2025年滬科版選擇性必修3生物上冊(cè)月考試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請(qǐng)※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁(yè)，總=sectionpages22頁(yè)第=page11頁(yè)，總=sectionpages11頁(yè)2025年滬科版選擇性必修3生物上冊(cè)月考試卷231考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級(jí)：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五六總分得分評(píng)卷人得分一、選擇題(共8題，共16分)1、“設(shè)計(jì)試管嬰兒”與一般所說的“試管嬰兒”多了哪一步（）A.體外受精B.胚胎移植C.基因檢測(cè)D.細(xì)胞核移植2、下列有關(guān)生物技術(shù)安全性及倫理問題的說法，正確的是（）A.針對(duì)他人的不同見解，你的正確做法是分析每種觀點(diǎn)的科學(xué)性，理性地看待問題，趨利避害B.人類利用設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)可以解決不孕夫婦的生育問題C.對(duì)于設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)，中國(guó)政府堅(jiān)持四不原則D.克隆技術(shù)如果被不合理利用將給社會(huì)造成災(zāi)難，應(yīng)禁止任何克隆研究3、科研工作者利用禽流感病毒蛋白制備單克隆抗體，下列步驟中敘述不正確的是（）A.用適宜濃度相同抗原多次免疫小鼠，以獲得更多的漿細(xì)胞B.用培養(yǎng)液培養(yǎng)禽流感病毒，通過離心獲得抗原蛋白C.可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞D.單克隆抗體相比血清抗體特異性更強(qiáng)，并且可以大量制備4、下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，正確的是（）A.菜花提取的DNA濾液中，加入冷酒精有利于溶解DNAB.雞血細(xì)胞液中，加入0．14mol/L的NaCl溶液有利于溶解細(xì)胞膜C.洋蔥鱗片葉碎片中，加入沐浴液和食鹽后研磨有利于去除細(xì)胞膜D.與雞血相比，用同樣方法從等體積兔血中提取DNA的量較高5、小鼠胚胎干細(xì)胞可從小鼠的囊胚中獲取，經(jīng)定向誘導(dǎo)可獲得多種功能細(xì)胞。下列敘述正確的是（）A.為獲得更多的囊胚，需采用激素注射促進(jìn)雄鼠產(chǎn)生更多的精子B.胚胎干細(xì)胞和其他細(xì)胞的全能性不同是由于含有的核基因不同C.用胰蛋白酶將胚胎組織細(xì)胞的膜蛋白消化后可獲得分散的細(xì)胞D.胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)出的各種細(xì)胞都需在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)6、基因工程的基本工具——基因的“剪刀”是指（）A.限制性核酸內(nèi)切酶B.蛋白酶C.DNA連接酶D.運(yùn)載體7、谷氨酸的發(fā)酵是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)。下列有關(guān)發(fā)酵罐的監(jiān)測(cè)裝置作用及目的的敘述，不正確的是（）A.檢測(cè)培養(yǎng)液中的微生物數(shù)目、產(chǎn)物濃度等B.監(jiān)控pH并及時(shí)添加堿性物質(zhì)以提高產(chǎn)量C.監(jiān)控溶解氧、溫度、通氣量和轉(zhuǎn)速等條件，以免影響其代謝途徑和產(chǎn)量D.此過程需要控制無氧和恒溫條件以利于谷氨酸棒狀桿菌和谷氨酸的生成8、下列關(guān)于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的說法，正確的是（）A.制作腐乳過程中主要利用毛霉將蛋白質(zhì)分解成肽和氨基酸B.制作泡菜過程中先將蔬菜裝至八成滿，然后倒入煮沸的鹽水C.當(dāng)缺少糖源時(shí)醋酸菌進(jìn)行無氧呼吸將乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，再將乙醛轉(zhuǎn)化為醋酸D.制作果酒過程中應(yīng)先將去除枝梗的葡萄用清水沖洗1~2次，然后晾干備用評(píng)卷人得分二、多選題(共6題，共12分)9、在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中；果醋的制作往往在果酒制作基礎(chǔ)上進(jìn)行。下圖甲是醋酸發(fā)酵裝置，乙是培養(yǎng)液pH變化曲線圖，下列敘述不正確的是（）

A.發(fā)酵初期不通氣，溶液中沒有氣泡產(chǎn)生B.中期可以聞到酒香，說明進(jìn)行了酒精發(fā)酵C.后期接種醋酸菌，適當(dāng)通氣并保持原有溫度D.圖乙中能正確表示pH變化的曲線是③10、科學(xué)家將4個(gè)關(guān)鍵基因移植入已分化的肌肉細(xì)胞中并表達(dá)；使這個(gè)細(xì)胞成為多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞），下圖為該實(shí)驗(yàn)示意圖。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.應(yīng)用該技術(shù)可緩解器官移植時(shí)器官供應(yīng)不足的問題B.iPS細(xì)胞所攜帶的遺傳信息與肌肉細(xì)胞相同C.關(guān)鍵基因表達(dá)使細(xì)胞功能趨向?qū)ｉT化，降低了細(xì)胞的分化程度D.圖示過程體現(xiàn)了iPS細(xì)胞的全能性11、RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后再進(jìn)行PCR擴(kuò)增的技術(shù)稱為RT－PCR，過程如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的是（）

A.過程①需要RN逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、核糖核苷酸等條件B.真核細(xì)胞的mRNA經(jīng)過程①②獲得的DNA無內(nèi)含子片段C.過程③PCR擴(kuò)增時(shí)引物中的CG含量會(huì)影響退火溫度D.RT－PCR技術(shù)可應(yīng)用于新冠病毒（RNA病毒）的核酸檢測(cè)12、野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，下圖為純化某氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，①②③④代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操作步驟，D、E為菌落。下列敘述正確的是（）

