2025年華東師大版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年華東師大版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷457考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級(jí)：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五六總分得分評(píng)卷人得分一、選擇題(共5題，共10分)1、實(shí)驗(yàn)人員利用矮牽牛（二倍體，2n=14）的紅色花瓣細(xì)胞（液泡呈紅色）與枸杞（四倍體，4n=48）葉肉細(xì)胞，制備了相應(yīng)的原生質(zhì)體，并誘導(dǎo)其融合，經(jīng)篩選、培養(yǎng)獲得雜種植株。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.獲得該雜種植株時(shí)不用考慮兩種高等植物間的生殖隔離問題B.可利用聚乙二醇、滅活的病毒等作為融合劑誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合C.可利用光學(xué)顯微鏡觀察，篩選出雜種原生質(zhì)體D.若原生質(zhì)體均為兩兩融合，則融合后的細(xì)胞中染色體數(shù)目可能為28、96或62條2、生物武器不包括（）A.致病菌及經(jīng)過基因重組的致病菌B.生化毒劑C.病毒D.所有微生物3、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF20）會(huì)在肺癌、胃癌及結(jié)腸癌細(xì)胞中過量表達(dá)，可作為潛在的腫瘤標(biāo)志物。因此抗FCF20抗體可以用于癌癥早期診斷篩查及預(yù)后評(píng)估。研究者設(shè)計(jì)如下流程制備抗FCF20單克隆抗體。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.①過程可用胰蛋白酶處理剪碎后的小鼠脾臟B.②過程應(yīng)先用聚乙二醇或滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合C.②③過程篩選相關(guān)細(xì)胞時(shí)都需用選擇培養(yǎng)基D.④過程可將細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)或體外培養(yǎng)4、生物技術(shù)在食品加工中具有廣泛的應(yīng)用，如利用微生物釀制果酒。下列有關(guān)利用葡萄釀制果酒過程的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.適當(dāng)增加酵母菌的接種量，可以縮短發(fā)酵的時(shí)間B.酒精積累是導(dǎo)致發(fā)酵液中細(xì)菌數(shù)量降低的原因之一C.釀酒過程中發(fā)酵罐要始終處于密封狀態(tài)，以保證無氧的環(huán)境D.葡萄的品質(zhì)、酵母菌菌種的純度都會(huì)影響果酒的品質(zhì)5、廣式高鹽稀態(tài)醬油發(fā)酵工藝中鹽分含量對于發(fā)酵過程和產(chǎn)品風(fēng)味至關(guān)重要，其作用之一是防腐抑菌，淘汰非耐鹽野生雜菌或有害微生物。隨著健康中國建設(shè)的推進(jìn)，醬油的減鹽成為一種趨勢?？蒲腥藛T研究了不同鹽分條件下不同發(fā)酵階段微生物群落結(jié)構(gòu)的變化，結(jié)果如下表所示。下列說法錯(cuò)誤的是（）

不同鹽分雜件下不同發(fā)酵階段各類微生物菌落總數(shù)。樣品菌落總數(shù)/（1gCFU/mL）細(xì)菌真菌乳酸菌乳酸菌LI6.954.876.18LⅡ6、656.466.37LⅢ5.874.724.60MI6.934.034.70MⅡ6.416.325.52MⅢ5.574.075.11HI6.823.484.60HⅡ6.155.785.84HⅢ5.392.434.93

注，L、M、H分別表示低鹽組（120g/L）、中鹽組（150g/L）、高鹽組（170g/L），I、Ⅱ、Ⅲ分別表示發(fā)酵第5天、發(fā)酵第25天、發(fā)酵第55天A.高濃度鹽分能通過提高培養(yǎng)液的滲透壓來實(shí)現(xiàn)防腐抑菌B.在發(fā)酵初期，鹽濃度的提高對真菌及乳酸菌形成有效抑C.在發(fā)酵過程中，細(xì)菌、真菌、乳酸菌的數(shù)量的顯現(xiàn)降低趨勢D.隨時(shí)檢測培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量，可以更好地了解發(fā)酵進(jìn)程評(píng)卷人得分二、多選題(共7題，共14分)6、下列動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中屬于原代培養(yǎng)的是（）A.通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)B.從機(jī)體取得細(xì)胞后立即進(jìn)行培養(yǎng)的過程C.出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象后接下來的細(xì)胞培養(yǎng)過程D.哺乳動(dòng)物細(xì)胞在培養(yǎng)基中的懸浮生長過程7、有關(guān)質(zhì)粒的敘述，下述說法不正確的為（）A.質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞不可缺少的遺傳物質(zhì)B.質(zhì)?？捎糜诨虻臄U(kuò)增和蛋白質(zhì)的表達(dá)C.每個(gè)細(xì)菌細(xì)胞都都含有一個(gè)質(zhì)粒D.質(zhì)粒都由4種脫氧核糖核苷酸脫水縮合而成8、下圖是我國科學(xué)家制備小鼠孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞的相關(guān)研究流程；其中Oct4基因在維持胚胎干細(xì)胞全能性和自我更新中發(fā)揮極其重要的作用。下列敘述正確的是（）

A.受精卵發(fā)育過程中桑椹胚前的細(xì)胞都是全能性細(xì)胞B.推測Oct4基因的表達(dá)有利于延緩衰老C.過程③胚胎干細(xì)胞細(xì)胞核大、核仁明顯D.從卵巢中獲取的卵母細(xì)胞可直接用于過程①9、甲流試劑盒中的抗血凝素單克隆抗體能與甲流病毒的血凝素蛋白（HA）特異性結(jié)合，發(fā)揮診斷作用。利用小鼠制備抗HA單克隆抗體的流程如圖，下列敘述正確的是（）

A.制備抗HA單克隆抗體使用的B淋巴細(xì)胞取自注射過HA的小鼠脾臟B.在特定的選擇培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡C.放入96孔板的細(xì)胞為多種雜交瘤細(xì)胞，均能產(chǎn)生所需抗體D.將圖中細(xì)胞群a在體外大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取出大量的抗HA單克隆抗體10、某植物有甲、乙兩品種，科研人員在設(shè)計(jì)品種乙組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，參照品種甲的最佳激素配比（見下表）進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。為確定品種乙的II階段的最適細(xì)胞分裂素濃度，參照表中α2（α2>2．0μmol·L-1），以0．5μmol·L-1為梯度，設(shè)計(jì)5個(gè)濃度水平的實(shí)驗(yàn)，其中細(xì)胞分裂素最高濃度設(shè)為M。下列有關(guān)敘述正確的是（）。品種甲組織培養(yǎng)階段細(xì)胞分裂素/（μmol·L-1）生長素/（μmol·L-1）I誘導(dǎo)形成愈傷組織α1b1II誘導(dǎo)形成幼芽α2b2Ⅲ誘導(dǎo)生根α3b3

