中藥制劑的含量測定技術-薄層掃描法

薄層掃描法

一、儀器工作原理（一）薄層色譜掃描法的基本原理薄層色譜掃描法的測定原理是用長寬可以調整的一束波長、強度固定的光，對薄層板上的斑點進行掃描，通過測量斑點或被斑點反射的光束的強度變化，求出待測組分含量。薄層掃描法可分為吸收薄層掃描法和薄層熒光掃描法。吸收薄層掃描測定法

是用可見-紫外光的單色光對薄層板上色譜斑點進行掃描，根據(jù)掃描獲得的吸光度隨展開距離變化的圖譜及積分數(shù)據(jù)進行定量的方法。根據(jù)測光的方式不同，吸收掃描測定法又分為透射法和反射法兩種。透射法是測定光透過供試品斑點后的吸收情況進行的定量方法。L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點

PD-檢測器透射法掃描

1.定義

薄層掃描法是供試品經薄層分離后,用一束波長、強度一定的紫外線或可見光對薄層板進行掃描，通過測定薄層板上的斑點對光的吸收強度或斑點經激發(fā)后所產生的熒光強度,將掃描得到的圖譜及積分數(shù)據(jù)進行定量的方法。

2.特點

設備簡單、操作方便、分離快速、靈敏度及分辨率高、顯色劑選擇范圍廣、適用于多組分及微量組分定量等。L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點

PD-檢測器反射法掃描

反射法是測定供試品斑點對光的反射情況進行的定量方法。薄層熒光掃描法是通過儀器對供試品吸收可見-紫外光后發(fā)射的熒光強度掃描得到的吸收光譜及積分數(shù)據(jù)，求出供試品含量的方法。熒光反射法掃描L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點

PD-檢測器當樣品量很少時，斑點中組分的濃度與熒光強度呈線性關系，可按公式計算：F=2.3K/IoECL或F=KC式F=2.3K/IoECL中：F為熒光強度；Io為入射光強度；C為濃度；E為吸收系數(shù)；K為常數(shù)（與熒光效率有關）；L為薄層厚度。

式F=KC中：C為濃度；K為2.3K/IoEL之積。在薄層熒光掃描法中，常用斑點熒光強度的積分值（色譜峰面積）代替公式中的F，斑點中組份的含量代替公式中的C進行計算。（二）薄層掃描儀的構造薄層掃描儀主要由主機（光源、單色器、供試品室、薄層板臺架、檢測器）及工作站組成。

1.光源

光源室能提供穩(wěn)定的、具有一定強度的所需波長范圍內的連續(xù)光源。包括紫外光源氘燈（200nm～370nm）；可見光源鎢燈（370nm～700nm）；熒光光源氙燈或汞燈（200nm～700nm），其中汞燈為線光源，可提供特征輻射光譜。2.單色光器

單色光器可以將光源發(fā)出的連續(xù)光分解為單色光。其主要由入射狹縫、出射狹縫、色散元件、平行光裝置（準直鏡）等部分構成。薄層掃描儀多采用光柵為色散元件。3.薄層板臺

包括薄層板臺架及驅動裝置。4.檢測器

檢測器是用來檢測和放大由供試品斑點透射、反射或發(fā)出熒光強度的裝置。5.工作站

具有設定儀器參數(shù)、控制儀器工作條件和信號采集、處理計算和打印輸出等功能的裝置。二、含量測定1.原理

薄層掃描法含量測定有外標法和內標法兩種方法，《中國藥典》僅采用外標法。2.類型

根據(jù)對照品標準曲線性質的不同，外標法又分為外標一點法和外標兩點法。選擇檢測方法

含量計算薄層掃描發(fā)含量測定操作步驟溶液的制備薄層板點樣展開掃描掃描波長對照品系統(tǒng)適用性實驗

測定方式

掃描方式

供試品三、含量計算

（1）外標一點法：標準曲線通過原點。計算公式：C=F1·A

（2）外標兩點法(隨行標準法)：標準曲線不通過原點。計算公式：C=F1·A+F2

由C1=F1·A1+F2C2=F1·A2+F2得結果判斷

將測定結果與藥品標準中的各品種項下標準進行對比，符合標準即為合格。注意事項

或四、案例

（一）靈寶護心丹的含量測定供試品溶液的制備對照品溶液的制備薄層掃描含量計算本品每1g含牛黃以膽酸（C24H40O5）計，不得少于2.5mg。靈寶護心丹的膽酸含量測定采用的是何種方法？供試品溶液是如何制備的？課堂互動（二）六味地黃膠囊中酒萸肉的含量測定供試品溶液的制備對照品溶液的制備薄層掃描含量計算本品每粒含酒萸肉以熊果酸（