2024-2025學(xué)年高中生物專(zhuān)題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)教案新人教版選修1

PAGE10-課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.明確用培育基對(duì)微生物進(jìn)行選擇的原理。(重點(diǎn))2.學(xué)會(huì)統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)量的方法。(重點(diǎn))3.能進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作，并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)。(難點(diǎn))1．探討思路(1)篩選菌株的思路①自然界中目的菌株的篩選ⅰ依據(jù)：依據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去找尋。ⅱ實(shí)例：PCR技術(shù)過(guò)程中用到的耐高溫的TaqDNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來(lái)的Taq細(xì)菌中提取出來(lái)的。②試驗(yàn)室中目的菌株的篩選ⅰ原理：人為供應(yīng)有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括養(yǎng)分、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻擋其他微生物的生長(zhǎng)。ⅱ方法：利用選擇培育基分別。a．選擇培育基：允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)阻擋或抑制其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培育基。b．實(shí)例：選擇分解尿素的細(xì)菌的培育基，以尿素作為唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目①常用方法：稀釋涂布平板法。ⅰ原理eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(a.當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培育基表面,生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的,一個(gè)活菌,b.通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來(lái)推想樣品中,大約含有的活菌數(shù)))ⅱ計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M。C：代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)。V：代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)。M：代表稀釋倍數(shù)。ⅲ留意事項(xiàng)a．為了保證結(jié)果精確，一般設(shè)置三個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。b．統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。緣由是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上視察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來(lái)表示。c．設(shè)置比照：主要目的是解除試驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，提高試驗(yàn)結(jié)果的可信度。②其他方法：利用顯微鏡干脆計(jì)數(shù)。2．試驗(yàn)設(shè)計(jì)及操作提示(1)試驗(yàn)設(shè)計(jì)①土壤取樣從富含有機(jī)質(zhì)、酸堿度接近中性且潮濕的土壤取樣。先鏟去表層土，在距地表約3～8cm的土壤層取樣。②樣品的稀釋ⅰ稀釋緣由：樣品的稀釋度干脆影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目。ⅱ稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用肯定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培育，保證獲得菌落數(shù)在30～300之間，便于計(jì)數(shù)。ⅲ微生物的培育與視察a．培育：不同種類(lèi)的微生物，往往須要不同的培育溫度和培育時(shí)間。b．視察：每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最終選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。(2)操作提示①無(wú)菌操作ⅰ取土樣的用具在運(yùn)用前都須要滅菌。ⅱ應(yīng)在火焰旁稱(chēng)取土壤，并在火焰旁邊將稱(chēng)好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。ⅲ在稀釋土壤溶液的過(guò)程中，每一步都要在火焰旁操作。②做好標(biāo)記：本試驗(yàn)運(yùn)用的平板和試管比較多。為避開(kāi)混淆，最好運(yùn)用前就做好標(biāo)記。③制定安排：對(duì)于耗時(shí)較長(zhǎng)的生物試驗(yàn)，要事先制定安排，以便提高工作效率。(3)菌種鑒定①原理：分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，使培育基的堿性增加。②方法：在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑培育細(xì)菌，若指示劑變紅，可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。1．推斷對(duì)錯(cuò)(1)因?yàn)橥寥乐懈黝?lèi)微生物的數(shù)量不同，所以，為獲得不同類(lèi)型的微生物要按不同的稀釋倍數(shù)進(jìn)行分別。 ()(2)測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍不同。 ()(3)假如得到了兩個(gè)或兩個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較勝利，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。 ()(4)牛肉膏蛋白胨培育基上的菌落數(shù)目明顯少于選擇培育基上的菌落數(shù)目，說(shuō)明選擇培育基已篩選出一些菌種。 ()提示：(1)√(2)√(3)√(4)×牛肉膏蛋白胨培育基上的菌落數(shù)目明顯大于選擇培育基上的菌落數(shù)目，才說(shuō)明選擇培育基具有篩選作用。2．產(chǎn)生每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培育基分別是()A．一個(gè)細(xì)菌，液體培育基B．很多細(xì)菌，液體培育基C．一個(gè)細(xì)菌，固體培育基D．很多細(xì)菌，固體培育基C[在微生物的培育中產(chǎn)生每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目是一個(gè)細(xì)菌，運(yùn)用的培育基為固體培育基。]微生物的篩選與計(jì)算[合作溝通]1．依據(jù)選擇培育基的原理，如何篩選出耐酸菌？提示：可將培育基的pH調(diào)至酸性，再接種培育。2．如何從平板上的菌落數(shù)推想出每克樣品中的菌落數(shù)？提示：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板上菌落數(shù)的平均值，然后依據(jù)公式進(jìn)行計(jì)算。3．稀釋涂布平板法和顯微計(jì)數(shù)法對(duì)微生物計(jì)數(shù)產(chǎn)生的試驗(yàn)誤差如何？試分析緣由。提示：稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的值比實(shí)際值偏小，緣由是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上視察到的只是一個(gè)菌落；顯微計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)的結(jié)果比實(shí)際值偏大，緣由是顯微鏡下無(wú)法區(qū)分細(xì)胞的死活，計(jì)數(shù)時(shí)包括了死細(xì)胞。[歸納總結(jié)]1．選擇培育基的選擇作用(1)原理：依據(jù)不同微生物的特殊養(yǎng)分要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性不同而制備培育基。(2)方法：①在培育基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分別出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。②變更培育基中的養(yǎng)分成分。例如，缺乏氮源時(shí)可以分別固氮微生物；石油作為唯一碳源時(shí)，可以分別出能消退石油污染的微生物；用含無(wú)機(jī)碳源的培育基分別自養(yǎng)型微生物。③變更微生物的培育條件。例如，將培育基放在高溫環(huán)境中培育可以得到耐高溫的微生物；用一般培育基在無(wú)氧條件下分別厭氧型和兼性厭氧型微生物。2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，但是一般運(yùn)用計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)法可分為干脆計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。二者的比較如下表所示：項(xiàng)目干脆計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法原理利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算肯定容積的樣品中微生物的數(shù)量當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培育基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推想出樣品中大約含有多少活菌主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板培育基計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)菌體本身培育基上菌落數(shù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)便利、操作簡(jiǎn)潔計(jì)數(shù)的是活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較困難，有肯定誤差計(jì)算公式每毫升原液含菌數(shù)＝每小格平均菌體數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)每毫升原液含菌數(shù)＝培育基上平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)÷涂布液體積特殊提示：能在選擇培育基上生長(zhǎng)的不肯定是所須要的目的菌原則上選擇培育基只能允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，但事實(shí)上，微生物的培育是一個(gè)特別困難的問(wèn)題，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)繁殖，因此能在選擇培育基上生長(zhǎng)的微生物不肯定都是所需的微生物，還需進(jìn)一步的鑒定。[典題通關(guān)]自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的。人們?cè)谔接懳⑸飼r(shí)一般要將它們分別提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定。下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的試驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題。步驟如下：①制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。②為了得到更加精確的結(jié)果，應(yīng)選用________法接種樣品。③相宜溫度下培育。結(jié)果分析：(1)測(cè)定大腸桿菌數(shù)時(shí)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培育基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，與事實(shí)更加接近的是________。A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是220和260，取平均值240C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是400、212和256，取平均值289D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、260、240和250，取平均值240(2)一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培育基上測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為212，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)約是(涂布平板時(shí)所用的稀釋液體積為0.2mL)________。