《玉米紋枯病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程》

1DB36/XXXXX—XXXX玉米紋枯病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了玉米紋枯?。≧hizoctoniasolani）抗性鑒定技術(shù)的術(shù)語和定義、鑒定方法、病情調(diào)查、品種抗病性評價(jià)等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于江西省玉米品種對紋枯病的抗性鑒定與評價(jià)。2規(guī)范性引用文件NY/T1248.9玉米抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范，第9部分：紋枯病。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1自然誘發(fā)naturalinduction在適宜病害發(fā)生的環(huán)境和病原菌存在的條件下，病原菌借自然因素或間接傳播到寄主植物或器官，使其發(fā)病。3.2人工接種artificialinoculation采用人工方法將病原菌直接或間接接種到寄主植物的種子或根部，使其發(fā)病，并依據(jù)相關(guān)的抗性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，來區(qū)分品種的抗病性。4鑒定方法4.1自然病圃鑒定4.1.1病圃設(shè)定在玉米紋枯病常發(fā)區(qū)，選擇地勢平坦、土壤肥沃、肥力均勻、上年度玉米紋枯病發(fā)生嚴(yán)重的田塊設(shè)置病4.1.2播種2DB36/XXXXX—XXXX播種時(shí)間為每年的4月上旬~4月中旬。開溝做畦（壟），按畦面的寬度方向穴播。依據(jù)參鑒品種生育期，分期播種。各品種每小區(qū)播3行。每10個(gè)鑒定材料設(shè)1組已知抗病和感病對照材料（參見附錄B）。重復(fù)3次。每小區(qū)行長15m，行株距30cm~35cm×50cm。4.1.3病圃管理6片可見葉定苗，單穴單株。苗期追施適量復(fù)合肥，拔節(jié)期追施適量尿素。使用殺蟲劑及時(shí)防蟲。整個(gè)鑒定期間禁止使用殺菌劑。其余按大田常規(guī)生產(chǎn)管理。4.2人工接種鑒定4.2.1病圃設(shè)定在玉米紋枯病常發(fā)區(qū)，選擇地勢平坦、土壤肥沃、肥力均勻的田塊設(shè)置病圃。4.2.2播種播種時(shí)間為每年的4月上旬~4月中旬。開溝做畦（壟按畦面的寬度方向條播。依據(jù)參鑒品種生育期，分期播種。各品種每小區(qū)播3行。每10個(gè)鑒定材料設(shè)1組已知抗病和感病對照材料（參見附錄B）。重復(fù)3次。每小區(qū)行長10m，行株距30cm~35cm×50cm。4.2.3病圃管理6片可見葉定苗，單穴單株。苗期追施適量復(fù)合肥，拔節(jié)期追施適量尿素。使用殺蟲劑及時(shí)防蟲。整個(gè)鑒定期間禁止使用殺菌劑。其余按大田常規(guī)生產(chǎn)管理。4.2.4病原菌接種體制備將保存的玉米紋枯病菌接種于PDA斜面，25℃下活化培養(yǎng)3d左右。挑取菌苔接入麥粒培養(yǎng)基，25℃黑暗條件下擴(kuò)大繁殖5d左右（參見附錄B），至菌絲布滿麥粒備用。4.2.5接種時(shí)期玉米大喇叭口期進(jìn)行人工接種。4.2.6接種方法將長滿菌絲的麥粒接種于玉米倒數(shù)第三葉葉鞘內(nèi)側(cè)，每株接種麥粒2粒。接種后注意及時(shí)澆灌，保持土壤相對濕度不低于25%。5病情調(diào)查3DB36/XXXXX—XXXX鮮食玉米于鮮果穗采收期即吐絲后21d~25d（甜玉米吐絲后21d~23d，糯玉米吐絲后23d~25d籽粒玉米于乳熟末期（吐絲后40d左右采用全小區(qū)調(diào)查法進(jìn)行。病情分級標(biāo)準(zhǔn)見附錄A。6品種抗病性評價(jià)6.1評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品種抗感性根據(jù)田間自然病圃和人工接種的結(jié)果進(jìn)行綜合評價(jià)；以田間自然病圃單一方式鑒定品種的抗性，應(yīng)有不少于2次或不同年份的田間鑒定結(jié)果。以感病對照品種群體病情指數(shù)不低于55.57，作為評判田間自然病圃和人工接種鑒定結(jié)果有效性的標(biāo)準(zhǔn)。6.2病情調(diào)查劃分標(biāo)準(zhǔn)病情調(diào)查分級如下：表1玉米紋枯病病情分級標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)重度分級病癥特征描述0級：全株無病癥最下方果穗下第4葉鞘及其以下葉鞘發(fā)病最下方果穗下第3葉鞘及其以下葉鞘發(fā)病最下方果穗下第2葉鞘及其以下葉鞘發(fā)病最下方果穗下第1葉鞘及其以下葉鞘發(fā)病最下方果穗及其以上葉鞘發(fā)病6.3品種抗性分級標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)以下公式計(jì)算單株病情指數(shù)和群體病情指數(shù)：單株病情指數(shù)（DI）=[∑(病級值×該病級的病株數(shù))×100]/(病級最高值×調(diào)查總株數(shù))，群體病情指數(shù)=∑所有單株病情指數(shù)/調(diào)查總株數(shù)。依據(jù)各品種的群體病情指數(shù)，按照表1評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，確定品種的抗感性。表2玉米紋枯病抗性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)抗性表型分級標(biāo)準(zhǔn)高抗（HR）群體病情指數(shù)為0抗（R）0＜群體病情指數(shù)≤11.11中抗（MR）11.11＜群體病情指數(shù)≤33.33中感（MS）33.33＜群體病情指數(shù)≤55.56感（S）55.56＜群體病情指數(shù)≤77.78高感（HS）群體病情指數(shù)＞77.784DB36/XXXXX—XXXX（資料性附錄）玉米紋枯病菌培養(yǎng)基A.1馬鈴薯葡萄糖瓊膠培養(yǎng)基（PDA）制備去皮馬鈴薯200g，葡萄糖或蔗糖10g，瓊膠17g~20g，蒸餾水1000mL。馬鈴薯切碎，加水適量煮沸30min，紗布過濾并加水定容至1000mL后，加入糖和瓊膠。加熱熔化后分裝，121℃下高壓滅菌20min。A.2麥粒培養(yǎng)基制備麥粒浸泡至籽粒略漲，裝入三角瓶，于121℃下高壓滅菌1h。5DB36/XXXXX—XXXX（資料性附錄）玉米紋枯病抗性鑒定對照材料B.1抗病對照材料昌7-2，選自昌單七號雜交種并改良，中抗玉米紋枯病。在江西抗性表現(xiàn)穩(wěn)定。B.2感病對照材料南60-1，為CML204改良自交系，高感玉米紋枯病。在江西感病性表現(xiàn)穩(wěn)定