DB50T 1367-2023 水質(zhì) 磺胺類抗生素的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS13.060.01DB50重慶市市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB50/T1367—2023 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14方法原理 15干擾與消除 16試劑和材料 17儀器和設(shè)備 28樣品 29分析步驟 310結(jié)果計算與表示 711精密度和正確度 812質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 813廢棄物的處理 9附錄A（規(guī)范性）方法的檢出限和測定下限 附錄B（資料性）方法的精密度和正確度 DB50/T1367—2023本文件按照GB/T1.1－2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心提出。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境局歸口并組織實施。本文件主要起草單位：重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。本文件主要起草人：鄭璇、田雋、李新宇、張文斌、李莉、鄒家素、張曉嶺、蹇川、張芹、趙麗、張君、鄒素蘭、孫靜、郭志順、唐思雨。1DB50/T1367—2023水質(zhì)磺胺類抗生素的測定液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法本文件規(guī)定了液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法對水中18種磺胺類抗生素進行測定的方法。本文件適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、甲氧卞氨嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、奧美普林、磺胺氯噠嗪;磺胺甲惡唑、磺胺-6-（間）甲氧嘧啶、磺胺二甲氧噠嗪、磺胺異惡唑、磺胺苯吡唑、磺胺多辛、磺胺喹惡啉等18種磺胺類抗生素的測定。若通過驗證，本文件也可適用于其他磺胺類抗生素的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ91.1污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ91.2地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ164地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4方法原理水中的磺胺類抗生素經(jīng)固相萃取柱富集，用液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜分離檢測。根據(jù)保留時間和特征離子峰定性，內(nèi)標(biāo)法定量。5干擾與消除金屬離子與目標(biāo)化合物能形成絡(luò)合物，使固相萃取效率降低，可向水樣中加入乙二胺四乙酸二鈉抑制絡(luò)合物的形成。6試劑和材料警告：本方法所使用的有機試劑對人體健康有害，試劑配制和樣品前處理過程應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進行，操作時應(yīng)按規(guī)定要求佩帶防護器具，避免接觸皮膚和衣服。6.1除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實驗用水為新制備的超純水。2DB50/T1367—20236.2氫氧化鈉（NaOH）：分析純。6.3鹽酸（HCl）：1mol/L，分析純。6.4甲醇（CH3OH）：農(nóng)殘級或等同規(guī)格。6.5甲酸（HCOOH）：色譜純。6.6甲酸溶液（0.05%）：取50μl甲酸（6.5）溶于100ml實驗用水中。6.7甲酸/甲醇溶液：取90ml甲酸溶液（6.5）和10ml甲醇（6.4）混合，搖勻。6.8乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）：分析純。6.9標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=1.00g/L可直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，也可用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度大于99.0%，用甲醇（6.4）溶解，貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產(chǎn)品說明。6.10混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：ρ=100μg/ml移取適量標(biāo)準(zhǔn)貯備液（6.9）按需要用甲醇（6.4）稀釋，中間液應(yīng)于-10℃以下冷凍、避光保存不超過3個月。6.11混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1.00μg/ml（參考濃度）將磺胺類抗生素混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（6.10）按需要用甲醇（6.4）稀釋，-10℃以下冷凍，避光保存不6.12內(nèi)標(biāo)貯備液1：ρ=1.00g/L內(nèi)標(biāo)1為磺胺二甲嘧啶-13C6半水合物（Sulfadimidine-13C6），可直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，也可用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶于甲醇（6.4）。貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產(chǎn)品說明。6.13內(nèi)標(biāo)貯備液2：ρ=1.00g/L內(nèi)標(biāo)2為磺胺甲噁唑-13C6（Sulfamethoxazole-13C6）,可直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，也可用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶于甲醇（6.4）。貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產(chǎn)品說明。