《神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病生物樣本與數(shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)規(guī)范 第2部分：人類腦脊液樣本采集與處理》

T/CRHAXXX—XXXXT/CRHAXXX—XXXXICS07.080A40團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CRHAXX—XXXX————————————————————————————————————神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病生物樣本與數(shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)規(guī)范第2部分：人類腦脊液樣本采集與處理SpecificationforBiobankconstructionofneurodegenerativediseasesPart2:Collectionandprocessingofhumancerebrospinalfluidbiomaterial（征求意見稿）XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施XXXXXXXX發(fā)布 目次TOC\o"1-2"\h\u前??言 I引??言 II1范圍 1神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病生物樣本與數(shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)規(guī)范

第2部分：人類腦脊液樣本采集與處理范圍本部分規(guī)定了人類腦脊液樣本的采集、處理以及質(zhì)量控制的規(guī)范要求。本部分適用于涉及人類腦脊液樣本采集與處理的生物樣本庫(kù)以及基于腦脊液樣本進(jìn)行神經(jīng)系統(tǒng)變性等疾病研究的所有機(jī)構(gòu)。規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T22576.1-2018醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的要求第1部分：通用要求GB/T37864-2019生物樣本庫(kù)質(zhì)量和能力通用要求GB/T39707-2020醫(yī)療廢物處理處置污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB/T39767-2021人類生物樣本管理規(guī)范術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。腦脊液cerebrospinalfluid由分布于側(cè)腦室底部和第三、四腦室頂部,其結(jié)構(gòu)是一簇毛細(xì)血管,被覆一層室管膜上皮的腦室內(nèi)脈絡(luò)叢組織產(chǎn)生,向腦室腔和蛛網(wǎng)膜下腔分泌的無(wú)色透明液體，產(chǎn)生速率為0.3ml/min,日分泌量在400～500ml。腰椎穿刺lumbarpuncture從腰椎弓板間隙穿刺腰椎穿刺針，穿透硬腦膜及蛛網(wǎng)膜進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔，提取腦脊液的過(guò)程。評(píng)估assessment一項(xiàng)系統(tǒng)的獨(dú)立的檢查活動(dòng)，以確定活動(dòng)是否按原計(jì)劃進(jìn)行以及這些活動(dòng)是否有效實(shí)施且能夠?qū)崿F(xiàn)目標(biāo)。評(píng)估還包括將結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較，類型包括外部評(píng)估、內(nèi)部評(píng)估、同行評(píng)審和自我評(píng)估等。腦脊液樣本采集與處理總要求腦脊液樣本的采集與處理應(yīng)遵循神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病生物樣本與數(shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)規(guī)范第1部分：通用要求的規(guī)定。應(yīng)遵循GB/T39767-2021、GB/T22576.1-2018、GB/T39707-2020的規(guī)定進(jìn)行操作。應(yīng)由具有相應(yīng)資質(zhì)的人員執(zhí)行腦脊液的無(wú)菌采集、處理。采集前應(yīng)排除腦脊液采集禁忌證（采集禁忌證詳見附錄A），并對(duì)供者告知供者腰椎穿刺的風(fēng)險(xiǎn)及相關(guān)注意事項(xiàng)。腦脊液應(yīng)采集多管，總采集量宜≥12ml，分別滿足常規(guī)生化檢測(cè)、微生物、細(xì)胞學(xué)檢測(cè)及生物樣本庫(kù)的前瞻性保藏。注：開始1～2ml腦脊液用于常規(guī)分析評(píng)估，后續(xù)收集腦脊液樣本到聚丙烯（polypropylene）管中。腰椎穿刺應(yīng)選擇標(biāo)準(zhǔn)型號(hào)為21～23G的非創(chuàng)傷性針頭。