食品微生物 實驗四 水產(chǎn)品中副溶血型弧菌的檢測學(xué)習(xí)資料

實驗四、水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的檢測

主要包括霍亂弧菌、副溶性弧菌和創(chuàng)傷弧菌。大多數(shù)弧菌源于海洋，是嗜鹽菌，嗜溫性。預(yù)防措施：徹底烹調(diào)或預(yù)煮，并防止交叉污染控制原料收購產(chǎn)品的冷藏適宜

致病性弧菌：弧菌屬（Vibrio）弧菌是一大群菌體短小，彎曲成弧形的革蘭陰性菌形態(tài)與染色涂片中呈穿梭樣運動非?；顫娨后w中排列整齊呈魚群狀革蘭染色陰性弧型或逗點狀，單鞭毛霍亂弧菌（V.cholerae）培養(yǎng)特性耐堿不耐酸在pH8.8~9.0的堿性蛋白胨水堿性瓊脂平板上生長良好抗原構(gòu)造與分型根據(jù)O抗原不同，現(xiàn)已有155個血清群，其中O1群、O139群引起霍亂。根據(jù)表型差異，O1群霍亂弧菌的每一個血清型，還可分為2生物型：古典生物型，ElTor生物型ElTor生物型和其它非01群霍亂弧菌，在外環(huán)境中的生存力較古典型為強。不耐酸，在正常胃酸中僅能存活4分鐘。水中存活長，河水、井水、海水中1-3周。怕熱，100℃1-2分鐘死亡。抵抗力：霍亂腸毒素:致病物質(zhì)激活GS，使細(xì)胞內(nèi)cAMP水平升高，主動分泌Na+、K+、HCO3—和水，導(dǎo)致重的腹瀉與嘔吐B亞單位A亞單位與小腸粘膜上皮細(xì)胞GM1神經(jīng)節(jié)苷脂受體結(jié)合，介導(dǎo)A亞單位進(jìn)入細(xì)胞（結(jié)合亞單位）（毒性亞單位）鞭毛運動鞭毛、菌毛普通菌毛有助于細(xì)菌穿過腸粘膜表面粘液層而接近腸壁上皮細(xì)胞是細(xì)菌定居于小腸所必須的因子免疫性：感染霍亂弧菌后，機體可獲得牢固免疫力

劇烈腹瀉和嘔吐（米泔水樣腹瀉物），大量水分和電解質(zhì)喪失，低容量性休克及心力不齊和腎衰竭（死亡率高達(dá)60%）烈性腸道傳染病，為我國的甲類法定傳染病傳播途徑主要是通過污染的水源或食物經(jīng)口攝入所致疾病傳染源臨床表現(xiàn)霍亂病人、無癥狀感染者上吐下瀉副溶血性弧菌的生物學(xué)特性雷同于其它引起人類感染的弧菌抵抗力：不耐熱，90

C1分鐘即被殺死不耐酸，50%食醋中1分鐘死亡嗜鹽（halophilic）在培養(yǎng)基中以含3.5%NaCl生長最為適宜神奈川現(xiàn)象（Kanagawaphenomenon）在“我妻瓊脂平板”上產(chǎn)生溶血現(xiàn)象所致疾病食物中毒傳播途徑：烹飪不當(dāng)?shù)暮．a(chǎn)品、鹽腌制品或生熟不分所傳播潛伏期5~72小時，可從自限性腹瀉至中度霍亂樣病癥免疫性：病后免疫力不強，可重復(fù)感染該菌還可引起淺表創(chuàng)傷感染、敗血癥等致病性防治治療可用抗菌藥物食品衛(wèi)生管理副溶血性弧菌的檢測SN0173-92《出口食品副溶血性弧菌檢驗方法》

