醫(yī)學資料 白色念珠菌與抑菌效力檢查方法

白色念珠菌檢查方法

1、增菌培養(yǎng)取供試液10ml（相當于供試品1g、ml、10cm2）直接或處理后接種至適量（不少于100ml）的沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48～72小時。2、分離培養(yǎng)取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48小時（必要時延長至72小時）。1最新版整理ppt

結果判斷

白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的菌落呈乳白色偶見淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，培養(yǎng)時間稍久則菌落增大，顏色變深、質地變硬或有皺摺。若平板上無菌落生長或生長的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出白色念珠菌。2最新版整理ppt2、如平板上生長的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應挑選2～3個菌落分別接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48小時（必要時延長至72小時）。若平板上無綠色或翠綠色的菌落生長，判供試品未檢出白色念珠菌。3、若平板上生長的菌落為綠色或翠綠色，挑取相符或疑似的菌落接種于1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24～48小時。取培養(yǎng)物進行染色，鏡檢及芽管試驗。3最新版整理ppt4、芽管試驗挑取1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物，接種于加有一滴血清的載玻片上，蓋上蓋玻片，置濕潤的平皿內，置35～37℃、1～3h，置顯微鏡下觀察，可見到由孢子長出短小芽管。5、若上述疑似菌為非革蘭陽性菌，顯微鏡未見厚膜孢子、假菌絲、芽管，判供試品未檢出白色念珠菌。4最新版整理ppt

抑菌劑效力測定概述

1、抑菌劑效力檢查法系用于測定滅菌、非滅菌制劑中抑菌劑的活性，以評價最終產(chǎn)品的抑菌效力，同時也可用于指導生產(chǎn)企業(yè)在制劑研發(fā)階段抑菌劑的確定。2、如果藥物本身不含有充分的抗菌活性，那么應根據(jù)制劑特性（如水溶液制劑）添加適宜的抑菌劑，以防止制劑在正常儲存和使用過程中可能發(fā)生微生物污染和大量繁殖尤其多劑量包裝的制劑，避免因藥物微生物污染及對患者造成傷害。

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3、所有抑菌劑都具有一定的毒性，而且在貯存過程中其有效性有可能因藥物的活性成分提高或降低，為保證藥品的質量和用藥安全，添加防腐劑的量應根據(jù)制劑本身是否具抗菌活性，保持最低有效量并在藥品包裝上注明添加抑菌劑的名稱和數(shù)量。6最新版整理ppt

培養(yǎng)基

1、胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基2、胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基3、沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

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培養(yǎng)基的適用性檢查

菌種銅綠假單胞菌pseudomonasaeruginosa）金黃色葡萄球菌（staphycococcus）白色念球菌（Candidaalbicans）]黑曲霉（Aspergillusniger）大腸埃希菌（EscherichiaColi）

菌液的制備同控制菌培養(yǎng)基適用性檢查8最新版整理ppt

適用性檢查

取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌各50～100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注胰酷胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置30～35℃培養(yǎng)48小時，計數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置20～25℃培養(yǎng)72小時，計數(shù)；同時，用對應的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。9最新版整理ppt

結果判定

被檢培養(yǎng)基的菌落數(shù)與對照培養(yǎng)基菌落數(shù)相比大于70%，菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。10最新版整理ppt

抑菌劑效力測定

供試品分類為了達到試驗目的，根據(jù)供試品的給藥途徑和用途將供試品分為四類，以便標準的制定和執(zhí)行，但對于一些抗酸性制劑和含活生物制劑應考慮會降低有益菌的生物活性。見表11最新版整理ppt

表產(chǎn)品分類類別藥品

1類注射劑、其他非腸道制劑，包括乳劑、耳用制劑、無菌鼻用制劑及眼用制劑2類局部給藥制劑、非滅菌鼻用制劑及用于黏膜的乳劑3類口服非固體制劑（非抗酸制劑）4類非固體抗酸制劑12最新版整理ppt

菌種和菌液的制備同培養(yǎng)基適用性檢查

供試品接種1、抑菌劑效力可能受試驗用容器特征的影響，如容器的材質、形狀、體積及封口的方式等。因此，只要供試品每個包裝容器的裝量足夠試驗用，同時容器便于按無菌操作的接入試驗菌液、混合及取樣等，一般應將試驗菌直接接種于供試品原包裝容器中進行貯存。

13最新版整理ppt2、若因供試品的性狀或每個容器裝量等因素需將供試品轉移至無菌容器時，該容器的材質不得影響供試品的特性（如吸附作用），特別應注意不得影響供試品的PH，PH對抑菌劑的活性影響很大，同時容器的口徑大小應便于供試品的進出及混勻。14最新版整理ppt3、取包裝完整的供試品至少5份，直接接種試驗菌，或取適量供試品分別轉移至5個適宜的無菌容器中（若試驗菌侏數(shù)超過5株，應增加相應的供試品份數(shù)），每一容器接種一個試驗菌。15最新版整理ppt4、1、2、3類供試品1g或1ml接種菌量為105～106cfu，4類供試品中1g或1ml接種菌量為106～108cfu，接種菌液的體積不得超過供試品體積的0．5%～1%，充分混合，使供試品中的試驗菌均勻分布。5、將接種的供試品在試驗期間置20～25℃，避光貯存，貯存溫度的變化應盡可能控制在最小范圍，并防止被污染。16最新版整理ppt

存活菌數(shù)測定

由于供試品中含有抑菌活性，所以菌數(shù)測定方法應進行驗證。根據(jù)菌數(shù)測定結果，計算1ml(g)供試品各試驗菌所加的菌數(shù)及各間隔時間的菌數(shù)，并換算成lg值。17最新版整理ppt

測定細菌用胰酷胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，測定真菌用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

根據(jù)產(chǎn)品類型，在規(guī)定的接種時間，分別從上述每個容器中取供試ml(g)，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋成1：10、1：102、1：103等稀釋級。

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結果判斷

1、抑菌劑效力根據(jù)各間隔時間測定的菌數(shù)1.0lg值相對于初始值（0時菌數(shù)1.0lg值）減少程度進行評價（見表），試驗結果按有效數(shù)字的修約規(guī)則進舍，保留一位小數(shù)點。結果符合表，要求可判斷該產(chǎn)品抑菌效力符合規(guī)定。

19最新版整理ppt表防腐劑抗菌效力標準

1類供試品細菌7天菌數(shù)下降不少于1.0lg，14天菌數(shù)下降不少于3.0lg，第14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，到7、14、28天菌數(shù)均不增加。

2類供試品細菌14天菌數(shù)下降不少于2.0lg，14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，到14、28天菌數(shù)均不增加。

3類供試品細菌14天菌數(shù)下降不少于1.0lg，14天到28天菌數(shù)均不增加。真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。

4類供試品細菌，真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增長。注：1、表中“不增加”是指對前一個測定時間，試驗菌增加的數(shù)量不超過0.5lg。2、0時菌數(shù)供試品加入試驗菌，搖勻，立即取樣檢查，培養(yǎng)，計數(shù)，為0時20最新版整理ppt舉例1、氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液不含抑菌劑加入菌從初始到6h就開始無限增加，不具抑菌力，抗病毒口服液從初始到24h對數(shù)值無變化，72h后明顯降低，具一定的抑菌力。2、