應(yīng)根據(jù)供者體型選擇合適的腰椎穿刺針，肥胖者宜使用長(zhǎng)度＞90mm的穿刺針，一般體型者使用長(zhǎng)度＜90mm的穿刺針。腦脊液應(yīng)在采集后2h內(nèi)完成分離、分裝與保存，分裝應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，避免交叉污染。應(yīng)根據(jù)研究需求分別存儲(chǔ)經(jīng)處理后的腦脊液上清和/或沉淀，存儲(chǔ)溫度應(yīng)為-80℃，并記錄腦脊液樣本的凍融次數(shù)，反復(fù)凍融次數(shù)應(yīng)＜3次。腦脊液應(yīng)使用帶螺帽、無(wú)菌聚丙烯材質(zhì)（polypropylene，PP）管保存并做唯一性標(biāo)識(shí)便于檢索。肉眼可見的血液污染或污染的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)＞500個(gè)/μl腦脊液不應(yīng)作為樣本庫(kù)保存的樣本。注：正常采集的腦脊液為無(wú)色、清澈、透明、不凝結(jié)的液體。腦脊液分裝量應(yīng)達(dá)每支凍存管總?cè)萘康?5%，以防止冷凍干燥。應(yīng)完整記錄腦脊液體樣本的標(biāo)準(zhǔn)分析前變量（standardPRE-analyticalcode，SPREC），包括但不僅限于：采集時(shí)間、采集量、采集部位；主要添加劑；離心前延遲時(shí)間、離心次數(shù)、離心速度與時(shí)間；存儲(chǔ)容器與長(zhǎng)期存儲(chǔ)時(shí)間等。新鮮腦脊液的轉(zhuǎn)運(yùn)應(yīng)遵循GB/T37864-2019中7.4要求，并根據(jù)分析項(xiàng)目、分析方法等的不同選擇在低溫或室溫進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。凍存的腦脊液樣本應(yīng)采用液氮或干冰運(yùn)輸。注1：干冰量應(yīng)能確保樣本保持在適當(dāng)?shù)臏囟取?天。注2：腦脊液最好在周一開始啟運(yùn)，以便樣本在同一周內(nèi)到達(dá)目的地。腦脊液樣本采集與處理操作規(guī)程腦脊液樣本采集前準(zhǔn)備應(yīng)審查和確認(rèn)知情同意書已簽署以及供者不存在采集禁忌癥。核對(duì)供者姓名、住院號(hào)等信息以確認(rèn)供者身份信息保持一致。準(zhǔn)備腰穿包、穿戴個(gè)人防護(hù)裝備，至少兩層手套，宜在一次性手套下佩戴耐切割手套。應(yīng)根據(jù)腦脊液的來(lái)源（活體供者或死亡供著）選擇合適的穿刺部位進(jìn)行具體操作?；铙w供者穿刺前應(yīng)對(duì)供者適當(dāng)?shù)亟忉屌c安撫，以消除疑慮和恐懼。指導(dǎo)供者側(cè)臥于硬板床上，背部與床面垂直，頭部應(yīng)盡量向前胸屈曲，使軀干盡可能彎曲呈弓形，脊柱盡量后凸以增寬椎間隙。確定穿刺點(diǎn)，以雙側(cè)髂嵴最高點(diǎn)連線與后正中線的交會(huì)處為穿刺點(diǎn)，宜選擇L3～L4腰椎棘突間隙，也可在上一或下一腰椎間隙進(jìn)行穿刺采集。以穿刺點(diǎn)為中心，直徑15cm，消毒至少3遍，穿刺區(qū)覆蓋無(wú)菌洞巾。用利多卡因自皮膚做逐層浸潤(rùn)麻醉，邊回抽邊推注，直達(dá)椎間韌帶。左手固定穿刺點(diǎn)皮膚，右手持穿刺針以垂直背部、針尖稍斜向頭部的方向緩慢刺入，成人進(jìn)針約4～6cm（兒童2～4cm），當(dāng)針頭穿過(guò)韌帶與硬腦膜時(shí)，有阻力突然消失落空感。此時(shí)，可將針芯慢慢抽出，可見腦脊液流出。接測(cè)壓管，測(cè)定腦脊液壓力，然后撤去測(cè)壓管，收集腦脊液。穿刺結(jié)束后，將針芯插入穿刺針中，右手拔出穿刺針，左手持無(wú)菌紗布按壓穿刺口，消毒、無(wú)菌敷料覆蓋、固定。囑患者去枕平臥休息6小時(shí)，測(cè)量血壓并觀察變化。行腦室引流的患者可直接從腦室外引流管的接入口獲取腦脊液，具體實(shí)施步驟參照《神經(jīng)外科腦脊液外引流中國(guó)專家共識(shí)(2018版)》。注：腦室外引流管是放置在側(cè)腦室內(nèi)的裝置，用于控制患有創(chuàng)傷性腦損傷、蛛網(wǎng)膜下腔血腫、腦積水、占位性病變（如腫瘤）的神經(jīng)和神經(jīng)外科患者的顱內(nèi)壓升高，或神經(jīng)系統(tǒng)疾病。死亡供者在尸檢過(guò)程中收集腦脊液應(yīng)在病理學(xué)家詳細(xì)檢查大腦并記錄其特征和所有異常后進(jìn)行。對(duì)于需要進(jìn)行完整尸檢的供者，或在局部解剖中樞神經(jīng)系統(tǒng)的情況下［有或沒有附加器官系統(tǒng)和（或）體腔限制］，在移除顱骨后直接從側(cè)腦室獲取（具體操作參照神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病生物樣本與數(shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)規(guī)范第3部分：死亡供者腦組織樣本的采集與處理第5章、第6章規(guī)定進(jìn)行）。將穿刺針插入大腦半球背側(cè)的副矢狀面（正中線正外側(cè)）至合適的深度，直至將注射器的柱塞縮回導(dǎo)致液體流出，獲取腦脊液。