A.表中發(fā)生基因選擇性表達(dá)的是II和Ⅲ階段B.實(shí)驗(yàn)中共配制了2種不同的培養(yǎng)基，即生根培養(yǎng)基和生芽培養(yǎng)基C.確定品種乙II階段最適細(xì)胞分裂素濃度的實(shí)驗(yàn)中，M為α2+2μmol·L-1D.生長素和細(xì)胞分裂素的配比是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵因素11、某種物質(zhì)S（一種含有C；H、N的有機(jī)物）難以降解；會(huì)對環(huán)境造成污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過程中需要甲，乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機(jī)鹽、水和S，乙的組分為無機(jī)鹽、水、S和Y下列分析正確的是（）

A.Y物質(zhì)是瓊脂，甲和乙均需采用高壓蒸汽滅菌B.若搖瓶甲細(xì)菌細(xì)胞估算數(shù)為2×107個(gè)/mL，每個(gè)平板接種量為0．1mL，菌落平均數(shù)為200個(gè)，則搖瓶內(nèi)菌液至少稀釋104倍C.③過程所使用的接種環(huán)，需采用灼燒滅菌法進(jìn)行滅菌D.⑤過程中若S的濃度超過某一濃度時(shí)，菌株對S的降解量可能會(huì)下降12、據(jù)統(tǒng)計(jì)，從20世紀(jì)90年代至今，全世界包括基因制藥在內(nèi)的生物技術(shù)藥物的銷售額以年均30%的速度增長，生物制藥已成為21世紀(jì)的朝陽產(chǎn)業(yè)。下列有關(guān)說法正確的是（）A.利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)還可以進(jìn)行基因治療，現(xiàn)在技術(shù)已經(jīng)完全成熟B.對于基因制藥，我們應(yīng)該科學(xué)地認(rèn)識(shí)和評(píng)估，保障公眾的知情權(quán)C.由于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全問題，國家應(yīng)建立相應(yīng)的評(píng)估及預(yù)警機(jī)制D.我們可以利用轉(zhuǎn)基因工程技術(shù)使哺乳動(dòng)物本身變成“批量生產(chǎn)藥物的工廠”評(píng)卷人得分三、填空題(共9題，共18分)13、一般包括______、______等技術(shù)14、哺乳動(dòng)物核移植可以分為______核移植（比較容易）和______核移植（比較難）。15、基因工程操作一般經(jīng)歷如下四個(gè)步驟：_____。16、假設(shè)PCR反應(yīng)中，只有一個(gè)DNA片段作為模板，請計(jì)算在30次循環(huán)后，反應(yīng)物中大約有個(gè)這樣的_______個(gè)DNA片段，一共需要加入______________個(gè)引物。17、PCR技術(shù)的DNA體外復(fù)制環(huán)境有DNA解旋酶、耐熱DNA聚合酶、DNA母鏈、4種脫氧核苷酸和__________，它能使DNA聚合酶能夠從引物的________端開始連接脫氧核苷酸。（人教P58列表），而引物是一段______________片段，用于PCR的引物長度通常為____個(gè)核苷酸。18、科學(xué)家采用定點(diǎn)誘變的方法構(gòu)建T4溶菌酶的新蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)其中一種新蛋白質(zhì)的第9和第164位氨基酸殘基被轉(zhuǎn)換為半胱氨酸殘基，并形成一個(gè)二硫鍵。這種新蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性會(huì)有什么變化？這項(xiàng)技術(shù)的要點(diǎn)是什么？_________19、不同國家的政府對待生殖性克隆人的態(tài)度是不同的?我們認(rèn)同我國政府對待生殖性克隆人研究的態(tài)度嗎？為什么？_____。20、基因表達(dá)載體的組成及其作用。

一個(gè)基因表達(dá)載體的組成，除了______________、_______________外，還必須有__________、______________等(如圖所示)。

①______________②______________③______________

④______________⑤______________⑥______________

⑦_(dá)_____________21、有時(shí)還需進(jìn)行______的鑒定。如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)______。評(píng)卷人得分四、判斷題(共2題，共4分)22、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎兒的各種組織，滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤。（選擇性必修3P58）()A.正確B.錯(cuò)誤23、要對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，最終必須通過改造氨基酸序列來完成。()A.正確B.錯(cuò)誤評(píng)卷人得分五、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共16分)24、單克隆抗體特異性強(qiáng)；靈敏度高，用于診療疾病具有準(zhǔn)確；高效等特點(diǎn)。下圖表示單克隆抗體制備過程。

回答下列問題：

（1）若細(xì)胞B是小鼠的骨髓瘤細(xì)胞；則A是_________________細(xì)胞，誘導(dǎo)d過程常用的因素是_________________（答出一個(gè)即可）。

（2）用于篩選細(xì)胞D的培養(yǎng)基必需滿足兩個(gè)條件：一是_________________細(xì)胞都會(huì)死亡；二是保證_________________細(xì)胞能生長。

（3）使用合成培養(yǎng)基體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞時(shí)；通常需要加入_________________等一些天然成分，并置于含有_________混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（4）制備抗新冠病毒單克隆抗體檢測試劑，可用_________________（選填數(shù)字標(biāo)號(hào)：①新冠病毒滅活疫苗、②新冠病毒RNA疫苗、③新冠病毒滅活疫苗或RNA疫苗）免疫小鼠，以獲得圖中的A細(xì)胞。25、（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮______、______和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、______、______等優(yōu)點(diǎn)；因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。

（2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行________（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和______；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能__________。

（3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的_______。

（4）通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的____________。

（5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是_________。

（6）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_______處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。26、丙肝病毒引起的丙型肝炎可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化；部分患者可能發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。為研制丙肝病毒的單克隆抗體，某研究者以小鼠為實(shí)驗(yàn)材料設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)流程?；卮鹣铝袉栴}：

