禽流感防制知識講座-禽流感間接ELISA診斷技術(shù)INDIRECTELISA

禽流感的流行、診斷與防治

禽流感〔AIV〕是影響?zhàn)B禽業(yè)開展的重要疾病之一，高致病性AIV被國際獸疫局列為I類烈性傳染病,我國為一類動物疫病。1878年首次報(bào)道于意大利，目前遍布全世界。近期得到前所未有的關(guān)注。禽流感做為一種人禽共患的政治、經(jīng)濟(jì)病，嚴(yán)重地威脅著我國養(yǎng)禽業(yè)的開展、對外貿(mào)易及人類健康。禽流感概況禽流感的病原1901年別離到，1955年被確定為正粘病毒科、流感病毒屬、A型流感病毒。負(fù)鏈單股RNA病毒，呈球形，直徑為80─120nm，平均為100nm。具囊膜，在囊膜外表有許多放射狀的纖突。病毒基因組由8個(gè)獨(dú)立片段組，分別編碼10病毒蛋白：依賴性聚合酶蛋白〔PA、PB1、PB2〕、核蛋白〔NP〕、非結(jié)構(gòu)蛋白〔NS1、NS2〕、基質(zhì)蛋白〔M1、M2〕及病毒外表的血凝素蛋白〔HA〕及神經(jīng)氨酸酶蛋白〔NA〕。我國公開報(bào)道的禽流感的幾個(gè)事件97香港流感事件，18人感染H5N1亞型禽流感病毒，6人死亡，約150萬只雞、鴨、鵝和鴿子被撲殺，直接耗資6000萬港幣，用于對養(yǎng)禽業(yè)的補(bǔ)助達(dá)10億港幣。據(jù)估算，僅廣東一省的損失達(dá)人民幣15億元以上。1999年3月，香港衛(wèi)生署從2個(gè)生病兒童身上別離到H9N2亞型AIV。我國從人群中分出5株H9N2毒株。3.2001年5月，香港再次發(fā)生Ｈ5N1禽流感并展開殺雞行動，港方銷毀120萬只家禽，涉及賠償及有關(guān)開支金額達(dá)8000萬元。隨后，澳門市政部門證實(shí)在一批禽鳥樣本中發(fā)現(xiàn)兩只鵝受到H5N1禽流病毒感染，展開了歷年來首次的全澳門“殺雞行動〞，銷毀約二萬只家禽。4.2001年6月4日，韓國農(nóng)林部宣布從中國上海大盈禽聯(lián)公司出口的禽肉中檢測出H5N1HPAIV，禁止從中國進(jìn)口家禽及禽類產(chǎn)品。6月8日，日本僅依據(jù)韓國提供的情況，也宣布暫停從中國進(jìn)口禽類產(chǎn)品。5.2002年2月，香港因發(fā)生禽流感第三次展開殺雞行動，銷毀約30多萬只。6.2003年1-2月，香港再次爆發(fā)禽流感，涉及22個(gè)禽場，共殺禽86萬只。我國禽流感的流行情況★禽流感的診斷◆流行病學(xué)診斷◆臨床病癥診斷◆病理變化診斷◆組織學(xué)病變診斷◆病原學(xué)診斷◆血清學(xué)診斷禽流感的臨床病癥1.慢性型：非高致病性AIV毒株感染或高致病性毒株感染已有一定免疫力的家禽引起的。主要表現(xiàn)為產(chǎn)蛋量突然下降，有時(shí)有輕微呼吸道病癥，死亡率正常或略有上升。潛伏期長，最長可達(dá)21天。2.急性型：多由H5、H7亞型HPAIV引起。----潛伏期短，病程1～2天，死亡率可達(dá)100%。有時(shí)沒有明顯病癥即可見到雞只死亡。----雞冠發(fā)紺呈暗紅色或紫黑色，頭和顏面部水腫，腳鱗出現(xiàn)紫色出血斑。----局部病雞及水禽出現(xiàn)頭頸和腿部麻痹、抽搐等神經(jīng)病癥。禽流感的病理變化★剖檢病變：HPAI主要表現(xiàn)為各臟器、粘膜廣泛出血?！锝M織學(xué)病變：主要表現(xiàn)為皮膚及內(nèi)臟器官〔肝、脾、胰、肺、腎〕的出血、充血和壞死。實(shí)驗(yàn)室診斷病原學(xué)診斷血清學(xué)診斷捕捉ELISAHI試驗(yàn)AGP試驗(yàn)間接ELISA斑點(diǎn)ELISA雞新城疫與雞禽流感的鑒別診斷及防治