GB/T4789.7-2008副溶血性弧菌是一種海洋細(xì)菌，主要來源于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產(chǎn)品。此菌對酸敏感，在普通食醋中5分鐘即可殺死；對熱的抵抗力也較弱。副溶血性弧菌食物中毒多發(fā)生在6~10月，海產(chǎn)品大量上市時。中毒食品主要是海產(chǎn)品，其次為咸菜、熟肉類、禽肉、禽蛋類，約有半數(shù)中毒者為食用了腌制品后。中毒原因主要是烹調(diào)時未燒熟煮透或熟制品被污染。中毒表現(xiàn)：進(jìn)食被副溶血性弧菌污染的食物后10小時左右出現(xiàn)上腹部陣發(fā)性絞痛、腹瀉，多數(shù)患者在腹瀉后出現(xiàn)惡心、嘔吐，腹瀉多為水樣便，重者為黏液便和黏血便。嘔吐、腹瀉嚴(yán)重，失水過多者可引起虛脫并伴有血壓下降。大部分病人發(fā)病后2~3天恢復(fù)正常，少數(shù)嚴(yán)重病人由于休克、昏迷而死亡。緊急處理：發(fā)生中毒后要立即停止食用可疑中毒食品，并到醫(yī)院醫(yī)治。副溶血性弧菌對氯霉素敏感。嘔吐、腹瀉嚴(yán)重者要補充水和鹽。中毒預(yù)防：調(diào)查顯示，加工海產(chǎn)品的案板上副溶血弧菌的檢出率為87.9%。因此，對加工海產(chǎn)品的器具必須嚴(yán)格清洗、消毒。海產(chǎn)品一定要燒熟煮透，加工過程中生熟用具要分開。烹調(diào)和調(diào)制海產(chǎn)品拼盤時可加適量食醋。食品燒熟至食用的放置時間不要超過4個小時。03年共采集41份魚蝦標(biāo)本，檢出副溶血性弧菌24份，檢出率為58.58%。其中魚類中副溶血性弧菌的檢出率為42.86%（9/21）；蝦類副溶血性弧菌檢出率為75%（15/20）。在三份市場活蝦的副溶血性弧菌的污染量達(dá)≥24000MPN/100g、15000和11000MPN/100g。監(jiān)測結(jié)果表明主要腸道病原菌的菌相為副溶血性弧菌，占總病原菌的85.65%。顯示目前我省城市居民腸道病原菌以弧菌為主浙江CDC系統(tǒng)2003年海水產(chǎn)品副溶血性弧菌定量檢測l

樣品制備按照SNO173-92、GB標(biāo)準(zhǔn)或其他標(biāo)準(zhǔn)制備l

準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)菌株l

培養(yǎng)基：

1、30g/L氯化鈉稀釋液

2、60g/L氯化鈉蛋白胨水(PW)3、氯化鈉多粘菌素B肉湯(SPB)

4、硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉、膽鹽、蔗糖瓊脂(TCBS)5、氯化鈉三糖鐵瓊脂(TSI)

6、嗜鹽性試驗用胰胨水(TB)7、胰胨大豆瓊脂斜面(TSA)8、靛基質(zhì)試驗用培養(yǎng)基(I)

