無菌部位標(biāo)本的細(xì)菌檢驗(yàn)岳陽王華洪講解

無菌部位標(biāo)本的細(xì)菌檢驗(yàn)岳陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院王華洪一、血液及骨髓標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本的采集1.皮膚消毒

?嚴(yán)格執(zhí)行三步法2.采血部位：

?肘靜脈

?肘動脈或股動脈采血

?嬰幼兒采頸靜脈血

3.采集方法

?嚴(yán)格無菌操作4.采血量

?比例：1:10

?成人8～10ml/瓶

?兒童1～5ml/瓶

?嬰兒1～2ml/瓶

?骨髓1～2ml/瓶

疾病24小時(shí)內(nèi)24小時(shí)后菌血癥、敗血癥2～3份細(xì)菌性心內(nèi)膜炎3份（1～2小時(shí)）2份不明原因發(fā)熱2～3份2份5.采血時(shí)間和頻度6.標(biāo)本的運(yùn)送和保存立即送檢，室溫保存，切勿冷藏（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)

1.常見病原菌2.

檢驗(yàn)程序培養(yǎng)基性狀改變疑似病原菌均勻混濁，指示劑變色革蘭陰性桿菌微混濁，有綠色變化肺炎鏈球菌有菌膜，均勻混濁有綠色熒光銅綠假單胞菌上層澄清，下層有沉淀鏈球菌細(xì)胞層自上而下的溶血溶血性鏈球菌混濁、有膠凍狀凝固現(xiàn)象葡萄球菌灰白色菌膜、培養(yǎng)基清晰枯草芽孢桿菌或類白喉棒狀桿菌3.檢驗(yàn)方法（1）普通細(xì)菌的培養(yǎng)與鑒定

?增菌培養(yǎng)：培養(yǎng)陽性指證及疑似菌列表陽性培養(yǎng)瓶直接藥敏試驗(yàn)分離培養(yǎng)涂片染色鏡檢細(xì)菌鑒定藥敏試驗(yàn)報(bào)告報(bào)告報(bào)告?陽性培養(yǎng)瓶處理?陰性培養(yǎng)瓶處理于12～18小時(shí)、第3天和第7天至少做3次盲傳，7天無細(xì)菌生長報(bào)告陰性（2）特殊細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定?腦膜炎奈瑟菌血液骨髓胰胨肉湯或?qū)I(yè)培養(yǎng)瓶巧克力培養(yǎng)基（35℃,

5％～10％C02）鑒定：葡萄糖、麥芽糖發(fā)酵陽性藥敏：CLSI標(biāo)準(zhǔn)腦膜炎奈瑟菌菌落（2）特殊細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定?草綠色鏈球菌血液骨髓血瓊脂平板（35℃,

5％～10％C02、需氧和厭氧環(huán)境）胰酶解酪蛋白大豆肉湯培養(yǎng)瓶鑒定藥敏試驗(yàn)草綠色鏈球菌草綠色鏈球菌菌落7天培養(yǎng)無細(xì)菌生長，培養(yǎng)至第4周，仍無細(xì)菌生長則報(bào)告“經(jīng)4周培養(yǎng)無草綠色鏈球菌生長”血液骨髓葡萄糖膽汁或膽鹽肉湯MAC、SS35℃培養(yǎng)鑒定;KIA、生化反應(yīng)、血清學(xué)試驗(yàn)等藥敏試驗(yàn)血液骨髓肝浸液肉湯肝浸液平板或血平板（35℃,