(1)為使單細(xì)胞懸液中的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的抗體中一定含有能與丙肝病毒結(jié)合的抗體，需要進(jìn)行的操作是______。融合之前的兩種細(xì)胞中，能通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)大量增加數(shù)量的是____

(2)誘導(dǎo)細(xì)跑融合時(shí)利用的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶，能夠與細(xì)胞膜上的______（填化學(xué)本質(zhì)）發(fā)生作用，使得細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的______重新排布，細(xì)胞發(fā)生融合。篩選1利用______進(jìn)行篩選，而篩選2通過多次的_______來完成。

(3)得到大量丙肝病毒單克隆抗體的方法之一是將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，接入培養(yǎng)液中雜交瘤細(xì)胞的量是單克隆抗體產(chǎn)量的重要影響因素之一，為探究一定培養(yǎng)液中接種雜交瘤細(xì)胞的最佳數(shù)量，實(shí)驗(yàn)思路為_______。27、被稱為“水中小白鼠”的斑馬魚是一種體長4厘米左右的熱帶淡水魚；與人類基因同源性高達(dá)87%，并有相似的器官；生理功能和信號(hào)通路。由于發(fā)育周期短、費(fèi)用低、體外受精、透明等優(yōu)點(diǎn)，斑馬魚現(xiàn)在越來越廣泛地應(yīng)用于毒性檢測、疾病模型創(chuàng)制、藥物篩選等領(lǐng)域中。

研究人員欲通過使胰島素基因表達(dá)受阻從而構(gòu)建糖尿病模型斑馬魚。嗎啉反義寡核苷酸是一種RNA剪接抑制劑；通過將其注入斑馬魚受精卵可阻礙相關(guān)基因的表達(dá)。針對其作用原理，現(xiàn)有兩種假說：

假說1：嗎啉反義寡核苷酸導(dǎo)致RNA前體上內(nèi)含子2的對應(yīng)序列不能被剪切。

假說2：嗎啉反義寡核苷酸導(dǎo)致RNA前體上內(nèi)含子2和外顯子3的對應(yīng)序列同時(shí)被剪切。

為了驗(yàn)證上述假說；研究人員進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：

(1)從受精卵發(fā)育了3天的實(shí)驗(yàn)組和對照組的細(xì)胞中提取總RNA，再通過逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。若假說1成立，選擇上圖所示引物2和引物3進(jìn)行PCR后的結(jié)果為______（填字母）。A．實(shí)驗(yàn)組有雜交帶B．實(shí)驗(yàn)組無雜交帶C．對照組有雜交帶D．對照組無雜交帶(2)若要證明假說2成立，進(jìn)行PCR時(shí)，需要選擇上圖所示引物有____________。

(3)采用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA需要引物的原因是__________________。

(4)為了獲取大量斑馬魚胚胎干細(xì)胞用于藥物篩選，可加入__________________，用于分散斑馬魚囊胚中的__________________。再取分散細(xì)胞作為初始材料進(jìn)行______培養(yǎng)，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中添加輸卵管上皮細(xì)胞作為______細(xì)胞，以提高斑馬魚胚胎干細(xì)胞的數(shù)量。評(píng)卷人得分六、綜合題(共4題，共12分)28、由西班牙研究團(tuán)隊(duì)在《Science》雜志上刊登的一項(xiàng)最新研究成果表明；當(dāng)T淋巴細(xì)胞的代謝能力發(fā)生變化時(shí)，體內(nèi)積累的炎癥會(huì)讓動(dòng)物未老先衰，出現(xiàn)各種“老年病”。這一成果表明了T淋巴細(xì)胞在動(dòng)物體衰老進(jìn)程中的重要作用?；卮鹣铝袉栴}：

（1）對于多細(xì)胞生物而言個(gè)體的衰老意味著體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞的衰老，生物體內(nèi)衰老細(xì)胞的及時(shí)清除體現(xiàn)了免疫系統(tǒng)的___________功能。

（2）有科學(xué)家提出可利用人體細(xì)胞培養(yǎng)出T淋巴細(xì)胞；再通過向人體內(nèi)適當(dāng)輸入T淋巴細(xì)胞來延緩衰老。下面是該設(shè)想的流程圖。

過程①的培養(yǎng)液中除合成培養(yǎng)基的成分外，還需添加___________等天然成分，同時(shí)要保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于___________的環(huán)境中。進(jìn)行過程②時(shí)，需要先利用___________技術(shù)將四種目的基因擴(kuò)增。iPS細(xì)胞是一類具有胚胎干細(xì)胞特性的細(xì)胞。哺乳動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞是由___________中分離出來的一類細(xì)胞，在功能上具有發(fā)育的___________。過程③的實(shí)質(zhì)是___________。29、玉米是重要經(jīng)濟(jì)作物；常受到玉米螟危害而減產(chǎn)。研究人員發(fā)現(xiàn)玉米螟若食用某種原核生物分泌的γ—蛋白后將會(huì)死亡，由此他們將γ—蛋白基因轉(zhuǎn)入到玉米體內(nèi)，使玉米獲得抗玉米螟危害的能力。據(jù)圖回答下列問題：

（1）若用限制酶E和F從原核生物基因組DNA上切下γ—蛋白的基因，并將之取代質(zhì)粒Z1上相應(yīng)的E—F區(qū)域（0.4kb，1kb＝1000對堿基）。圖中E、F、G、H是4種識(shí)別序列完全不同的限制酶及其部分識(shí)別位點(diǎn)，已知用限制酶G切割Z1，只能得到大小為2.5kb的DNA片段，用限制酶E和F切割Z1時(shí)，可得到0.4kb和4.6kb的DNA片段。

①質(zhì)粒Z1上有________個(gè)限制酶G的酶切位點(diǎn)，有________個(gè)限制酶E的酶切位點(diǎn)。

②若圖中所形成的重組質(zhì)粒Z2的大小為5.4kb，則目的基因的大小是________。

（2）構(gòu)建的基因表達(dá)載體一般具有目的基因和________及標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)等結(jié)構(gòu)，將目的基因?qū)朕r(nóng)桿菌時(shí)，需先拼接到特定質(zhì)粒的________上。最后用接蟲法檢測玉米是否獲得抗玉米螟的能力。

（3）標(biāo)記基因的作用是________________________。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是________________。30、尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥；但尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收，土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某課題小組從土壤中分離能夠分解尿素的細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)的過程如圖所示。請分析回答下列問題：

