液相色譜質(zhì)譜基礎(chǔ)介紹

HPLC-QQQ基礎(chǔ)操作培訓(xùn)2018年9月，燕山大學(xué)液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)主要可解決如下幾方面的問題：不揮發(fā)性化合物分析測定；極性化合物的分析測定；熱不穩(wěn)定化合物的分析測定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析測定；在下列領(lǐng)域獲得廣泛應(yīng)用：常見應(yīng)用領(lǐng)域有機(jī)化學(xué)：燃料、有機(jī)合成物環(huán)境化學(xué)：農(nóng)藥和農(nóng)殘分析、有機(jī)污染物、土壤/食品/水分析食品科學(xué)：香料、添加物、包裝物、蛋白質(zhì)、致癌物生物化學(xué)：肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、糖醫(yī)藥學(xué)：藥物代謝、藥物動力學(xué)、雜質(zhì)分析、天然產(chǎn)物分析臨床醫(yī)學(xué)：新生兒檢查、糖化血紅蛋白（糖尿?。?、血紅蛋白變異、膽酸法醫(yī)學(xué)：濫用藥物、爆炸物、興奮劑檢測獸醫(yī)學(xué)：興奮劑、磺胺類藥物、抗體……缺點(diǎn)：沒有商品化的譜庫可對比查詢，只能自己建庫或自己解析譜圖。

培訓(xùn)目的認(rèn)識和了解液相色譜三重四級桿質(zhì)譜（1290II-6460）掌握MussHunterDataAcquisition參數(shù)設(shè)定，學(xué)會數(shù)據(jù)采集掌握利用QualitativeAnalysis進(jìn)行數(shù)據(jù)分析的基本操作培訓(xùn)提綱?質(zhì)譜相關(guān)知識?QQQ工作原理?編輯采集方法與進(jìn)樣?檢測數(shù)據(jù)的定性分析What’sMassSpectrometry?質(zhì)譜：按離子質(zhì)荷比的大小依次排列形成的圖譜質(zhì)譜分析法：根據(jù)質(zhì)譜給出的信息，進(jìn)行的定性、定量、結(jié)構(gòu)分析（！重排）

氯霉素的碎片離子質(zhì)譜圖

質(zhì)譜相關(guān)知識—質(zhì)譜特點(diǎn)質(zhì)譜不屬波譜范圍（Itis

Spectrometry

NOT

Spectroscopy）

質(zhì)譜圖與電磁波的波長和分子內(nèi)某種物理量的改變無關(guān)

質(zhì)譜是分子離子及碎片離子的質(zhì)量與其相對強(qiáng)度的譜,譜圖與分子結(jié)構(gòu)有關(guān)

質(zhì)譜法進(jìn)樣量少,靈敏度高,分析速度快

質(zhì)譜是唯一可以給出分子量,確定分子式的方法,而分子式的確定對化合物的結(jié)構(gòu)鑒定是至關(guān)重要的。質(zhì)譜相關(guān)知識—質(zhì)譜特點(diǎn)什么工具干什么活質(zhì)譜相關(guān)知識—質(zhì)譜分類質(zhì)譜相關(guān)知識—TripleQuadrupoleMS

結(jié)構(gòu)示意圖質(zhì)譜儀的幾個(gè)參數(shù)—質(zhì)量范圍質(zhì)量范圍——質(zhì)譜儀所檢測的單電荷離子的質(zhì)荷比m/z范圍：1-3000Da（6460）不同儀器可測定質(zhì)量范圍不同：四極桿1~600Da，1~4000Da，磁質(zhì)譜：1~10000Da飛行時(shí)間質(zhì)譜：無上限離子阱質(zhì)譜：1~2000Da，1~4000Da質(zhì)譜儀的幾個(gè)參數(shù)—質(zhì)量分辨率若儀器分辨率很低，如R=200，在分辨CO、N2、和C2H4時(shí)（分子量28）則對以上三個(gè)分子不能分開，混為一峰。若要分開以下混合物，則必需有如下分辨力CO-C2H4:(R)2=27.994914/(28.031299-27.994914)=770N2-C2H4:(R)3=28.006158/(28.031299-28.006158)=1100CO-N2:(R)1=27.994914/(28.006158-27.994914)=2490分辨率(ResolutionPower)分開兩個(gè)鄰近質(zhì)量峰的能力何為分開：若兩個(gè)相鄰峰的峰谷低于峰高的10%(或5%，50%)，則認(rèn)為是分開的，不同類型的儀器對分辨率的定義不同。R=m/

m

=m/(m2-m1)