5％～10％C02）涂片、生化鑒定血清學(xué)試驗(yàn)?傷寒沙門菌及其他沙門菌?布魯菌培養(yǎng)4周無細(xì)菌生長，報(bào)告“經(jīng)4周培養(yǎng)無細(xì)菌生長”標(biāo)本牛心腦浸液或肝浸液血平板或巧克力平板35℃、厭氧培養(yǎng)生化鑒定?厭氧菌?真菌：真菌增菌肉湯增菌→沙保弱培養(yǎng)基（25℃或37℃）→菌落特征→生化鑒定、報(bào)告?L型細(xì)菌高滲液體培養(yǎng)基→血瓊脂平板和L型細(xì)菌培養(yǎng)基→典型“油煎蛋”菌落→返祖、鑒定4.結(jié)果報(bào)告采取分級和限時(shí)報(bào)告制度?初報(bào)告：將鏡檢結(jié)果電話通知主管醫(yī)生?預(yù)報(bào)告：6～8小時(shí)內(nèi)報(bào)告直接藥物敏感結(jié)果?最終報(bào)告：報(bào)告細(xì)菌種屬、藥敏試驗(yàn)、結(jié)果評價(jià)及建議?陰性報(bào)告（三）臨床意義?排除雜菌污染，從血液和骨髓標(biāo)本中檢出任何細(xì)菌都具有臨床意義?葡萄球菌是血液感染最常見的細(xì)菌?草綠色鏈球菌是亞急性心內(nèi)膜炎的主要致病菌?尿路、膽道、胃腸道炎癥粘膜損傷引起的敗血癥以大腸埃希菌多見?產(chǎn)單核李斯特菌主要引起新生兒敗血癥二、腦脊液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本的采集1.采集部位?腰椎穿刺法2.采集量?3～5ml3.標(biāo)本的運(yùn)送和保存?15分鐘內(nèi)送檢，最遲不能超過1小時(shí)。疑似苛養(yǎng)菌感染時(shí)，應(yīng)保溫送檢（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.常見病原菌2.檢驗(yàn)程序肺炎鏈球菌腦膜炎奈瑟菌流感嗜血桿菌3.檢驗(yàn)方法（1）涂片檢查

?革蘭染色

?抗酸染色?墨汁負(fù)染色

新型隱球菌結(jié)核桿菌（2）分離培養(yǎng)與鑒定?普通細(xì)菌標(biāo)本→血瓊脂平板和巧克力平板（35℃，CO2環(huán)境）→可疑菌落→形態(tài)、生化試驗(yàn)及血清學(xué)試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)?結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本→羅-琴培養(yǎng)基或米氏7H-10培養(yǎng)基→35℃溫箱孵育→可疑菌落→鑒定?真菌標(biāo)本→血平板或沙保弱培養(yǎng)基→25℃及37℃孵育→可疑菌落→形態(tài)、鏡檢及生化反應(yīng)等鑒定。?厭氧菌標(biāo)本→血平板、厭氧血瓊脂平板和硫乙醇酸鈉肉湯→35℃需氧、厭氧培養(yǎng)→可疑菌落→染色鏡檢及生化鑒定、藥敏試驗(yàn)4.結(jié)果報(bào)告

?初報(bào)告：報(bào)告標(biāo)本直接涂片結(jié)果?預(yù)報(bào)告：報(bào)告標(biāo)本直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果?最終報(bào)告：報(bào)告細(xì)菌種屬、藥敏試驗(yàn)、結(jié)果評價(jià)及建議?陰性報(bào)告（三）臨床意義?腦膜炎奈瑟菌引起細(xì)菌性腦膜炎?結(jié)核分枝桿菌引起的結(jié)核性腦膜炎?真菌性腦膜炎最常見的病原體是新型隱球菌，白假絲酵母菌、球孢子菌好發(fā)于免疫功能低下和惡性疾病患者開放性膿腫瘺管1.拭子采集法

?

開放性性膿腫2.沙布條采集法

?

瘺管的放線菌感染3.注射器抽吸法

?

封閉性膿腫4.標(biāo)本運(yùn)送與保存

?

厭氧標(biāo)本“床邊接種”膿液（病灶分泌物）標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.常見病原菌2.檢驗(yàn)程序3.檢驗(yàn)方法（1）涂片檢查?普通細(xì)菌檢查：根據(jù)形態(tài)和染色特點(diǎn)，報(bào)告?放線菌檢查：查找“硫磺樣顆?！?，挑取“硫磺樣顆粒”制片。用低倍鏡及高倍鏡檢查并報(bào)告?厭氧芽孢梭菌檢查：描述是否有芽胞、芽胞位置及形狀破傷風(fēng)芽孢梭菌厭氧芽孢梭菌（2）分離培養(yǎng)與鑒定?普通細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本→血平板、中國藍(lán)/麥康凱平板→35℃、需氧培養(yǎng)→典型菌落→染色鏡檢、生化反應(yīng)等鑒定?產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)標(biāo)本→血瓊脂平板、卵黃瓊脂平板、庖肉培養(yǎng)基→35℃、厭氧環(huán)境→可疑菌落→染色鏡檢、生物學(xué)性狀鑒定雙層溶血環(huán)Nagler反應(yīng)洶涌發(fā)酵4.結(jié)果報(bào)告

?

初級報(bào)告：報(bào)告“找到革蘭×性球（桿）菌，呈××排列，形似××細(xì)菌”

?

最終報(bào)告：報(bào)告“檢出××細(xì)菌”、藥敏試驗(yàn)、結(jié)果評價(jià)及建議

?

陰性報(bào)告：報(bào)告“經(jīng)4