A.圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基B.A操作的目的是提高突變率，增加突變株的數(shù)量C.B的正確操作是用涂布器蘸取菌液后均勻地涂布在②表面D.經(jīng)C過程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D進(jìn)行純化培養(yǎng)13、欲探究1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌，需要用科學(xué)的方法測(cè)定微生物數(shù)量。下列相關(guān)敘述不正確的是（）A.利用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基，可從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌B.平板劃線法可以分離得到單菌落，也可用來測(cè)定樣品中的活菌數(shù)C.樣品的稀釋度直接影響平板上的菌落數(shù)目，因此稀釋度越大越好D.利用顯微鏡進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，可快速直觀地測(cè)定樣品中的活菌數(shù)14、大腸桿菌能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；X射線照射后產(chǎn)生的代謝缺陷型大腸桿菌不能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但可以在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。利用夾層培養(yǎng)法可篩選代謝缺陷型大腸桿菌，具體的操作是：在培養(yǎng)皿底部倒一層基本培養(yǎng)基，冷凝后倒一層含經(jīng)X射線處理過的菌液的基本培養(yǎng)基，冷凝后再倒一層基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時(shí)間后，對(duì)首次出現(xiàn)的菌落做好標(biāo)記。然后再向皿內(nèi)倒一層完全培養(yǎng)基，再培養(yǎng)一段時(shí)間后，會(huì)長(zhǎng)出形態(tài)較小的新菌落。下列說法正確的是（）A.X射線誘發(fā)染色體變異進(jìn)而導(dǎo)致大腸桿菌代謝缺陷B.首次出現(xiàn)的菌落做標(biāo)記時(shí)應(yīng)標(biāo)記在皿蓋上C.夾層培養(yǎng)法可避免細(xì)菌移動(dòng)或菌落被完全培養(yǎng)基沖散D.形態(tài)較小的新菌落可能是代謝缺陷型大腸桿菌評(píng)卷人得分三、填空題(共7題，共14分)15、本課題對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步的篩選。但是，這只是分離純化的第一步。為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有___________和___________發(fā)酵兩種。纖維素酶的測(cè)定方法，一般是采用對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的__________進(jìn)行________的測(cè)定。16、載體具備的條件：①_____。②具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入。③______。17、結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：______和______。18、我國(guó)政府同樣禁止進(jìn)行治療性克隆實(shí)驗(yàn)。（選擇性必修3P108）()19、干細(xì)胞的應(yīng)用：有著_____能力及_____的干細(xì)胞，與組織、器官的發(fā)育、_____和_____等密切相關(guān)。20、首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了______，方法是采用______。21、有時(shí)還需進(jìn)行______的鑒定。如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)______。評(píng)卷人得分四、判斷題(共1題，共7分)22、理性看待轉(zhuǎn)基因技術(shù)，就是聽之任之，不管不問（______）A.正確B.錯(cuò)誤評(píng)卷人得分五、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共32分)23、金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病微生物；該菌具耐高鹽的特性。哥倫比亞血平板含無菌脫纖維羊血，金黃色葡萄球菌可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，產(chǎn)生透明的溶血圈。如圖為檢測(cè)鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌的操作流程，請(qǐng)回答：

（1）從功能上看7．5％NaCl（高鹽）肉湯培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，用該培養(yǎng)基對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行培養(yǎng)的主要目的是提高_(dá)__________。

（2）從培養(yǎng)過程分析，振蕩培養(yǎng)可以____________________________；更有利于微生物的生長(zhǎng)。

（3）在配制哥倫比亞血平板時(shí)，添加無菌脫纖維羊血是在高壓蒸汽滅菌________（填“之前”或“之后”），原因是________________________。

（4）圖中血平板上的接種方法是________________。經(jīng)規(guī)范操作并多次重復(fù)，血平板上均出現(xiàn)__________的菌落，初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌。但牛奶供應(yīng)商仍認(rèn)為此菌并非牛奶所攜帶，因此需要對(duì)本次操作進(jìn)行完善，具體方案是________________。24、蘋果樹腐爛病是由黑腐皮殼菌引起的；是限制蘋果產(chǎn)量的重要因素之一。生產(chǎn)上主要以化學(xué)藥劑防治該病。為開發(fā)生物防治途徑，科研人員擬從土壤中分離篩選出能抑制黑腐皮殼菌生長(zhǎng)的枯草芽孢桿菌，實(shí)驗(yàn)流程圖如圖1：

（1）①中木糖和硝酸鉀的作用分別是______________。

（2）②→③中梯度稀釋的目的是_____________________________________________。

（3）制作的平板需要倒置的目的除了防止培養(yǎng)基中水分過快蒸發(fā)之外，還有______________。

（4）現(xiàn)有經(jīng)純化后獲得的4個(gè)枯草芽孢桿菌品系，為探究哪個(gè)品系對(duì)黑腐皮殼菌的抑制效果更好，科研人員在如圖2平板中的A處接種黑腐皮殼菌，在距離A處等距離的B1～B4處分別接種等量的4個(gè)枯草芽孢桿菌品系，在適宜條件下培養(yǎng)3﹣5天后，通過觀察_________________________篩選出抑菌更好的枯草芽孢桿菌菌株。

圖2

（5）在利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)土樣中活菌的數(shù)目時(shí)，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在______________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。該方法所得結(jié)果往往比實(shí)際細(xì)菌的數(shù)目要少，原因是__________________________________。25、干燥綜合征（SS）是臨床常見的一種自身免疫??；患者血清中存在多種抗體，其中以SSB抗體特異性最強(qiáng)。下圖表示科研人員利用基因工程技術(shù)獲得SSB蛋白及利用SSB蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行免疫的過程?；卮鹣铝袉栴}：