質(zhì)譜儀的幾個(gè)參數(shù)—質(zhì)量分辨率例:有質(zhì)量數(shù)為200和201的兩峰，使之正好分開（滿足10%峰谷的要求），需要儀器的分辨率達(dá)到：R=m/

m=200/（201-200）=200若要分開1000和1001兩個(gè)離子，所需儀器的分辨率應(yīng)該為R=m/

m=1000/（1001-1000）=1000可見分離質(zhì)量數(shù)越大的離子所需的分辨率越高。同一臺儀器對不同質(zhì)量數(shù)的分辨率不同?。?！靈敏度(Sensitivity)或最小檢測限（LOD）ppm—ppb—ppt;ug——ng——pg——fg;微量——痕量質(zhì)譜儀的幾個(gè)參數(shù)—靈敏度（sensitivity）質(zhì)譜儀的幾個(gè)參數(shù)—質(zhì)量測定精度多次、不同條件下對同一目標(biāo)物質(zhì)量測定波動質(zhì)譜常用術(shù)語1、分子離子(molecularion)

自由基（radical）離子M?+。很活潑，易碎裂而產(chǎn)生廣義的碎片離子（GCMS）2、準(zhǔn)分子離子(quasi-molecularion)

由軟電離技術(shù)產(chǎn)生的質(zhì)子或其他陽離子加合離子以及去質(zhì)子化或其他陰離子加合離子（LC-ESI-MS）。3、碎片離子(fragmention)

電離后具有過剩內(nèi)能的分子離子能以多種方式裂解生成碎片離子。4、多電荷離子(multiply-chargedion)5、同位素離子(isotopicion)培訓(xùn)提綱?質(zhì)譜相關(guān)知識?QQQ工作原理?編輯采集方法與進(jìn)樣?檢測數(shù)據(jù)的定性分析QQQ工作原理Q1Q2Q3四極桿分析器由四根棒狀電極組成，形成一個(gè)四極電場，處于對角位置的兩根桿被連接在一起，通過控制兩對電極上的電流和電壓，使得帶電離子震蕩通過四極桿。QQQ的工作方式A→離子全通過（TrueTotalIon，TTI）不過濾離子，所有的帶電離子全都通過B→掃描（SCAN）指在給定的質(zhì)荷比范圍內(nèi)，依次采集每個(gè)質(zhì)量數(shù)的信號C→選擇離子監(jiān)測（SIM）只是采集指定的某個(gè)或某幾個(gè)質(zhì)荷比的離子信號每個(gè)四極桿質(zhì)量分析器有三種工作方式全掃描（Scan）選擇離子監(jiān)測（SIM，SelectedIonMonitoring）子離子掃描（ProductIonScan）母離子掃描(PrecursorIonScan)中性丟失掃描(NeturalLostScan)中性獲得掃描（NeturalGainScan）多反應(yīng)監(jiān)測(MRM，MultipleReactionMonitoring)兩個(gè)四極桿在空間上串聯(lián)起來，有多種工作方式選擇離子監(jiān)測