(1)圖中甲培養(yǎng)基與乙培養(yǎng)基的物理狀態(tài)不同，二者在成分上的主要區(qū)別是______________。乙培養(yǎng)基中為微生物的生長提供氮源的是______________。

(2)調(diào)pH之后，通常利用高壓蒸汽滅菌鍋對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。為了確定培養(yǎng)基滅菌效果是否達(dá)到要求，可隨機(jī)取若干_________________，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察該培養(yǎng)基是否出現(xiàn)______________；若沒有出現(xiàn)，則證明培養(yǎng)基滅菌合格。

(3)在涂布平板前需要對甲中的菌液進(jìn)行稀釋，為確定對菌液的稀釋程度是否合適，可采取的方法是________________。

(4)圖中所用的計(jì)數(shù)方法是_______________。利用該方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是____________________________。31、腸道微生物對宿主健康具有重要影響；但目前缺乏對特定菌株進(jìn)行基因編輯的有效手段?？蒲腥藛T嘗試使用M13噬菌體作為載體，對大腸桿菌進(jìn)行基因編輯。M13噬菌體與T2噬菌體相似；能夠侵染大腸桿菌，但被M13噬菌體侵染的大腸桿菌不發(fā)生裂解。

(1)科研人員將綠色熒光蛋白基因特異性序列（sgfp）；Cas酶基因與利用特定方法得到的M13噬菌體的環(huán)狀DNA進(jìn)行重組；構(gòu)建重組基因編輯質(zhì)粒（pCG）、如圖1。

①構(gòu)建pCG需要用到的工具酶有_____。

②以pCG的綠色熒光蛋白基因特異性序列（sgfp）經(jīng)_____過程形成的RNA；會(huì)靶向結(jié)合綠色熒光蛋白基因，從而使Cas酶能夠切割綠色熒光蛋白基因。

(2)科研人員將綠色熒光蛋白基因和紅色熒光蛋白基因?qū)氪竽c桿菌，獲得GS菌株。先用添加GS菌株的飼料喂養(yǎng)小鼠，一段時(shí)間后，將小鼠分為實(shí)驗(yàn)組和對照組。其中，實(shí)驗(yàn)組小鼠用添加含_____的M13噬菌體和的_____飼料喂養(yǎng)，以篩選獲得腸道微生物被基因編輯的小鼠。本實(shí)驗(yàn)對照組使用的質(zhì)粒不包括圖1中的_____。

(3)為確認(rèn)M13噬菌體作為載體對大腸桿菌進(jìn)行基因編輯的可行性和特異性；科研人員檢測腸道微生物的變化，結(jié)果如圖2；3所示。

①圖2中，標(biāo)號(hào)為b、c的區(qū)域分別代表含有紅綠疊加色熒光的微生物和無熒光的微生物，a區(qū)代表含有_____熒光的微生物。

②解釋實(shí)驗(yàn)組第0天到第14天腸道微生物熒光類型發(fā)生變化的原因：_____。參考答案一、選擇題(共5題，共10分)1、B【分析】【分析】

誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合前；先要采用酶解法（纖維素酶和果膠酶）去除細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體；誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合時(shí)，可以采用物理方法（電激；振動(dòng)等）和化學(xué)方法（聚乙二醇）；若原生質(zhì)體均為兩兩融合，則會(huì)形成3種細(xì)胞，即矮牽牛細(xì)胞自身融合的細(xì)胞、枸杞細(xì)胞自身融合的細(xì)胞，雜種細(xì)胞?？衫蔑@微鏡篩選得到融合后的雜種原生質(zhì)體。

【詳解】

A；植物體細(xì)胞雜交技術(shù)能克服遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙；因此獲得該雜種植株時(shí)不用考慮兩種高等植物間的生殖隔離問題，A正確；

B；誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合時(shí)不能用滅活的病毒作為誘導(dǎo)劑；B錯(cuò)誤；

C；顯微鏡下可以觀察到染色體；因此可利用光學(xué)顯微鏡觀察，篩選出雜種原生質(zhì)體，C正確；

D；若原生質(zhì)體均為兩兩融合；則有三種情況，即矮牽牛細(xì)胞自身融合、枸杞細(xì)胞自身融合、矮牽牛細(xì)胞和枸杞細(xì)胞融合，因此融合后的細(xì)胞中染色體數(shù)目可能為28、96或62條，D正確。

故選B。2、D【分析】【分析】

生物武器種類：包括致病菌；病毒、生化毒劑；以及經(jīng)過基因重組的致病菌等。把這些病原體直接或者通過食物、生活必需品等散布到敵方，可以對軍隊(duì)和平民造成大規(guī)模殺傷后果。

【詳解】

結(jié)合分析可知；生物武器種類包括致病微生物；病毒、生化毒劑，以及經(jīng)過基因重組的致病菌等，不包括所有微生物，D符合題意。

故選D。3、C【分析】【分析】

1；單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)；之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng),即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

2；兩次篩選：第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞(去掉未雜交的細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞)；第二次篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。

3；雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量增殖；又能產(chǎn)生特異性抗體。

4；誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有：物理法(離心、振動(dòng))、化學(xué)法(聚乙二醇)、生物法(滅活的病毒)。

5；單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比；最大的優(yōu)勢在于特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備。

【詳解】

A；①過程可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理剪碎后的小鼠脾臟；獲得分散的細(xì)胞，A正確；

B；②過程屬于動(dòng)物細(xì)胞融合；誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法包括化學(xué)法(聚乙二醇)和生物法(滅活的病毒)，B正確；

C；②過程屬于第一次篩選；需要用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，③過程需要進(jìn)行抗體陽性檢測，無需選擇培養(yǎng)基，C錯(cuò)誤；

D；④過程屬于單克隆抗體擴(kuò)增；可將細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)或體外培養(yǎng)，從而獲得大量單克隆抗體，D正確。

故選C。4、C【分析】【分析】

參與果酒制作的微生物是酵母菌；其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型。

【詳解】

A；若適當(dāng)增加酵母菌的接種量；則可以縮短發(fā)酵的時(shí)間，A正確；

B；酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精；酒精具殺菌作用，發(fā)酵液中酒精積累是細(xì)菌數(shù)量降低的原因之一，B正確；

C、釀制果酒時(shí)，一般先通入空氣，以利于酵母菌大量繁殖。酒精發(fā)酵過程中會(huì)產(chǎn)生CO2；應(yīng)適時(shí)排放，C錯(cuò)誤；

