2025年上外版選擇性必修3生物下冊(cè)月考試卷含答案

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請(qǐng)※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁(yè)，總=sectionpages22頁(yè)第=page11頁(yè)，總=sectionpages11頁(yè)2025年上外版選擇性必修3生物下冊(cè)月考試卷含答案考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級(jí)：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五六總分得分評(píng)卷人得分一、選擇題(共9題，共18分)1、我國(guó)科研人員利用大鼠；小鼠兩個(gè)遠(yuǎn)親物種創(chuàng)造出世界首例異種雜合二倍體胚胎干細(xì)胞（AdESCs）；過程如下圖所示。該細(xì)胞可分化成各種雜種體細(xì)胞，為研究不同物種性狀差異的分子機(jī)制提供了模型。相關(guān)敘述不正確的是（）

A.單倍體囊胚1最可能由小鼠的卵細(xì)胞經(jīng)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得B.體外培養(yǎng)AdESCs需向培養(yǎng)液中添加動(dòng)物血清等天然成分C.該項(xiàng)技術(shù)突破生殖隔離獲得了哺乳動(dòng)物遠(yuǎn)親物種的雜種細(xì)胞D.AdESCs的染色體組數(shù)與大鼠-小鼠體細(xì)胞融合的雜種細(xì)胞相同2、植物體細(xì)胞雜交需要分離出有活力的原生質(zhì)體，研究者通過實(shí)驗(yàn)研究了酶解時(shí)間對(duì)原生質(zhì)體產(chǎn)量和活力的影響，結(jié)果如圖。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

注：原生質(zhì)體活力=（有活力的原生質(zhì)體數(shù)/原生質(zhì)體總數(shù)）×100%A.利用纖維素酶和果膠酶去壁后可分離得到原生質(zhì)體B.隨酶解時(shí)間延長(zhǎng)兩種原生質(zhì)體產(chǎn)量均先增加后減少C.適宜兩植物細(xì)胞的最佳酶解時(shí)間分別為10h和12hD.原生質(zhì)體活力可通過質(zhì)壁分離與復(fù)原實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證3、分離土壤中分解尿素菌的實(shí)驗(yàn)操作中，對(duì)于獲得純化的尿素分解菌的單菌落影響最大的是（）A.制備浸出液的土壤取自土壤的表層B.涂布前涂布器未在酒精燈外焰上灼燒滅菌C.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中添加尿素作為氮源D.接種操作者的雙手未用酒精棉進(jìn)行消毒4、微生物發(fā)酵已經(jīng)廣泛應(yīng)用于人類生活的各個(gè)領(lǐng)域。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.根據(jù)發(fā)酵條件要求，微生物發(fā)酵過程分為有氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵B.谷氨酸棒狀桿菌是好氧細(xì)菌，可用于發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸制取味精C.當(dāng)缺少糖源和氧氣時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿酓.乳酸菌在無氧條件下將葡萄糖分解成乳酸，可用于制作酸奶和泡菜5、下列關(guān)于克隆的解釋不正確的是（）A.克隆是指通過無性繁殖連續(xù)傳代形成的無性繁殖系B.只由一個(gè)模板分子、母細(xì)胞直接形成新一代分子、細(xì)胞C.由一個(gè)細(xì)菌分裂產(chǎn)生的一個(gè)菌落就是一個(gè)微生物克隆D.由一個(gè)受精卵發(fā)育為一個(gè)完整的個(gè)體叫作克隆6、如圖表示卵子的發(fā)生過程。與此相關(guān)的敘述中；不合理的是（）

A.圖中A是第一極體，B是合子，E代表受精，階段C是胎兒期，階段D是初情期后B.當(dāng)觀察到第二極體時(shí)，可以表明卵子已經(jīng)受精C.能發(fā)生染色體著絲點(diǎn)分裂的階段是①④D.①階段存在的變異方式有基因突變、基因重組和染色體變異7、下圖所示是某動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)；培養(yǎng)液中活細(xì)胞和死亡細(xì)胞密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.培養(yǎng)至第6d時(shí)，新產(chǎn)生的細(xì)胞數(shù)等于死亡細(xì)胞數(shù)B.培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具需要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理C.曲線bc段變化的主要原因是培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不足及有害代謝產(chǎn)物積累等D.進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，首先需要在等滲溶液中用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理新鮮的動(dòng)物組織，但要注意酶溶液的濃度和處理時(shí)間8、某種細(xì)菌菌株需要亮氨酸才能生長(zhǎng)，但此菌株對(duì)鏈霉素敏感。實(shí)驗(yàn)者用誘變劑處理此菌株，想篩選出表格中細(xì)菌菌株類型，則配制相應(yīng)選擇培養(yǎng)基類型正確的是（）。選項(xiàng)篩選出不需要亮氨酸的菌株篩選出抗鏈霉素的菌株篩選出不需要亮氨酸且抗鏈霉素的菌株AL＋S＋L－S－L＋S－BL－S－L＋S＋L－S＋CL－S＋L＋S＋L－S－DL＋S－L－S－L＋S＋

注：L代表亮氨酸，S代表鏈霉素；“＋”代表加入，“－”代表不加入A.AB.BC.CD.D9、科學(xué)家成功將“抗多聚半乳糖醛酸酶基因”導(dǎo)入番茄，能有效防止細(xì)胞壁的分解，獲得防腐爛抗軟化的轉(zhuǎn)基因番茄，該技術(shù)利用的原理是（）A.基因突變B.基因重組C.染色體結(jié)構(gòu)變異D.染色體數(shù)目變異評(píng)卷人得分二、多選題(共8題，共16分)10、科學(xué)家通過“治療性克隆”研究發(fā)現(xiàn)；利用病人本身的細(xì)胞可治療其患有的某些疾病。一般將胚胎干細(xì)胞進(jìn)行基因修飾后，經(jīng)誘導(dǎo)分化成相應(yīng)的組織器官用于移植。其過程如下圖所示。下列關(guān)于“治療性克隆”的敘述不正確的是（）

A.人類“治療性克隆”屬于生物工程中的細(xì)胞工程B.該治療過程中應(yīng)用的主要技術(shù)有核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植等C.此過程體現(xiàn)了胚胎干細(xì)胞具有全能性D.“治療性克隆”與“異體器官移植”相比，其優(yōu)點(diǎn)之一是避免了免疫排斥反應(yīng)11、科學(xué)家將4個(gè)關(guān)鍵基因移植入已分化的肌肉細(xì)胞中并表達(dá)；使這個(gè)細(xì)胞成為多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞），下圖為該實(shí)驗(yàn)示意圖。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.應(yīng)用該技術(shù)可緩解器官移植時(shí)器官供應(yīng)不足的問題B.iPS細(xì)胞所攜帶的遺傳信息與肌肉細(xì)胞相同C.關(guān)鍵基因表達(dá)使細(xì)胞功能趨向?qū)ｉT化，降低了細(xì)胞的分化程度D.圖示過程體現(xiàn)了iPS細(xì)胞的全能性12、下列關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是（）A.DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸餾水B.洗滌劑能瓦解植物細(xì)胞壁并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度C.調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度或加入冷酒精后過濾，都可以去除部分雜質(zhì)D.在酸性條件下，DNA與二苯胺會(huì)發(fā)生反應(yīng)，最終產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)13、生長(zhǎng)圖形法是一種測(cè)定微生物營(yíng)養(yǎng)需求的簡(jiǎn)便方法。為探究某嗜熱菌所需生長(zhǎng)因子的種類；研究小組把該菌的懸浮液與不含任何生長(zhǎng)因子但含有其他必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基混合后倒成平板，然后在平板上劃分?jǐn)?shù)區(qū)，將甲；乙、丙三種生長(zhǎng)因子分別添加到不同區(qū)域，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示，下列說法正確的是（）