SIM中性丟失工作模式Q1Q2Q3用途與特點(diǎn)全

掃描（MS2Scan）掃描全部離子不打碎，只傳輸無分辨?zhèn)鬏敇悠坊拘畔?，測“分子量”子離子掃描（ProductIonScan）固定通過選定母離子打碎母離子掃描子離子研究母離子的構(gòu)特征母離子掃描掃描母離子打碎母離子固定過濾子離子篩選具有特征子離子（結(jié)構(gòu)）的分子掃描母離子打碎離子掃子離子，與母離子有特征差異篩選具有特征結(jié)構(gòu)的分子，此結(jié)構(gòu)不易形成子離子按表過濾離子不打碎，只傳輸無分辨，傳輸定量多反應(yīng)檢測（MRM）按表過濾母離子打碎母離子按表過濾子離子定量，假陽性低QQQ的工作方式QQQ的工作方式—全掃描（MS2Scan）MS1工作在離子全通過（TTI）狀態(tài)下，不過濾離子，所有的帶電離子全都通過；碰撞池不施加碰撞能量，不會把離子撞碎；而MS2工作在掃描模式，可以得到待分析物質(zhì)的一級質(zhì)譜圖。在這種工作模式下，其功能與單級四極桿類似。該測量模式主要用于樣品基本信息，以及測“分子量”（母離子）m1,m2,m3,m4,m5…m1,m2,m3,m4,m5…m1,m2,m3m4m5ESI源—大氣壓電噴霧離子源電場作用：帶有被測物質(zhì)離子的流動相，在霧化針尖端發(fā)生霧化。噴霧針在離子源電場作用下，使液滴表面富集與電場極性相反的離子，而與電場極性相同的離子則聚集在液滴內(nèi)部，形成帶電液滴細(xì)小噴霧，并在電場的作用下，飛向毛細(xì)管。干燥氣作用：加熱的干燥氮?dú)夥聪蛄鲃?，帶走液滴中的中性溶劑分子，從而收縮液滴，直到排斥的靜電力超過液滴表面張力，引起庫侖爆炸。這個(gè)過程不斷重復(fù)，直到待分析物離子最終變成氣態(tài)分子離子進(jìn)入毛細(xì)管。注：①被測物質(zhì)離子化過程在進(jìn)入離子源前已經(jīng)完成!!質(zhì)譜的調(diào)諧和校正調(diào)諧：通過把一系列已知質(zhì)荷比的標(biāo)準(zhǔn)物引入三級四極桿并產(chǎn)生離子，利用這些已知離子，調(diào)整離子光學(xué)組件上的儀器參數(shù)（電壓值），以期在全質(zhì)量范圍獲得最大傳輸效率，獲得理想信號強(qiáng)度。調(diào)諧包括控制skimmer，八極桿，透鏡，四極桿和檢測器等的參數(shù)。調(diào)諧后，被優(yōu)化、校正過的質(zhì)譜參數(shù)記錄在調(diào)諧文件中（atune.TUNE.XML），并保存供測試使用。三種調(diào)諧方式自動調(diào)諧Autotune檢驗(yàn)調(diào)諧Checktune手動調(diào)諧ManualTune提示：日常測試中，請勿改動調(diào)諧文件及參數(shù)??！培訓(xùn)提綱?質(zhì)譜相關(guān)知識?QQQ工作原理?編輯采集方法與進(jìn)樣?檢測數(shù)據(jù)的定性分析LC-MS儀器方法的建立一般性操作明確目標(biāo)物：*通過文獻(xiàn)的搜集，整理出目標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)（碰撞能、母離子、子離子及加速電壓等）以及色譜系統(tǒng)中的梯度程序確定色譜系統(tǒng)中的流動相和色譜柱（若需要）等分析條件：

目標(biāo)物的單標(biāo)及混標(biāo)的配置以備用（定量必需）

m/z=372LC-MS分析條件的選擇1.電離源的選擇ESI適合于中等極性到強(qiáng)極性的化合物分子，特別是在溶液中能預(yù)先形成離子的化合物和可以獲得多個(gè)質(zhì)子的大分子（如蛋白質(zhì)），含有雜原子的化合物樣品。APCI多用于非極性或中等極性的小分子分析，不適合多電荷的大分子分析。分子量分析物的極性電噴霧(ESI)GC/MS1000100,00010,000非極性極性APCILC-MS分析條件的選擇2.正負(fù)離子模式的選擇正離子模式（ESI+）：*適合堿性樣品分析，可用乙酸（pH=3~4）或甲酸（pH=2~3）對樣品加以酸化，降低pH*流動相酸性環(huán)境：容易加合質(zhì)子負(fù)離子模式（ESI-）：*適應(yīng)于酸性樣品，含氯、含溴和多個(gè)羥基時(shí)可嘗試使用*流動相堿性環(huán)境：易失去質(zhì)子*可用氨水或三乙胺（因產(chǎn)生頑固性背景102峰[M+H]，慎用?。悠愤M(jìn)行堿化，增加pH對于本身離子流較弱的樣品建議

*在酸性系統(tǒng)中做ESI(+)ESI響應(yīng)很強(qiáng)，若洗滌器皿需沖洗干凈！抑制離子化不建議使用！若必須使用，可在樣品中添加，但濃度必須低于0.01%3.流動相的選擇LC-MS理想的流動相——√.水（超純水，可用哇哈哈或屈臣氏蒸餾水，不是礦泉水或去離子水?。。?、√.

