化過程中通過________法分別培育的結果，在培育基上接種時接種環(huán)需通過灼燒滅菌，完成圖中劃線操作，至少須要灼燒接種環(huán)________次。(3)為檢測某人體內(nèi)是否感染了Hp，可讓其服用14C標記的__________，定時收集呼出的氣體，通過分析呼氣中14C標記的CO2的含量即可推斷。該檢測方法和卡爾文探討光合作用的方法一樣可稱為________法。答案(1)酸干熱滅菌防止培育皿蓋上的冷凝水落入培育基造成污染(2)稀釋涂布平板平板劃線4(3)尿素同位素標記(或同位素示蹤)解析(1)因為幽門螺桿菌生活在胃部，所以其培育基的pH應偏酸性。對培育皿滅菌可以采納干熱滅菌法。(2)由圖①分析可知菌落勻稱分布，所以是利用稀釋涂布平板法接種的，而圖②是利用平板劃線法接種的，在每次接種前和最終接種后都要對接種環(huán)進行滅菌，由圖可知劃線3次，所以至少須要灼燒4次。(3)因為Hp可產(chǎn)生高活性的脲酶，所以可以讓病人服用14C標記的尿素，尿素會被分解為二氧化碳和氨，定時收集呼出的氣體，通過分析呼氣中14C標記的CO2的含量即可推斷是否感染了Hp。該方法利用了同位素標記法。2．(2024·四川雙流中學月考)莠去津是一種含氮的有機除草劑，在土壤中不易降解。為修復被莠去津污染的土壤，科研人員通過如圖所示過程選育可高效降解莠去津的細菌(目的菌)。結合所學學問，回答下列問題：(1)培育皿中的培育基比培育瓶中的培育基多添加了____________作為凝固劑，從功能上講，這兩種培育基都屬于____________培育基。若過程②運用的是平板劃線法，則對接種環(huán)常用的滅菌方法是____________。(2)分解莠去津的微生物屬于____________(填“自養(yǎng)”或“異養(yǎng)”)微生物，培育若干天后，應選擇培育液中莠去津含量____________的培育瓶進行過程②。為了避開雜菌污染，接種操作須要在____________________旁邊進行。圖中培育過程重復多次的主要目的是____________。(3)若要獲得更高效分解莠去津的微生物，常用的方法是____________。答案(1)瓊脂選擇灼燒滅菌法(2)異養(yǎng)最少酒精燈火焰選擇最高效的目的菌(3)誘變育種解析(1)瓊脂是固體培育基中的凝固劑，從功能上講，這兩種培育基都屬于選擇培育基，對培育基滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌法，對接種環(huán)常用的滅菌方法是灼燒滅菌法。(2)莠去津是一種含氮的有機除草劑，只能利用現(xiàn)成的有機物作為碳源和能源的微生物屬于異養(yǎng)型微生物。在選育過程中，因為目的菌能夠分解莠去津，所以應當選擇培育液中莠去津含量最少的培育瓶進行下一步接種，為了防止雜菌污染，接種操作應在酒精燈火焰旁進行。因為初選出來的培育瓶中可能不止一種微生物能夠分解莠去津，所以要通過固體培育基進行純化，而多次重復培育過程的目的就是選育最高效的目的菌。(3)若要獲得更高效分解莠去津的微生物，常用的方法是用誘變處理使其發(fā)生基因突變，即誘變育種。3．(2024·安徽馬鞍山質(zhì)檢)為了獲得耐熱耐輻射微生物資源，某生物愛好小組在新疆庫木塔格沙漠某區(qū)域取樣，利用常規(guī)平板分別方法進行分別培育，定向篩選出耐高溫耐輻射菌株，試驗流程如下，分析并回答下列問題：eq\x(樣品采集)→eq\x(\a\al(LB肉湯培育基,富集培育))→eq\x(\a\al(耐高溫耐輻射,馴化培育))→eq\x(菌株純化視察)→eq\x(鑒定已純化菌株)(1)生物愛好小組選擇在該區(qū)域取樣的緣由是______________________________。(2)配制LB肉湯培育基需添加肯定量的NaCl，其目的是____________________，對LB肉湯培育基一般采納________滅菌；馴化培育過程中，對活菌純化并計數(shù)的方法是________，測得的活菌數(shù)往往比實際值________，緣由是______________________________________。(3)某同學為探究已純化的菌株能否分解纖維素，他將此菌株接種在以纖維素為唯一碳源的培育基上，一段時間后，培育基上出現(xiàn)了菌落，該同學認為此菌株能分解纖維素，但其他的同學并不認同他的觀點，你認為他們的理由是________________________________________________。答案(1)該區(qū)域溫度較高、遭遇輻射較強、目的菌數(shù)量多(2)為微生物供應無機鹽(或為微生物供應無機鹽，調(diào)整滲透壓)高壓蒸汽稀釋涂布平板法低當兩個或多個細胞連在一起時，平板上只能視察到一個菌落(3)試驗缺少空白比照；操作不規(guī)范，未進行重復試驗解析(1)依據(jù)篩選目的菌株的特點，生物愛好小組之所以選擇在該區(qū)域取樣是因為該區(qū)域溫度較高、遭遇輻射較強，所以含有的耐熱耐輻射的微生物多。(3)結合試驗設計要遵循比照試驗的原則分析，該同學的試驗設計中缺乏空白比照組，即不接種該篩選菌株，培育基中是否會出現(xiàn)菌落。此外，該同學未設置重復組，也可能會由于操作不規(guī)范等偶然因素導致培育基上出現(xiàn)菌落。4．(2024·齊魯名校二聯(lián))大腸埃希菌，俗稱大腸桿菌。是人和動物腸道中的正常棲居菌。自來水一旦被它污染，就有可能引發(fā)腸道傳染病，甚至流行病。因此，必需對自來水進行嚴格的檢測，以確保飲水平安。我國規(guī)定1000mL自來水中的大腸桿菌數(shù)不得超過3個。某同學欲對家中自來水中大腸桿菌含量是否達標，對飲用水中大腸桿菌進行了培育、計數(shù)和鑒定。回答下列問題：(1)試驗前應進行無菌處理。將漏斗、培育皿、三角瓶和鑷子等進行________滅菌。培育基進行________滅菌。對自來水龍頭進行________滅菌。