《乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2023年修訂版）》

乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2023年修訂版）（征求意見稿）本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)乳酸脫氫酶測(cè)定試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。本指導(dǎo)原則是對(duì)乳酸脫氫酶測(cè)定試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。一、適用范圍乳酸脫氫酶測(cè)定試劑是指用于定量測(cè)定人體樣本（血清、血漿等）中乳酸脫氫酶活性的試劑。本指導(dǎo)原則適用于以酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)為檢驗(yàn)原理，采用全自動(dòng)、半自動(dòng)生化分析儀或分光光度計(jì)，進(jìn)行乳酸脫氫酶定量測(cè)定的臨床化學(xué)體外診斷試劑。不包括用于單獨(dú)銷售的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。其他方法學(xué)的乳酸脫氫酶測(cè)定試劑注冊(cè)可參考本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，如不適用，應(yīng)另行選擇適用自身方法學(xué)特性的研究步驟及方法。乳酸脫氫酶（lactatedehydrogenase，LDH

）活性的測(cè)定方法目前主要有乳酸底物法（L→P：乳酸→丙酮酸）和丙酮酸底物法（P→L：丙酮酸→乳酸）。1.乳酸底物法（L→P）在堿性條件下，乳酸脫氫酶催化L-乳酸生成丙酮酸，同時(shí)將NAD+（氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）還原成NADH（還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）。NADH生成的速率與血清中乳酸脫氫酶的活性成正比，340nm波長(zhǎng)處監(jiān)測(cè)NADH吸光度上升時(shí)變化速率，計(jì)算乳酸脫氫酶的活性。（國(guó)際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)IFCC參考方法）2.丙酮酸底物法（P→L）中性條件下，乳酸脫氫酶催化丙酮酸生成L-乳酸，同時(shí)將NADH（還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）氧化成NAD+（氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）。NADH消耗的速率與血清中乳酸脫氫酶的活性成正比，340nm波長(zhǎng)處監(jiān)測(cè)NADH吸光度下降時(shí)變化速率，計(jì)算乳酸脫氫酶的活性。從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則主要指乳酸脫氫酶催化丙酮酸和乳酸之間的氧化或還原反應(yīng)的相互轉(zhuǎn)化的同時(shí)，NADH量的下降或上升速率，通過在340nm處吸光度的變化，計(jì)算乳酸脫氫酶活性。不包括干化學(xué)、酶聯(lián)免疫類檢測(cè)試劑及電泳等檢測(cè)方法。注冊(cè)審查要點(diǎn)監(jiān)管信息應(yīng)按《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說(shuō)明》的要求提交申請(qǐng)表、術(shù)語(yǔ)縮寫詞列表、產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄、符合性聲明以及其它相關(guān)信息。1.產(chǎn)品名稱產(chǎn)品名稱一般由三部分組成。第一部分：被測(cè)物名稱；第二部分：用途，如測(cè)定試劑；第三部分：方法或者原理，如乳酸底物法、丙酮酸底物法等。2.分類依據(jù)根據(jù)《體外診斷試劑分類子目錄》，乳酸脫氫酶測(cè)定試劑產(chǎn)品類別為：II-4用于酶類檢測(cè)的試劑，管理類別為第二類，分類編碼為6840。3.注冊(cè)單元?jiǎng)澐謶?yīng)符合《醫(yī)療器械注冊(cè)單元?jiǎng)澐种笇?dǎo)原則》中體外診斷試劑注冊(cè)單元?jiǎng)澐窒嚓P(guān)要求。如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間僅試劑組分裝量或檢測(cè)數(shù)有差異，原則上劃分為同一注冊(cè)單元；如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間除試劑裝量或檢測(cè)數(shù)的差異外，適用于不同的儀器機(jī)型，原則上劃分為同一注冊(cè)單元。校準(zhǔn)品、質(zhì)控品可以與配合使用的乳酸脫氫酶測(cè)定試劑合并申請(qǐng)注冊(cè)，也可以單獨(dú)申請(qǐng)注冊(cè)。4.產(chǎn)品列表5.關(guān)聯(lián)文件應(yīng)由境內(nèi)（外）申請(qǐng)人提供相關(guān)證明材料和文件、主文檔授權(quán)信（如適用）。授權(quán)信中應(yīng)當(dāng)包括引用主文檔的申請(qǐng)人信息、產(chǎn)品名稱、已備案的主文檔編號(hào)、授權(quán)引用的主文檔頁(yè)碼/章節(jié)信息等內(nèi)容。6.既往溝通記錄在產(chǎn)品申報(bào)前，如果申請(qǐng)人與監(jiān)管機(jī)構(gòu)針對(duì)申報(bào)產(chǎn)品以會(huì)議形式進(jìn)行了溝通，或者申報(bào)產(chǎn)品與既往注冊(cè)申報(bào)相關(guān)。應(yīng)當(dāng)提供相關(guān)內(nèi)容（如適用）。如不適用，應(yīng)當(dāng)明確聲明申報(bào)產(chǎn)品沒有既往申報(bào)和/或申報(bào)前溝通。7.