(1)利用RNA通過①過程獲得cDNA需要________酶。已知真核生物mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保護(hù)尾部不被降解。為了針對(duì)性獲得cDNA，應(yīng)如何設(shè)計(jì)逆轉(zhuǎn)錄第一步時(shí)的DNA引物______，設(shè)計(jì)引物的目的是______。

(2)為確保與pET41a質(zhì)粒定向連接，對(duì)逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA擴(kuò)增時(shí)，應(yīng)在相應(yīng)引物的_______（填“5'”或“3'”）端加上______酶切位點(diǎn)。

(3)③過程用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌時(shí)，需要用Ca2+處理大腸桿菌，目的是______，然后將處理后的大腸桿菌先接種在添加_______的培養(yǎng)基（A）上培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后再利用無菌膜同位置轉(zhuǎn)移到添加______的培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)，收集_______菌落進(jìn)一步純化后將菌體破碎處理；篩選得到SSB蛋白。

(4)將改造后的大腸桿菌生產(chǎn)的SSB蛋白注入到小鼠體內(nèi)是為了檢測(cè)該蛋白是否具有抗原性，則后續(xù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容應(yīng)為抽取小鼠血液_______。26、T-2毒素是一種由霉菌分泌的脂溶性小分子；可通過污染飼料引起畜禽中毒反應(yīng)。CYP3A是豬體內(nèi)降解T-2毒素的關(guān)鍵酶，T-2毒素可誘導(dǎo)CYP3A基因表達(dá)水平升高。

(1)T-2毒素是霉菌的_____（選填“初級(jí)”或“次級(jí)”）代謝產(chǎn)物，主要以_____方式進(jìn)入豬細(xì)胞。

(2)B1和B2是CYP3A基因啟動(dòng)子上游的兩個(gè)調(diào)控序列，為研究T-2毒素誘導(dǎo)CYP3A基因表達(dá)的機(jī)理，研究者首先將不同調(diào)控序列分別和CYP3A基因啟動(dòng)子及熒光素酶基因（LUC基因）連接構(gòu)建表達(dá)載體，再分別導(dǎo)入豬肝細(xì)胞，然后向各組豬肝細(xì)胞培養(yǎng)液中加入_____，適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)；24h后檢測(cè)LUC酶活性，計(jì)算啟動(dòng)子活性相對(duì)值，結(jié)果如圖1所示。據(jù)圖可知，B1和B2調(diào)控序列是CYP3A基因響應(yīng)T-2毒素的核心元件，理由是_____。

(3)研究表明NF-Y和Sp1兩種蛋白均參與T-2毒素對(duì)CYP3A的誘導(dǎo)；B2是Spl的結(jié)合位點(diǎn)。研究者推測(cè)，NF-Y通過與B1結(jié)合，與Sp1共同調(diào)控CYP3A基因的表達(dá)。

①為證明Bl是NF-Y的結(jié)合位點(diǎn)，研究者依據(jù)B1序列制備了野生型和突變型探針，分別與豬肝細(xì)胞核蛋白提取物混合，實(shí)驗(yàn)分組及結(jié)果如圖2．據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，第4組出現(xiàn)阻滯帶的原因是_____，進(jìn)而推測(cè)第5組結(jié)果產(chǎn)生的原因是_____。

②研究者設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了NF-Y和Spl通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路是：增大或縮小B1和B2兩者之間的距離，檢測(cè)CYP3A基因的啟動(dòng)子活性。據(jù)此分析，實(shí)驗(yàn)假設(shè)是_____。評(píng)卷人得分六、綜合題(共2題，共18分)27、生物工程技術(shù)為人們獲得需要的生物新品種或新產(chǎn)品提供了便利。據(jù)圖回答下列問題：

（1）在培育轉(zhuǎn)人生長(zhǎng)激素基因牛過程中，③過程培養(yǎng)到___________階段?？梢圆捎胈_________技術(shù)；培育出多頭相同的轉(zhuǎn)基因犢牛。

（2）prG能激發(fā)細(xì)胞不斷分裂，通過基因工程導(dǎo)入該調(diào)控基因來制備單克隆抗體，II最可能是____細(xì)胞，Ⅲ代表的細(xì)胞具有______________的特點(diǎn)。

（3）從免疫的小鼠脾臟細(xì)胞中獲取B淋巴細(xì)胞，在誘導(dǎo)劑的作用下與骨髓瘤細(xì)胞融合，形成_______________________，然后通過體內(nèi)培養(yǎng)或體外培養(yǎng)也可以生產(chǎn)單克隆抗體。單克隆抗體與普通血清抗體相比較，具有__________________的特點(diǎn)。

（4）在抗蟲棉培育過程中，④過程中的受體細(xì)胞采用愈傷組織細(xì)胞與采用葉肉細(xì)胞相比較，其優(yōu)點(diǎn)是___________，⑤過程采用的技術(shù)是___________________。28、馬鈴薯是世界上最重要的糧食作物之一；與大多數(shù)糧食作物不同，馬鈴薯主要以塊莖繁殖。

(1)野生馬鈴薯為二倍體，而商業(yè)化的馬鈴薯栽培品種為四倍體，即體細(xì)胞中有4個(gè)______。塊莖繁殖易攜帶病原體；且四倍體的染色體高度雜合，使引入新性狀的育種工作復(fù)雜化。因此，利用二倍體雜交是馬鈴普育種的發(fā)展趨勢(shì)。

(2)大多數(shù)二倍體馬鈴薯自交不親和，其受1號(hào)染色體上復(fù)等位基因（S1，S2，S3）控制。如下圖所示；該基因在雌蕊的花柱中編碼S酶，能抑制花粉管的伸長(zhǎng)，導(dǎo)致精子不能與卵細(xì)胞結(jié)合；在雄蕊的花粉中則編碼F蛋白，能識(shí)別降解進(jìn)入花粉管的S酶，但對(duì)相同基因編碼的S酶無效。