6.14內(nèi)標(biāo)混合中間液：ρ=100μg/ml（參考濃度）移取適量內(nèi)標(biāo)貯備液1（6.12）和內(nèi)標(biāo)貯備液2（6.13）按需要用甲醇（6.4）稀釋成。內(nèi)標(biāo)混合中間液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過3個月或參照制造商的產(chǎn)品說明。6.15內(nèi)標(biāo)混合使用液：ρ=10.0μg/ml（參考濃度）將內(nèi)標(biāo)混合中間液（6.14）按需要用甲醇（6.4）稀釋，-10℃以下冷凍，避光保存不超過7天。6.16固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為6ml/150mg。6.17濾膜：0.22μ和0.45μm玻璃纖維聚膜或其他材質(zhì)等效濾膜。6.18氮氣：純度≥99.99%6.19氬氣：純度≥99.99%7儀器和設(shè)備7.1液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子化源(ESI)。7.2色譜柱：C18柱或等效反相高效液相色譜柱，參考規(guī)格為100mm×2.1mm1.9μm。7.3濃縮裝置：K-D濃縮器或氮吹濃縮儀等性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。7.4固相萃取裝置：自動或手動，流速可調(diào)節(jié)。7.5一般實驗室常用儀器。8樣品3DB50/T1367—20238.1采集與保存參照HJ91.1、HJ91.2和HJ164的相關(guān)規(guī)定采集樣品于4000ml磨口棕色玻璃瓶中，水樣應(yīng)充滿采樣瓶，不留液上空間。樣品采集后應(yīng)盡快進行分析。如暫不能分析，應(yīng)在0℃~4℃避光保存，14天內(nèi)完成萃取。8.2樣品制備將固相萃取柱（6.15）固定在固相萃取裝置(7.4)上，分別用10ml甲醇（6.4）和10ml實驗用水活化固相萃取柱（6.15），保證小柱柱頭浸潤。水樣經(jīng)0.45μm濾膜（6.16）過濾，取1000ml水樣，加入1gNa2EDTA（6.8），用氫氧化鈉（6.2）和鹽酸（6.3）調(diào)節(jié)pH值為至6.0，水樣以低于10ml/min（約3滴/秒～4滴/秒）的流速通過小柱，用10ml實驗用水洗滌小柱，用氮氣（6.17）吹干小柱，再用10ml甲醇（6.4）洗脫，收集洗脫液于潔凈試管中，洗脫液經(jīng)5.00μl，用甲酸/甲醇溶液（6.7）定容至1ml，經(jīng)0.22μm濾膜（6.16）過濾，置于樣品瓶中，待測。當(dāng)樣品體積為1000ml，濃縮后定容體積為1.0ml，進樣體積為10μl，18種磺胺類抗生素的檢出限為1ng/L～2ng/L，測定下限為4ng/L～8ng/L，詳見附錄A。8.3空白樣品的制備以實驗用水代替樣品，應(yīng)按照樣品制備（8.2）相同操作步驟，制備空白樣品。9分析步驟9.1儀器參考條件9.1.1液相色譜參考條件流動相A：甲酸溶液(6.5)，流動相B：甲醇（6.4），梯度洗脫程序見表1，流速：200.0μl/min；柱溫：35℃;進樣量：10μL；具體參數(shù)見表1。表1液相色譜流動相梯度洗脫程序%%55559.1.2質(zhì)譜參考條件正離子模式：ESI噴霧電壓(Sprayvoltage)：3000V毛細管溫度：350℃4DB50/T1367—2023鞘氣(N2)流速:45L/min輔助氣(N2)流速:15L/min碰撞氣(Ar)壓力:200mPa選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)，具體參數(shù)見表2。表2目標(biāo)化合物的選擇反應(yīng)監(jiān)測條件V12a3a456a7a8a9磺胺二甲嘧啶-13C6aaaaaa5DB50/T1367—2023表2(續(xù))Vaa9.1.3儀器調(diào)諧按照儀器使用說明書在規(guī)定時間和頻次內(nèi)對液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行儀器質(zhì)量數(shù)和靈敏度校正，以確保儀器處于最佳測試狀態(tài)。在儀器使用過程中，如發(fā)現(xiàn)儀器質(zhì)量數(shù)出現(xiàn)明顯偏差或靈敏度大幅度下降時，應(yīng)立即對儀器重新進行質(zhì)量數(shù)和靈敏度校正。9.2校準(zhǔn)9.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取一定量磺胺類抗生素混合標(biāo)準(zhǔn)使用液（6.11）于甲酸/甲醇混合溶液（6.7）中，制備至少5個濃度點的標(biāo)準(zhǔn)系列，18種磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度均分別為2.00μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L（此為參考濃度），于每毫升標(biāo)準(zhǔn)系列中加入5.00μl內(nèi)標(biāo)混合使用液（6.15），使內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度為50.0μg/L，貯存在棕色進樣小瓶中，待測。由低濃度到高濃度依次對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進樣，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)組分的濃度為橫坐標(biāo)，以其對應(yīng)的峰面積（或峰高）與內(nèi)標(biāo)物峰面積(或峰高)的比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的乘積為縱坐標(biāo)，建立校準(zhǔn)曲線。如式（1）：yaxb..................................................................................(1)式中：x——目標(biāo)組分濃度的數(shù)值，單位為微克每升(μg/L）；y——目標(biāo)組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積（或峰高）比值與內(nèi)標(biāo)物濃度乘積的數(shù)值；a——校準(zhǔn)曲線斜率的數(shù)值；b——校準(zhǔn)曲線截距的數(shù)值。9.2.2標(biāo)準(zhǔn)參考譜圖在本標(biāo)準(zhǔn)推薦的儀器參考條件下，目標(biāo)化合物的提取離子流色譜圖見圖1。