KTB2401-CN-查爾酮異構(gòu)酶（CHI）活性檢測(cè)試劑盒（微量法）

查爾酮異構(gòu)酶（CHI）活性檢測(cè)試劑盒（微量法）原理查爾酮異構(gòu)酶（Chalconeisomerase，CHI）是第一個(gè)被認(rèn)識(shí)的黃酮類(lèi)化合物合成相關(guān)酶，也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類(lèi)化合物生物合成的限速酶。CheKine?查爾酮異構(gòu)酶（CHI）活性檢測(cè)試劑盒（微量法）可檢測(cè)植物組織樣本。在該試劑盒中，CHI催化查爾酮環(huán)化形成4,5,7-三羥基黃烷酮，通過(guò)測(cè)定381nm下的吸光度變化表示CHI的活性。包裝清單試劑盒組分規(guī)格儲(chǔ)存條件48T96TExtractionBuffer60mL120mL4℃，避光保存ReagentⅠ14mL28mL4℃ReagentIIPowder×1vialPowder×1vial4℃，避光保存注意：正式檢測(cè)前，建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。自備耗材·酶標(biāo)儀或可見(jiàn)光分光光度計(jì)（能測(cè)381nm處的吸光度）·96孔UV板或微量石英比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭、1.5mL離心管·水浴鍋、低溫離心機(jī)·去離子水·勻漿器或研缽（如果是組織樣本）試劑準(zhǔn)備ExtractionBuffer：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃避光保存。ReagentI：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃保存。ReagentII：臨用前配制；48T加入12mLReagentⅠ，96T加入24mLReagentⅠ，充分溶解。用不完的試劑4℃避光保存1個(gè)月。注意：ExtractionBuffer有刺激性氣味，ReagentII有毒，建議在通風(fēng)櫥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。樣本制備注意：建議使用新鮮樣本。如果不立即使用，可將樣品在-80℃下保存一個(gè)月。測(cè)定時(shí)，應(yīng)控制解凍的溫度和時(shí)間。室溫環(huán)境下解凍時(shí)，需在4h內(nèi)完成樣品解凍。植物組織：稱取約0.1g樣本，加入1mLExtractionBuffer，冰浴勻漿，8,000g，4℃離心10min，取上清液，置冰上待測(cè)。注意：如需測(cè)定蛋白濃度，推薦使用Abbkine貨號(hào)：KTD3002的蛋白質(zhì)定量試劑盒（Bradford法）進(jìn)行樣本蛋白質(zhì)濃度測(cè)定。實(shí)驗(yàn)步驟酶標(biāo)儀或可見(jiàn)光分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到381nm，可見(jiàn)光分光光度計(jì)用去離子水調(diào)零。操作表（下述操作在96孔UV板或微量石英比色皿中操作）：試劑測(cè)定孔（μL）樣本10ReagentII190充分混勻，記錄381nm處10s時(shí)吸光值A(chǔ)1，37℃反應(yīng)30min記錄30min10s時(shí)的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算ΔA=A2-A1。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果ΔA小于0.05可適當(dāng)加大樣本量。如果ΔA大于0.8，樣本可用ExtractionBuffer進(jìn)一步稀釋，計(jì)算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，或減少提取用樣本量。結(jié)果計(jì)算注意：我們?yōu)槟峁┑挠?jì)算公式，包括推導(dǎo)過(guò)程計(jì)算公式和簡(jiǎn)潔計(jì)算公式。兩者完全相等。建議以加粗的簡(jiǎn)潔計(jì)算公式為最終計(jì)算公式。CHI活性的計(jì)算按樣本蛋白濃度計(jì)算：酶活單位定義：每毫克蛋白在每毫升反應(yīng)體系中每小時(shí)A381變化0.05定義為一個(gè)酶活力單位。CHI(U/mgprot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷T÷0.05=800×ΔA÷Cpr按樣本鮮重計(jì)算：酶活單位定義：每克樣本在每毫升反應(yīng)體系中每小時(shí)A381變化0.05定義為一個(gè)酶活力單位。CHI(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T÷0.05=800×ΔA÷WV反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。結(jié)果展示以下數(shù)據(jù)僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。Figure1.本試劑盒測(cè)定綠蘿葉子和胡蘿卜中CHI的活性。相關(guān)產(chǎn)品CatalogNo.ProductNameKTB3030CheKine?乙醇脫氫酶（ADH）活性檢測(cè)試劑盒（微量法）KTB1560CheKine?酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）活性檢測(cè)試劑盒（微量法