符合性聲明申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)聲明下列內(nèi)容：7.1申報(bào)產(chǎn)品符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》和相關(guān)法規(guī)的要求。7.2申報(bào)產(chǎn)品符合《體外診斷試劑分類規(guī)則》、《體外診斷試劑分類子目錄》有關(guān)分類的要求。7.3申報(bào)產(chǎn)品符合現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，并提供符合標(biāo)準(zhǔn)的清單。7.4申報(bào)產(chǎn)品符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的清單。7.5保證所提交資料的真實(shí)性（境內(nèi)產(chǎn)品由申請(qǐng)人出具，進(jìn)口產(chǎn)品由申請(qǐng)人和代理人分別出具）。（二）綜述資料綜述資料主要包括章節(jié)目錄、概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史、其他需說(shuō)明的內(nèi)容等。1.章節(jié)目錄應(yīng)包括本章的所有標(biāo)題和小標(biāo)題，注明目錄中各內(nèi)容的頁(yè)碼。2.概述應(yīng)描述乳酸脫氫酶測(cè)定試劑名稱及其確定依據(jù)；該產(chǎn)品屬于II-4用于酶類檢測(cè)的試劑，管理類別為第二類，分類編碼為6840；描述申報(bào)產(chǎn)品預(yù)期用途；描述有關(guān)申報(bào)產(chǎn)品的背景信息概述或特別細(xì)節(jié)（如適用），如申報(bào)產(chǎn)品的歷史概述、歷次提交的信息，與其他經(jīng)批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的關(guān)系等。3.產(chǎn)品描述3.1產(chǎn)品綜述應(yīng)明確產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，產(chǎn)品組成，原材料的來(lái)源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝，檢驗(yàn)方法，質(zhì)控品的制備方法及賦值情況等。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品，應(yīng)提供校準(zhǔn)品的制備方法及溯源情況。技術(shù)原理包括反應(yīng)原理，方法學(xué)，測(cè)量方法（速率法），信號(hào)處理方法，數(shù)據(jù)獲取和解讀方式，分析前處理步驟等。描述產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)，包括分析性能評(píng)估、參考區(qū)間、穩(wěn)定性以及臨床評(píng)價(jià)等。描述不同包裝規(guī)格之間的差異。描述產(chǎn)品中使用的生物材料或衍生物（如適用），包括生物學(xué)來(lái)源（如人、動(dòng)物、病原體、重組或發(fā)酵產(chǎn)物）和組織來(lái)源（如血液）的描述。人源性材料須對(duì)有關(guān)傳染病（HIV、HBV、HCV等）病原體測(cè)定予以說(shuō)明；其他動(dòng)物源及微生物來(lái)源的材料，應(yīng)當(dāng)說(shuō)明其在產(chǎn)品運(yùn)輸、使用過程中對(duì)使用者和環(huán)境是安全的，并提供相關(guān)的證明文件。3.2包裝描述提供有關(guān)產(chǎn)品包裝信息，包括包裝形狀和材料等。3.3研發(fā)歷程闡述申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品的研發(fā)背景和目的。如有參考的同類產(chǎn)品或前代產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)提供同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品的信息，并說(shuō)明選擇其作為研發(fā)參考的原因。3.4與同類和/或前代產(chǎn)品的比較應(yīng)著重從預(yù)期用途、主要組成成分、溯源情況、主要性能指標(biāo)、參考區(qū)間等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與境內(nèi)、外已上市同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。4.預(yù)期用途4.1預(yù)期用途說(shuō)明產(chǎn)品用于體外定量測(cè)定人體樣本中乳酸脫氫酶的活性，應(yīng)明確具體的樣本類型如血清、血漿等，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的分析性能研究及臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。臨床適應(yīng)證：乳酸脫氫酶（LDH）廣泛分布于各組織，特別是在心、肝、肌肉和腎中。根據(jù)電泳遷移率的不同，血清中的LDH可被分為5種不同的同工酶。每個(gè)同工酶都是由兩個(gè)不同亞基組成的四聚體。這兩種亞基根據(jù)多肽鏈的不同，被命名為心型和肌型。5種同工酶中，有2種是同源四聚體：LDH-1（心）和LDH-5（肌肉），其他3種為雜合體。血清LDH升高見于多種疾病。臨床上主要用于心肌梗死、肝病等疾病的輔助診斷。臨床適應(yīng)證應(yīng)鑒別疾病等的發(fā)生率、易感人群、分析物的詳細(xì)介紹及與臨床適應(yīng)證的關(guān)系，相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。適用人群：目標(biāo)患者/人群的信息，對(duì)于適用人群包含亞群、兒童或新生兒的情況，應(yīng)進(jìn)行明確。預(yù)期使用者：專業(yè)或非專業(yè)。4.2預(yù)期使用環(huán)境提供申報(bào)產(chǎn)品預(yù)期使用的地點(diǎn)及可能會(huì)影響其安全性和有效性的環(huán)境條件（如溫度、濕度、海拔）等。5.提供申報(bào)產(chǎn)品上市歷史情況（如適用）。6.