A.倒成平板后直接培養(yǎng)可判斷有無污染B.倒成平板后需要進(jìn)行滅菌處理C.圖示結(jié)果表明該菌需要生長(zhǎng)因子乙或丙D.生長(zhǎng)圖形法還可用于某些菌種的篩選14、如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌的過程示意圖，有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.在配制步驟②、③的培養(yǎng)基時(shí)，都應(yīng)添加瓊脂作凝固劑B.步驟③純化分解尿素細(xì)菌的原理是將聚集的細(xì)菌分散，可以獲得單細(xì)胞菌落C.步驟③采用涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素D.步驟④挑取③中不同種的菌落分別接種，可通過溶液pH的變化大小來比較細(xì)菌分解尿素的能力15、某學(xué)習(xí)小組從富含纖維素分解菌土壤中獲取纖維素分解菌并進(jìn)行了下列操作：稱取土樣20g，加入裝有30mL培養(yǎng)基的搖瓶中并完成稀釋，在30℃下將搖瓶置于搖床上振蕩培養(yǎng)；吸取一定的培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移至另一瓶新鮮的選擇培養(yǎng)基中，以同樣的方法培養(yǎng)到培養(yǎng)液變混濁時(shí)，吸取0.1ml培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋和涂布平板，以達(dá)到分離純化培養(yǎng)的目的。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.取樣土壤須在無菌條件下，用蒸餾水稀釋B.為確定所用的固體培養(yǎng)基是否滅菌嚴(yán)格，應(yīng)選擇未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)C.搖床上振蕩培養(yǎng)的目的是保證纖維素分解菌所需要的有氧環(huán)境及提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率D.在所用的固體培養(yǎng)基中添加剛果紅，若存在纖維素分解菌，則其菌落周圍會(huì)呈現(xiàn)紅色的透明圈16、大腸桿菌能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；X射線照射后產(chǎn)生的代謝缺陷型大腸桿菌不能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但可以在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。利用夾層培養(yǎng)法可篩選代謝缺陷型大腸桿菌，具體的操作是：在培養(yǎng)皿底部倒一層基本培養(yǎng)基，冷凝后倒一層含經(jīng)X射線處理過的菌液的基本培養(yǎng)基，冷凝后再倒一層基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時(shí)間后，對(duì)首次出現(xiàn)的菌落做好標(biāo)記。然后再向皿內(nèi)倒一層完全培養(yǎng)基，再培養(yǎng)一段時(shí)間后，會(huì)長(zhǎng)出形態(tài)較小的新菌落。下列說法正確的是（）A.X射線誘發(fā)染色體變異進(jìn)而導(dǎo)致大腸桿菌代謝缺陷B.首次出現(xiàn)的菌落做標(biāo)記時(shí)應(yīng)標(biāo)記在皿蓋上C.夾層培養(yǎng)法可避免細(xì)菌移動(dòng)或菌落被完全培養(yǎng)基沖散D.形態(tài)較小的新菌落可能是代謝缺陷型大腸桿菌17、GAL4基因的表達(dá)產(chǎn)物能識(shí)別啟動(dòng)子中的UAS序列，從而驅(qū)動(dòng)UAS序列下游基因的表達(dá)。野生型雌雄果蠅均為無色翅，且基因組中無GAL4基因和含UAS序列的啟動(dòng)子。科研人員利用基因工程在雄果蠅的一條Ⅲ號(hào)染色體上插入GAL4基因，雌果蠅的某條染色體上插入基因M（含有UAS序列啟動(dòng)子的綠色熒光蛋白基因），利用雜交實(shí)驗(yàn)對(duì)雌果蠅中基因M插入的位置進(jìn)行判斷：將上述雌雄果蠅雜交得到F1，讓F1中綠色翅雌雄果蠅隨機(jī)交配，觀察并統(tǒng)計(jì)F2個(gè)表型和比例。下列說法正確的是（）A.同時(shí)含有GAL4基因和基因M的果蠅才能表現(xiàn)出綠色性狀B.若F1中綠色翅：無色翅為1：3，則基因M插入Ⅲ號(hào)染色體上C.若F2中綠色翅：無色翅=9：7，則基因M插入Ⅲ號(hào)以外的其他常染色體上D.若F2中綠雌：無雌：綠雄：無雄=6：2：3：5，則基因M插入X染色體上評(píng)卷人得分三、填空題(共9題，共18分)18、載體具備的條件：①_____。②具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入。③______。19、醋酸菌是一種____________細(xì)菌。醋酸生成反應(yīng)式是_____________________。20、常用的轉(zhuǎn)化方法：

將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：采用最多的方法是_______，其次還有______和______等。

將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞：最常用的方法是_______。此方法的受體細(xì)胞多是_______。

將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞：原核生物作為受體細(xì)胞的原因是_______，最常用的原核細(xì)胞是_____，其轉(zhuǎn)化方法是：先用______處理細(xì)胞，使其成為______，再將______溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。21、第三步：將目的基因?qū)隷_____22、結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：______和______。23、DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)中，如果實(shí)驗(yàn)材料是非哺乳動(dòng)物如雞血細(xì)胞，需要在雞血細(xì)胞中加入一定量的____________，如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先使用_______________溶解細(xì)胞膜。24、在___________條件下，DNA與___________反應(yīng)呈現(xiàn)______________，因此_____________可以作為鑒定DNA的試劑。25、蛋白質(zhì)工程是指以______作為基礎(chǔ)，通過______，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行_____，或制造一種______，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。（基因工程在原則上只能生產(chǎn)______的蛋白質(zhì)）

26、近年來，克隆技術(shù)的發(fā)展取得了巨大突破?在日常生活中，我們遇到過與克隆技術(shù)有關(guān)的問題嗎？_____。評(píng)卷人得分四、判斷題(共4題，共28分)27、生殖性克隆是指通過克隆技術(shù)產(chǎn)生獨(dú)立生存的新個(gè)體。（選擇性必修3P106）()A.正確B.錯(cuò)誤28、生物武器包括致病菌類、病毒類和生化毒劑類等。()A.正確B.錯(cuò)誤29、生物武器包括致病菌類、病毒類和生化毒劑類等。（選擇性必修3P111）()A.正確B.錯(cuò)誤30、轉(zhuǎn)入油菜的抗除草劑基因，可能通過花粉傳入環(huán)境中。()A.正確B.錯(cuò)誤評(píng)卷人得分五、實(shí)驗(yàn)題(共3題，共27分)31、如圖為釀制葡萄酒的兩個(gè)簡(jiǎn)易裝置；請(qǐng)分析回答：

（1）制作果酒與果醋的菌種在結(jié)構(gòu)上最主要的區(qū)別在于前者有_____，后者應(yīng)將溫度控制在_____℃

（2）甲裝置中，A液體是_____，NaHCO3溶液的作用是_____；若用乙裝置，在發(fā)酵過程中，必須進(jìn)行的操作是每隔12小時(shí)左右將瓶蓋_____一次。

（3）將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有大約1/3的空間，這是因?yàn)開__________

（4）果酒制作是否成功，需發(fā)酵后取樣鑒定，可用_____試劑檢驗(yàn)。

（5）醋酸菌可以利用果酒進(jìn)行發(fā)酵，請(qǐng)寫出相應(yīng)反應(yīng)式：_________________32、干燥綜合征（SS）是臨床常見的一種自身免疫??；患者血清中存在多種抗體，其中以SSB抗體特異性最強(qiáng)。下圖表示科研人員利用基因工程技術(shù)獲得SSB蛋白及利用SSB蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行免疫的過程?；卮鹣铝袉栴}：

(1)利用RNA通過①過程獲得cDNA需要________酶。已知真核生物mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保護(hù)尾部不被降解。為了針對(duì)性獲得cDNA，應(yīng)如何設(shè)計(jì)逆轉(zhuǎn)錄第一步時(shí)的DNA引物______，設(shè)計(jì)引物的目的是______。