D；葡萄的品質(zhì)、酵母菌菌種的純度都會(huì)影響果酒的品質(zhì)；D正確。

故選C。5、C【分析】【分析】

1；鹽分能通過提高培養(yǎng)液的滲透壓使微生物失水死亡；從而實(shí)現(xiàn)防腐抑菌；

2；在發(fā)酵初期；鹽濃度的提高對真菌及乳酸菌形成有效抑制；

3；發(fā)酵過程中；隨時(shí)檢測培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量，可以更好地了解發(fā)酵進(jìn)程。

【詳解】

A；高濃度鹽分能通過提高培養(yǎng)液的滲透壓使微生物失水死亡；從而實(shí)現(xiàn)防腐抑菌，A正確；

B；由表格內(nèi)容可知；在發(fā)酵初期提高鹽濃度，對真菌及乳酸菌形成有效抑制，B正確；

C；由表中數(shù)據(jù)可知；低鹽組、中鹽組和高鹽組的細(xì)菌數(shù)量隨發(fā)酵時(shí)間推移數(shù)量減少；而真菌和乳酸菌數(shù)量隨著發(fā)酵時(shí)間的推移呈現(xiàn)先增后減的趨勢，C錯(cuò)誤；

D；發(fā)酵過程中；隨時(shí)檢測培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量，可以更好地了解發(fā)酵進(jìn)程，D正確。

故選C。二、多選題(共7題，共14分)6、A:B【分析】【分析】

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)；取幼齡動(dòng)物的組織，剪碎后，用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸浮液，轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)液中進(jìn)行的培養(yǎng)是原代培養(yǎng)；當(dāng)細(xì)胞貼滿瓶壁，在用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸浮液，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進(jìn)行的是傳代培養(yǎng)。

【詳解】

A；通常將動(dòng)物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)；A正確；

B；從機(jī)體取得細(xì)胞后立即進(jìn)行培養(yǎng)過程是原代培養(yǎng)；B正確；

C；出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象后；接去下的細(xì)胞的培養(yǎng)過程是傳代培養(yǎng)，C錯(cuò)誤；

D；無論原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)細(xì)胞過程；細(xì)胞都有在培養(yǎng)基中的懸浮生長過程，D錯(cuò)誤。

故選AB。7、A:C【分析】【分析】

質(zhì)粒是細(xì)胞染色體外能夠復(fù)制得很小的環(huán)狀DNA分子。廣義上說幾乎所有的細(xì)胞都有質(zhì)粒(比如線粒體DNA)；狹義上指存在于許多細(xì)菌酵母菌；放線菌等生物中的質(zhì)粒。質(zhì)粒與染色體DNA一樣都是雙鏈DNA分子，質(zhì)粒亦可攜帶遺傳信息，質(zhì)粒上面一般含有幾個(gè)到幾百個(gè)基因，控制著細(xì)菌的抗藥性、固.氮、抗生素生成等性狀。然而質(zhì)粒也有一些與染色體DNA不同的特性。

質(zhì)粒具有以下特點(diǎn)；質(zhì)?？梢元?dú)立復(fù)制；質(zhì)粒很小細(xì)菌質(zhì)粒的分子量乙般較小，約為細(xì)菌DNA的0.5%~3%；質(zhì)粒的存在與否對宿主細(xì)胞生存沒有決定性作用。

【詳解】

A；細(xì)菌的遺傳物質(zhì)是DNA；質(zhì)粒是某些細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中小型的環(huán)狀DNA，質(zhì)粒的存在與否對宿主細(xì)胞生存沒有決定性作用，因此，質(zhì)粒不是細(xì)菌細(xì)胞不可缺少的遺傳物質(zhì)，A錯(cuò)誤；

B；質(zhì)粒可以獨(dú)立復(fù)制；因此，目的基因與質(zhì)粒連接后形成重組質(zhì)粒之后，目的基因可隨著質(zhì)粒DNA的復(fù)制而復(fù)制，質(zhì)粒上有基因存在，如質(zhì)粒上有抗性基因的存在，因此質(zhì)粒還可控制蛋白質(zhì)的表達(dá)，B正確；

C；細(xì)菌細(xì)胞不都含有質(zhì)粒；且每個(gè)細(xì)菌細(xì)胞不都含有一個(gè)質(zhì)粒，C錯(cuò)誤；

D；質(zhì)粒是小型的環(huán)狀DNA分子；因此，是由4種脫氧核糖核苷酸脫水縮合而成的，D正確。

故選AC。

【點(diǎn)睛】8、A:B:C【分析】【分析】

分析圖示可知；將卵子去核，然后注入Oct4轉(zhuǎn)基因小鼠的精子，用氧化鍶激活，可使該換核的細(xì)胞形成雄原核，并分裂分化形成單倍體囊，最終形成孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞。

【詳解】

A；由于桑椹胚期的細(xì)胞沒有出現(xiàn)分化；桑椹胚前的細(xì)胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能，是全能性細(xì)胞，A正確；

B；從題干可知；Oct4基因在維持胚胎干細(xì)胞全能性和自我更新中發(fā)揮極其重要的作用，可推測Oct4基因的表達(dá)有利于延緩衰老，B正確；

C；過程③胚胎干細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特性；體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯，C正確；

D；卵巢中取出來的是未成熟的卵細(xì)胞；要進(jìn)行培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂的中期才能受精，不能直接用于過程①，D錯(cuò)誤。

故選ABC。

【點(diǎn)睛】9、A:B:D【分析】【分析】

單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)；之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

【詳解】

A；抗原與抗體的結(jié)合具有特異性；為制備抗HA單克隆抗體，則使用的B淋巴細(xì)胞應(yīng)取自注射過HA的小鼠脾臟，A正確；

B；在特定的選擇培養(yǎng)基上；未融合的親本細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞類型、骨髓瘤細(xì)胞類型）和融合的具有同種核的細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞-B淋巴細(xì)胞型和骨髓瘤-骨髓瘤細(xì)胞型）都會(huì)死亡，B正確；

C；將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后；放入96孔板，不一定都能產(chǎn)生所需抗體，還需進(jìn)行抗體陽性檢測，C錯(cuò)誤；

D；據(jù)圖可知；圖中細(xì)胞群a在加入HA抗原后呈陽性，說明細(xì)胞群a產(chǎn)生了抗HA抗原的抗體，故將圖中細(xì)胞群a在體外大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取出大量的抗HA單克隆抗體，D正確。

