復(fù)件 水楊酸課件

水楊酸鈉血漿半衰期的測定DeterminationofHalf-lifeofSodiumSalicylateinPlasma

【實驗?zāi)康摹?/p>

掌握用分光光度法應(yīng)用酶標(biāo)儀測定水楊酸鈉（sodiumsalicylate）的血藥濃度

并學(xué)會用公式計算半衰期(t1/2)

【實驗原理】

水楊酸鈉在酸性環(huán)境中成為水楊酸（salicylicacid），與三氯化鐵生成一種紫色絡(luò)合物。該絡(luò)合物在520nm波長下比色，其光密度(OD值)與salicylicacid濃度成正比?！緦嶒炂鞑摹棵笜?biāo)儀、移液器、加樣器（1000μl）、離心機、燒杯、effendorff

管、試管、試管架、記號筆、兔手術(shù)臺、手術(shù)器械一套、動脈插管、注射器（2ml、5ml、10ml）。【藥品】

10%水楊酸鈉，0.02%水楊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液，10%三氯醋酸，10%三氯化鐵，0.2%肝素生理鹽水，3%戊巴比妥鈉等。【實驗對象】家兔，體重2.5～3kg?！痉椒?、步驟】1.取兔一只，稱重，麻醉，3%戊巴比妥鈉1ml/kg,耳緣靜脈注射，固定，頸部備皮。2.頸總動脈插管：頸部正中切口，分離頸總動脈，然后將充滿肝素生理鹽水的動脈插管插入，固定確切。由頸總動脈插管緩慢給入0.2%肝素生理鹽水，1ml/kg，防止凝血。近心端遠(yuǎn)心端動脈夾3.取試管5只編號，各管中加入10%三氯醋酸3.5ml。4.由頸總動脈放血2ml，分別放入1號管（對照管）和2號管（標(biāo)準(zhǔn)管）內(nèi)各1.0ml,搖勻靜置。5.由耳緣靜脈緩慢注射10%水楊酸鈉，2ml/kg，給藥后開始計時。6.給藥后10min、25min、40min，先后取血1ml，分別置于3、4、5號試管內(nèi)，搖勻靜置。

7.以0.02%水楊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液1ml放入2號管內(nèi)，其余各管加入蒸餾水1ml，搖勻。8.將5支試管離心5分鐘（2000轉(zhuǎn)/分），精確吸取上清液3.0ml，分別放入另一編號的試管中，每管加10%三氯化鐵0.5ml，搖勻顯色。200微升/孔，加入96孔板。9.在酶標(biāo)儀檢測各管的光密度值。

10．由標(biāo)準(zhǔn)管的光密度值（Y）和濃度（X）求比值K，即K=X/Y，再根據(jù)X=K.Y，求得其余各管的濃度值，代入下式:

t1/2

=0.301(lgX1-lgX2)/Δt__________試管10%三氯醋酸血蒸餾水充分搖勻離心5分鐘取上清3毫升10%三氯化鐵OD值血藥濃度t1/21號（對照管）3.5ml1.0ml1.0ml0.5ml2號（標(biāo)準(zhǔn)管）3.5ml1.0ml標(biāo)準(zhǔn)液1.0ml0.5ml3號（10min）3.5ml1.0ml1.0ml0.5ml4號（25min）3.5ml1.0ml1.0ml0.5ml5號（40min）3.5ml1.0ml1.0ml0.5ml水楊酸測定加樣表【注意事項】

1.兔子頸部充分伸展。

2.皮膚剪開后鈍性分離。

3.頸總動脈插管用動脈夾固定。

4.肝素化和耳緣靜脈給藥速度要慢5.在各時間點從頸總動脈插管放血時，務(wù)必將插管前端含有肝素的血液棄掉不用。

6.每次加樣時劑量一定要準(zhǔn)確。