(2)為確保與pET41a質(zhì)粒定向連接，對(duì)逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA擴(kuò)增時(shí)，應(yīng)在相應(yīng)引物的_______（填“5'”或“3'”）端加上______酶切位點(diǎn)。

(3)③過程用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌時(shí)，需要用Ca2+處理大腸桿菌，目的是______，然后將處理后的大腸桿菌先接種在添加_______的培養(yǎng)基（A）上培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后再利用無菌膜同位置轉(zhuǎn)移到添加______的培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)，收集_______菌落進(jìn)一步純化后將菌體破碎處理；篩選得到SSB蛋白。

(4)將改造后的大腸桿菌生產(chǎn)的SSB蛋白注入到小鼠體內(nèi)是為了檢測(cè)該蛋白是否具有抗原性，則后續(xù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容應(yīng)為抽取小鼠血液_______。33、T-2毒素是一種由霉菌分泌的脂溶性小分子；可通過污染飼料引起畜禽中毒反應(yīng)。CYP3A是豬體內(nèi)降解T-2毒素的關(guān)鍵酶，T-2毒素可誘導(dǎo)CYP3A基因表達(dá)水平升高。

(1)T-2毒素是霉菌的_____（選填“初級(jí)”或“次級(jí)”）代謝產(chǎn)物，主要以_____方式進(jìn)入豬細(xì)胞。

(2)B1和B2是CYP3A基因啟動(dòng)子上游的兩個(gè)調(diào)控序列，為研究T-2毒素誘導(dǎo)CYP3A基因表達(dá)的機(jī)理，研究者首先將不同調(diào)控序列分別和CYP3A基因啟動(dòng)子及熒光素酶基因（LUC基因）連接構(gòu)建表達(dá)載體，再分別導(dǎo)入豬肝細(xì)胞，然后向各組豬肝細(xì)胞培養(yǎng)液中加入_____，適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)；24h后檢測(cè)LUC酶活性，計(jì)算啟動(dòng)子活性相對(duì)值，結(jié)果如圖1所示。據(jù)圖可知，B1和B2調(diào)控序列是CYP3A基因響應(yīng)T-2毒素的核心元件，理由是_____。

(3)研究表明NF-Y和Sp1兩種蛋白均參與T-2毒素對(duì)CYP3A的誘導(dǎo)；B2是Spl的結(jié)合位點(diǎn)。研究者推測(cè)，NF-Y通過與B1結(jié)合，與Sp1共同調(diào)控CYP3A基因的表達(dá)。

①為證明Bl是NF-Y的結(jié)合位點(diǎn)，研究者依據(jù)B1序列制備了野生型和突變型探針，分別與豬肝細(xì)胞核蛋白提取物混合，實(shí)驗(yàn)分組及結(jié)果如圖2．據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，第4組出現(xiàn)阻滯帶的原因是_____，進(jìn)而推測(cè)第5組結(jié)果產(chǎn)生的原因是_____。

②研究者設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了NF-Y和Spl通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路是：增大或縮小B1和B2兩者之間的距離，檢測(cè)CYP3A基因的啟動(dòng)子活性。據(jù)此分析，實(shí)驗(yàn)假設(shè)是_____。評(píng)卷人得分六、綜合題(共3題，共9分)34、科學(xué)家利用基因工程技術(shù)可以使哺乳動(dòng)物本身變成“批量生產(chǎn)藥物的工廠”。目前科學(xué)家已在牛和羊等動(dòng)物的乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶；血清白蛋白、生長(zhǎng)激素等重要藥品。請(qǐng)回答有關(guān)問題：

（1）將藥用蛋白基因和乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子、終止子和__________________等重組在一起，就可構(gòu)建基因表達(dá)載體，再通過__________技術(shù)導(dǎo)入受精卵中。基因表達(dá)載體上的啟動(dòng)子的作用是_____________________。

（2）制備乳腺生物反應(yīng)器的過程中，目的基因的受體細(xì)胞為______________，性染色體組成為____________。

（3）為確定受體細(xì)胞中染色體的DNA上是否插入了目的基因，可利用_________技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，一般是用放射性同位素標(biāo)記______________作探針。35、番木瓜極易受環(huán)斑病毒（PRSV；單鏈RNA病毒）侵襲。上世紀(jì)番木瓜環(huán)斑病在我國(guó)暴發(fā)，導(dǎo)致番木瓜嚴(yán)重減產(chǎn)。2006年，轉(zhuǎn)基因番木瓜獲得農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的安全證書，這是我國(guó)第一例獲準(zhǔn)進(jìn)行商品化種植的轉(zhuǎn)基因果樹。

（1）最初的轉(zhuǎn)基因番木瓜品種“Rainbow”是以PRSV的衣殼蛋白（CP）基因作為目的基因。通過___________過程從PRSV基因組中獲取CP基因，經(jīng)限制酶和___________酶處理，構(gòu)建基因表達(dá)載體，用___________法導(dǎo)入番木瓜愈傷組織中；培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因番木瓜植株。

（2）病毒自身基因作為番木瓜抗性基因的機(jī)理源于一種名為RNAi的基因沉默機(jī)制（圖1）。轉(zhuǎn)入番木瓜細(xì)胞內(nèi)的CP基因轉(zhuǎn)錄出CPmRNA。PRSV侵染番木瓜后，病毒RNA會(huì)與CPmRNA通過___________原則結(jié)合形成雙鏈RNA.D酶與該雙鏈RNA結(jié)合，經(jīng)復(fù)雜過程形成RISC復(fù)合物，最終阻礙病毒RNA在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行___________；進(jìn)而抑制病毒增殖，體現(xiàn)抗病性。

（3）“Rainbow”對(duì)夏威夷的PRSV（HA株系）具有良好的抗性，但對(duì)我國(guó)的PRSV（YS等株系）抗性不強(qiáng)。中國(guó)科學(xué)家以PRSV的RNA復(fù)制酶基因（RP）為目的基因，成功培育出具有廣譜抗性的“華農(nóng)1號(hào)”抗病毒番木瓜新品種。請(qǐng)推測(cè)“Rainbow”對(duì)我國(guó)PRSV抗性不強(qiáng)而“華農(nóng)1號(hào)”具有廣譜抗性的原因___________。

（4）上述轉(zhuǎn)基因番木瓜對(duì)PRSV的抗性僅有20%。為使番木瓜具有更高效的抗PRSV能力；我國(guó)科研人員設(shè)計(jì)引物向RP基因兩端引入兩個(gè)酶切位點(diǎn)，并和中間載體1連接構(gòu)建中間載體2，利用同樣的方法構(gòu)建出中間載體3（圖2）。最后用限制酶將融合基因從中間載體3上切下，構(gòu)建表達(dá)載體，導(dǎo)入番木瓜中。

請(qǐng)?jiān)趫D2的①、②、③處寫出恰當(dāng)?shù)南拗泼浮________________結(jié)合圖1、圖2闡述利用該過程構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因番木瓜比直接導(dǎo)入RP基因的轉(zhuǎn)基因番木瓜抗病毒效果更好的機(jī)理___________。36、研究發(fā)現(xiàn)；新冠病毒外殼中的S蛋白具有很強(qiáng)的抗原性，可利用其制備單克隆抗體，制備流程設(shè)計(jì)如下圖所示，相關(guān)限制酶及其識(shí)別序列如下表所示，請(qǐng)分析回答問題：

限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)EcoRⅠG↓AATTCBamHⅡG↓GATCCBglⅠA↓GATCTSalⅠG↓TCGAC