圖中的兩個(gè)親本雜交，后代的基因型及比例是______。

(3)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)一種自交親和的二倍體馬鈴薯RH，研究發(fā)現(xiàn)其自交親和由12號(hào)染色體上的A基因決定，A蛋白能識(shí)別絕大多數(shù)類型的S酶。將RH（父本，AaS1S1）與自交不親和的二倍體PI（母本，aaS2S2）雜交；流程如圖。

①F1中SC自交，F(xiàn)2中:AA：Aa=1:1，無aa類型的個(gè)體，理由是基因型為______的精子花粉管不能伸長(zhǎng)；無法完成受精。

②寫出F1中SC自交的遺傳圖解_________。

(4)S酶是雌蕊阻斷花粉管萌發(fā)的“鎖”，RH中的A蛋白則表現(xiàn)出“萬能鑰匙”的作用，從而打破自交不親和性，對(duì)培育馬鈴薯自交系有重要作用。請(qǐng)寫出利用RH培育出自交親和的PI的流程___________。（用文字或圖示作答均可）參考答案一、選擇題(共8題，共16分)1、C【分析】【分析】

1；試管嬰兒技術(shù)是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精；并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術(shù)。

2；設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)是通過體外受精獲得許多胚胎；然后從中選擇符合要求的胚胎，再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術(shù)。

【詳解】

結(jié)合分析可知；“設(shè)計(jì)試管嬰兒”與一般所說的“試管嬰兒”相比，多了一步基因檢測(cè)的過程，C符合題意。

故選C。2、A【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)；過敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。

治療性克?。褐咐每寺〖夹g(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞和組織（皮膚；神經(jīng)或肌肉等）用于治療性移植。

生殖性克?。褐笇⒖寺〖夹g(shù)用于生育目的；即用于產(chǎn)生人類個(gè)體。

中國(guó)政府：禁止生殖性克隆人；堅(jiān)持四不原則（不贊成；不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)），不反對(duì)治療性克隆人。

【詳解】

A；對(duì)于生物技術(shù)安全性及倫理問題；針對(duì)他人的不同見解，正確做法是分析每種觀點(diǎn)的科學(xué)性，理性地看待問題，趨利避害，A正確；

B；人類利用試管嬰兒技術(shù)解決不孕夫婦的生育問題；B錯(cuò)誤；

C；對(duì)克隆技術(shù)中國(guó)政府的態(tài)度是禁止生殖性克隆人；堅(jiān)持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)），C錯(cuò)誤；

C；對(duì)克隆技術(shù)中國(guó)政府的態(tài)度是禁止生殖性克隆人；堅(jiān)持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)），不反對(duì)治療性克隆，D錯(cuò)誤。

故選A。3、B【分析】【分析】

單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)；之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，可用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)，最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

【詳解】

A；多次給小鼠注射適宜濃度的抗原；引起小鼠發(fā)生體液免疫，可以獲得更多的漿細(xì)胞，A正確；

B；禽流感病毒沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)；不能在培養(yǎng)液中獨(dú)立生存，B錯(cuò)誤；

C；用滅活的病毒可誘導(dǎo)漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合形成雜交瘤細(xì)胞；除外還可以用聚乙二醇誘導(dǎo)融合，C正確；

D；雜交瘤細(xì)胞既具有漿細(xì)胞能合成抗體的特點(diǎn)；也具有骨髓瘤細(xì)胞無限繁殖的特點(diǎn)，骨髓瘤細(xì)胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體，因此單克隆抗體相比血清抗體特異性更強(qiáng)，并且可以大量制備，D正確。

故選B。4、C【分析】【分析】

1；DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同；在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低；

2；DNA不溶于酒精溶液；

3；蛋白質(zhì)不能忍受60～80℃的高溫；DNA在80℃以上才會(huì)變性。洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)DNA沒有影響；

4；DNA含量相對(duì)較高的生物組織；如雞血、菜花、洋蔥等。

【詳解】

A；DNA不溶于酒精溶液；所以加入冷酒精不利于溶解DNA，A錯(cuò)誤；

B；DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低；不利于提取DNA，洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，B錯(cuò)誤；

C；沐浴液屬于洗滌劑；能夠瓦解細(xì)胞膜，C正確；

D；DNA含量相對(duì)較高的生物組織；如雞血、菜花、洋蔥等；兔屬于哺乳動(dòng)物，血中DNA含量少，D錯(cuò)誤。

故選C。5、D【分析】【分析】

1；胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞；來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）。

2；ES細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中；能夠維持不分化的狀態(tài)。在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子，如?；撬帷⒍□－h(huán)腺苷酸等化學(xué)物質(zhì)時(shí)，就可以誘導(dǎo)ES細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化，這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡機(jī)理提供了有效的手段。

【詳解】

A；為了獲得更多的囊胚；可以采用激素促進(jìn)成熟雌性個(gè)體超數(shù)排卵，然后將卵細(xì)胞從母體內(nèi)取出，在試管內(nèi)與人工采集的精子進(jìn)行體外受精，培育成胚胎，A錯(cuò)誤；

B；胚胎干細(xì)胞和其他細(xì)胞含有的核基因是相同的；而兩者的全能性不同是由于分化程度不同，B錯(cuò)誤；

C；運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以從哺乳動(dòng)物的早期胚胎中獲得胚胎干細(xì)胞；首先必須用胰蛋白酶處理內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，分解細(xì)胞間的膠原蛋白等，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，C錯(cuò)誤；

D、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要在5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；以維持培養(yǎng)液的pH，D正確；