9、氨基酸試驗用培養(yǎng)基10、V-P半固體瓊脂(VP)11、糖類分解試驗用培養(yǎng)基

12、42℃生長試驗用培養(yǎng)基13、O/F試驗用培養(yǎng)基(HLGB)14、神奈川現(xiàn)象試驗用我妻氏瓊脂(WA)一、實驗?zāi)康囊罅私馐称返馁|(zhì)量與副溶血性弧菌檢驗的意義。掌握副溶血性弧菌的生物學(xué)特性。掌握食品中副溶血性弧菌檢驗的方法和技術(shù)。二、實驗原理副溶血性弧菌是分布極廣的海洋細(xì)菌，有嗜鹽性。常存在于近海海水、海底沉積物、海產(chǎn)品（如魚類、貝類）及鹽漬食品中。是夏秋季節(jié)沿海地區(qū)食物中毒和急性腹瀉主要病原菌。本菌對酸敏感，不耐熱。一般在食醋中5分鐘加熱56度30分鐘即死亡，在淡水中生存不超過2日，但在海水中能存活47天以上。人因食用未煮熟的海產(chǎn)品或污染本菌的鹽漬食物（如蔬菜、肉、蛋類等）而受感染。副溶血性弧菌是革蘭氏陰性桿菌，無芽胞，無夾膜，有鞭毛，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中加入適量氯化鈉即可生長，對副溶血性弧菌的檢驗及鑒定過程并不復(fù)雜，關(guān)健是樣品的采集和及時送檢，若不能及時送檢，千萬不能放冰箱保存，因其不耐低溫。最好將樣本放鹼性蛋白胨水或卡布運送培養(yǎng)基內(nèi)。三、試劑和儀器（一）最先準(zhǔn)備的器材規(guī)格名稱 數(shù)量 用途1、500ml三角瓶1個 制3.%氯化鈉堿性蛋白胨2、250ml三角瓶3個 制培養(yǎng)基3、15×150mm試管7支 制3%氯化鈉三糖鐵培養(yǎng)基4、直徑為90mm平皿 4套 制TCBS等平板5、1ml移液管 2支6、10ml移液管2支7、250ml量筒 1支（二）應(yīng)滅菌的其它器材剪刀1把 不銹鋼湯匙1把 稱量紙適量（三）應(yīng)準(zhǔn)備的培養(yǎng)基和試劑培養(yǎng)基總量 所用容器1.3.5%滅菌鹽水： 8瓶225ml/瓶500ml三角瓶2.氯化鈉結(jié)晶紫增菌液：8瓶100ml/瓶250ml三角瓶3.氯化鈉蔗糖瓊脂2瓶150ml/瓶 250ml三角瓶4.選擇性瓊脂： 2瓶150ml/瓶 250ml三角瓶5.TCBS瓊脂：2瓶150ml/瓶250ml三角瓶6.3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂：7支6ml/支50ml（300）15×150mm試管TCBS,SS平板（一）操作步驟1.分離培養(yǎng)：首先稱取樣品25g，加225mL3.5％滅菌鹽水，用均質(zhì)器打碎或用乳缽磨碎，接種氯化鈉瓊脂平板和嗜鹽性瓊脂平板各一個，同時取10mL加入100mL增菌液中，放37℃8~16h培養(yǎng)后，涂上述平板進(jìn)行分離，37℃培養(yǎng)18~24h取出觀察，挑取可疑菌落，轉(zhuǎn)種3.5％氯化鈉三糖鐵斜面，37℃、24h觀察結(jié)果。2.涂片鏡檢：將三糖鐵培養(yǎng)基上反應(yīng)可疑者即底層變黃（葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）、上層斜面不變（乳糖、蔗糖不分解）、有動力、不產(chǎn)生硫化氫，進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢形態(tài)。3.嗜鹽性試驗：將上述可疑培養(yǎng)物分別接種不同含量的鹽胨水（0％，3％，7％，10％）于37℃24h培養(yǎng)后觀察生長情況，在無鹽和10％鹽的胨水中不生長，在3％和7％鹽的胨水中生長良好者，繼續(xù)進(jìn)行下列有關(guān)試驗。4.生化試驗：分別接種下列各類生化培養(yǎng)基，葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甲基紅、靛基質(zhì)、V-P，賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸、硫化氫及溶血性試驗，放37℃培養(yǎng)，除V-P、靛基質(zhì)和甲基紅試驗培養(yǎng)48h后加試劑觀察外，其他均在24h觀察結(jié)果。5.動物試驗：將上述符合各類反應(yīng)的副溶血性弧菌，接種3.5％氯化鈉胨水，經(jīng)37℃、16~18h培養(yǎng)后，小鼠腹腔注射0.3mL，觀察2~3d，將死亡小鼠進(jìn)行解剖作分離培養(yǎng)。GB/T4789.7-2008標(biāo)準(zhǔn)1．3％氯化鈉堿性蛋白陳水成分:蛋白胨10g氯化鈉30g蒸餾水1000mlPH8.5士0.2

制法：將上述成分混合，121攝氏度高壓滅菌10min。2．3％氯化鈉胰蛋白胨大豆〔TSA）瓊脂成分:胰蛋白胨15.0g大豆蛋白胨5.0g氯化鈉30.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000ml

制法：將上述成分混合，加熱并輕輕攪拌至溶解，121攝氏度高壓滅菌15mon，調(diào)節(jié)PH至7.3士0.2。3．3％氯化鈉三糖鐵（TSI）瓊脂）成分：蛋白胨15.0g月示蛋白胨5.0g牛肉膏3.0g酵母浸膏3.0g氯化鈉30.0g乳糖10.0g蔗糖10.0g葡萄糖1.0g硫酸亞鐵0.2g苯酚紅0.024g

硫代硫酸鈉0.3g瓊脂12.0g水1000ml

制法：調(diào)節(jié)PH，使滅菌后為7.4士0.2。分發(fā)到適當(dāng)容量的試管中。121攝氏度高壓滅菌15min，制成斜面，斜面長4cm—5cm培養(yǎng)基（一）氯化鈉結(jié)晶紫增菌液

成分：蛋白胨 20g氯化鈉 40g

0.01％結(jié)晶紫溶液 5mL蒸餾水 1000mLpH9.0

制法：除結(jié)晶紫外其他按上述成分配好，加熱溶解，校正pH，加熱煮沸，再加入結(jié)晶紫溶液，混合分裝試管，121℃高壓滅菌15min。（二）氯化鈉蔗糖瓊脂