雞新城疫、雞禽流感都是由病毒引起的具有高度傳染性的疾病，一年四季均可發(fā)病，且都以冬春兩季多發(fā)，現(xiàn)就其鑒別診斷介紹如下。

一、易感動物1．雞新城疫：是由副粘病毒引起，易感動物是雞，死亡率高于雞禽流感。

2．雞禽流感：由A型流感病毒引起，具有快速流行、持續(xù)時(shí)間長等特點(diǎn)，對禽類都有一定的互感性，雞、鴨、鵝等禽類均易感染

二、臨床病癥1．雞新城疫：(1)呼吸有羅音，并發(fā)出咯咯喘鳴聲；(2)腿部麻痹，頭部顫抖；(3)食欲和飲水量下降，糞便呈綠色。2．雞禽流感：(1)頭部腫大，雞冠、肉髯發(fā)紺，腳鱗出現(xiàn)紫色出血斑；(2)腹瀉，糞便呈綠色或黃綠色水樣，死亡率5％--30％不等是特征性病癥；(3)有的雞群以呼吸障礙為主，呼吸有羅音且雛雞的呼吸病癥更嚴(yán)重。三、剖檢變化1．雞新城疫：(1)腺胃粘膜乳頭出血；(2)十二指腸潰瘍，小腸粘膜有圓形或棗核狀壞死潰瘍病灶，泄殖腔充血、出血；(3)盲腸扁桃體潰瘍。2．雞禽流感：(1)心肌灰白色壞死；(2)胰腺有灰白色壞死點(diǎn)；(3)消化道有類似新城疫病變，特別是腺胃乳頭腫大出血，但與新城疫不同的是十二指腸、盲腸扁桃體未見潰瘍；(4)產(chǎn)蛋雞成熟卵泡囊充血、出血，腹腔內(nèi)常見有卵黃滲出或破裂、卵泡血腫和變形等特異性病變。

四、鑒別診斷根據(jù)兩者的流行情況、臨床病癥及剖檢變化得到初步的鑒別診斷。另外，采用紅細(xì)胞血凝試驗(yàn)可作定性鑒別，即雞紅細(xì)胞血凝試驗(yàn)兩者均凝集，山羊紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)雞新城疫不凝集，雞禽流感凝集。五、防治措施1．杜絕病原侵入雞群、嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度。消毒劑應(yīng)選擇重信譽(yù)、講品質(zhì)廠家生產(chǎn)的具有殺菌譜廣、作用快、無腐蝕性、殘留少、使用方便者。如百毒殺、農(nóng)福五號等。2．合理制訂雞群免疫程序，做好預(yù)防接種工作。可分別選用雞新城疫I系或Ⅳ系苗、雞禽流感多價(jià)滅活苗屢次強(qiáng)化免疫以增強(qiáng)雞群的抵抗力。五、防治措施

病毒別離病毒別離不僅是目前對發(fā)病禽群最確切診斷的一種方法，也是免疫禽群的主要監(jiān)測手段。如果采集及處理樣品的方法得當(dāng)，別離病毒是診斷禽流感的一種敏感而實(shí)用的方法。相對于PCR、免疫熒光、ELISA以及電鏡觀察等其他直接檢測病原的方法或手段，病毒別離的一個(gè)主要的優(yōu)點(diǎn)就是可以測定病毒的致病性，而且可以對病毒做進(jìn)一步抗原特性分析試驗(yàn)和基因特性的研究，同時(shí)可用于疫苗制備及藥物敏感性實(shí)驗(yàn)等。