(3)用這種方法測(cè)定菌體密度時(shí)，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量________(填“多”或“少”)，因?yàn)開(kāi)_______________。[技巧點(diǎn)撥](1)因?yàn)轭}中操作的目的是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定，所以接種的方法是稀釋涂布平板法。(2)測(cè)定活菌數(shù)量時(shí)，選擇的平板越多誤差越小，且選擇的平板要能形成30～300個(gè)菌落。(3)所做的多個(gè)平板中，假如其中一個(gè)平板中菌落的數(shù)目明顯多于或少于其他幾個(gè)平板，則說(shuō)明該平板不符合要求，應(yīng)重做或舍棄。[解析]若對(duì)大腸桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，則須要用稀釋涂布平板法接種樣品。(1)應(yīng)選取多個(gè)菌落數(shù)相差不大的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，取其平均值。(2)212÷0.2×106＝1.06×109(個(gè))。(3)因?yàn)橐粋€(gè)菌落可能由兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起生長(zhǎng)而成，所以實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量多。[答案]稀釋涂布平板(1)D(2)1.06×109個(gè)(3)多當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上視察到的只是一個(gè)菌落(1)假如某同學(xué)的稀釋倍數(shù)僅為104，則測(cè)定的數(shù)值要比題中操作的數(shù)值高還是低？為什么？(2)第(1)小題C項(xiàng)中菌落數(shù)為400的平板不符合要求，試分析該平板中菌落數(shù)目多于其他平板的可能的緣由。提示：(1)低，因?yàn)橄♂尡稊?shù)太低，則大部分菌落是多個(gè)細(xì)菌繁殖而成，所以視察到的菌落的數(shù)值要低于由單一細(xì)菌形成的菌落數(shù)值。(2)①培育基被污染，一些菌落是由雜菌繁殖而成的；②接種過(guò)程中由于操作不當(dāng)感染了雜菌；③取菌液時(shí)沒(méi)有搖擺，所取菌液中細(xì)菌個(gè)體濃度偏大等。1．分別土壤中分解尿素的細(xì)菌，對(duì)培育基的要求是()①加尿素②不加尿素③加瓊脂④不加瓊脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸鹽⑧不加硝酸鹽A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦C[要分別土壤中分解尿素的細(xì)菌，培育基中尿素應(yīng)是唯一的氮源，不能加硝酸鹽；在固體培育基上形成菌落，要加瓊脂作凝固劑；分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，要加有機(jī)碳源(如葡萄糖)。]2．某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培育基上測(cè)得平板上的菌落數(shù)的平均值為234，那么每毫升樣品中菌落數(shù)是(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)()A．2.34×108個(gè) B．2.34×109個(gè)C．234個(gè) D．23.4個(gè)B[平板上菌落的平均數(shù)×稀釋倍數(shù)÷體積＝每毫升樣品中的菌落數(shù)，即234×10×106＝2.34×109(個(gè))。]試驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作[合作溝通]1．為什么分別不同的微生物要采納不同的稀釋度？當(dāng)測(cè)定時(shí)為什么要將稀釋的范圍放寬一些？提示：這是因?yàn)橥寥乐懈黝?lèi)微生物的數(shù)量(單位：株/kg)是不同的；為確保能從中選擇出菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。2．在稀釋涂布平板法中，為何需涂布3個(gè)平板？提示：作為重復(fù)試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)時(shí)取平均值，以削減偶然因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，增加試驗(yàn)結(jié)果的勸服力。3．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是什么？提示：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培育基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。4．為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果？提示：盡量縮小統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)與實(shí)際活菌數(shù)的差值，因?yàn)榉敝陈木w起先看不出明顯的菌落。[歸納總結(jié)]1．試驗(yàn)流程稀釋度104105106123平均值123平均值123平均值菌落數(shù)/平板菌數(shù)/克土壤2．試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則(1)設(shè)立重復(fù)組：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時(shí)，要至少涂布3個(gè)平板作重復(fù)組，以增加試驗(yàn)結(jié)果的勸服力與精確性。(2)設(shè)立兩種比照組：①推斷培育基中是否有雜菌污染，需同時(shí)將未接種的選擇培育基進(jìn)行培育。②推斷選擇培育基是否具有篩選作用，需同時(shí)設(shè)立牛肉膏蛋白胨培育基進(jìn)行接種后培育，視察兩種培育基上的菌落數(shù)目，進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。3．