其他需說(shuō)明的內(nèi)容除申報(bào)產(chǎn)品外，還需提供測(cè)定系統(tǒng)的其他組成部分，如樣本處理用試劑、適用儀器、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品、獨(dú)立軟件等的基本信息，并說(shuō)明其在測(cè)定中發(fā)揮的作用。對(duì)于已獲得批準(zhǔn)的測(cè)定系統(tǒng)的其他組成部分，應(yīng)當(dāng)提供注冊(cè)證編號(hào)和國(guó)家藥監(jiān)局官方網(wǎng)站公布的注冊(cè)證信息。（三）非臨床資料1.章節(jié)目錄應(yīng)包括本章的所有標(biāo)題和小標(biāo)題，注明目錄中各內(nèi)容的頁(yè)碼。2.產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理資料申請(qǐng)人應(yīng)考慮產(chǎn)品生命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從產(chǎn)品設(shè)計(jì)開發(fā)、原材料的采購(gòu)控制、生產(chǎn)、預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面的判定以及對(duì)患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)和相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制基礎(chǔ)上，綜合評(píng)價(jià)產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)可接受程度，形成風(fēng)險(xiǎn)管理資料。應(yīng)符合GB/T42062《醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。3.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單產(chǎn)品應(yīng)符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項(xiàng)適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對(duì)于其中不適用的各項(xiàng)要求，應(yīng)當(dāng)說(shuō)明理由。對(duì)于包含在產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料中的文件，應(yīng)當(dāng)說(shuō)明其在申報(bào)資料中的具體位置；對(duì)于未包含在產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料中的文件，應(yīng)當(dāng)注明該證據(jù)文件名稱及其在質(zhì)量管理體系文件中的編號(hào)以備查。4.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告4.1適用的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)申報(bào)產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)符合適用的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于強(qiáng)制性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，若申報(bào)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)特征、技術(shù)原理、預(yù)期用途、使用方式等與強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍不一致，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)提出不適用強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的說(shuō)明，并提供經(jīng)驗(yàn)證的證明性資料。4.2產(chǎn)品技術(shù)要求申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的有關(guān)要求進(jìn)行產(chǎn)品技術(shù)要求編寫。產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標(biāo)應(yīng)不低于國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。產(chǎn)品各性能指標(biāo)建議不低于YY/T1241《乳酸脫氫酶測(cè)定試劑（盒）》的要求。如有修訂，以最新發(fā)布版本為準(zhǔn)。不同方法學(xué)的產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)方法學(xué)特點(diǎn)制訂不同的性能指標(biāo)。產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法需根據(jù)技術(shù)性能指標(biāo)設(shè)定，檢驗(yàn)方法需優(yōu)先采用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法；自建檢驗(yàn)方法應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)研究，以確保檢驗(yàn)方法的科學(xué)性、準(zhǔn)確性、可重現(xiàn)性和可操作性。4.3產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告在保證產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，采用在符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的，應(yīng)當(dāng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)?？