（1）人體內(nèi)，分泌抗體的細(xì)胞可來自于____________________細(xì)胞的增殖分化。

（2）根據(jù)病毒的結(jié)構(gòu)，圖中①過程常用__________酶處理，完成②過程需要的酶是___________。

（3）檢測(cè)④過程是否獲得成功的方法是________________________，⑥過程常用的方法是_________________。

（4）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增無限增殖調(diào)控基因時(shí)，科研人員設(shè)計(jì)了如下一對(duì)引物（部分序列）：GAATTC____和____CCTAGG，其中下劃線部分序列的設(shè)計(jì)依據(jù)是___________，方框部分序列的設(shè)計(jì)目的是___________。

（5）抗體可變區(qū)氨基酸的組成和排列順序可隨抗體結(jié)合抗原的特異性不同而有較大的變異，由于可變區(qū)中氨基酸的種類以及排列順序干變?nèi)f化，故可形成許多種具有不同結(jié)合抗原特異性的抗體。為克服鼠源性單抗輸入人體后產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng)，科研人員通過人工改造鼠源性單抗獲得了嵌合抗體。分析下圖，你認(rèn)為最符合臨床要求的嵌合抗體是A~D中的___________。嵌合抗體的研制屬于___________這一科技范疇。

參考答案一、選擇題(共9題，共18分)1、D【分析】【分析】

分析題圖：小鼠的卵細(xì)胞體外培養(yǎng)到囊胚時(shí)期；取內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞培養(yǎng)成孤雌單倍體胚胎干細(xì)胞，取大鼠的精子體外培養(yǎng)到囊胚時(shí)期，取內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞培養(yǎng)成孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞，兩種胚胎融合成異種雜合二倍體胚胎干細(xì)胞（AdESCs）。

【詳解】

A；單倍體囊胚1能發(fā)育成孤雌單倍體胚胎干細(xì)胞；因此單倍體囊胚1最可能是由小鼠的卵子（卵細(xì)胞）發(fā)育而來，所采用的技術(shù)應(yīng)為早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)，A正確；

B；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中；使用的培養(yǎng)液除含有一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分以及動(dòng)物血清等天然成分，B正確；

C；由于物種間存在生殖隔離；因此自然情況下哺乳動(dòng)物遠(yuǎn)親物種間的配子往往無法完成受精作用，或者即便能完成也不能發(fā)育，該項(xiàng)技術(shù)突破生殖隔離獲得了哺乳動(dòng)物遠(yuǎn)親物種的雜種細(xì)胞，C正確；

D；結(jié)合分析可知；該AdESCs是“雜合二倍體胚胎干細(xì)胞”，故體內(nèi)有2個(gè)染色體組，但小鼠-大鼠雜交細(xì)胞，是由體細(xì)胞融合產(chǎn)生，因此雜交細(xì)胞中通常含有4個(gè)染色體組，兩者染色體組數(shù)不同，D錯(cuò)誤。

故選D。2、D【分析】【分析】

1；植物體細(xì)胞雜交的具體過程：

2；據(jù)圖分析；里奧百脈根酶解12h時(shí)，原生質(zhì)體產(chǎn)量最高和活力較大；清水紫花苜蓿酶解10h，原生質(zhì)體產(chǎn)量最高和活力最大。

【詳解】

A；細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠；則利用纖維素酶和果膠酶去壁后可分離得到原生質(zhì)體，A正確；

B；據(jù)圖分析；隨酶解時(shí)間延長(zhǎng)兩種原生質(zhì)體產(chǎn)量均先增加后減少，B正確；

C；據(jù)圖分析；清水紫花苜蓿和里奧百脈根的最佳酶解時(shí)間分別為10h和12h，C正確；

D；原生質(zhì)體已經(jīng)去除細(xì)胞壁；不能發(fā)生質(zhì)壁分離和復(fù)原，D錯(cuò)誤。

故選D。3、C【分析】【分析】

1；實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長(zhǎng)的菌落→鑒定。

2；實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選：

①原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)；溫度、pH等）；同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。

培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素；只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。

②方法：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素；配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。

【詳解】

A；取樣一般取距離地表約3～8cm的土壤層；而土壤的表層中微生物數(shù)量也很大，因此該操作對(duì)獲得純化的尿素分解菌的單菌落影響不大，A錯(cuò)誤；

B；涂布前涂布器未在酒精燈外焰上灼燒滅菌；這會(huì)導(dǎo)致雜菌污染，可能影響微生物計(jì)數(shù)，但對(duì)獲得純化的尿素分解菌的單菌落影響不大，B錯(cuò)誤；

C；該培養(yǎng)基必須以尿素為唯一的氮源；不能使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基或在其中添加尿素作為氮源，該操作對(duì)實(shí)驗(yàn)影響最大，C正確；

D；接種操作者的雙手未用酒精棉進(jìn)行消毒；可能會(huì)造成污染，但與純化的尿素分解菌的單菌落有關(guān)但影響不大，D錯(cuò)誤。

故選C4、C【分析】【分析】

（1）發(fā)酵是指利用微生物在有氧或無氧條件下的生命活動(dòng)來制備微生物菌體及各種不同代謝產(chǎn)物的過程。根據(jù)產(chǎn)物分為氨基酸發(fā)酵；酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵等。根據(jù)條件分為有氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵。

（2）制取味精；醋酸、酸奶和泡菜的主要微生物分別是谷氨酸棒狀桿菌、醋酸菌、乳酸菌和乳酸菌。

【詳解】

A；根據(jù)發(fā)酵條件要求；微生物發(fā)酵過程分為有氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵，A正確；

B；谷氨酸棒狀桿菌是好氧細(xì)菌；可用于微生物發(fā)酵工程生產(chǎn)谷氨酸來制取谷氨酸鈉（味精），B正確；

C；醋酸菌是一種好氧菌；當(dāng)氧氣充足、缺少糖源時(shí)，醋酸菌先將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?，C錯(cuò)誤；

D；制作酸奶和泡菜使用的菌種為乳酸菌；乳酸菌在無氧條件下將葡萄糖分解成乳酸，D正確。

故選C。5、D【分析】【分析】

1；克隆就是無性繁殖；即只要不通過兩個(gè)分子、兩個(gè)細(xì)胞或兩個(gè)個(gè)體的結(jié)合，只由一個(gè)模板分子、母細(xì)胞或母體直接形成新一代分子、細(xì)胞或個(gè)體。

2；在分子水平上；基因克隆是指某種目的基因的復(fù)制、分離過程。

3；在細(xì)胞水平上；細(xì)胞克隆技術(shù)應(yīng)用在雜交瘤制備單克隆抗體的操作中。

4；在個(gè)體水平上；植物可由母體的特定部位或結(jié)構(gòu)產(chǎn)生新個(gè)體，而動(dòng)物的克隆較復(fù)雜，經(jīng)歷了由胚胎細(xì)胞克隆到體細(xì)胞克隆的發(fā)展過程。

【詳解】

A；克隆是指通過無性繁殖連續(xù)傳代形成的無性繁殖系；A正確；

B；根據(jù)克隆的定義；只由一個(gè)模板分子、母細(xì)胞直接形成新一代分子、細(xì)胞，這就是克隆，B正確；

C；由一個(gè)細(xì)菌分裂產(chǎn)生的一個(gè)菌落就是一個(gè)微生物克?。籆正確；

D；由一個(gè)受精卵發(fā)育為一個(gè)完整的個(gè)體的過程叫做胚胎發(fā)育；不叫克隆，D錯(cuò)誤。

故選D。6、D【分析】【分析】

據(jù)圖分析可知；C表示卵子的形成和在卵巢內(nèi)的貯備，是胎兒出生前完成的；D表示減數(shù)分裂過程，在初情期后進(jìn)行。圖中A為第一極體，B為合子，E為受精過程，①表示有絲分裂和減數(shù)第一次分裂間期，③表示減數(shù)第一次分裂，④表示減數(shù)第二次分裂，同時(shí)發(fā)生受精作用。