DB50/T1367—2023 圖118種磺胺類抗生素和內(nèi)標(biāo)物的提取離子流色譜圖9.3測定9.3.1樣品測定67DB50/T1367—2023按照與繪制校準(zhǔn)曲線相同的儀器分析條件進行測定。9.3.2空白試驗按與樣品測定相同的儀器分析條件進行空白樣品的測定。10結(jié)果計算與表示10.1定性分析每種被測組分選擇1個母離子和2個子離子進行監(jiān)測。在相同的實驗條件下，樣品中待測組分的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中目標(biāo)組分的保留時間比較，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的絕對值應(yīng)小于2.5%；且待測樣品譜圖中，各組分定性離子的相對豐度（Ksam,見式2）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖中對應(yīng)的定性離子相對豐度（Kstd,見式3）進行比較，偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定為樣品中存在對應(yīng)的待測物。Ksam100................................................................................(2)式中：Ksam——樣品中某組分定性子離子的相對豐度的數(shù)值，單位為百分比（%）；A2——樣品中某組分二級質(zhì)譜定性子離子的峰面積（或峰高A1——樣品中某組分二級質(zhì)譜定量子離子的峰面積(或峰高)。Kstd100..............................................................................(3)式中：Kstd——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分定性子離子的相對豐度,單位為百分比（%Astd2——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分二級質(zhì)譜定性子離子的峰面積（或峰高）；Astd1——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分二級質(zhì)譜定量子離子的峰面積(或峰高)。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差K%K最大允許偏差%K＞5020＜K≤50K≤1010.2結(jié)果計算樣品中的目標(biāo)物的質(zhì)量濃度按公式（4）f....................................................................................(4)式中：ρ——樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為納克每升（ng/L）；8DB50/T1367—2023ρ1——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的樣品中目標(biāo)物的濃度的數(shù)值，單位為微克每升(μg/L)；f——稀釋倍數(shù)。10.3結(jié)果表示測定結(jié)果小數(shù)位數(shù)的保留與方法檢出限一致，最多保留三位有效數(shù)字。11精密度和正確度11.1精密度11.1.16家實驗室對含18種磺胺類抗生素濃度為5.00ng/L、10.0ng/L和20.0ng/L的統(tǒng)一空白加標(biāo)樣進行了6次重復(fù)測定：實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為：4.0%～12.2%，1.3%～13.8%，0.8%～10.4%;實驗室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為：5.3%～16.3%，4.4%～9.3%，3.9%～9.8%;重復(fù)性限范圍為：0.71ng/L～0.88ng/L，1.38ng/L～2.64ng/L，2.13ng/L～4.30ng/L;再現(xiàn)性范圍為：0.94ng/L～1.79ng/L，1.78ng/L～3.53ng/L，2.54ng/L～6.30ng/L。11.1.26家實驗室統(tǒng)一對地表水樣品進行重復(fù)6次加標(biāo)測定，抗生素加標(biāo)濃度為5.00ng/L和10.0ng/L：實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為：3.9%～29.5%和4.1%～29.5%；實驗室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為：12.5%～22.4%和10.9%～19.9%；重復(fù)性限范圍為：2.27ng/L～3.75ng/L和3.09ng/L～5.57ng/L；再現(xiàn)性范圍為：2.27ng/L～3.78ng/L和3.32ng/L～6.55ng/L。11.1.36家實驗室統(tǒng)一對廢水樣品進行重復(fù)6次加標(biāo)測定，抗生素加標(biāo)濃度為10.0ng/L和20.0ng/L：實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為：4.0%～12.2%和4.5%～28.5%；實驗室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為：5.7%～16.3%和12.1%～19.7%；重復(fù)性限范圍為：4.49ng/L～7.21ng/L和6.46ng/L～12.0ng/L；再現(xiàn)性范圍為：5.21ng/L～7.77ng/L和7.30ng/L～12.9ng/L。11.2正確度11.2.16家實驗室對地表水進行加標(biāo)回收實驗，加標(biāo)濃度為分別為5.00ng/L、10.0ng/L，加標(biāo)回收率分別為：70.6%～132%，69.5%～131%。11.2.26家實驗室對廢水進行加標(biāo)回收實驗，加標(biāo)濃度為分別為10.0ng/L、20.0ng/L，加標(biāo)回收率分別為：65.8%～129%，71.9%～129%。11.2.3精密度和正確度結(jié)果統(tǒng)計見附表B。12質(zhì)量保證和質(zhì)量控制12.1空白分析每次分析至少做一個實驗室空白，實驗室空白中目標(biāo)化合物的濃度應(yīng)低于方法檢出限。12.2校準(zhǔn)每批樣品應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.99。9DB5