商峤灰韵氯我恍问降臋z驗(yàn)報(bào)告：（1）申請(qǐng)人出具的自檢報(bào)告。（2）委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。如產(chǎn)品提交自檢報(bào)告，還需按照《醫(yī)療器械注冊(cè)自檢管理規(guī)定》的要求提交相應(yīng)資料。5.分析性能評(píng)估申請(qǐng)人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行的所有性能評(píng)估驗(yàn)證的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的研究都應(yīng)包括研究目的、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。分析性能研究的試驗(yàn)方法，可以參考《定量檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》或YY/T1789《體外診斷檢驗(yàn)系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)方法》系列標(biāo)準(zhǔn)。分析性能評(píng)估時(shí)應(yīng)將試劑、儀器和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個(gè)整體進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)估整個(gè)系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能評(píng)估的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)、檢驗(yàn)人員、適用儀器、試劑規(guī)格和批號(hào)、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、臨床樣本來(lái)源等。用于分析性能評(píng)估的樣本，應(yīng)盡量與預(yù)期適用的真實(shí)臨床樣本一致，并按照說(shuō)明書描述的方式進(jìn)行樣本采集、處理、運(yùn)輸和保存。如申報(bào)產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上進(jìn)行評(píng)估的資料。如試劑包含不同包裝規(guī)格，需對(duì)各包裝規(guī)格間的差異進(jìn)行分析或驗(yàn)證。如不同規(guī)格間存在性能差異，需采用每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行分析性能評(píng)估；如不同規(guī)格間不存在性能差異，需要詳細(xì)說(shuō)明各規(guī)格間的差別及可能產(chǎn)生的影響，采用具有代表性的包裝規(guī)格進(jìn)行分析性能評(píng)估。5.1樣本穩(wěn)定性應(yīng)充分考慮實(shí)際使用過程中樣本采集、處理、運(yùn)輸及保存等各個(gè)階段的條件，對(duì)不同類型樣本的穩(wěn)定性分別進(jìn)行評(píng)價(jià)并提交研究資料。包括建議的保存條件（如溫度范圍、是否需要避光等）、添加劑（如抗凝劑等）和運(yùn)輸條件（如涉及）等。LDH尤其是LDH-4和LDH-5與其它酶不同，不是熱變性而是冷變性，易受冷藏或冷凍的影響，在4℃貯存活性下降快于室溫25℃，申請(qǐng)人應(yīng)充分研究確定適合的樣本儲(chǔ)存條件。對(duì)于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。樣本穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說(shuō)明書【樣本要求】中進(jìn)行詳細(xì)描述。5.2適用的樣本類型申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)適用的樣本類型及添加劑進(jìn)行適用性確認(rèn)。如試劑盒不僅適用于一種血液樣本類型，則應(yīng)選擇具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的樣本進(jìn)行樣本一致性的同源比對(duì)研究。研究樣本應(yīng)包含醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限濃度附近的樣本。采用抗凝劑時(shí)，應(yīng)說(shuō)明抗凝劑對(duì)樣本測(cè)定結(jié)果的影響。樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明樣本的來(lái)源及制備方法。5.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）可參考GB/T21415《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測(cè)量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》、YY/T1709《外診斷試劑用校準(zhǔn)物測(cè)量不確定度評(píng)定》、YY/T1549《生化分析用校準(zhǔn)物》、YY/T1662《生化分析儀用質(zhì)控物》、YY/T1652《體外診斷試劑用質(zhì)控物通用技術(shù)要求》的要求，提供試劑配套校準(zhǔn)品量值溯源相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時(shí)，應(yīng)對(duì)校準(zhǔn)品的正確度、質(zhì)控品的可接受區(qū)間/值（預(yù)期結(jié)果）以及校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的均勻性進(jìn)行評(píng)價(jià)。5.4正確度對(duì)測(cè)量正確度的評(píng)價(jià)，可采用參考物質(zhì)檢測(cè)、方法學(xué)比對(duì)、回收試驗(yàn)等方法，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。