故選D。6、A【分析】【分析】

DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）；DNA連接酶、運(yùn)載體；

1；限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列；并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂；

2；DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵；

3；運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。

【詳解】

A；限制性核酸內(nèi)切酶是基因工程的“剪刀”；A正確；

B；蛋白酶能催化蛋白質(zhì)水解；不是基因工程的基本工具，B錯(cuò)誤；

C；DNA連接酶是基因工程的“針線”；C錯(cuò)誤；

D；運(yùn)載體是基因工程的運(yùn)輸工具；D錯(cuò)誤。

故選A。

【點(diǎn)睛】7、D【分析】【分析】

谷氨酸棒狀桿菌是一種異養(yǎng)兼性厭氧細(xì)菌；谷氨酸棒狀桿菌在擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，碳氮比應(yīng)為4：1，而在發(fā)酵獲得谷氨酸時(shí)碳氮比應(yīng)為3：1。擴(kuò)大培養(yǎng)應(yīng)在有氧條件下進(jìn)行，在無氧條件下，谷氨酸棒狀桿菌能將葡萄糖和含氮物質(zhì)（如尿素；硫酸銨、氨水）合成為谷氨酸．谷氨酸經(jīng)過人們的進(jìn)一步加工，就成為谷氨酸鈉－味精。

【詳解】

A；發(fā)酵罐的監(jiān)測(cè)裝置；可以方便檢測(cè)培養(yǎng)液中的細(xì)菌數(shù)目、產(chǎn)物濃度、代謝產(chǎn)物類型等，以了解發(fā)酵進(jìn)程，A正確；

B；在谷氨酸發(fā)酵過程中；隨著谷氨酸的不斷生成，發(fā)酵液的pH值不斷的減小，對(duì)谷氨酸產(chǎn)生抑制，為了維持發(fā)酵的最佳條件，要監(jiān)控pH并及時(shí)添加堿性物質(zhì)或氨水以維持pH穩(wěn)定，提高谷氨酸的產(chǎn)量，B正確；

C；谷氨酸發(fā)酵過程需要嚴(yán)格控制溫度、pH、溶氧、通氣量等；以免影響其代謝途徑和產(chǎn)量，例如溶氧不足，生成的代謝產(chǎn)物就會(huì)是乳酸或琥珀酸，C正確；

D；谷氨酸棒狀桿菌是一種異養(yǎng)兼性厭氧細(xì)菌；擴(kuò)大培養(yǎng)應(yīng)在有氧條件下進(jìn)行，有利于谷氨酸棒狀桿菌的生成，在無氧條件下，谷氨酸棒狀桿菌能將葡萄糖和含氮物質(zhì)(如尿素、硫酸銨、氨水)合成為谷氨酸，D錯(cuò)誤。

故選D。8、A【分析】【分析】

1、參與果酒制作的微生物是酵母菌，其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型。果酒制作的原理：（1）在有氧條件下，反應(yīng)式如下：C6H12O6+6H2O+6O26CO2+12H2O+能量；（2）在無氧條件下，反應(yīng)式如下：C6H12O62CO2+2C2H5OH+能量。

2；參與果醋制作的微生物是醋酸菌；其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。果醋制作的原理：當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?/p>

3；參與腐乳制作的微生物主要是毛霉；其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪分解成甘油和脂肪酸。

【詳解】

A；制作腐乳過程中主要利用毛霉產(chǎn)生的蛋白酶將蛋白質(zhì)分解成肽和氨基酸；產(chǎn)生的脂肪酶將脂肪分解為甘油和脂肪酸，A正確；

B；制作泡菜過程中先將蔬菜裝至半壇；然后倒入煮沸后冷卻的鹽水，B錯(cuò)誤；

C；醋酸菌為需氧型細(xì)菌；進(jìn)行有氧呼吸，當(dāng)缺少糖源時(shí)醋酸菌將乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，再將乙醛轉(zhuǎn)化為醋酸，C錯(cuò)誤；

D；制作果酒過程中應(yīng)該先用清水沖洗1~2次；然后再去除葡萄的枝梗，D錯(cuò)誤。

故選A。二、多選題(共6題，共12分)9、A:C:D【分析】【分析】

1；參與果酒制作的微生物是酵母菌；其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型。

果酒制作的原理：

（1）在有氧條件下，反應(yīng)式如下：C6H12O6+6H2O+6O2→6CO2+12H2O；

（2）在無氧條件下，反應(yīng)式如下：C6H12O6→2CO2+2C2H5OH。

2；參與果醋制作的微生物是醋酸菌；其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。果醋制作的原理：當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的果糖分解成醋酸。當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿帷?/p>

【詳解】

A；若發(fā)酵初期不通入氣體；由于錐形瓶中含有少量空氣，溶液中酵母菌也可通過有氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳，即使沒有空氣，酵母菌也能通過無氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳，因此有氣泡產(chǎn)生，A錯(cuò)誤；

B；中期可以聞到酒香；說明有酒精產(chǎn)生，即進(jìn)行了酒精發(fā)酵，B正確；

C；由于醋酸菌是嗜氧菌；也是嗜溫菌，因此后期接種醋酸菌，需通氣并適當(dāng)升高溫度，C錯(cuò)誤；

D；醋酸發(fā)酵過程中；發(fā)酵液的pH會(huì)進(jìn)一步降低，因此圖乙中能正確表示pH變化的曲線是②，D錯(cuò)誤。

故選ACD。10、B:C:D【分析】【分析】

1；干細(xì)胞的概念：動(dòng)物和人體內(nèi)保留著少量具有分裂和分化能力的細(xì)胞。

2；干細(xì)胞的分類：（1）全能干細(xì)胞：具有形成完整個(gè)體的分化潛能；（2）多能干細(xì)胞：具有分化出多種細(xì)胞組織的潛能；（3）專能干細(xì)胞：只能向一種或兩種密切相關(guān)的細(xì)胞類型分化。如神經(jīng)干細(xì)胞可分化為各類神經(jīng)細(xì)胞；造血干細(xì)胞可分化為紅細(xì)胞、白細(xì)胞等各類血細(xì)胞。