結(jié)果分析與評(píng)價(jià)內(nèi)容結(jié)果分析有無(wú)雜菌污染的推斷比照的培育皿中無(wú)菌落生長(zhǎng)→未被雜菌污染培育基中菌落數(shù)偏高→被雜菌污染菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高→培育物中混入其他雜菌選擇培育基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培育基的菌落數(shù)目大于選擇培育基的數(shù)目→選擇培育基具有篩選作用樣品的稀釋操作得到2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板→操作勝利重復(fù)組的結(jié)果若選取同一種土樣，統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)接近[典題通關(guān)]尿素是一種重要的氮肥，農(nóng)作物不能將其干脆汲取利用，而是通過(guò)土壤中的細(xì)菌將其分解為氨和CO2后才能被農(nóng)作物利用。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)土壤中的某些細(xì)菌能分解尿素是因?yàn)樵摲N細(xì)菌能合成________。(2)為篩選尿素分解菌而制備的培育基中含有的養(yǎng)分物質(zhì)除尿素外，還包括水、碳源、________等，該培育基能篩選出目的菌株的緣由是________________________________________。(3)一般依據(jù)尿素分解菌菌落的________、隆起程度和顏色等特征來(lái)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目?，F(xiàn)將10mL尿素分解菌懸液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)謩e取0.1mL稀釋倍數(shù)為106的樣液接種到3個(gè)培育基上，培育一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為39、42、45，則1mL懸液中活細(xì)菌數(shù)量為_(kāi)_______個(gè)。上述過(guò)程采納的接種方法是______________。(4)為檢驗(yàn)培育基及培育皿滅菌是否合格，可實(shí)行的措施是______________________________。[解析](1)分解尿素的細(xì)菌中含有脲酶，能將尿素分解。(2)微生物的培育基中需含有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源，尿素作為氮源。因?yàn)橹挥泻须迕傅募?xì)菌才能利用尿素作為氮源生長(zhǎng)，因此該培育基能篩選出分解尿素的細(xì)菌。(3)一個(gè)菌落為一個(gè)細(xì)菌繁殖的后代，不同的微生物的菌落不同，菌落的特征包括形態(tài)、大小、隆起程度，據(jù)此來(lái)統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)目。微生物計(jì)數(shù)的方法采納稀釋涂布平板法接種，1mL懸液中細(xì)菌的數(shù)目為(39＋42＋45)÷3÷0.1×106＝4.2×108(個(gè))。(4)單獨(dú)設(shè)置一個(gè)滅菌后不接種樣液的含培育基的培育皿進(jìn)行培育，視察該培育基上是否出現(xiàn)菌落，從而推斷滅菌是否合格。[答案](1)脲酶(2)無(wú)機(jī)鹽只有以尿素作為唯一氮源的細(xì)菌才能在該培育基上生長(zhǎng)(3)形態(tài)、大小4.2×108稀釋涂布平板法(4)單獨(dú)設(shè)置一個(gè)滅菌后不接種樣液的培育皿(含培育基)進(jìn)行培育下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”試驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是()A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培育基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將試驗(yàn)組和比照組平板倒置，37℃恒溫培育24～48hD．確定比照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的試驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)D[檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)，用蒸餾水配制培育基，常用高壓蒸汽滅菌法滅菌后，取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上，將試驗(yàn)組和比照組放置在相宜條件下培育，在確定比照組無(wú)菌后，選擇菌落在30～300的平板為代表進(jìn)行計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。A是培育基的滅菌方法，B設(shè)置了一系列比照試驗(yàn)，C是細(xì)菌的培育方法，A、B、C三個(gè)選項(xiàng)均是正確的。故選D。][課堂小結(jié)]知識(shí)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建核心語(yǔ)句歸納1.選擇培育基是指允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻擋其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培育基。2.設(shè)置比照的主要目的是解除試驗(yàn)中非測(cè)試因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，提高試驗(yàn)結(jié)果的可信度。3.在標(biāo)記培育皿時(shí)，應(yīng)注明培育基種類(lèi)、培育日期以及平板上培育樣品的稀釋度等。4.為確保結(jié)果精確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。5.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素為唯一氮源的選擇培育基分別能分解尿素的細(xì)菌。6.鑒定分解尿素細(xì)菌的方法是在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑，依據(jù)是否變紅進(jìn)行推斷。1．土壤中的細(xì)菌能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣梢环N()A．尿素酶 B．脲酶C．蛋白酶 D．肽酶B[能夠分解利用尿素的細(xì)菌，其細(xì)胞內(nèi)含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后進(jìn)一步利用。]2．分別土壤中分解尿素的細(xì)菌，對(duì)培育基的要求是()選項(xiàng)尿素瓊脂葡萄糖硝酸鹽A＋＋＋＋B－－－－C＋＋＋－D＋－－＋注：“＋”表示加入，“－”表示不加。C[分別土壤中分解尿素的細(xì)菌，培育基中要有碳源，且以尿素作為唯一的氮源，故不能添加硝酸鹽。]3．可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法