【詳解】

A；圖中①為有絲分裂和減數(shù)第一次分裂間期；可增加卵原細(xì)胞的數(shù)量，卵原細(xì)胞進(jìn)一步演變?yōu)槌跫?jí)卵母細(xì)胞。③為減數(shù)第一次分裂，初級(jí)卵母細(xì)胞分裂產(chǎn)生次級(jí)卵母細(xì)胞和第一極體，即A表示第一極體。只有在受精后，次級(jí)卵母細(xì)胞才能最終完成減數(shù)第二次分裂，因此E是受精作用，B是合子。卵泡的形成是在胎兒期，減數(shù)分裂是從初情期后開始的，因此階段C為胎兒期，階段D為初情期后，A正確；

B；受精的標(biāo)志是在透明帶和卵細(xì)胞膜之間觀察到兩個(gè)極體；故當(dāng)觀察到第二極體時(shí)，可以表明卵子已經(jīng)受精，B正確；

C；著絲點(diǎn)分裂可發(fā)生在有絲分裂后期；也可發(fā)生在減數(shù)第二次分裂后期，而①包括有絲分裂，④為減數(shù)第二次分裂，C正確；

D；①為有絲分裂和減數(shù)第一次分裂間期；有絲分裂中的變異類型只有基因突變、染色體變異，沒有基因重組，而基因重組主要發(fā)生在減數(shù)第一次分裂過程中，D錯(cuò)誤。

故選D。7、A【分析】【分析】

分析曲線圖可知，表示某動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中活細(xì)胞和死亡細(xì)胞密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果．a(chǎn)b段表示活細(xì)胞和死細(xì)胞密度都在增加，bc段表示活細(xì)胞密度減少而死細(xì)胞密度增加；培養(yǎng)第6天時(shí)，活細(xì)胞數(shù)等于死亡細(xì)胞數(shù)。

【詳解】

A；培養(yǎng)第6天時(shí)；活細(xì)胞數(shù)等于死亡細(xì)胞數(shù)，A錯(cuò)誤。

B；培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具需要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理；防止對(duì)實(shí)驗(yàn)造成污染，B正確；

C、曲線bc段表示活細(xì)胞密度減少而死細(xì)胞密度增加；產(chǎn)生的主要原因是培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不足及有害代謝產(chǎn)物積累等，C正確；

D；進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)；首先需要在等滲溶液中用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理新鮮的動(dòng)物組織，但要注意酶溶液的濃度和處理時(shí)間，D正確。

故選A。

【點(diǎn)睛】8、B【分析】【分析】

表中所列均為選擇培養(yǎng)基；選擇培養(yǎng)基是指通過培養(yǎng)特殊的培養(yǎng)基，培養(yǎng)混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要的微生物則不能生存。細(xì)菌細(xì)胞壁的成分是肽聚糖，鏈霉素可以破壞肽聚糖而使細(xì)菌死亡。

【詳解】

根據(jù)題目要求；篩選不需要亮氨酸的菌株時(shí)，培養(yǎng)基中不需要添加亮氨酸，應(yīng)使用的培養(yǎng)基為不加L，能生存的就是不需要亮氨酸的細(xì)菌；篩選抗鏈霉素的菌株時(shí)，需要向培養(yǎng)基中添加鏈霉素S，而L可加可不加，能抵抗鏈霉素的細(xì)菌就能在培養(yǎng)基生存下來；篩選不需要亮氨酸且抗鏈霉素的菌株時(shí)，需要向培養(yǎng)基中添加鏈霉素，但不添加亮氨酸，應(yīng)用的培養(yǎng)基為L(zhǎng)-；S+，能在培養(yǎng)基上生存的細(xì)菌，即是所需要的菌種，B正確，ACD錯(cuò)誤。

故選B。9、B【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因技術(shù)是指運(yùn)用科學(xué)手段從某種生物中提取所需要的基因；將其轉(zhuǎn)入另一種生物中，使與另一種生物的基因進(jìn)行重組，從而產(chǎn)生特定的具有變異遺傳性狀的物質(zhì)。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以改變動(dòng)植物性狀，培育新品種，也可以利用其它生物體培育出期望的生物制品。

【詳解】

轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理是基因重組；該技術(shù)能按照人們的意愿定向改造生物的遺傳性狀，故科學(xué)家通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將“抗多聚半乳糖醛酸酶基因”導(dǎo)入番茄，獲得防腐爛抗軟化的轉(zhuǎn)基因番茄，利用的原理是基因重組，ACD錯(cuò)誤；B正確。

故選B。二、多選題(共8題，共16分)10、B:C【分析】【分析】

1；治療性克隆：指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞和組織（皮膚、神經(jīng)或肌肉等）用于治療性移植。生殖性克?。褐笇⒖寺〖夹g(shù)用于生育目的；即用于產(chǎn)生人類個(gè)體。2、分析題圖：圖示為治療性克隆的大概過程，即從患者身上提取一個(gè)體細(xì)胞核，移植到去核的卵細(xì)胞中，形成一個(gè)新細(xì)胞，經(jīng)過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)成胚胎干細(xì)胞，經(jīng)過細(xì)胞分裂、分化形成組織和器官。

【詳解】

A；人類“治療性克隆”應(yīng)用的主要技術(shù)有核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)；屬于生物工程中的動(dòng)物細(xì)胞工程，A正確；

B；由圖可知；該治療過程中應(yīng)用的主要技術(shù)有核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，沒有應(yīng)用胚胎移植技術(shù)，B錯(cuò)誤；

C；此過程沒有形成完整個(gè)體；不能體現(xiàn)胚胎干細(xì)胞的全能性，C錯(cuò)誤；

D；“治療性克隆”與“異體器官移植”相比；器官來自于同一個(gè)體，其優(yōu)點(diǎn)之一是避免了免疫排斥反應(yīng)，D正確。

故選BC。11、B:C:D【分析】【分析】

1；干細(xì)胞的概念：動(dòng)物和人體內(nèi)保留著少量具有分裂和分化能力的細(xì)胞。

2；干細(xì)胞的分類：（1）全能干細(xì)胞：具有形成完整個(gè)體的分化潛能；（2）多能干細(xì)胞：具有分化出多種細(xì)胞組織的潛能；（3）專能干細(xì)胞：只能向一種或兩種密切相關(guān)的細(xì)胞類型分化。如神經(jīng)干細(xì)胞可分化為各類神經(jīng)細(xì)胞；造血干細(xì)胞可分化為紅細(xì)胞、白細(xì)胞等各類血細(xì)胞。

3；胚胎干細(xì)胞的主要用途是：（1）可用于研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律；（2）是在體外條件下研究細(xì)胞分化的理想材料；在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子，如牛黃酸等化學(xué)物質(zhì)時(shí)，就可以誘導(dǎo)ES細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化，這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡的機(jī)理提供了有效的手段；（3）可以用于治療人類的某些頑疾，如帕金森綜合癥、少年糖尿病等；（4）利用可以被誘導(dǎo)分化形成新的組織細(xì)胞的特性，移植ES細(xì)胞可使壞死或退化的部位得以修復(fù)并恢復(fù)正常功能；（5）隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展，通過ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化，定向培育出人造組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題。

【詳解】

A；由題圖知；應(yīng)用該技術(shù)可以緩解器官移植時(shí)器官供應(yīng)不足的問題，A正確；

B；iPS細(xì)胞導(dǎo)入了外源基因；其遺傳信息與肌肉細(xì)胞不同，B錯(cuò)誤；

C；關(guān)鍵基因表達(dá)形成iPS細(xì)胞；沒有使細(xì)胞功能趨向?qū)ｉT化，C錯(cuò)誤；

D；過程①②③表示細(xì)胞分化；其實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，沒有體現(xiàn)iPS細(xì)胞的全能性，D錯(cuò)誤。