3；胚胎干細(xì)胞的主要用途是：（1）可用于研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律；（2）是在體外條件下研究細(xì)胞分化的理想材料；在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子，如牛黃酸等化學(xué)物質(zhì)時(shí)，就可以誘導(dǎo)ES細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化，這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡的機(jī)理提供了有效的手段；（3）可以用于治療人類的某些頑疾，如帕金森綜合癥、少年糖尿病等；（4）利用可以被誘導(dǎo)分化形成新的組織細(xì)胞的特性，移植ES細(xì)胞可使壞死或退化的部位得以修復(fù)并恢復(fù)正常功能；（5）隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展，通過ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化，定向培育出人造組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題。

【詳解】

A；由題圖知；應(yīng)用該技術(shù)可以緩解器官移植時(shí)器官供應(yīng)不足的問題，A正確；

B；iPS細(xì)胞導(dǎo)入了外源基因；其遺傳信息與肌肉細(xì)胞不同，B錯(cuò)誤；

C；關(guān)鍵基因表達(dá)形成iPS細(xì)胞；沒有使細(xì)胞功能趨向?qū)ｉT化，C錯(cuò)誤；

D；過程①②③表示細(xì)胞分化；其實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，沒有體現(xiàn)iPS細(xì)胞的全能性，D錯(cuò)誤。

故選BCD。11、B:C:D【分析】【分析】

PCR技術(shù)：1；概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。2、原理：DNA復(fù)制。3、前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對(duì)引物。4、條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）5、過程：①高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開）；低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。

【詳解】

A；過程①是由mRNA形成單鏈DNA的過程；表示逆轉(zhuǎn)錄，需要RNA、逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、脫氧核苷酸等條件，A錯(cuò)誤；

B；真核細(xì)胞中DNA的外顯子部分轉(zhuǎn)錄的RNA拼接形成mRNA；因此真核細(xì)胞的mRNA經(jīng)過程①②逆轉(zhuǎn)錄過程獲得的DNA無內(nèi)含子片段，B正確；

C；CG含量越高；氫鍵越多，結(jié)構(gòu)越穩(wěn)定，因此過程③PCR擴(kuò)增時(shí)引物中的CG含量會(huì)影響退火溫度，C正確；

D；新冠病毒遺傳物質(zhì)是RNA；RT-PCR技術(shù)可應(yīng)用于新冠病毒的核酸檢測(cè)，D正確。

故選BCD。

【點(diǎn)睛】12、A:D【分析】【分析】

由題圖信息分析可知；圖中首先利用培養(yǎng)基擴(kuò)增菌體，然后在涂布在平板上，再通過影印法將菌種接種到兩種培養(yǎng)基中，分別是基本培養(yǎng)基；完全培養(yǎng)基；野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株由于發(fā)生基因突變無法合成某種氨基酸只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，據(jù)此利用培養(yǎng)基的種類便可以選擇出氨基酸突變株。

【詳解】

A；野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，根據(jù)題干信息和圖形分析，圖中①②④中含有菌落，①②④為完全培養(yǎng)基，③中影印處無菌落，③為基本培養(yǎng)基，A正確；

B；紫外線可以提高突變的頻率；而A操作即培養(yǎng)的目的是提高已經(jīng)突變菌株的濃度（A操作不能提高突變率），即增加突變株的數(shù)量，B錯(cuò)誤；

C；B操作是將菌液滴加到培養(yǎng)基表面；再用涂布器將菌液均勻的涂布在②表面，C錯(cuò)誤；

D；從圖中可看出；D在③基本培養(yǎng)基中無法生長(zhǎng)，在完全培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)，說明D是氨基酸缺陷型菌落，故經(jīng)C過程影印及培養(yǎng)后，可從④培養(yǎng)基中挑取D菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，D正確。

故選AD。13、B:C:D【分析】【分析】

選擇培養(yǎng)基是用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來的培養(yǎng)基。設(shè)計(jì)選擇培養(yǎng)基時(shí)；主要考慮某些微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)需求或它們對(duì)某些化學(xué)物質(zhì)具有的抗性。

【詳解】

A；以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基；可從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌，A正確；

B；平板劃線法能將單個(gè)微生物分散到培養(yǎng)基上；從而分離得到單菌落，但是不可以用來測(cè)定樣品中的活菌數(shù)，稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；

C；樣品的稀釋度太大；會(huì)導(dǎo)致微生物數(shù)量太少，一般要求稀釋后平板上的菌落數(shù)在30到300之間比較合適，C錯(cuò)誤；

D；利用顯微鏡進(jìn)行直接計(jì)數(shù)；可快速直觀地測(cè)定樣品中的活菌數(shù)和死菌數(shù)，D錯(cuò)誤。

故選BCD。14、C:D【分析】【分析】

微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板；接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】

A；大腸桿菌是原核生物；沒有染色體，A錯(cuò)誤；

B；首次出現(xiàn)的菌落做標(biāo)記時(shí)應(yīng)標(biāo)記在皿底上；B錯(cuò)誤；

C；夾層培養(yǎng)法不需要對(duì)大腸桿菌進(jìn)行再次接種；可避免細(xì)菌移動(dòng)或菌落被完全培養(yǎng)基沖散，C正確；

D；由于代謝缺陷型大腸桿菌不能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；所以形態(tài)較小的新菌落可能是代謝缺陷型大腸桿菌，D正確。