若尸檢不對(duì)顱內(nèi)內(nèi)容物進(jìn)行評(píng)估（如顱骨和顱底、硬腦膜、軟腦膜、腦、垂體、顱神經(jīng)），仍可以通過(guò)腰椎穿刺收集腦脊液且穿刺的位置可不必局限于脊髓的腰部區(qū)域。腦脊液采集結(jié)束后應(yīng)徹底清潔工作站、沖洗使用過(guò)的手術(shù)器械，并進(jìn)行手消毒。一次性穿刺針應(yīng)放在指定的鋒利物容器內(nèi)，所有個(gè)人防護(hù)設(shè)備脫下后按醫(yī)療廢棄物進(jìn)行統(tǒng)一處置。腦脊液樣本處理腦脊液即時(shí)離心（離心力2000×g，室溫10min），離心前的延遲時(shí)間宜控制在30分鐘。注：如需要保存腦脊液細(xì)胞（離心力400×g，室溫離心10min）。使用校準(zhǔn)過(guò)的移液器將腦脊液等量分裝到PP凍存管中。分裝量宜按每支凍存管0.2、0.5或1.0ml，最小分裝量為0.1ml。注：盡量保證分裝多個(gè)復(fù)份，如10.0ml腦脊液樣本，0.5ml/管，可分裝20管。分裝結(jié)束后，所有腦脊液樣本應(yīng)分配具有唯一性標(biāo)識(shí)的凍存二維碼，確保樣本與研究對(duì)象的基本信息、采樣信息及隨訪信息等可追溯。將腦脊液于-80℃以下保存，盡量將多個(gè)復(fù)份樣本存儲(chǔ)在不同的位置，以防止其中一個(gè)出現(xiàn)故障。腦脊液樣本質(zhì)量控制應(yīng)根據(jù)腦脊液的目標(biāo)標(biāo)志物建立并實(shí)施相應(yīng)質(zhì)量控制（QualityControl，QC）方案評(píng)估腦脊液的質(zhì)量。應(yīng)規(guī)定QC的頻次，保留QC過(guò)程和結(jié)果的記錄，以證明樣本能滿足預(yù)期要求。應(yīng)分析QC數(shù)據(jù),若不能滿足既定要求，應(yīng)對(duì)不合格生物樣本進(jìn)行有效標(biāo)識(shí)，并采取相應(yīng)措施控制其報(bào)告和分發(fā)范圍。附錄A（資料性附錄）腦脊液樣本采集的禁忌癥禁忌癥a）實(shí)施腰穿留取腦脊液時(shí)，一定要考慮是否有顱內(nèi)壓升高，如果眼底檢查發(fā)現(xiàn)視乳頭水腫，一定要先做電子計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）和磁共振成像（MRI）檢查；影像學(xué)上如腦室大小正常且沒有移位，后顱凹沒有占位征象，方可腰穿取腦脊液，否則不能做腰穿。b)穿刺部位有化膿性感染灶的患者,通過(guò)受感染組織進(jìn)行腰穿會(huì)增加中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的風(fēng)險(xiǎn)，腦脊液壓迫癥做腰穿時(shí)應(yīng)該謹(jǐn)慎，因?yàn)檠┛梢允鼓X脊液壓迫癥狀加重。c)凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)、血小板計(jì)數(shù)低于40×109/L使用肝素或任何原因?qū)е碌某鲅獌A向，應(yīng)該在凝血障礙糾正后方可腰穿。d)開放性顱腦損傷或有腦脊液漏者。e)先天性脊柱異常和脊髓異常（如脊髓栓系）或腰穿部位的局部皮膚感染是進(jìn)行腰穿的禁忌癥，在先天性脊柱畸形的情況下，腰穿程序可以通過(guò)透視、超聲或計(jì)算機(jī)斷層掃描進(jìn)行引導(dǎo)。f)抗血小板藥物只是相對(duì)的禁忌癥，大多數(shù)中心不會(huì)在腰穿前中斷抗血小板藥物治療。對(duì)于聯(lián)合使用抗血小板藥物（如氯吡格雷和阿司匹林）的病例中的腰穿并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的研究尚不多見，但認(rèn)為在腰穿之前暫時(shí)保留兩者之一更安全（III級(jí)證據(jù)）。在雙重抗血小板治療的情況下，建議繼續(xù)使用阿司匹林，而噻吩吡啶衍生物（如氯吡格雷、噻氯匹定）的攝入應(yīng)在腰穿前暫時(shí)停止（1或2周），除非患者有高血栓形成風(fēng)險(xiǎn)或有進(jìn)行腰穿的緊急指征（III級(jí)證據(jù)）。

參考文獻(xiàn)EngelborghsS,NiemantsverdrietE,StruyfsH,etal.Consensusguidelinesforlumbarpunctureinpatientswithneurologicaldiseases.AlzheimersDement(Amst).2017May18;8:111-126.TeunissenCE,PetzoldA,BennettJL,etal.Aconsensusprotocolforthestandardizationofcerebrospinalfluidcollectionandbiobanking.Neurology.2009Dec1;73(22):1914-22.BestPracticesforRepositories?Collection,Storage,RetrievalandDistributionofBiologicalMaterialsforResearch,ISBER,2012.TeunissenCE,TumaniH,EngelborghsS,MollenhauerB.BiobankingofCSF:internati