故選BCD。12、A:C:D【分析】【分析】

DNA粗提取和鑒定的原理：

1；DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同（DNA在0.14mol/L的氯化鈉中溶解度最低）；DNA不溶于酒精溶液；但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。

2；DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性不同。

3；DNA的鑒定：在沸水浴的條件下；DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。

【詳解】

A；DNA不溶于酒精溶液；但DNA既溶于2mol/L的NaCl溶液，也溶于蒸餾水，A正確；

B；洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜；但不能增加DNA在NaCl溶液中的溶解度，B錯(cuò)誤；

C；DNA在濃度為0.14mol/LNaCl溶液中的溶解度最低；因此用蒸餾水將NaCl溶液濃度調(diào)至0.14mol/L或加入冷酒精后過濾，都可以去除部分雜質(zhì)，C正確；

D；在酸性條件下；DNA與二苯胺試劑反應(yīng)，最終產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，因此常用二苯胺試劑鑒定DNA，D正確。

故選ACD。13、A:D【分析】【分析】

培養(yǎng)基的概念及營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成。

（1）概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求；配制出的供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。

（2）營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水；碳源、氮源、無機(jī)鹽；此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時(shí)需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)則需要提供無氧的條件。

【詳解】

A；平板上不含任何生長(zhǎng)因子；若倒成平板后直接培養(yǎng)，出現(xiàn)菌落說明已被雜菌感染，因?yàn)樵撌葻峋荒茉谌狈ιL(zhǎng)因子的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，A正確；

B；制備平板時(shí)；先滅菌再倒平板，B錯(cuò)誤；

C；圖中菌落生活在乙丙區(qū)域之間；說明同時(shí)需要乙和丙，C錯(cuò)誤；

D；不同菌種所需生長(zhǎng)因子不同；可利用生長(zhǎng)圖形法篩選菌種，D正確。

故選AD。14、A:C【分析】【分析】

1；培養(yǎng)基的概念、種類及營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：

（1）概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求；配制出的供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。

（2）種類：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。

（3）營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水；碳源、氮源、無機(jī)鹽；此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。

2；微生物常見的接種的方法：

（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板；接種；劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后；均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】

A；②培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基；不需要添加瓊脂，A錯(cuò)誤；

B；步驟③純化分解尿素細(xì)菌的原理是將聚集的細(xì)菌通過涂布平板法分散；獲得單細(xì)胞菌落，B正確；

C；步驟③篩選分解尿素的細(xì)菌；培養(yǎng)基中應(yīng)以尿素為唯一氮源，不能加入牛肉膏蛋白胨（含有氮源），C錯(cuò)誤；

D、步驟④鑒定細(xì)菌分解尿素的能力時(shí)，挑?、壑胁煌N的菌落分別接種，分解尿素能力高的會(huì)產(chǎn)生更多NH3；溶液pH更高，所以可通過溶液pH的變化大小來比較細(xì)菌分解尿素的能力，D正確。

故選AC。15、A:B:D【分析】【分析】

剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理：剛果紅是一種染料；它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。

【詳解】

A；取樣土壤須在無菌條件下；用無菌水稀釋，這樣可以避免雜菌污染，A錯(cuò)誤；

B；為檢測(cè)所用的固體培養(yǎng)基是否滅菌嚴(yán)格；應(yīng)選擇未接種的上述培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)，若無菌落出現(xiàn)，則說明配制的固體培養(yǎng)基合格，B錯(cuò)誤；

C；搖床上振蕩培養(yǎng)不僅能保證纖維素分解菌所需要的有氧環(huán)境；而且還可以使菌體和營(yíng)養(yǎng)液充分接觸，進(jìn)而提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，C正確；

D；在所用的固體培養(yǎng)基中添加剛果紅；隨著纖維素被分解利用，若存在纖維素分解菌，則其菌落出現(xiàn)透明圈，D錯(cuò)誤。

故選ABD。16、C:D【分析】【分析】

微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板；接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】

A；大腸桿菌是原核生物；沒有染色體，A錯(cuò)誤；

B；首次出現(xiàn)的菌落做標(biāo)記時(shí)應(yīng)標(biāo)記在皿底上；B錯(cuò)誤；

C；夾層培養(yǎng)法不需要對(duì)大腸桿菌進(jìn)行再次接種；可避免細(xì)菌移動(dòng)或菌落被完全培養(yǎng)基沖散，C正確；

D；由于代謝缺陷型大腸桿菌不能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；所以形態(tài)較小的新菌落可能是代謝缺陷型大腸桿菌，D正確。

故選CD。17、A:D【分析】【分析】

分析題意可知，GAL4基因可以控制GAL4蛋白的表達(dá)，它能夠與特定的DNA序列UAS結(jié)合，并驅(qū)動(dòng)UAS下游基因的表達(dá)。將GAL4基因插入到雄果蠅的Ⅲ號(hào)染色體上(一條常染色體上)，UAS綠色熒光蛋白基因隨機(jī)插入到雌果蠅某條染色體上，但無法表達(dá)(親代雌果蠅缺乏GAL4蛋白)。同時(shí)具備GAL4和UAS-綠色熒光蛋白基因的果蠅，才能合成GAL4蛋白驅(qū)動(dòng)UAS下游的綠色熒光蛋白基因表達(dá)，從而表現(xiàn)出綠色性狀。為便于理解，假設(shè)插入GAL4基因用A表示(沒有該基因用a表示)，插入U(xiǎn)AS綠色熒光蛋白基因用B表示(沒有該基因用b表示)。UAS-綠色熒光蛋白基因插入的位置有3種可能：Ⅲ號(hào)染色體上(則雄、雌基因型可表示為Aabb×aaBb，遵循連鎖定律)，其他常染色體上(則雄、雌基因型可表示為Aabb×aaBb，遵循自由組合定律)、X染色體上(則雄、雌基因型可表示為AaXbY×aaXBXb；遵循自由組合定律)。

【詳解】

A；同時(shí)具備GAL4和UAS-綠色熒光蛋白基因（M基因）的果蠅；才能合成GAL4蛋白驅(qū)動(dòng)UAS下游的綠色熒光蛋白基因表達(dá)，從而表現(xiàn)出綠色性狀，A正確；

B、若綠色熒光蛋白基因（M基因）插入Ⅲ號(hào)染色體上，發(fā)生基因連鎖，假設(shè)插入GAL4基因用A表示(沒有該基因用a表示)，插入U(xiǎn)AS綠色熒光蛋白基因用B表示(沒有該基因用b表示)，則親本為Aabb×aaBb，則F1中綠色翅（AaBb）：無色翅（Aabb、aaBb、aabb）為1：3，若插入Ⅲ號(hào)染色體以外的染色體上，兩對(duì)基因遵循基因組合定律，則親本仍為Aabb×aaBb，F(xiàn)1中綠色翅（AaBb）與無色翅（Aabb、aaBb、aabb）比例仍為1：3；B錯(cuò)誤；

C、若F2中綠色翅：無色翅=9：7，則說明兩種基因自由組合，故綠色熒光蛋白基因（M基因）沒有插入Ⅲ號(hào)染色體上，但不能確定熒光蛋白基因的具體位置，不一定就在常染色體上，也可能在X染色體上，C錯(cuò)誤；

D、若F2中綠色翅雌性：無色翅雌性：綠色翅雄性：無色翅雄性=6：2：3：5；雌雄中綠色翅和無色翅比例不同，說明與性別相關(guān)，則可以得出熒光蛋白基因（M基因）插入X染色體的結(jié)論，D正確。