故選CD。三、填空題(共7題，共14分)15、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】液體發(fā)酵固體發(fā)酵葡萄糖定量16、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇17、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】黏性末端平末端。18、略

【分析】【詳解】

中國(guó)政府的態(tài)度：禁止生殖性克隆，不反對(duì)治療性克隆，該表述錯(cuò)誤?！窘馕觥垮e(cuò)誤19、略

【分析】略【解析】自我更新分化潛能再生修復(fù)20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】目的基因DNA分子雜交技術(shù)。21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】個(gè)體生物學(xué)水平抗蟲性狀。四、判斷題(共1題，共7分)22、B【分析】【詳解】

理性看待轉(zhuǎn)基因技術(shù)，正確的做法是趨利避害，而不能因噎廢食，所以本題錯(cuò)誤。五、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共32分)23、略

【分析】【分析】

1；選擇培養(yǎng)基：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件；同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。

2；根據(jù)題意分析；金黃色葡萄球菌可破壞哥倫比亞血平板上菌落周圍的紅細(xì)胞，產(chǎn)生透明的溶血圈。

【詳解】

（1）金黃色葡萄球菌具耐高鹽的特性；可用7.5％NaCl（高鹽）肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，可進(jìn)一步提高金黃色葡萄球菌的濃度。

（2）振蕩培養(yǎng)的目的是使微生物與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，增加O2濃度；更有利于微生物生長(zhǎng)。

（3）因?yàn)闊o菌脫纖維羊血上有紅細(xì)胞；而高溫會(huì)破壞紅細(xì)胞。故添加無菌脫纖維羊血是在高壓蒸汽滅菌之后。

（4）根據(jù)圖中最右邊的圖示可知；接種方法是平板劃線法。已知金黃色葡萄球菌可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，產(chǎn)生透明的溶血圈。故若要初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌，則血平板上要均出現(xiàn)周圍出現(xiàn)透明溶血圈的菌落。本實(shí)驗(yàn)缺乏對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)不完善，還需要設(shè)置不加（鮮）牛奶但其他操作和培養(yǎng)條件均相同的對(duì)照組。

【點(diǎn)睛】

本題旨在考查學(xué)生理解選擇培養(yǎng)基的原理和應(yīng)用、平板劃線法的使用要點(diǎn)，把握知識(shí)的內(nèi)在聯(lián)系并應(yīng)用相關(guān)知識(shí)綜合解決問題的能力。【解析】選擇金黃色葡萄球菌的濃度使微生物與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸/增加O2之后防止高溫破壞紅細(xì)胞平板劃線法周圍出現(xiàn)透明溶血圈設(shè)置不加（鮮）牛奶但其他操作和培養(yǎng)條件均相同的對(duì)照組24、略

【分析】【分析】

微生物的分離：①利用該分離對(duì)象對(duì)某一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的“嗜好”；專門在培養(yǎng)基中加入該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，使該微生物大量增殖。這些物質(zhì)主要是一些特殊的碳源；氮源，如纖維素可用來富集纖維素分解微生物，尿素可用來富集尿素分解微生物。②利用該分離對(duì)象對(duì)某種抑制物質(zhì)的抗性，在混合培養(yǎng)物中加入該抑制物質(zhì)，經(jīng)培養(yǎng)后，由于原來占優(yōu)勢(shì)的它種微生物的生長(zhǎng)受到抑制，而分離對(duì)象卻可趁機(jī)大量增殖，使之在數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)。如篩選酵母菌和霉菌，在培養(yǎng)基中加入青霉素，因青霉素可抑制細(xì)菌和放線菌的細(xì)胞壁的合成，從而抑制兩類微生物的生長(zhǎng)，而酵母菌和霉菌正常生長(zhǎng)增殖。

【詳解】

（1）微生物的生長(zhǎng)需要碳源；氮源、水和無機(jī)鹽；①中木糖含有C、H、O元素，故能提供碳源，硝酸鉀中含有N元素，可以提供氮源和無機(jī)鹽。

（2）分離篩選枯草芽孢桿菌需要得到單菌落；②→③中梯度稀釋的目的是將聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在固體培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

（3）制作的平板需要倒置的目的除了防止培養(yǎng)基中水分過快蒸發(fā)之外；還可以防止冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。

（4）分析題意可知，A處接種黑腐皮殼菌，在距離A處等距離的B1~B4處分別接種等量的4個(gè)枯草芽孢桿菌品系；在適宜條件下培養(yǎng)3－5天，由于枯草芽孢桿菌能抑制黑腐皮殼菌生長(zhǎng)，通過觀測(cè)黑腐皮殼菌菌落的形狀（黑腐皮殼菌菌落邊緣與4個(gè)枯草芽孢桿菌菌落的距離），就能篩選出抑菌更好的枯草芽孢桿菌菌株。

（5）在利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)土樣中活菌的數(shù)目時(shí)；為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，故該方法所得結(jié)果往往比實(shí)際細(xì)菌的數(shù)目要少。

【點(diǎn)睛】

本題考查微生物的分離和計(jì)數(shù)的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生利用所學(xué)知識(shí)解決實(shí)際問題的能力，難度中等。【解析】提供碳源，提供氮源和無機(jī)鹽將聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在固體培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落防止冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染觀測(cè)黑腐皮殼菌菌落的形狀（黑腐皮殼菌菌落邊緣與4個(gè)枯草芽孢桿菌菌落的距離）30～300當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)平板上觀察到的只是一個(gè)菌落25、略

【分析】【分析】

1；基因工程的四個(gè)步驟：目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。

2、在基因工程操作中，常用原核生物作為受體細(xì)胞，其中以大腸桿菌應(yīng)用最為廣泛。研究人員一般先用Ca2＋處理大腸桿菌細(xì)胞；使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。