5.4.1參考物質(zhì)測(cè)定參考物質(zhì)包括具有互換性的有證參考物質(zhì)、公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，參考測(cè)量程序賦值的臨床樣本等。不可采用產(chǎn)品校準(zhǔn)品、申報(bào)試劑檢測(cè)系統(tǒng)定值的質(zhì)控品進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)。采用至少兩個(gè)濃度的參考物質(zhì)，代表臨床意義相關(guān)的高、低濃度水平，進(jìn)行多次重復(fù)測(cè)定，根據(jù)測(cè)定結(jié)果平均值與參考量值計(jì)算偏倚。如參考物質(zhì)只有一個(gè)水平，且無(wú)合理稀釋方法，亦可在說(shuō)明原因的基礎(chǔ)上，僅采用一個(gè)水平的參考物質(zhì)進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)，結(jié)果應(yīng)在申請(qǐng)人給定范圍內(nèi)。5.4.2方法學(xué)比對(duì)采用參考測(cè)量程序或國(guó)內(nèi)普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)測(cè)定一批臨床樣品，臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報(bào)試劑的測(cè)量區(qū)間并均勻分布。比較兩種方法之間的偏倚，如果偏倚在申請(qǐng)人給定的允許誤差范圍內(nèi)，說(shuō)明兩種測(cè)定系統(tǒng)對(duì)樣本的測(cè)定結(jié)果基本相符。擬申報(bào)試劑與比對(duì)試劑相比，對(duì)同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋不會(huì)產(chǎn)生差異結(jié)果。在實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前，應(yīng)分別對(duì)擬申報(bào)試劑和比對(duì)試劑進(jìn)行初步評(píng)估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。方法學(xué)比對(duì)時(shí)應(yīng)注意適用機(jī)型、質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。如條件允許，建議與具有相同溯源性的分析系統(tǒng)作比對(duì)。樣本盡可能使用新鮮樣本。5.4.3回收試驗(yàn)將標(biāo)準(zhǔn)溶液、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或分析物純品加入臨床樣本中，配制成回收樣品，進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)溶液、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的體積與臨床樣本的體積比應(yīng)不會(huì)產(chǎn)生基質(zhì)的變化，一般加入體積不超過總體積的10%。檢測(cè)至少3個(gè)水平的回收樣品，代表試劑測(cè)量區(qū)間內(nèi)的高、中、低濃度，其中應(yīng)包括醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限附近的濃度。每個(gè)濃度應(yīng)進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，采用檢測(cè)結(jié)果平均值計(jì)算回收率。5.5精密度應(yīng)根據(jù)各測(cè)量條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響程度的分析，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性。精密度研究用樣本一般為臨床實(shí)際檢測(cè)樣本或其混合物。樣本濃度一般包括測(cè)量區(qū)間高、中、低在內(nèi)的3～5個(gè)水平，應(yīng)有醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限濃度附近的樣本。精密度研究可能涉及多天、多地點(diǎn)檢測(cè)，應(yīng)確保樣本的穩(wěn)定性和一致性，可將樣本等分保存。5.6空白限、檢出限、定量限5.6.1空白限、檢出限與定量限的建立空白限（LoB），檢出限(LoD)，定量限(LoQ)的建立需分別選擇多個(gè)獨(dú)立的樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行研究。空白限一般由多個(gè)獨(dú)立的空白樣本（無(wú)分析物）的測(cè)定結(jié)果，經(jīng)計(jì)算獲得；檢出限一般由多個(gè)低濃度（含有分析物）樣本的測(cè)定結(jié)果結(jié)合空白限（或單獨(dú)計(jì)算）獲得。定量限應(yīng)滿足預(yù)設(shè)正確度指標(biāo)，即考慮偏倚和精密度的要求。5.6.2空白限、檢出限與定量限的驗(yàn)證空白限、檢出限及定量限的驗(yàn)證，每個(gè)項(xiàng)目需選擇至少2個(gè)樣本（空白樣本、檢出限濃度樣本、定量限濃度樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)試劑批次至少需要獲得20個(gè)檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算與5.6.1研究獲得的空白限、檢出限及定量限呈現(xiàn)一致性的檢測(cè)結(jié)果比例，如果比例符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求/預(yù)設(shè)的臨界值，則空白限、檢出限及定量限得到驗(yàn)證。5.7分析特異性干擾物質(zhì)研究應(yīng)當(dāng)考慮常見的內(nèi)源性干擾、外源性干擾和已有報(bào)道的干擾物質(zhì)等對(duì)產(chǎn)品測(cè)定結(jié)果的影響。