故選ABD。10、A:B:D【分析】【分析】

植物組織培養(yǎng)中植物激素使用：物組織培養(yǎng)中關(guān)鍵性激素是生長素和細(xì)胞分裂素；同時(shí)使用生長素和細(xì)胞分裂素時(shí)；兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向；先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長素，細(xì)胞既分裂又分化。

【詳解】

A；Ⅰ階段為脫分化；II階段和Ⅲ階段為再分化，Ⅰ、II、Ⅲ階段中會(huì)發(fā)生基因的選擇性表達(dá)，A錯(cuò)誤；

B；實(shí)驗(yàn)至少配制了3種不同的培養(yǎng)基；即形成愈傷組織的培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基和生芽培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；

C、由于參照品種B的激素配比（a2＞2.0），以0.5μmol/L為梯度，設(shè)計(jì)5個(gè)濃度水平的實(shí)驗(yàn)，則細(xì)胞分裂素濃度依次為a2-1.0μmol/L、a2-0.5μmol/L、a2μmol/L、a2+0.5μmol/L、a2+1.0μmol/L，可見細(xì)胞分裂素的最高濃度M應(yīng)設(shè)為a2+1.0μmol/L；C錯(cuò)誤；

D；生長素和細(xì)胞分裂素的配比是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵因素；D正確。

故選ABD。11、A:B:D【分析】【分析】

由題圖信息分析可知；通過過程①獲得菌懸液，此過程中的淤泥不需要滅菌操作，過程②可以使分解S的細(xì)菌大量繁殖（選擇培養(yǎng)），過程③通過稀釋涂布獲得分解S物質(zhì)的單菌落，過程④再次對各種單菌落進(jìn)行篩選，經(jīng)過過程⑤多次篩選后獲得高效降解S的菌體。

【詳解】

A；甲和乙的培養(yǎng)基均需采用高壓蒸汽滅菌；乙與甲不同的是Y，乙的培養(yǎng)基上有菌落生長，說明是固體培養(yǎng)基，因此Y是凝固劑瓊脂，A正確；

B、利用稀釋涂布平板法對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，要保證每個(gè)平板上長出的菌落數(shù)為200個(gè)，假設(shè)稀釋倍數(shù)為a，在每個(gè)平板上涂布100μL（0.1ml）稀釋后的菌液，則有200×a÷0.1=2×107，則稀釋倍數(shù)a=104；B正確；

C；③過程采用的是稀釋涂布平板法；其接種工具為涂布器，涂布器需采用灼燒滅菌法進(jìn)行滅菌，C錯(cuò)誤；

D；⑤過程中若S的濃度超過某一濃度時(shí)；會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞由于滲透作用失水過多，會(huì)抑制菌株的生長，使得菌株對S的降解量可能會(huì)下降，D正確。

故選ABD。12、B:C:D【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物中基因來源是藥用蛋白基因和乳腺組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子；成果是乳腺生物反應(yīng)器?；蛑委熓前颜；?qū)氩∪梭w內(nèi)有缺陷的細(xì)胞中，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達(dá)到治療疾病的目的，目前還處于初期的臨床試驗(yàn)階段。轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)；過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。

【詳解】

A；轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以進(jìn)行基因治療；但現(xiàn)在技術(shù)還不成熟，A錯(cuò)誤；

B；由于人們對基因藥物持不同觀點(diǎn)；所以應(yīng)科學(xué)地認(rèn)識(shí)和評(píng)估，保障公眾的知情權(quán)，B正確；

C；轉(zhuǎn)基因生物的安全性包括食物安全、生物安全和環(huán)境安全問題；國家應(yīng)該設(shè)立多環(huán)節(jié)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)陌踩栽u(píng)價(jià)機(jī)制，C正確；

D；利用轉(zhuǎn)基因工程技術(shù)可以使哺乳動(dòng)物本身變成“批量生產(chǎn)藥物的工廠”；如有人將α-抗胰蛋白酶基因轉(zhuǎn)到羊體內(nèi)生產(chǎn)α-抗胰蛋白酶，D正確；

故選BCD。

【點(diǎn)睛】三、填空題(共9題，共18分)13、略

【解析】①.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)、②.動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體14、略

【解析】①.胚胎細(xì)胞②.體細(xì)胞15、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】提取目的基因、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。16、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】2030×22030×2－217、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】2種引物DNA或RNA20—3018、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)形成二硫鍵，使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，因此T4溶菌酶的熱穩(wěn)定性會(huì)提高。這項(xiàng)技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)，其步驟為從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需的蛋白質(zhì)?！窘馕觥繒?huì)提高T4溶菌酶的耐熱性。這項(xiàng)技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)，該技術(shù)的要點(diǎn)是從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需的蛋白質(zhì)。19、略

【分析】【詳解】

對待生殖性克隆人的研究，我國政府一再重申四不原則：不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)。因?yàn)樯承钥寺。ㄒ簿褪强寺∪耍?，違反人類繁衍的自然法則，損害人類作為自然人的尊嚴(yán)，會(huì)引起嚴(yán)重的道德、倫理、社會(huì)和法律問題。所以，現(xiàn)階段生殖性克隆絕對不可以應(yīng)用于人類本身?！窘馕觥空J(rèn)同。因?yàn)樯承钥寺。ㄒ簿褪强寺∪耍?，違反人類繁衍的自然法則，損害人類作為自然人的尊嚴(yán)，會(huì)引起嚴(yán)重的道德、倫理、社會(huì)和法律問題。所以，現(xiàn)階段生殖性克隆絕對不可以應(yīng)用于人類本身。20、略

【分析】略【解析】目的基因標(biāo)記基因啟動(dòng)子終止子啟動(dòng)子上游RNA聚合酶終止子下游轉(zhuǎn)錄標(biāo)記21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】個(gè)體生物學(xué)水平抗蟲性狀。四、判斷題(共2題，共4分)22、A【分析】【詳解】

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎兒的各種組織；滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤。

正確。23、B【分析】【詳解】

要對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造；最終必須通過改造基因中的堿基序列來完成，因?yàn)榛蚰苤笇?dǎo)蛋白質(zhì)的生物合成。