甲醇、乙腈（有機(jī)相，色譜純）其它溶劑——√.揮發(fā)性酸：甲酸和乙酸（可降低LC流動相的pH值）；√.揮發(fā)性堿：氨水（可提高LC流動相的pH值）；√.緩沖鹽：乙酸銨（緩沖流動相并改善色譜分離而不影響MS性能，最大濃度不超過0.1M）；√.其它溶劑/調(diào)節(jié)劑：異丙醇，三氟醋酸（TFA，常用于分析肽和蛋白質(zhì)），三乙胺，四氫呋喃；不可用試劑——?。?！不揮發(fā)的鹽（硫酸鹽、硼酸鹽、磷酸鹽…），表面活性劑/洗滌劑，無機(jī)酸（HCl,H2SO4…）LC-MS分析條件的選擇軟件概覽數(shù)據(jù)采集定性分析定量分析儀器配置離線方法編輯自動優(yōu)化軟件進(jìn)程終結(jié)液相色譜診斷數(shù)據(jù)采集軟件-DataAcquisition儀器狀態(tài)欄譜圖顯示區(qū)采集方法/進(jìn)樣編輯區(qū)實(shí)時(shí)質(zhì)譜信號、DAD信號實(shí)時(shí)TIC、壓力曲線…?。?！采集方法、進(jìn)樣編輯區(qū)…工作參數(shù)各模塊實(shí)時(shí)狀態(tài)綠色：Ready，表示儀器準(zhǔn)備就緒，可以隨時(shí)進(jìn)行樣品分析；藍(lán)色：表示儀器正在運(yùn)行樣品；粉色：表示儀器處于等待運(yùn)行的狀態(tài)；黃色：NotReady，表示儀器的狀態(tài)還沒有準(zhǔn)備好或者儀器條件還沒有達(dá)到設(shè)定值；灰色：表示儀器處于StandbyBy或ShutDown狀態(tài)；紅色：表示儀器出錯（請及時(shí)同儀器負(fù)責(zé)人聯(lián)系?。。┎杉椒ǖ木庉嫛狹ethodEditorMethodEditor界面采集方法的編輯—MethodEditor①②③④Properties:方法的屬性，可以設(shè)置方法前運(yùn)行和后運(yùn)行的動作，以及給方法添加一些說明和描述，可忽略；DA：數(shù)據(jù)自動處理，可忽略；SamplerPretreatment：樣品在線預(yù)處理，可忽略。采集方法的編輯—MethodEditor0.新建采集方法通過菜單File>New>Method創(chuàng)建一個(gè)新的方法，或者通過菜單File>Open>Method來打開D:\MassHunter\Methods\目錄下的默認(rèn)方法Default.m，在這個(gè)方法的基礎(chǔ)上創(chuàng)建新的方法。新建，打開，保存，另存方法采集方法的編輯—MethodEditor進(jìn)樣體積，推薦<10洗針方式，選flushport停止時(shí)間，和泵一樣進(jìn)樣針工作參數(shù)，勿動！！進(jìn)樣器樣品室溫度，off1.自動進(jìn)樣器設(shè)置注意：胺類物質(zhì)進(jìn)樣量要少，因?yàn)楹苋菀纂x子化，不易沖洗干凈，會影響后續(xù)樣品的測定。采集方法的編輯—MethodEditor2.泵(流動相)設(shè)置液相流速，細(xì)內(nèi)徑柱子，≤0.5B相比例，0-100%！必須從下拉列表選擇與實(shí)際一致的溶劑種類選填備注泵停止時(shí)間，與右側(cè)Timetable一致后運(yùn)行時(shí)間，用于梯度洗脫后平衡流動相系統(tǒng)最小和最大壓力限制（安全壓力閾值）洗脫梯度表可設(shè)定流動相B的百分和流速隨時(shí)間變化可以選擇使用八種溶劑組合方式建議：只測“分子量”、不定量無需色譜柱??！采集方法的編輯—MethodEditor3.柱溫箱設(shè)置設(shè)置左右柱箱溫度設(shè)置左右柱箱溫度大部分情況下都選擇和左邊一樣停止時(shí)間都設(shè)置和泵一樣采集方法的編輯—MethodEditor4.質(zhì)譜采集參數(shù)—1.MS2Scan勿動默認(rèn)調(diào)諧文件atune.TUNE.XML！停止時(shí)間和泵一樣離子源類型與實(shí)際一致時(shí)間段設(shè)置，分段運(yùn)行不同模式LC流動相去向切換(MSorWaste)質(zhì)譜工作方式！設(shè)置掃描質(zhì)量起止范圍本掃描段掃描時(shí)間裂解電壓，通常分子量越大，需要設(shè)定的值越高，默認(rèn)135V正負(fù)模式選擇數(shù)據(jù)存儲格式，輪廓圖Proflie或棒狀圖Centroid該掃描模式，可以得到待分析物質(zhì)的一級質(zhì)譜全圖！需要設(shè)置掃描的質(zhì)量范圍、掃描時(shí)間、裂解電壓，極性采集方法的編輯—MethodEditor4.質(zhì)譜采集參數(shù)—2.MS2SIM該掃描模式，可以得到選定的離子的一級質(zhì)譜全圖！一般用于優(yōu)化待分析物質(zhì)的碎裂電壓（Fragmentor）。MS1工作在離子全通過（TTI）狀態(tài)下，不過濾離子，所有的帶電離子全都通過；碰撞池不施加碰撞能量，不會把離子撞碎；而MS2工作在SIM模式，可以得到選定的離子的一級質(zhì)譜圖。在這種工作模式下，其功能相當(dāng)于單級四極桿。