故選AD。三、填空題(共9題，共18分)18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】好氧C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法顯微注射技術(shù)受精卵繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少大腸桿菌Ca2+感受態(tài)細(xì)胞重組表達(dá)載體DNA分子21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】受體細(xì)胞22、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】黏性末端平末端。23、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】蒸餾水洗滌劑和食鹽24、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】沸水浴二苯胺藍(lán)色二苯胺25、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系基因修飾或基因合成改造新的蛋白質(zhì)自然界已存在26、略

【分析】【詳解】

在日常生活中；我們遇到過的與克隆技術(shù)有關(guān)的問題有：

①瀕臨滅絕動(dòng)物的克隆：克隆可以拯救瀕危的國(guó)家保護(hù)動(dòng)物以及植物；我們可運(yùn)用克隆，復(fù)制瀕臨滅絕的生物，讓其不至于在我們的生活中消失；

②農(nóng)業(yè)克?。簯?yīng)用于農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域；通過轉(zhuǎn)基因的方式，增加糧食的畝產(chǎn)量，提高土地的單位出產(chǎn)量；

③細(xì)胞克隆替代或者修復(fù)人體細(xì)胞問題；比如胚胎干細(xì)胞；

④畜牧業(yè)克?。簯?yīng)用于畜牧業(yè)，提升優(yōu)良品種群體基數(shù)，縮短畜牧育種年限?！窘馕觥坑?，比如：①瀕臨滅絕動(dòng)物的克??；②農(nóng)業(yè)克?。簯?yīng)用于農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域，通過轉(zhuǎn)基因的方式，增加糧食的畝產(chǎn)量，提高土地的單位出產(chǎn)量；③細(xì)胞克隆替代或者修復(fù)人體細(xì)胞問題，比如胚胎干細(xì)胞；④畜牧業(yè)克?。簯?yīng)用于畜牧業(yè)，提升優(yōu)良品種群體基數(shù)，縮短畜牧育種年限。四、判斷題(共4題，共28分)27、A【分析】【詳解】

生殖性克隆，即通常所說的克隆人，通過克隆技術(shù)產(chǎn)生獨(dú)立生存的新個(gè)體，即通常所說的克隆人，該說法正確。28、A【分析】【詳解】

生物武器是利用生物戰(zhàn)劑殺傷人員、牲畜、毀壞植物的武器。生物武器種類包括致病菌、病毒、生化毒劑以及經(jīng)過基因重組的致病菌等，故正確。29、A【分析】【詳解】

生物武器是利用生物戰(zhàn)劑殺傷人員、牲畜、毀壞植物的武器。生物武器種類包括致病菌、病毒、生化毒劑以及經(jīng)過基因重組的致病菌等。故該說法正確。30、A【分析】【詳解】

轉(zhuǎn)入到油菜的抗除草劑基因，則可能通過減數(shù)分裂進(jìn)入到花粉細(xì)胞中，進(jìn)而傳入環(huán)境中的其他生物體內(nèi)。本說法正確。五、實(shí)驗(yàn)題(共3題，共27分)31、略

【分析】【分析】

分析題圖：圖示為釀制葡萄酒的兩個(gè)簡(jiǎn)易裝置，甲裝置中，A為葡萄汁，能為酵母菌提供碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子；NaHCO3溶液能夠吸收酵母菌酒精發(fā)酵產(chǎn)生的CO2；乙裝置需要定期擰松瓶蓋排氣。

（1）

制作果酒的菌種是酵母菌；屬于真核生物；制作果醋的菌種是醋酸菌，屬于原核生物，它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)上最主要的區(qū)別在于前者有以核膜為界限的細(xì)胞核，即有核膜包被的細(xì)胞核。醋酸菌發(fā)酵的適宜溫度為30℃～35℃，因此制作果酒后制果醋，應(yīng)將溫度控制在30℃～35℃。

（2）

甲裝置中，A液體是葡萄汁，能為酵母菌提供碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子；NaHCO3溶液的作用是吸收酵母菌酒精發(fā)酵產(chǎn)生的CO2；若用乙裝置；在發(fā)酵過程中，必須進(jìn)行的操作是每隔12小時(shí)左右將瓶蓋擰松一次，排除二氧化碳。

（3）

酵母菌屬于兼性厭氧菌；其在有氧條件下可以大量繁殖，故將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有大約1/3的空間，這樣既為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣，又可防止發(fā)酵旺盛時(shí)汁液溢出。

（4）

酒精可用重鉻酸鉀來檢驗(yàn)；在酸性條件下，該試劑與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。

（5）

醋酸菌可以利用果酒進(jìn)行發(fā)酵，相應(yīng)反應(yīng)式為：

【點(diǎn)睛】

本題考查果酒和果醋的制作，要求考生識(shí)記參與果酒和果醋制作的微生物及其代謝類型，掌握果酒和果醋制作的原理及條件，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，難度適中?！窘馕觥浚?）核膜包被的細(xì)胞核30-35

（2）葡萄汁吸收酵母菌酒精發(fā)酵產(chǎn)生的CO2擰松。

（3）為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣；防止發(fā)酵旺盛時(shí)汁液溢出。

（4）重鉻酸鉀。

（5）32、略

【分析】【分析】

1；基因工程的四個(gè)步驟：目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。

2、在基因工程操作中，常用原核生物作為受體細(xì)胞，其中以大腸桿菌應(yīng)用最為廣泛。研究人員一般先用Ca2＋處理大腸桿菌細(xì)胞；使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。

【詳解】

（1）利用RNA通過①過程（逆轉(zhuǎn)錄）獲得cDNA需要逆轉(zhuǎn)錄酶；已知真核生物基因的mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保護(hù)尾部不被降解。逆轉(zhuǎn)錄第一步以mRMA為模板合成DNA單鏈；新鏈與模板鏈反向平行，由于新鏈只能由5'端向3'端延伸，所以逆轉(zhuǎn)錄第一步的引物應(yīng)與mRNA尾部的PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）互補(bǔ)配對(duì)，即用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物；設(shè)計(jì)引物的目的是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。

（2）對(duì)逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA擴(kuò)增時(shí)；引物的5'端結(jié)合母鏈的3'端之后DNA聚合酶開始擴(kuò)增DNA。為確保其與pET41a質(zhì)粒定向連接，應(yīng)使用不同種的限制酶切割質(zhì)粒和目的基因，由圖可知，使用EcoRI酶會(huì)破環(huán)SSB基因，故應(yīng)在相應(yīng)引物的5'端加上BamHI和XhoⅠ酶切位點(diǎn)。

（3）由題圖分析可知：質(zhì)粒上存在卡那霉素和氯霉素抗性基因，由于XhoⅠ酶破壞了氯霉素抗性基因，所以成功組裝的重組質(zhì)粒不能在添加了氯霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，③過程用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌時(shí)，需要用Ca2+處理大腸桿菌；目的是使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態(tài)，然后分別將處理后的大腸桿菌先接種在添加卡那霉素的培養(yǎng)基（A）上培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后再利用無菌膜同位置轉(zhuǎn)移到添加氯霉素的培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)，收集能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而不能在含氯霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落進(jìn)一步純化后將菌體破碎處理，經(jīng)篩選即可得到SSB蛋白。

（4）將改造后的大腸桿菌生產(chǎn)的SSB蛋白注入到小鼠體內(nèi)是為了檢測(cè)該蛋白是否具有抗原性，如果該蛋白有抗原性，會(huì)引起機(jī)體的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)抗體。則后續(xù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容應(yīng)為抽取小鼠血液提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測(cè)其是否含有抗SSB的抗體?！窘馕觥?1)逆轉(zhuǎn)錄用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

(2)5’BamHⅠ和XhoI

(3)使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態(tài)卡那霉素氯霉素能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而不能在含氯霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的。