成分：蛋白胨 10g牛肉膏 10g氯化鈉 50g蔗糖 10g瓊脂 18g

0.2％溴麝香草酚藍(lán)溶液20mL蒸餾水 1000mL

pH7.8 制法：將牛肉膏、蛋白胨、蔗糖及氯化鈉溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，加熱溶解，加入指示劑，分裝燒瓶150mL，121℃高壓滅菌15min備用。（三）嗜鹽菌選擇性培養(yǎng)基

成分：蛋白胨 20g氯化鈉 40g瓊脂 17g

0.01％結(jié)晶紫溶液 5mL蒸餾水 1000mL

pH8.7

制法：除結(jié)晶紫和瓊脂外，其他按上述成分配好，校正pH，加入瓊脂，加熱溶解，再加結(jié)晶紫溶液，分裝燒瓶，每瓶150mL。（四）3.5％氯化鈉三糖鐵瓊脂成分：蛋白胨 20g牛肉膏 5g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化鈉 35g硫酸亞鐵銨 0.2g硫代硫酸鈉 0.2g瓊脂 12g酚紅 0.025g蒸餾水 1000mL

pH7.4

制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，加熱煮沸使瓊脂溶化，加入0.2％酚紅溶液12.5mL，搖勻，分裝試管，121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面?zhèn)溆谩?.5%滅菌鹽水：35g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中，校正pH7.0，121℃15min高壓滅菌。TCBS硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉、膽鹽、蔗糖瓊脂

酵母粉5.0g

蛋白胨10.0g

氯化鈉10.0g

檸檬酸鈉10.0g

硫代硫酸鈉10.0g

膽酸鈉3.0g

牛膽汁粉5.0g

蔗糖20.0g

檸

檬酸鐵1.0g

瓊脂18.0g

溴麝香草酚藍(lán)0.04g

麝香草酚藍(lán)0.04g

蒸餾水1000mL

最終pH8.6±0.1酵母粉提供B族維生素；蛋白胨提供氮源和氨基酸；氯化鈉維持滲透壓；檸檬酸鈉、硫代硫酸鈉和高PH值腸桿菌科的細(xì)菌生長；膽酸鈉和牛膽汁粉主要抑制革蘭氏陽性菌生長；瓊脂是凝固劑；溴麝香草酚藍(lán)和麝香草酚藍(lán)是PH值指示劑這些指示劑是經(jīng)不起高壓滅菌的；副溶血弧菌不分解蔗糖不變色，在此培養(yǎng)基上生長呈藍(lán)綠色菌落，霍亂弧菌分解蔗糖產(chǎn)酸，菌落為黃色。制法：將上述成分加蒸餾水至1000mL，混合，使全部溶解，校正pH為8.6，加熱煮沸，不需高壓滅菌，傾注平皿15~20mL。待用培養(yǎng)基（五）氯化鈉血瓊脂（我妻氏培養(yǎng)基）成分：酵母膏 3g蛋白胨 10g氯化鈉 70g磷酸氫二鈉 5g甘露醇 10g結(jié)晶紫 0.001g瓊脂 15g蒸餾水 1000mL制法：調(diào)pH8.0，加熱30min（不必高壓），待冷至45℃左右時，加入新鮮人或兔血（5％~10％），混合均勻，傾注平皿（六）嗜鹽性試驗培養(yǎng)基成分：蛋白胨 2g氯化鈉 按不同量加入蒸餾水 100mL

pH7.7（七）3.5％氯化鈉生化試驗培養(yǎng)基成分：牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化鈉 35g磷酸氫二鈉 2g

0.2％溴麝香草酚藍(lán)溶液 12mL蒸餾水 1000mL

pH7.7

制法：將上述成分配好后，根據(jù)所需的糖發(fā)酵管分別加入各種糖類，葡萄糖發(fā)酵管可按0.5％葡萄糖加入后，分裝有小倒管的試管內(nèi)，121℃高壓滅菌15min。其他培養(yǎng)基可分裝為每瓶100mL，121℃高壓滅菌15min，另將各糖類分別配好10％溶液，同時高壓滅菌后，取5mL糖液，加入100mL培養(yǎng)基內(nèi)，以無菌操作分裝小試管。（八）葡萄糖食鹽胨水（MR-VP試驗用）成分：多胨 5g葡萄糖 5g磷酸氫二鉀 5g氯化鈉 30g制法：加入1000mL蒸餾水，振搖加熱，使全部溶解，冷卻后分裝小試管，121℃高壓滅菌15min。（九）食鹽胨水（靛基質(zhì)試驗用）成分：蛋白胨 20g氯化鈉 30g蒸餾水 1000mL