在掃描類型下拉列表選擇MS2SIM，采集參數(shù)需要設(shè)置選擇監(jiān)測的離子的質(zhì)荷比，以及質(zhì)譜分辨率為Unit、Wide或Widest，并需要設(shè)置駐留時(shí)間，碰撞電壓的大小和極性的選擇。采集方法的編輯—MethodEditor4.質(zhì)譜采集參數(shù)—3.ProductIonScan該掃描模式，可以得到待分析物質(zhì)的二級質(zhì)譜圖，從而幫助確定在做多重反應(yīng)監(jiān)測時(shí)使用的定量離子和定性離子。MS1使用SIM方式選擇某一個(gè)或多個(gè)特定質(zhì)荷比的母離子通過四極桿Q1，在碰撞池產(chǎn)生碎片離子，然后在MS2中進(jìn)行掃描分析。此過程可以產(chǎn)生典型的質(zhì)譜/質(zhì)譜碎片譜圖。在掃描類型下拉列表選擇ProductIon，并需要設(shè)定母離子的質(zhì)量以及子離子的掃描范圍和碰撞能量。選擇ProductIonScan母離子m/z設(shè)定子離子掃描范圍碰撞能量CE設(shè)定采集方法的編輯—MethodEditor4.質(zhì)譜采集參數(shù)—4.MRM可以極大提高檢測靈敏度和定量準(zhǔn)確性，是三級四極桿儀器最主要的使用方式??！MS1采用SIM方式選擇某個(gè)或多質(zhì)荷比的母離子，在碰撞池產(chǎn)生碎片離子。MS2同樣采用SIM方式來監(jiān)測由母離子產(chǎn)生的一個(gè)或幾個(gè)特定子離子，這就是多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）在下拉列表中選擇MRM。當(dāng)分析化合物的種類較多和復(fù)雜時(shí)，可以根據(jù)化合物的保留時(shí)間劃分成若干個(gè)時(shí)間段。這樣每個(gè)時(shí)間段內(nèi)采集的離子個(gè)數(shù)減少，則采樣周期縮短，有助于提高儀器靈敏度。采集方法的編輯—MethodEditor4.質(zhì)譜采集參數(shù)—ESI源參數(shù)在ESI源總，需要設(shè)置干燥氣的溫度、流量，霧化器的壓力，以及毛細(xì)管電壓這些參數(shù)的數(shù)值。其中干燥氣的溫度、流量，霧化器的壓力與流動相的比例、流速以及待分析的物質(zhì)有關(guān)。毛細(xì)管電壓一般正離子默認(rèn)設(shè)置為4000V，負(fù)離子默認(rèn)設(shè)置為3500V，可以根據(jù)需要進(jìn)一步優(yōu)化。干燥氣溫度干燥氣流量霧化氣壓力毛細(xì)管電壓ESI源的參數(shù)參考設(shè)置如下表。一般HPLC的流速在200μL/min左右時(shí)可以得到最大的靈敏度。在實(shí)際應(yīng)用中，可以根據(jù)下面的參考條件設(shè)置進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化。采集方法的編輯—MethodEditor5.DAD檢測器參數(shù)保存，另存方法保存采集方法通過以上步驟逐步編輯完采集方法，注意保存方法，通過File菜單選擇Save>Method，或者點(diǎn)擊方法保存按鈕保存當(dāng)前方法。方法保存路徑：D:\MassHunter\Methods\*.m（注：路徑不要隨便更改，否則無法調(diào)用）運(yùn)行單針樣品運(yùn)行單針樣品樣品名稱設(shè)置好后點(diǎn)擊開始運(yùn)行樣品瓶位置進(jìn)樣體積，AsMethod即可保存數(shù)據(jù)文件名稱保存數(shù)據(jù)文件夾數(shù)據(jù)文件名編號遞增P1P2ABCDEF654321編輯和運(yùn)行Worklist工作列表(Worklist)是自動進(jìn)行樣品分析的一系列指令。使用工作列表，可對多個(gè)樣品實(shí)現(xiàn)自動進(jìn)樣分析。運(yùn)行單針樣品Worklist結(jié)束后standby宏命令進(jìn)樣標(biāo)記樣品名稱新建，保存等list菜單樣品位置采集方法保存數(shù)據(jù)文件樣品級別(SPl，QC…)進(jìn)樣體積工作表區(qū)域內(nèi)單擊鼠標(biāo)右鍵，完成添加樣品等list編輯添加多個(gè)樣品添加單個(gè)樣品選擇宏命令插入樣品刪除行提示：Add：在現(xiàn)有l(wèi)ist最后追加樣品Insert：選中行上側(cè)添加樣品可以接在工作列表表格輸入以下樣品信息：樣品名稱，樣品位置，方法，數(shù)據(jù)文件名稱…保存的數(shù)據(jù)文件為后綴為“.d”的文件(文件夾)，有定性、定量數(shù)據(jù)分析軟件可直接調(diào)用。編輯和運(yùn)行Worklist選擇AddMultipleSamples。在Sampleinformation選項(xiàng)卡下，填寫樣品名稱，數(shù)據(jù)文件名稱，調(diào)用方法等，點(diǎn)擊samplePosition選項(xiàng)卡，選擇要添加的樣品所放置的位置。所填信息均可返回worklist中修改！拖動鼠標(biāo)左鍵劃選；按住Ctrl點(diǎn)擊并拖動鼠標(biāo)點(diǎn)選；……