常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等，常見的外源性干擾物質(zhì)包括樣本添加劑（如防腐劑）、常用藥物及其代謝物（如維生素C）、患者群體使用的藥物及其代謝物、膳食物質(zhì)、樣本收集或處理過程中接觸到的物質(zhì)，樣本污染物；亦應(yīng)考慮文獻(xiàn)中已報(bào)道的對(duì)類似試劑或測(cè)量程序存在干擾的物質(zhì)。研究的干擾物質(zhì)濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，并對(duì)干擾的程度進(jìn)行量化。將研究結(jié)果在說(shuō)明書中進(jìn)行描述，明確干擾物質(zhì)影響的最大濃度。5.8線性區(qū)間與測(cè)量區(qū)間5.8.1線性區(qū)間線性區(qū)間的研究所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測(cè)的樣本相似，需采用高值和零濃度/低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。當(dāng)建立試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制較預(yù)期線性區(qū)間更寬的9-11個(gè)左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個(gè)樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測(cè)次數(shù)。采用重復(fù)檢測(cè)均值和預(yù)期值進(jìn)行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點(diǎn)圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)驗(yàn)證試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制覆蓋整個(gè)線性區(qū)間的至少5-7個(gè)不同濃度的樣本，每個(gè)樣本至少重復(fù)檢測(cè)2次。5.8.2測(cè)量區(qū)間測(cè)量區(qū)間，也稱分析測(cè)量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測(cè)量程序步驟中的其他前處理情況下，檢測(cè)結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。測(cè)量區(qū)間下限為定量限，線性區(qū)間包含測(cè)量區(qū)間。如對(duì)超出測(cè)量區(qū)間濃度的樣本可進(jìn)行稀釋后檢測(cè)，應(yīng)研究合適的稀釋液和稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的可報(bào)告區(qū)間。6.穩(wěn)定性研究一般應(yīng)包含研究方案、報(bào)告和數(shù)據(jù)三部分內(nèi)容。6.1實(shí)時(shí)穩(wěn)定性提交至少三批申報(bào)產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究資料。明確儲(chǔ)存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。6.2使用穩(wěn)定性提交申報(bào)產(chǎn)品實(shí)際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開瓶穩(wěn)定性。適用時(shí)提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如產(chǎn)品中包含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，還應(yīng)提交校準(zhǔn)、質(zhì)控頻率或校準(zhǔn)、質(zhì)控穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。6.3運(yùn)輸穩(wěn)定性提交申報(bào)產(chǎn)品可在特定或者預(yù)期的條件下運(yùn)輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說(shuō)明產(chǎn)品正確運(yùn)輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機(jī)械保護(hù)等）。同時(shí)說(shuō)明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運(yùn)輸條件。運(yùn)輸穩(wěn)定性研究可結(jié)合于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究中。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進(jìn)行研究。試劑穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說(shuō)明書【儲(chǔ)存條件及有效期】中進(jìn)行詳細(xì)描述。7.參考區(qū)間申報(bào)產(chǎn)品可以建立自己的參考區(qū)間或驗(yàn)證參考區(qū)間，但都要確保參考區(qū)間的可溯源性，記錄確定參考區(qū)間的所有步驟，包括參考個(gè)體的選擇、分析前因素、樣本檢測(cè)以及統(tǒng)計(jì)分析方法等。如參考已發(fā)布實(shí)施的臨床檢測(cè)參考區(qū)間標(biāo)準(zhǔn)等驗(yàn)證參考區(qū)間，應(yīng)依據(jù)《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》中“（二）參考區(qū)間的驗(yàn)證”章節(jié)相關(guān)條件進(jìn)行驗(yàn)證，如驗(yàn)證通過，可直接采用經(jīng)驗(yàn)證的參考區(qū)間；如驗(yàn)證不通過，應(yīng)建立參考區(qū)間。