病毒別離不僅是發(fā)病禽確實(shí)切診斷方法，而且是免疫禽群的主要監(jiān)手段。病料的采集可以從活體或尸體進(jìn)行病原的別離和鑒定。用棉拭子法常可從活體的氣管和泄殖腔中別離到病毒,特別是從泄殖腔中別離到病毒的時(shí)機(jī)較多，為此可用不同大小的棉拭子擦取氣管或泄殖腔，盡量使棉拭子擦到深部,并能刮取泄殖腔粘膜外表的濾泡，以獲得足量的材料。病料的采取時(shí)間很重要，一般在感染初期或發(fā)病急性期采取。如轉(zhuǎn)為后期那么因機(jī)體已形成足夠的抗體而不易別離到病毒。死禽采集氣管、脾、肺、肝、腎和腦等組織樣品。小珍禽用拭子取樣易造成損傷，可取而代之以采集新鮮糞便。病料的保存病料應(yīng)放在含有抗菌素的pH值7.0～7.4的等滲PBS內(nèi)〔無PBS可用25%～50%的甘油鹽水〕，假設(shè)短時(shí)間內(nèi)不能處理可于低溫條件下凍存。瓊脂擴(kuò)散〔AGP〕試驗(yàn)AGP試驗(yàn)用抗原是用所有A型禽流感病毒共有的核蛋白〔NP〕抗原制成的，可以用來檢測所有A型流感病毒〔目前有15種血凝素亞型〕產(chǎn)生的抗體。該方法只適用于未免疫雞群禽流感抗體的監(jiān)測，方法簡單、操作方便，但敏感性稍差。注意：1、該方法不適用于水禽血清抗體的檢測，水禽禽流感抗體檢測應(yīng)該用HI試驗(yàn)。2、配瓊脂時(shí)應(yīng)先將瓊脂充分溶化后再放入鹽，否那么瓊脂不易溶解。AGP試驗(yàn)結(jié)果1234567血凝〔HA〕—血凝抑制〔HI〕試驗(yàn)該方法適用于禽流感病毒血凝素亞型的鑒定以及感染或免疫后血清中抗體的檢測，敏感性比AGP試驗(yàn)高，但只有當(dāng)抗原和抗體的血凝素亞型完全一致時(shí)才會出現(xiàn)HI現(xiàn)象。進(jìn)行禽流感的監(jiān)測時(shí)，當(dāng)HI抗體在判定標(biāo)準(zhǔn)的可疑范圍之內(nèi)時(shí)，需一周后再采血進(jìn)行檢測。對于免疫雞，可以采集發(fā)病期及發(fā)病2-3周后的血清作比照檢查，測其抗體水平，如果康復(fù)期的血清抗體較發(fā)病初期升高4倍以上，可以認(rèn)為是禽流感發(fā)生。進(jìn)行血清學(xué)檢測時(shí)首先要了解該雞群的免疫狀況，防止簡單地將疫苗抗體誤認(rèn)為是感染抗體。注意：反響溫度不能太高，假設(shè)在37℃〔如溫箱〕下進(jìn)行，會影響檢測結(jié)果，應(yīng)在25℃以下的室溫或在4℃冰箱中作用。★疫苗免疫●概述疫苗免疫是預(yù)防和控制禽流感最經(jīng)濟(jì)、最有效的途徑。禽流感病毒抗原具有多樣性，各亞型之間的抗原性存在一定的差異，亞型間缺乏堅(jiān)強(qiáng)的交叉保護(hù)作用。我國主要流行的是H5和H9亞型禽流感，目前必須〔而且只需〕做好H9和H5亞型禽流感的預(yù)防工作。對雞群進(jìn)行大范圍的免疫、增強(qiáng)對外來病毒侵襲的抵抗能力的同時(shí)，必須做好水禽H5亞型禽流感的防疫工作，不僅可以減少水禽本身的發(fā)病率和死亡率，而且可以減少帶毒水禽對環(huán)境的污染及對雞的傳播。出口肉禽原那么上是不能進(jìn)行禽流感疫苗免疫的(香港除外)。所用疫苗必須是經(jīng)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)使用的禽流感疫苗〔H5、H9〕，由省級動物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)統(tǒng)一組織供給。

●影響疫苗免疫效果的因素疫苗質(zhì)量是疫苗保護(hù)率上下的決定性因素，主要包括疫苗中血凝素抗原的含量、乳化劑的選擇及乳化的生產(chǎn)工藝等；對于禽流感疫苗來講，最重要的是所用疫苗中病毒的血凝素亞型必須與當(dāng)?shù)亓餍兄甑膩喰拖嘁恢?，才能發(fā)揮該疫苗的高效免疫保護(hù)作用。雞群健康狀況是影響疫苗免疫效果的又一重要因素，當(dāng)雞群曾經(jīng)或正在感染某些疾病，尤其是一些免疫抑制病如法氏囊、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥、禽白血病和雞傳染性貧血等病會嚴(yán)重干擾疫苗的免疫效果。雞的日齡和品種的不同，對疫苗免疫的敏感性也不一致，HI抗體產(chǎn)生的時(shí)間和所能到達(dá)的高度也存在差異。禽種苗別第一次免疫第二次免疫第三次免疫第四次免疫日齡劑量ml/只日齡劑量日齡劑量日齡劑量蛋雞、種雞H5、H9140.3420.5120-1400.5260-2800.5商品、肉雞H5、H9100.3250.5種鴨H5140.5421.0120-1401.0260-2801.0種鵝H5140.5421.0150-1701.5260-2801.5●禽流感疫苗參考免疫程序