故錯(cuò)誤。五、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共16分)24、略

【分析】【分析】

1；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

（1）原理：細(xì)胞增殖。

（2）培養(yǎng)基性質(zhì)：液體培養(yǎng)基。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分與體內(nèi)細(xì)胞基本相同；如需要有葡萄糖；氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清或血漿，還有適量的抗生素以保證無菌環(huán)境。

（3）需要使用動(dòng)物血清。

（4）適宜的溫度：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。

（5）無菌條件下進(jìn)行。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素；以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害。

（6）氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。

2；單克隆抗體的制備：

（1）單克隆抗體制備的原理包括：①免疫原理：B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體。②細(xì)胞融合原理：利用病毒對宿主細(xì)胞的穿透性使B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合。③動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)；體外培養(yǎng)。

（2）單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)；之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（3）制備單克隆抗體過程中的幾種細(xì)胞：①免疫B細(xì)胞（漿細(xì)胞）：能產(chǎn)生單一抗體；但不能無限增殖。②骨髓瘤細(xì)胞：能無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。③雜交瘤細(xì)胞：既能產(chǎn)生單一抗體，又能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖。

（4）動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性；細(xì)胞的增殖。動(dòng)物細(xì)胞融合誘導(dǎo)手段有電刺激、聚乙二醇、滅活的病毒等；結(jié)果產(chǎn)生雜交細(xì)胞。

【詳解】

（1）若細(xì)胞B是小鼠的骨髓瘤細(xì)胞；則此過程可以為單克隆抗體的制備過程。故A是已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞或能產(chǎn)生特定抗體的B細(xì)胞。動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性；細(xì)胞的增殖。動(dòng)物細(xì)胞融合誘導(dǎo)手段（誘導(dǎo)d過程）有電刺激、聚乙二醇、滅活的病毒等，結(jié)果產(chǎn)生雜交細(xì)胞。

（2）一般來說；誘導(dǎo)A細(xì)胞和B細(xì)胞融合，形成C細(xì)胞后，必須利用選擇培養(yǎng)基來篩選出目的細(xì)胞。那么滿足的條件必須是：未融合的（親本）細(xì)胞和融合的同種（核的）細(xì)胞都會(huì)死亡，而雜交（瘤）細(xì)胞（或雜種細(xì)胞）能夠在選擇培養(yǎng)基上生長。

（3）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：一是液體培養(yǎng)基。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分與體內(nèi)細(xì)胞基本相同，如需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清或血漿，還有適量的抗生素以保證無菌環(huán)境。二是氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。

（4）選用免疫原性好的細(xì)菌；病毒、立克次體、螺旋體等；經(jīng)人工培養(yǎng)，再用物理或化學(xué)方法將其殺滅制成疫苗，即為滅活疫苗。而新冠病毒為RNA病毒，選用RNA疫苗都可以。故選③新冠病毒滅活疫苗或RNA疫苗。

【點(diǎn)睛】

本題考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、單克隆抗體制備的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)與觀點(diǎn)，對某些現(xiàn)實(shí)生活中的生物學(xué)問題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論。【解析】經(jīng)過（抗原、病原體）免疫的（小鼠）B（淋巴）細(xì)胞（或漿細(xì)胞，或已免疫的B細(xì)胞，或能產(chǎn)生特定抗體的B細(xì)胞）聚乙二醇（PEG）、滅活的（仙臺(tái)）病毒、電激（或電融合）未融合的（親本）細(xì)胞和融合的同種（核的）細(xì)胞雜交（瘤）細(xì)胞（或雜種細(xì)胞））血清（或血漿）95%空氣和5%CO2③25、略

【分析】【分析】

1；大腸桿菌屬于細(xì)菌；是原核生物。微生物營養(yǎng)成分主要有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽等，另外還需要注意滲透壓、溫度、pH等條件。大腸桿菌常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料．微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是無菌技術(shù)，防止外來雜菌的污染。

2；微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是無菌操作。使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子的過程稱為滅菌；常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。消毒是指用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體體表或內(nèi)部的一部分微生物的過程。常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法等。

【詳解】

（1）大腸桿菌具有體積??；結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點(diǎn)；培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。

（2）滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物；所以對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌；消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法，僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒，紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。

（3）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋；然后將不同稀釋度的菌液，分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)保證樣品稀釋的比例適合。

（4）對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀；大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。

（5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)；在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。

（6）因?yàn)橛械拇竽c桿菌會(huì)釋放一種強(qiáng)烈的毒素；并可能導(dǎo)致腸管出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。

【點(diǎn)睛】

本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記大腸桿菌的培養(yǎng)條件以及其作為遺傳實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)，區(qū)分掌握不同材料消毒和滅菌的方法，識(shí)記菌種鑒定的方法等，屬于基礎(chǔ)題?！窘馕觥竣?溫度②.酸堿度③.易培養(yǎng)④.生活周期短⑤.滅菌⑥.消毒⑦.損傷DNA的結(jié)構(gòu)⑧.比例合適⑨.鑒定(或分類)⑩.將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生.?.滅菌26、略

【分析】【分析】

單克隆抗體的制備過程：（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原；然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。（2）獲得雜交瘤細(xì)胞：①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。

【詳解】

（1）用丙肝病毒對小鼠進(jìn)行免疫后；小鼠的B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗丙肝病毒的抗體，從該小鼠的脾細(xì)胞中能獲得產(chǎn)生該抗體的B淋巴細(xì)胞。B淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下不能無限增殖，而骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖，故融合之前的兩種細(xì)胞中，能通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)大量增加數(shù)量的是骨髓瘤細(xì)胞。

（2）誘導(dǎo)細(xì)胞融合的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶；能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使得細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，在滅活病毒的誘導(dǎo)下，其上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜會(huì)發(fā)生融合。細(xì)胞融合后產(chǎn)生的融合細(xì)胞有B細(xì)胞間的融合；骨髓瘤細(xì)胞間的融合及B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的融合，會(huì)產(chǎn)生三類細(xì)胞。篩選1是指利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選得到雜交瘤細(xì)胞。由于雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體除了抗丙肝病毒的抗體外，還可能有其他類型，故篩選2是指進(jìn)行多次的克隆化培養(yǎng)和專一性抗體檢測，以得到能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。