選樣品盤位置，左側(cè)P1，右側(cè)P2編輯和運(yùn)行WorklistWorklist可單獨(dú)作為文件進(jìn)行保存（見下圖），然后運(yùn)行列表！運(yùn)行保存進(jìn)樣標(biāo)記，√選表示全部進(jìn)樣在工作列表運(yùn)行過程中，可以繼續(xù)編輯和增加樣品，也可以刪除樣品，或者通過樣品前的復(fù)選框決定是否取消某個(gè)樣品的運(yùn)行。幾點(diǎn)提示：1.每天進(jìn)樣前，請預(yù)先“沖洗流動相管路”（即purge），待監(jiān)視壓力基線平穩(wěn)后進(jìn)樣分析；2.每批次分析前，第一個(gè)樣品建議分析“Blank”（進(jìn)樣位置設(shè)為Noinjection）或“不含試樣的溶劑”，以便數(shù)據(jù)分析時(shí)參考或進(jìn)行背景的扣除??！3.Worklist最后一行切記添加“Standby”宏命令??！Standby宏命令DataAcquisition僅供儀器控制（在線），實(shí)現(xiàn)設(shè)定方法的數(shù)據(jù)采集，無法對采集獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析！培訓(xùn)提綱?質(zhì)譜相關(guān)知識?QQQ工作原理?編輯采集方法與進(jìn)樣?檢測數(shù)據(jù)的定性分析總離子色譜圖(TIC)：分析時(shí)間內(nèi)所有掃描獲得的離子流強(qiáng)度對時(shí)間作圖所得的色譜圖（橫坐標(biāo)RT）提取離子色譜圖(EIC)：根據(jù)監(jiān)測化合物分子量提取其產(chǎn)生的離子流強(qiáng)度對時(shí)間作圖所得的色譜圖（橫坐標(biāo)RT）.質(zhì)譜圖：不同質(zhì)量的離子質(zhì)荷比與其相對的離子強(qiáng)度所形成的譜圖（橫坐標(biāo)m/z）質(zhì)譜圖相關(guān)概念TIC上的每一點(diǎn)都對應(yīng)一張質(zhì)譜圖，而所有單張質(zhì)譜圖的加和就形成了總離子流圖。定性分析—AgilentMasshunterQualitativeAnalysis雙擊圖標(biāo)，打開定性分析軟件，“AgilentMasshunterQualitativeAnalysis”，可分析GCMS類，LCMS類，TOF，QTOF等，首次使用請“按需”進(jìn)行界面配置。定性分析詳細(xì)的入門手冊可以從定性軟件“幫助”菜單獲得QualitativeAnalysis安裝要求：win64位操作系統(tǒng)，與Excel匹配使用，但與WPS辦公套件不兼容?。寇浖惭b目錄下有學(xué)習(xí)手冊QualitativeAnalysis介紹定性軟件的主要功能區(qū)常用快捷鍵和介紹如下：QualitativeAnalysis定性分析在定性分析軟件內(nèi)，各個(gè)窗口可以任意拖動排列。如果需要默認(rèn)窗口設(shè)置界面，可以通過配置菜單欄→

