微生物生物學(xué)-李穎 08實(shí)驗(yàn)八 學(xué)習(xí)資料

實(shí)驗(yàn)八大分子物質(zhì)的水解及營(yíng)養(yǎng)元素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.通過(guò)了解不同細(xì)菌對(duì)不同的生物大分子及含氮化合物的分解利用情況，認(rèn)識(shí)微生物代謝類(lèi)型多樣性。2.了解營(yíng)養(yǎng)元素對(duì)微生物生長(zhǎng)發(fā)育的影響。3.學(xué)習(xí)平板接種法及穿刺接種法。

微生物對(duì)大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解為小分子有機(jī)物才能被微生物吸收利用。如淀粉酶水解淀粉為小分子的糊精、雙糖和單糖；脂肪酶水解脂肪為甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白質(zhì)為氨基酸等。實(shí)驗(yàn)原理

淀粉水解實(shí)驗(yàn)卵磷脂水解實(shí)驗(yàn)

不同微生物分解利用生物大分子能力各有不同。只有能夠產(chǎn)生并分泌胞外酶的微生物才能利用大分子有機(jī)物。實(shí)驗(yàn)原理（續(xù)）

不同細(xì)菌對(duì)不同含氮化合物的分解利用能力、代謝途徑、代謝產(chǎn)物等不完全相同。有些細(xì)菌分解色氨酸產(chǎn)生吲哚

分解含硫氨基酸產(chǎn)生硫化氫

分解氨基酸產(chǎn)氨

微生物對(duì)含氮化合物的分解利用的生化反應(yīng)是菌種鑒定的重要依據(jù)。硫化氫產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)

氧化苯丙氨酸為苯丙酮酸實(shí)驗(yàn)原理（續(xù)）

微生物的生長(zhǎng)發(fā)育需要一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件，只有全面滿(mǎn)足以上要求時(shí)，微生物才能進(jìn)行正常的生命活動(dòng)。影響微生物生長(zhǎng)、繁殖的主要營(yíng)養(yǎng)元素主要包括碳、氫、氧、氮、磷、硫等，個(gè)別微生物還需要某些維生素和微量元素。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)將黑曲霉接種于缺乏不同營(yíng)養(yǎng)元素的培養(yǎng)基中，觀察它的生長(zhǎng)情況，確知幾種營(yíng)養(yǎng)元素對(duì)微生物生長(zhǎng)的作用。實(shí)驗(yàn)材料1.菌種：大腸桿菌（Escherichiacoli)

普通變形桿菌（Proteusvulgaris)

枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)

假單胞菌（Pseudomonassp.）

黑曲霉(Aspergillusniger)2.培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基細(xì)菌培養(yǎng)基產(chǎn)H2S半固體穿刺培養(yǎng)基

淀粉水解實(shí)驗(yàn)37℃倒置培養(yǎng)2天淀粉培養(yǎng)基

四種細(xì)菌平板點(diǎn)接種卵磷脂的水解2ml3~5ml注意：充分混勻

卵磷脂也稱(chēng)磷脂酰膽堿，系統(tǒng)名稱(chēng)1，2－二酰基－sn－甘油－3－磷酸膽堿。在蛋黃和大豆中含量特別豐富。吸管37℃倒置培養(yǎng)2天硫化氫產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)蛋白胨10g牛肉膏3g酵母浸膏3gNaCl5g硫酸亞鐵0.2g硫代硫酸鈉0.3g瓊脂12g蒸餾水1000mlpH7.2~7.4H2S+Fe2+=FeS含硫氨基酸：

胱氨酸半胱氨酸甲硫氨酸產(chǎn)硫化氫穿刺培養(yǎng)基穿刺接種37℃培養(yǎng)2天普通變形桿菌穿刺接種

用接種針下段挑取菌種（針必須挺直），自半固體培養(yǎng)基的中心垂直刺入半固體培養(yǎng)基中，直至接近試管底部，但不要穿透，然后沿原穿刺線(xiàn)將針退出，塞上試管塞，燒灼接種針。不同營(yíng)養(yǎng)元素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響培養(yǎng)基成分完全缺碳缺氮缺磷

蔗糖6ml0

6ml

6mlNH4NO33ml3ml

0

3mlKH2PO41ml1ml

1ml

0混合液1ml1ml

1ml

1ml蒸餾水4ml10ml

7ml

5ml15mlAspergillusniger室溫靜置培養(yǎng)一周后觀察菌膜C-N-P-實(shí)驗(yàn)材料分配情況四種細(xì)菌兩組一套黑曲霉一組一套淀粉培養(yǎng)基平板一人一個(gè)雞蛋1個(gè)LB培養(yǎng)基100ml0.85%生理鹽水10ml產(chǎn)硫化氫固體穿刺培養(yǎng)基一組3支蔗糖兩組一瓶NH4NO3

一組一管（10ml)KH2PO4

兩組一管(10ml)混合液兩組一管(10ml)蒸餾水