(2)為測定大腸桿菌的數(shù)目，將已知________的水過濾后，將濾膜放在培育基上培育，留意濾膜與培育基完全貼緊，不能有________?？梢罁?jù)培育基上________的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目。(取三份樣品求平均值)(3)為了鑒定大腸桿菌，在培育基中應加入________。在該培育基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)________色。答案(1)干熱(或高壓蒸汽)高壓蒸汽灼燒(2)體積氣泡菌落(3)伊紅—美藍黑解析(1)微生物培育過程中要留意防止雜菌污染，培育基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，漏斗、培育皿、三角瓶和鑷子等進行干熱滅菌或高壓蒸汽滅菌，而對自來水龍頭進行灼燒滅菌。(2)(3)欲測定飲用水中大腸桿菌數(shù)目，將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍培育基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，留意濾膜與培育基完全貼緊，不能有氣泡；可依據(jù)培育基上菌落的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目。5．(2024·湖南師大附中模擬)聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一種難以降解的大分子有機物，PVA分解菌能產(chǎn)生PVA酶分解PVA，PVA與碘作用時能產(chǎn)生藍綠色復合物，當PVA被分解時藍綠色復合物消逝，形成白色透亮斑，請回答下列問題：(1)下表是篩選能高效分解PVA的細菌的培育基配方，X物質(zhì)最可能為________。試驗中還應設置完全培育液比照組，將菌液稀釋相同的倍數(shù)，通過比較菌落數(shù)目，說明選擇培育基具有篩選作用。成分MgSO4蛋白質(zhì)PVA溶液水X物質(zhì)用量5g10g1000mL7g20g(2)若將100mL含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋104倍后，取0.1mL稀釋液勻稱涂布在選擇培育基表面，測得菌落數(shù)的平均值為160個，空白比照組平板上未出現(xiàn)菌落，則100mL原菌液中有PVA分解菌________個，該方法的測量值與實際值相比一般會________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。(3)要鑒定分別出的細菌是否為PVA分解菌，培育PVA分解菌的培育基中除了加入必需的養(yǎng)分物質(zhì)外還須要加入________，用于鑒別PVA分解菌。若用上述培育基比較不同菌株降解PVA實力的大小，請用簡潔的語言寫出設計思路：____________________________________。(4)對于選擇出的PVA分解菌，應當接種在________培育基上培育，長成菌落后，置于________℃冰箱中做臨時保藏。若要長期保藏，則需采納________法。答案(1)瓊脂(2)1.6×109偏小(3)碘配置相同PVA濃度的培育基來培育不同菌株，肯定時間后通過測定白色透亮圈大小來確定不同菌株降解PVA實力的大小(4)固體斜面4甘油管藏解析(1)分析題意可知，表格是篩選能高效分解PVA的細菌的培育基配方，應當是固體培育基，所以X物質(zhì)最可能是瓊脂；由于完全培育液中任何微生物都可以生長，因此比照組培育基上生長的菌落數(shù)目應明顯多于選擇培育基上的數(shù)目，從而說明選擇培育基具有篩選作用。(2)若將100mL含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋104倍后，取0.1mL稀釋液勻稱涂布在選擇培育基表面，測得菌落數(shù)的平均值為160個，空白比照組平板上未出現(xiàn)菌落，則100mL原菌液中PVA分解菌有：160÷0.1×104×100＝1.6×109個；由于兩個或多個細菌聚集在一起只能視察到一個菌落，因此該方法的測量值與實際值相比一般會偏小。(3)依據(jù)題意可知，“PVA與碘作用時能產(chǎn)生藍綠色復合物，當PVA被分解時藍綠色復合物消逝，形成白色透亮斑”，因此要鑒定分別出的細菌是否為PVA分解菌，可在培育PVA分解菌的培育基中加入碘；若用上述培育基比較不同菌株降解PVA實力的大小，可以用含相同PVA濃度的上述培育基來培育不同菌株，肯定時間后，通過測定白色透亮斑的大小(或直徑)來確定不同菌株降解PVA實力的大小。6．(2024·哈三中模擬)回答下列有關土壤中微生物分別的問題：(1)為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培育基時，應選擇__________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的緣由是____________________________。(2)用來篩選分解尿素細菌的培育基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有____________________________(答出兩點即可)。(3)為從富含纖維素的土壤中分別獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計了甲、乙兩種培育基(成分見下表)：酵母膏無機鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培育基甲＋＋＋＋－＋＋培育基乙＋＋＋－＋＋＋注：