單擊窗口布局>恢復(fù)默認(rèn)布局來實(shí)現(xiàn)。QualitativeAnalysis定性分析放大或縮小譜圖1.鼠標(biāo)右鍵在坐標(biāo)軸外側(cè)拖劃2.鼠標(biāo)右鍵直接圈劃指定圖譜區(qū)域單擊譜圖窗口左上側(cè)的“完全縮小”復(fù)原。QualitativeAnalysis定性分析提取離子流圖（EIC）在色譜圖結(jié)果區(qū)域點(diǎn)擊右鍵，在彈出的菜單選擇“提取色譜圖”，如提取EIC，則在下圖中的“類型”中選擇“EIC”

，在“m/z”

值處輸入要提取的質(zhì)量數(shù)或范圍，選擇OK即可。m/z=388QualitativeAnalysis定性分析提取紫外色譜圖（前提：數(shù)據(jù)采集中已記錄UV信號）QualitativeAnalysis定性分析提取質(zhì)譜圖方法一：某時(shí)間點(diǎn)的質(zhì)譜圖，直接在TIC該點(diǎn)處“雙擊左鍵”即可；方法二：提取某段時(shí)間內(nèi)的平均質(zhì)譜圖，首先選擇圖標(biāo)，在色譜圖上按住鼠標(biāo)左鍵并拖拉鼠標(biāo)，選擇一段范圍，然后雙擊鼠標(biāo)左鍵，則得到選擇時(shí)間段的平均質(zhì)譜圖；方法三：通過鼠標(biāo)右鍵“提取質(zhì)譜圖”（略）；方法四：左側(cè)方法導(dǎo)航欄內(nèi)的“提取質(zhì)譜圖”（略）。左鍵雙擊選擇指定區(qū)左鍵雙擊

正離子模式ESI+：

[M+H]+

[M+1]+

[M+nH]n+

[M+n]n+

[M+Na]+

[M+23]+

[M+K]+[M+39]+

[M+NH4]+[2M+18]+

[2M+H]+[2M+1]+

[2M+Na]+[2M+23]+

負(fù)離子模式(ESI-)：

[M-H]-

M-1

QualitativeAnalysis定性分析ESI源常見離子“加合”模式對于多電荷離子：m/z=(M+n)/nm/z50-150,溶劑離子，[(H2O)nH+

，n=3-112]m/z102,H+乙腈

+乙酸,C4H7NO2H+,102.0549m/z149,管路中鄰苯二甲酸酯的酸酐,C8H4O3H+,149.0233m/z288,2mm離心管的產(chǎn)生的特征離子m/z279,管路中鄰苯二甲酸二丁酯

C16H22O4H+,279.1591m/z316,2mm離心管的產(chǎn)生的特征離子m/z384,瓶的光穩(wěn)定劑產(chǎn)生的離子m/z391,管路中鄰苯二甲酸二辛酯,C24H38O4H+,391.2843m/z413,鄰苯二甲酸二辛酯+鈉,C24H38O4Na+,413.2668m/z538,乙酸+氧

+鐵（噴霧管）,Fe3O(O2CCH3)6,537.8793

LC-MS中常見的本底離子QualitativeAnalysis定性分析提取和