(4)提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測(cè)其是否含有抗SSB的抗體33、略

【分析】【分析】

圖1可知：T-2毒素是一種常見的菌素；CYP3A是降解T-2毒素的關(guān)鍵酶，T-2毒素可誘導(dǎo)其表達(dá)水平升高，當(dāng)用兩種調(diào)控序列同時(shí)連接啟動(dòng)子，啟動(dòng)子的活性最高。

圖2可知：野生型探針能與NF-Y結(jié)合；突變型探針不能與NF-Y結(jié)合，NF-Y抗體一定能與NF-Y結(jié)合。

【詳解】

（1）初級(jí)代謝產(chǎn)物一般是霉菌生命活動(dòng)所必需的，大多存在于細(xì)胞內(nèi)。次級(jí)代謝產(chǎn)物不是霉菌生命活動(dòng)必需的，并且分泌到體外，故T-2毒素是霉菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物。T-2毒素是一種由霉菌分泌的脂溶性小分子，脂溶性小分子以自由擴(kuò)散的方式進(jìn)入細(xì)胞。

（2）實(shí)驗(yàn)的自變量是有無調(diào)控序列；根據(jù)單一變量原則，對(duì)照組的目的是為了排除無光變量的影響，除了沒有調(diào)控序列，其他處理和實(shí)驗(yàn)組相同，所以對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組豬肝細(xì)胞均導(dǎo)入含CYP3A基因啟動(dòng)子及LUC基因的表達(dá)載體，然后向各組豬肝細(xì)胞培養(yǎng)液中加入加入等量T-2毒素，適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)。從圖中信息可知，缺失兩個(gè)調(diào)控序列和對(duì)照組活性一致，缺失一個(gè)比對(duì)照組活性略強(qiáng)，兩個(gè)都存在活性最高，說明這兩個(gè)調(diào)控序列是CYP3A基因響應(yīng)T-2毒素的核心元件。故缺失兩個(gè)調(diào)控序列或其中任一個(gè)，T-2毒素都不能誘導(dǎo)啟動(dòng)子活性明顯增強(qiáng)。

（3）①實(shí)驗(yàn)的目的是要驗(yàn)證NF-Y能與B1結(jié)合；根據(jù)第2組和第3組結(jié)果，依據(jù)B1序列制備的NF-Y結(jié)合位點(diǎn)野生型探針能與NF-Y結(jié)合，根據(jù)第4組結(jié)果，突變型探針不能與NF-Y結(jié)合。第5組加入了NF-Y抗體，一定能與NF-Y結(jié)合。故可以解釋為：結(jié)合位點(diǎn)突變的探針不能結(jié)合核蛋白中的NF-Y，也不會(huì)競(jìng)爭(zhēng)NF-Y與標(biāo)記探針的結(jié)合，所以第4組與第2組同樣位置出現(xiàn)阻滯帶。第5組，NF-Y的抗體結(jié)合NF-Y，因此第5組中出現(xiàn)標(biāo)記探針；NF-Y和NF-Y抗體的結(jié)合物，結(jié)合物分子量大，阻滯帶的位置更靠后。

②假設(shè)NF-Y和Sp1通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，它們之間的距離是發(fā)揮作用的最佳距離，故增大或縮小B1和B2兩者之間的距離都會(huì)降低CYP3A基因的啟動(dòng)子的活性?！窘馕觥?1)次級(jí)自由擴(kuò)散。

(2)等量的T-2毒素缺失兩個(gè)調(diào)控序列或其中任一個(gè)；T-2毒素都不能誘導(dǎo)啟動(dòng)子活性增強(qiáng)。

(3)結(jié)合位點(diǎn)突變的探針不能結(jié)合核蛋白中的NF-Y，也不會(huì)競(jìng)爭(zhēng)NF-Y與標(biāo)記探針的結(jié)合，所以第4組與第2組同樣位置出現(xiàn)阻滯帶。NF-Y的抗體結(jié)合NF-Y，因此第5組中出現(xiàn)標(biāo)記探針、NF-Y和NF-Y抗體的結(jié)合物，結(jié)合物分子量大，阻滯帶的位置更靠后。NF-Y和Sp1通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，它們之間的距離是發(fā)揮作用的最佳距離。六、綜合題(共3題，共9分)34、略

【分析】【分析】

1；動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器是基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)平臺(tái)；使外源基因?qū)雱?dòng)物基因組中并定位表達(dá)于動(dòng)物乳腺，利用動(dòng)物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力，在動(dòng)物的乳汁中生產(chǎn)一些具有重要價(jià)值產(chǎn)品的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的總稱。

2；乳腺生物反應(yīng)器是最理想的生物反應(yīng)器；它的優(yōu)點(diǎn)：（1）藥物蛋白只在乳腺內(nèi)，對(duì)動(dòng)物的生理活動(dòng)不影響。（2）長(zhǎng)期收集也不會(huì)對(duì)動(dòng)物造成傷害。（3）產(chǎn)品成本低。（4）無論純化還是使用都很方便。

【詳解】

（1）建立生產(chǎn)生長(zhǎng)激素的乳腺生物反應(yīng)器；其核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，將藥用蛋白基因和乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子；終止子和標(biāo)記基因等重組在一起，通過顯微注射方法導(dǎo)入動(dòng)物受精卵中，其中啟動(dòng)子的作用是啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程。

（2）制備乳腺生物反應(yīng)器的受體細(xì)胞為受精卵；由于要從乳汁中提取藥物，所以應(yīng)該選擇雌性，其性染色體組成為XX。

（3）基因工程中；DNA分子雜交技術(shù)可用于檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入，一般是用放射性同位素標(biāo)記含有目的基因的DNA片段作探針。

【點(diǎn)睛】

本題以乳腺生物反應(yīng)器為背景，考查了基因工程的原理及技術(shù)、基因工程的應(yīng)用以及胚胎工程的應(yīng)用等方面的知識(shí)，綜合考查了考生的實(shí)驗(yàn)探究能力，要求考生能從課外材料中獲取相關(guān)的生物學(xué)信息，并能運(yùn)用這些信息，結(jié)合所學(xué)知識(shí)解決相關(guān)的生物學(xué)問題。【解析】標(biāo)記基因顯微注射啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程受精卵XXDNA分子雜交含有目的基因的DNA片段35、略

【分析】【分析】

基因工程（geneticengineering）是在分子水平上對(duì)基因進(jìn)行操作的復(fù)雜技術(shù)。是將外源基因通過體外重組后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)；使這個(gè)基因能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制；轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)的操作。

一；提取目的基因獲取目的基因是實(shí)施基因工程的第一步。

如植物的抗病（抗病毒抗細(xì)菌）基因；種子的貯藏蛋白的基因，以及人的胰島素基因干擾素基因等，都是目的基因。

二；目的基因與運(yùn)載體結(jié)合。

基因工程中常用的受體細(xì)胞有大腸桿菌；枯草桿菌，土壤農(nóng)桿菌，酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。用人工方法使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，主要是借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。例如，如果運(yùn)載體是質(zhì)粒，受體細(xì)胞是細(xì)菌，一般是將細(xì)菌用氯化鈣處理，以增大細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性，使含有目的基因的重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞。目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，就可以隨著受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌的繁殖速度非常快，在很短的時(shí)間內(nèi)就能夠獲得大量的目的基因。

三；目的基因的檢測(cè)和表達(dá)。

以上步驟完成后；在全部的受體細(xì)胞中，真正能夠攝入重組DNA分子的受體細(xì)胞是很少的。因此，必須通過一定的手段對(duì)受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入了目的基因進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)的方法有很多種，例如，大腸桿菌的某種質(zhì)粒具有青霉素抗性基因，當(dāng)這種質(zhì)粒與外源DNA組合在一起形成重組質(zhì)粒，并被轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞后，就可以根據(jù)受體細(xì)胞是否具有青霉素抗性來判斷受體細(xì)胞是否獲得了目的基因。重組DNA分子進(jìn)入受體細(xì)胞后，