參考區(qū)間的建立應(yīng)參考《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》中“（一）參考區(qū)間的建立”章節(jié)相關(guān)要求，提交建立參考區(qū)間所采用樣本來(lái)源及詳細(xì)的試驗(yàn)資料。參考樣本應(yīng)明確納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，樣本選擇應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途，考慮不同年齡、性別、地域等因素的影響，納入的樣本應(yīng)具有代表性。乳酸脫氫酶不同年齡階段（嬰兒、兒童及成人）濃度水平相差較大，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行分組研究，例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。8.其他資料8.1反應(yīng)體系（如需提供）反應(yīng)體系研究資料包括樣本的制備方式（采集和處理）、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法等。8.2主要原材料研究資料和生產(chǎn)工藝研究資料（如需提供）主要研究資料包括主要原材料的資料。如涉及企業(yè)參考品，還應(yīng)提交企業(yè)參考品生產(chǎn)工藝的研究資料主要為生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)8.3三批產(chǎn)品的生產(chǎn)及自檢記錄。提供三批產(chǎn)品生產(chǎn)及自檢記錄的復(fù)印件。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和（或）質(zhì)控品，還應(yīng)提供校準(zhǔn)品的賦值記錄和質(zhì)控品的定值記錄。8.4證明產(chǎn)品安全性、有效性的其他非臨床研究資料。（四）臨床評(píng)價(jià)資料根據(jù)體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)的相關(guān)要求，該項(xiàng)目已列入《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》，申請(qǐng)人可按照《免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。申請(qǐng)人也可通過臨床試驗(yàn)的方式進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)；如申請(qǐng)人無(wú)法按要求進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)或預(yù)期用途超出豁免目錄中的描述，應(yīng)進(jìn)行臨床試驗(yàn)；臨床試驗(yàn)的倫理、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等臨床試驗(yàn)資料均應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》對(duì)臨床評(píng)價(jià)資料的規(guī)定，相關(guān)資料簽章應(yīng)符合《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。產(chǎn)品說(shuō)明書和標(biāo)簽樣稿產(chǎn)品說(shuō)明書和標(biāo)簽的格式應(yīng)符合《醫(yī)療器械說(shuō)明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》、《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說(shuō)明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。境外試劑應(yīng)當(dāng)提交產(chǎn)品原文說(shuō)明書，中文說(shuō)明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。以下內(nèi)容僅對(duì)乳酸脫氫酶測(cè)定試劑說(shuō)明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，說(shuō)明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。1.【產(chǎn)品名稱】通用名稱，試劑名稱由三部分組成：被測(cè)物名稱、用途、方法或原理。例如：乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒（乳酸底物法）。2.【包裝規(guī)格】注（1）包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙試劑類型；（2）包裝規(guī)格應(yīng)明確裝量（如××mL；××人份）；（3）帶有校準(zhǔn)品或質(zhì)控品應(yīng)明確標(biāo)識(shí)；（4）與產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格一致；（5）如不同包裝規(guī)格有與之特定對(duì)應(yīng)的機(jī)型，應(yīng)同時(shí)明確適用機(jī)型。3.【預(yù)期用途】?jī)?nèi)容共分為兩段：第一段說(shuō)明試劑用于體外定量測(cè)定人樣本（血清或血漿）中乳酸脫氫酶的活性。第二段應(yīng)明確與目的測(cè)定物相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況，說(shuō)明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等。4.【檢驗(yàn)原理】根據(jù)產(chǎn)品采用的方法學(xué)說(shuō)明檢驗(yàn)的原理，測(cè)定原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測(cè)物和產(chǎn)物的關(guān)系進(jìn)行描述，必要時(shí)可結(jié)合圖示方法描述。