【詳解】

（1）利用RNA通過①過程（逆轉(zhuǎn)錄）獲得cDNA需要逆轉(zhuǎn)錄酶；已知真核生物基因的mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保護(hù)尾部不被降解。逆轉(zhuǎn)錄第一步以mRMA為模板合成DNA單鏈；新鏈與模板鏈反向平行，由于新鏈只能由5'端向3'端延伸，所以逆轉(zhuǎn)錄第一步的引物應(yīng)與mRNA尾部的PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）互補(bǔ)配對(duì)，即用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物；設(shè)計(jì)引物的目的是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。

（2）對(duì)逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA擴(kuò)增時(shí)；引物的5'端結(jié)合母鏈的3'端之后DNA聚合酶開始擴(kuò)增DNA。為確保其與pET41a質(zhì)粒定向連接，應(yīng)使用不同種的限制酶切割質(zhì)粒和目的基因，由圖可知，使用EcoRI酶會(huì)破環(huán)SSB基因，故應(yīng)在相應(yīng)引物的5'端加上BamHI和XhoⅠ酶切位點(diǎn)。

（3）由題圖分析可知：質(zhì)粒上存在卡那霉素和氯霉素抗性基因，由于XhoⅠ酶破壞了氯霉素抗性基因，所以成功組裝的重組質(zhì)粒不能在添加了氯霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，③過程用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌時(shí)，需要用Ca2+處理大腸桿菌；目的是使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態(tài)，然后分別將處理后的大腸桿菌先接種在添加卡那霉素的培養(yǎng)基（A）上培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后再利用無菌膜同位置轉(zhuǎn)移到添加氯霉素的培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)，收集能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而不能在含氯霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落進(jìn)一步純化后將菌體破碎處理，經(jīng)篩選即可得到SSB蛋白。

（4）將改造后的大腸桿菌生產(chǎn)的SSB蛋白注入到小鼠體內(nèi)是為了檢測(cè)該蛋白是否具有抗原性，如果該蛋白有抗原性，會(huì)引起機(jī)體的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)抗體。則后續(xù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容應(yīng)為抽取小鼠血液提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測(cè)其是否含有抗SSB的抗體?！窘馕觥?1)逆轉(zhuǎn)錄用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

(2)5’BamHⅠ和XhoI

(3)使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態(tài)卡那霉素氯霉素能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而不能在含氯霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的。

(4)提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測(cè)其是否含有抗SSB的抗體26、略

【分析】【分析】

圖1可知：T-2毒素是一種常見的菌素；CYP3A是降解T-2毒素的關(guān)鍵酶，T-2毒素可誘導(dǎo)其表達(dá)水平升高，當(dāng)用兩種調(diào)控序列同時(shí)連接啟動(dòng)子，啟動(dòng)子的活性最高。

圖2可知：野生型探針能與NF-Y結(jié)合；突變型探針不能與NF-Y結(jié)合，NF-Y抗體一定能與NF-Y結(jié)合。

【詳解】

（1）初級(jí)代謝產(chǎn)物一般是霉菌生命活動(dòng)所必需的，大多存在于細(xì)胞內(nèi)。次級(jí)代謝產(chǎn)物不是霉菌生命活動(dòng)必需的，并且分泌到體外，故T-2毒素是霉菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物。T-2毒素是一種由霉菌分泌的脂溶性小分子，脂溶性小分子以自由擴(kuò)散的方式進(jìn)入細(xì)胞。

（2）實(shí)驗(yàn)的自變量是有無調(diào)控序列；根據(jù)單一變量原則，對(duì)照組的目的是為了排除無光變量的影響，除了沒有調(diào)控序列，其他處理和實(shí)驗(yàn)組相同，所以對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組豬肝細(xì)胞均導(dǎo)入含CYP3A基因啟動(dòng)子及LUC基因的表達(dá)載體，然后向各組豬肝細(xì)胞培養(yǎng)液中加入加入等量T-2毒素，適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)。從圖中信息可知，缺失兩個(gè)調(diào)控序列和對(duì)照組活性一致，缺失一個(gè)比對(duì)照組活性略強(qiáng)，兩個(gè)都存在活性最高，說明這兩個(gè)調(diào)控序列是CYP3A基因響應(yīng)T-2毒素的核心元件。故缺失兩個(gè)調(diào)控序列或其中任一個(gè)，T-2毒素都不能誘導(dǎo)啟動(dòng)子活性明顯增強(qiáng)。

（3）①實(shí)驗(yàn)的目的是要驗(yàn)證NF-Y能與B1結(jié)合；根據(jù)第2組和第3組結(jié)果，依據(jù)B1序列制備的NF-Y結(jié)合位點(diǎn)野生型探針能與NF-Y結(jié)合，根據(jù)第4組結(jié)果，突變型探針不能與NF-Y結(jié)合。第5組加入了NF-Y抗體，一定能與NF-Y結(jié)合。故可以解釋為：結(jié)合位點(diǎn)突變的探針不能結(jié)合核蛋白中的NF-Y，也不會(huì)競(jìng)爭(zhēng)NF-Y與標(biāo)記探針的結(jié)合，所以第4組與第2組同樣位置出現(xiàn)阻滯帶。第5組，NF-Y的抗體結(jié)合NF-Y，因此第5組中出現(xiàn)標(biāo)記探針；NF-Y和NF-Y抗體的結(jié)合物，結(jié)合物分子量大，阻滯帶的位置更靠后。

②假設(shè)NF-Y和Sp1通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，它們之間的距離是發(fā)揮作用的最佳距離，故增大或縮小B1和B2兩者之間的距離都會(huì)降低CYP3A基因的啟動(dòng)子的活性。【解析】(1