（3）實(shí)驗(yàn)的自變量是培養(yǎng)液中接種雜交瘤細(xì)胞的數(shù)量，因變量為一定時(shí)間內(nèi)抗丙肝病毒抗體的數(shù)量，除自變量外，其他條件要相同且適宜。所以實(shí)驗(yàn)思路為：將適宜的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液分為體積相同的幾組（可自設(shè)組數(shù)）。在不同組別中接種不同量的能產(chǎn)生丙肝病毒的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，一定時(shí)間后測定培養(yǎng)液中的抗體含量?！窘馕觥?1)給小鼠注射丙肝病毒使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)骨髓瘤細(xì)胞。

(2)糖蛋白蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。

(3)將適宜的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液分為體積相同的幾組（可自設(shè)組數(shù)）。在不同組別中接種不同量的能產(chǎn)生丙肝病毒的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，一定時(shí)間后測定培養(yǎng)液中的抗體含量27、略

【分析】【分析】

根據(jù)題干信息分析；糖尿病模型斑馬魚的構(gòu)建的原理是使胰島素基因表達(dá)受阻，而使胰島素基因表達(dá)受阻是通過給斑馬魚受精卵注射嗎啉反義寡核苷酸實(shí)線的；嗎啉反義寡核苷酸是一種RNA剪接抑制劑，其作用的機(jī)理有兩種假說：可能是導(dǎo)致RNA前體上內(nèi)含子2的對應(yīng)序列不能被剪切，也可能是導(dǎo)致RNA前體上內(nèi)含子2和外顯子3的對應(yīng)序列同時(shí)被剪切。

(1)

根據(jù)引物2和引物3在胰島素基因片段上的位置；通過PCR擴(kuò)增能得到內(nèi)含子2的序列，若假說1成立，即嗎啉反義寡核苷酸導(dǎo)致RNA前體上內(nèi)含子2的對應(yīng)序列不能被剪切，故實(shí)驗(yàn)組中應(yīng)含有內(nèi)含子2的序列，而對照組的該片段被切除了，因此用引物2和引|物3進(jìn)行PCR反應(yīng)，其結(jié)果為實(shí)驗(yàn)組中有雜交帶，而對照組中無雜交帶。

故選AD。

(2)

若要證明假說2成立；即RNA前體上內(nèi)含子2和外顯子3的對應(yīng)序列同時(shí)被剪切下去，則可以選擇圖示引物5和引物2；引物5和引物6進(jìn)行PCR，觀察是否有雜交帶出現(xiàn)。

(3)

由于DNA聚合酶不能從頭合成DNA；而只能從引物3′端延伸DNA鏈，因此DNA復(fù)制需要引物。

(4)

用胰蛋白酶處理斑馬魚囊胚中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)；可以獲得分散的斑馬魚胚胎干細(xì)胞，然后對其進(jìn)行原代培養(yǎng)，接著分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中添加輸卵管上皮細(xì)胞作為飼養(yǎng)層細(xì)胞，以提高斑馬魚胚胎干細(xì)胞的數(shù)量。

【點(diǎn)睛】

解答本題的關(guān)鍵是掌握基因的表達(dá)的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，明確基因轉(zhuǎn)錄出來的mRNA是要經(jīng)過加工成為成熟的mRNA才能作為翻譯的模板的，并能夠根據(jù)題干提取有效信息進(jìn)行答題?！窘馕觥?1)AD

(2)5、65；2

(3)DNA聚合酶不能從頭合成DNA；只能從3′端延伸DNA鏈，因此DNA復(fù)制需要引物。（得分點(diǎn)：“只能從3′端延伸DNA鏈”）

(4)胰蛋白酶內(nèi)細(xì)胞團(tuán)原代飼養(yǎng)層六、綜合題(共4題，共12分)28、略

【分析】【分析】

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：

（1）充足的營養(yǎng)供給--微量元素；無機(jī)鹽、糖類、氨基酸、促生長因子、血清等。

（2）適宜的溫度：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。

（3）無菌；無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素；以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害。

（4）氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。

（1）

生物體內(nèi)衰老細(xì)胞的及時(shí)清除體現(xiàn)了免疫系統(tǒng)的監(jiān)控和清除功能。

（2）

過程①是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)；其培養(yǎng)液中除合成培養(yǎng)基的成分外，還需添加一定量的血清；血漿等天然成分，同時(shí)要保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境中。過程②是將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，導(dǎo)入前需要先利用PCR技術(shù)將四種目的基因擴(kuò)增。iPS細(xì)胞是一類具有胚胎干細(xì)胞特性的細(xì)胞。哺乳動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞，在功能上具有發(fā)育的全能性特點(diǎn)。過程③是細(xì)胞分化，其實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)。

【點(diǎn)睛】

本題以輸入T細(xì)胞延緩衰老為情境，考查T細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和基因工程技術(shù)的流程等知識(shí)，旨在考查考生的理解能力、實(shí)驗(yàn)與探究能力和綜合運(yùn)用能力，以及生命觀念和科學(xué)思維的核心素養(yǎng)?！窘馕觥浚?）監(jiān)控和清除。

（2）血清或血漿無菌、無毒PCR早期胚胎或原始性腺全能性基因的選擇性表達(dá)29、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：1；目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

（1）①據(jù)題意質(zhì)粒Zl大小為0.4+0.8+3.2+0.6=5.0kb。已知用限制酶G切割Z1，只能得到大小為2.5kb的DNA片段，可知質(zhì)粒Z1上有5.0÷2.5=2個(gè)限制酶G的酶切位點(diǎn)。由用限制酶E和F切割Z1時(shí)，可得到0.4kb和4.6kb的DNA片段；結(jié)合圖解可知，質(zhì)粒Z1上有1個(gè)限制酶E的酶切位點(diǎn)。

②據(jù)題意，用限制酶E和F切割Z1后得到的Z1片段大小為4.6kb，若圖中所形成的重組質(zhì)粒Z2的大小為5.4kb，則目的基因的大小是5.4-4.6=0.8kb。

（2）基因表達(dá)載體的組成包括啟動(dòng)子；終止子、目的基因、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)等結(jié)構(gòu)。農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T?DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞；并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，故將目的基因?qū)朕r(nóng)桿菌時(shí)，需先拼接到特定質(zhì)粒的T—DNA。最后用接蟲法檢測玉米是否獲得抗玉米螟的能力。

（3）標(biāo)記基因的作用是檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞；將含有目的基因的受體細(xì)胞篩選出來。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞時(shí)；根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。

【點(diǎn)睛】

本題考查基因工程的有關(guān)知識(shí)，解答本題的關(guān)鍵是識(shí)記基因工程的操作工具及具體的操作步驟，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合題干