●關(guān)于禽流感疫苗的幾個(gè)問題抗體產(chǎn)生期：7天產(chǎn)生HI試驗(yàn)可檢測到的抗體，但21天才能產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫保護(hù)力，對強(qiáng)毒攻擊的抗死亡保護(hù)率達(dá)100%。免疫后21天，H5亞型HI平均抗體價(jià)在5.5log2以上，H9亞型HI平均抗體價(jià)在6.0log2以上。HI抗體保護(hù)的臨界值：HI抗體大于或等于5.0log2以上時(shí)可完全保護(hù)，等于4.0log2時(shí)大局部保護(hù)。同一毒株制成的疫苗是否可以同時(shí)用于其它家禽：首先，從抗原性分析及氨基酸序列分析上，不同宿主來源的H5亞型禽流感病毒并無明顯差異。其次，我們曾分別用雞、鴨和鵝源毒株制成疫苗，分別免疫雞后進(jìn)行交叉攻毒，各疫苗均具有堅(jiān)強(qiáng)的交叉免疫免疫力。●監(jiān)測方法未經(jīng)免疫區(qū)域：以流行病學(xué)調(diào)查、血清學(xué)監(jiān)測為主〔包括瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等方法〕，結(jié)合病原別離和毒型鑒定、毒力鑒定進(jìn)行監(jiān)測。免疫區(qū)域：以病原學(xué)監(jiān)測為主，結(jié)合血清學(xué)監(jiān)測。

●監(jiān)測對象：所有易感禽類?！褚N檢疫

國內(nèi)異地引入種禽及精液、種蛋時(shí)，應(yīng)領(lǐng)先到當(dāng)?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機(jī)構(gòu)辦理檢疫審批手續(xù)且檢疫合格。引入的種禽必須隔離飼養(yǎng)21天以上，并由動物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測，合格前方可混群飼養(yǎng)。從國外引入種禽及精液、種蛋時(shí)，按國家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行?！锞C合防治預(yù)防禽流感的發(fā)生，不應(yīng)該僅僅依賴于疫苗的免疫，平時(shí)還必須認(rèn)真實(shí)施、貫徹好綜合防治措施。●加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高環(huán)境控制水平飼養(yǎng)、生產(chǎn)、經(jīng)營場所必須符合動物防疫條件，取得動物防疫合格證。飼養(yǎng)場實(shí)行全進(jìn)全出飼養(yǎng)方式，控制人員出入，嚴(yán)格執(zhí)行清潔和消毒程序。雞和水禽禁止混養(yǎng)，養(yǎng)雞場與水禽飼養(yǎng)場應(yīng)相互間隔3公里以上，且不得共用同一水源。養(yǎng)禽場要有良好的防止禽鳥〔包括水禽〕進(jìn)入飼養(yǎng)區(qū)的設(shè)施，并有健全的滅鼠設(shè)施和措施?！窦訌?qiáng)消毒，做好根底防疫工作各飼養(yǎng)場、屠宰廠〔場〕、動物防疫監(jiān)督檢查站等要建立嚴(yán)格的衛(wèi)生〔消毒〕管理制度。人感染禽流感原因的推測畜禽生產(chǎn)的模式為禽流禽的流行與進(jìn)化創(chuàng)造了條件〔水禽飼養(yǎng)的規(guī)?；?，原有只帶毒不表現(xiàn)病癥的鴨、鵝，現(xiàn)在可引起高死亡率；同樣也增加了與人類接觸的時(shí)機(jī)〕，隨著禽流感與人類接觸機(jī)率的提高，為禽流感病毒適應(yīng)有開始適應(yīng)人體細(xì)胞創(chuàng)造了條件，特別是這次大流行期間，不斷有禽流感病毒從病人中別離到。人流感與禽流感重組理論。

重視但不必恐慌禽流感病毒外表蛋白不易被人體細(xì)胞受體識別結(jié)合，偶爾從人體內(nèi)檢測到禽流感病毒，并不說明病毒已適應(yīng)人體，如香港及荷蘭的人感染病例出現(xiàn)后，最終并未在人群中流行；禽流感病毒在人體內(nèi)的復(fù)制比較困難，要感染人體，理論上病毒基因組須含有幾個(gè)人流感病毒的基因片斷，否那么不可能在人體內(nèi)繁殖，目前人傳人病例還未發(fā)現(xiàn)，說明這類重組病毒并不存在。在1997年前從未發(fā)現(xiàn)H5亞型禽流感可感染人，在禽流感大流行期間，由于人類大量接觸病毒，偶爾從人體中別離到病毒缺乏為奇。如何防范人感染禽流感在禽流感流行季節(jié)，防止接觸染病的禽類，如雞、鴨；發(fā)現(xiàn)禽流感患者應(yīng)立即隔離觀察，將接觸人群降到最低限度；在禽流感疫區(qū)直接接觸人員和職業(yè)人群要注意個(gè)人防護(hù)，衛(wèi)生部門要加強(qiáng)監(jiān)測工作；勤洗手，養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，戶內(nèi)保持良好的通風(fēng)；發(fā)現(xiàn)有類似流感病癥要及時(shí)就診。如何防范人感染禽流感改變雞、鴨、鵝共養(yǎng)模式改變豬、禽共養(yǎng)模式改變一些飲食習(xí)慣，如吃軟黃蛋、帶血白斬雞等。謝謝111111111看看123456男女男男女7古古怪怪古古怪怪個(gè)8vvvvvvv9

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