pH7.4

制法：按上述分配制，分裝小試管，121℃高壓滅菌15min。（十）運動性試驗培養(yǎng)基成分：牛肉膏 3g蛋白胨 10g氯化鈉 30g瓊脂 4g制法：將全部成分加入1000mL蒸餾水，加熱溶解，分裝試管，121℃15min高壓滅菌，最終pH7.4。樣品制備1.冷凍樣品應(yīng)在45℃以下不超過15min或在2～5℃不超過18h解凍。若不能及時檢驗,

應(yīng)放于－15℃左右保存；非冷凍而易腐的樣品應(yīng)盡可能及時檢驗,若不能及時檢驗,應(yīng)置于6～10℃冰箱保存,在24h內(nèi)檢驗。2.取樣:以無菌操作進(jìn)行。

2.1魚類:取魚體不同部位。

2.2貝類:取內(nèi)臟或含內(nèi)臟的全部貝肉；如為帶殼貝類,則應(yīng)先在清潔的流水中洗刷凈外殼,然后以無菌操作打開貝殼,取出內(nèi)臟或含內(nèi)臟的全部貝肉和貝液。

2.3甲殼類:取包括鰓及腸的部分或整體。

3.以無菌操作稱取25g檢樣放于均質(zhì)杯中,以滅菌剪刀充分剪碎。加35

g/L氯化鈉稀釋水225mL,均質(zhì)(8000

r/min)1min,使成1:10稀釋液。

用10mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液10mL,注入裝有100mL氯化鈉結(jié)晶紫增菌液。37℃培養(yǎng)18～24h。

氯化鈉結(jié)晶紫增菌液如有菌生長,則以3mm直徑接種環(huán)分別取一環(huán)菌液,劃線于氯化鈉蔗糖瓊脂、選擇性瓊脂、TCBS平板上。

37℃培養(yǎng)18～24h。副溶血性弧菌在蔗糖瓊脂(TCBS)平板上的典型菌落呈圓形,邊緣整齊、濕潤、稍混濁、半透明,多數(shù)具尖心、斗笠狀,藍(lán)綠色菌落,直徑2～4mm。增菌培養(yǎng)和分離

副溶血性弧菌在TCBS上霍亂弧菌在TCBS上TCBS瓊脂質(zhì)控菌株菌株編號生長情況其它特征霍亂弧菌非O1群HB081127A-1良好黃色大菌落，H2S陰性普通變形桿菌CMCC49027良好中心黑色邊緣黃色，H2S陽性副溶血性弧菌ATCC17802良好綠色大菌落溶澡弧菌ATCC17749良好黃色菌落梅氏弧菌HB081108A良好綠色小菌落大腸埃希氏菌ATCC25922抑制

/金黃色葡萄球菌ATCC25923抑制

/1在蔗糖瓊脂(TCBS)平板上如出現(xiàn)典型或可疑菌落,每個平板至少挑取兩個菌落,每個菌落分別順次接種到下列培養(yǎng)基進(jìn)行鑒別試驗。

1.1無鹽胰胨水。

1.230g/L氯化鈉胰胨水。

1.3氯化鈉三糖鐵瓊脂:先穿刺后劃線。

237℃培養(yǎng)18～24h。

生化鑒定三糖鐵（TSI）瓊脂試驗本試驗可同時觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。a.uninoculated

b.littlechange/alkaline/-/-

c.alkaline/acid/-/+

d.acid/acid/+/+

e.acid/acid/+/-

slantcolor/buttcolor/gasproduction/hydrogensulfideproduction3選取在氯化鈉三糖鐵斜面上產(chǎn)堿,在底層產(chǎn)酸,不產(chǎn)氣,不產(chǎn)硫化氫；在無鹽胰胨水中幾乎不生長,在30

g/L氯化鈉胰胨水中生長旺盛的菌株進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢,副溶血性弧菌為革蘭氏陰性,呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài),兩端濃染、無芽胞。如符合,