如：在堿性條件下，乳酸脫氫酶催化L-乳酸生成丙酮酸，同時(shí)將NAD+還原為NADH，因此在37℃、340nm波長(zhǎng)下監(jiān)測(cè)吸光度上升速率，可得出乳酸脫氫酶的活性。反應(yīng)式如下：L-乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+5.【主要組成成分】應(yīng)明確以下內(nèi)容：5.1說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度信息。對(duì)于多組分產(chǎn)品，說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。5.2產(chǎn)品如包含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，應(yīng)明確具體基質(zhì)成分，此外，校準(zhǔn)品應(yīng)明確定值及其溯源性，質(zhì)控品應(yīng)注明靶值和靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨(dú)的靶值單。5.3試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分，應(yīng)列明檢測(cè)所需但未包含在本試劑盒中的試劑名稱。如該試劑已取得注冊(cè)證號(hào)/備案號(hào)，需注明“注冊(cè)證號(hào)/備案號(hào)及貨號(hào)”；如該試劑正處于注冊(cè)/備案階段，需注明“貨號(hào)及注冊(cè)證號(hào):（留空）/備案號(hào):（留空）”。6.【儲(chǔ)存條件及有效期】對(duì)試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性、在機(jī)穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹，包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。如注冊(cè)單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品且其形態(tài)為干粉（包含試劑為凍干粉狀態(tài)），則應(yīng)對(duì)復(fù)溶后的儲(chǔ)存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對(duì)各組分的儲(chǔ)存條件和有效期分別進(jìn)行描述。對(duì)于可以冷凍的試劑應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。注明“生產(chǎn)日期、使用期限或者失效日期見標(biāo)簽”的字樣。7.【適用儀器】明確所適用的儀器類型，應(yīng)細(xì)化到具體廠家、型號(hào)。如需要可提供與儀器有關(guān)的信息以便指導(dǎo)用戶操作。如適用儀器為非通用的儀器則需寫明其具體型號(hào)，避免“系列”。8.【樣本要求】建議明確以下內(nèi)容：8.1樣本的類型：明確適用的樣本類型，如有抗凝血應(yīng)明確抗凝劑。8.2當(dāng)樣本為血漿時(shí)，其處理過程可能會(huì)使血小板和紅細(xì)胞中大量的LDH釋放，導(dǎo)致LDH水平異常升高，得到錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。樣本為血清時(shí)，因紅細(xì)胞中LDH含量比血清高100倍以上，不宜用溶血血清為測(cè)定標(biāo)本。為避免干擾，采血后應(yīng)立即分離血清、血漿。8.3為保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，血清和血漿樣本應(yīng)不含纖維蛋白、紅細(xì)胞和其他顆粒物質(zhì)。從接受抗凝劑或溶栓劑治療的患者身上獲得的血清樣本可能因凝固不完全而含有纖維蛋白，這可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤。8.4樣本的穩(wěn)定性：明確樣本采集后和處理后的保存條件和期限等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫、凍融次數(shù)的要求。以上內(nèi)容應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究結(jié)果一致。9.【檢驗(yàn)方法】應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：9.1試劑使用方法：各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的程序、注意事項(xiàng)等。9.2試驗(yàn)條件：時(shí)間、試劑用量、樣本用量、測(cè)定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向（如有）、反應(yīng)時(shí)間（如有）等以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)試驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度等注意事項(xiàng)，檢驗(yàn)試劑及樣本復(fù)溫、試劑孵育溫度等要求。9.3校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制。校準(zhǔn)有效期及需要重新校準(zhǔn)的情況。推薦的校準(zhǔn)周期。9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、對(duì)質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。9.5試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算或讀取，包括對(duì)每個(gè)系數(shù)及對(duì)每個(gè)計(jì)算步驟的解釋。如果可能，應(yīng)舉例說(shuō)明。10.【參考區(qū)間】分別說(shuō)明常用樣本類型的參考區(qū)間，并簡(jiǎn)要說(shuō)明參考區(qū)間的確定方法。應(yīng)包含參考區(qū)間確定的基本信息，包括：樣本量、參考人群特