繼續(xù)進(jìn)行以下生化鑒定。3.1嗜鹽性試驗:各取一環(huán)30g/L氯化鈉胰胨水培養(yǎng)物,分別接種到70g/L及100g/L氯化鈉胰胨水中,37℃培養(yǎng)18～24

h。

3.2細(xì)胞色素氧化酶試驗:取一環(huán)30g/L氯化鈉胰胨水培養(yǎng)物劃線到胰胨大豆瓊脂斜面上,37℃培養(yǎng)18～24h。

氧化酶（Oxidase）試驗氧化酶亦即細(xì)胞色素氧化酶，為細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶，氧化酶先使細(xì)胞色素C氧化，然后此氧化型細(xì)胞色素C再使對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。試驗方法：在瓊脂斜面培養(yǎng)物上或血瓊脂平板菌落上滴加試劑1~2滴，陽性者Kovacs氏試劑呈粉紅色~深紫色，Ewing氏改進(jìn)試劑呈藍(lán)色。陰性者無顏色改變。應(yīng)在數(shù)分鐘內(nèi)判定試驗結(jié)果。3.3靛基質(zhì)試驗:在6.1.2的30g/L氯化鈉胰胨水培養(yǎng)物中加靛基質(zhì)試劑后觀察反應(yīng)。

3.4賴氨酸脫羧酶試驗:由氯化鈉三糖鐵斜面以接種針取少許培養(yǎng)物接種到賴氨酸試驗用培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)18～24h。

3.5精氨酸雙水解酶試驗:按上項同樣操作,將培養(yǎng)物接種到精氨酸試驗用培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)18～24h。

3.6

V-P試驗:以接種針由氯化鈉三糖鐵斜面取少許培養(yǎng)物穿刺V-P半固體瓊脂,37℃培養(yǎng)18～24h。在加V-P試劑前應(yīng)先觀察動力。沿穿刺線周圍呈擴散性生長為動力陽性。

4副溶血性弧菌生化特性的判定及進(jìn)一步試驗如下。

靛基質(zhì)（Imdole）試驗?zāi)承┘?xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。V-P試驗?zāi)承┘?xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V－P（+）反應(yīng)。鑒定程序生化項目反應(yīng)初篩氯化鈉三糖鐵

斜面產(chǎn)堿底層產(chǎn)酸,不產(chǎn)氣硫化氫陰性嗜鹽性

無鹽胰胨水幾乎不生長30g/L氯化鈉胰胨水生長旺盛生化鑒別70

g/L氯化鈉胰胨水明顯生長100g/L氯化鈉胰胨水幾乎不生長靛基質(zhì)陽性V-P陰性動力陽性細(xì)胞色素氧化酶陽性賴氨酸脫羧酶陽性精氨酸雙水解酶陰性擴大生化鑒別42℃生長陽性蔗糖不分解O/F試驗發(fā)酵型4.1如所分離的菌株符合表1特性,報告結(jié)果。

4.2如表1生化項目(擴大生化試驗項目除外)中,僅有一項生化試驗不符合時,按以下步驟做進(jìn)一步鑒定

4.2.1蔗糖分解試驗,42℃生長試驗,O/F試驗。如仍符合副溶血性弧菌特性,可按第7章報告結(jié)果,如其中有一項不符合,即可排除。

與其它弧菌的鑒別：試驗副溶血性弧菌溶藻膠

弧菌鰻弧菌創(chuàng)傷

弧菌河弧菌麥?zhǔn)匣【人畾鈫伟愔举R鄰

單胞菌TCBS(藍(lán)綠色菌落)+--+---+42℃生長++-

vv--鹽耐受性試驗(生長)

0％氯化鈉------++60g/L氯化鈉++++++--80g/L氯化鈉++v-+v--100g/L氯化鈉-+------賴氨酸脫羧酶++-+-v-+精氨酸雙水解酶--v-++v+鳥氨酸脫羧酶+v-v---v蔗糖發(fā)酵-++-++v-乳糖發(fā)酵---+-vvv甘露醇發(fā)酵+++v+++-阿拉伯糖發(fā)酵+---+-v-V-P試驗-+v--+v-報告結(jié)果

生化試驗符合副溶血性弧菌特性的菌株,按增菌培養(yǎng)陽性管數(shù),應(yīng)用表3(3管法),查出每100

g樣品中的副溶血性弧菌MPN值。檢驗結(jié)果報告為每100g樣品中副溶血性弧菌的最近似值為××個。

陽性管數(shù)MPN陽性管數(shù)MPN0.10.010.0010.10.010.001000000000000000000001111222233330123012301230123<336936.19.2126.29.312169.41316