TNAIA 0347-2024 黃芪中7種黃酮類物質(zhì)含量的測定 高效液相色譜法

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T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0347-2024黃芪中7種黃酮類物質(zhì)含量的測定高效液相色譜法Determinationof7flavanoidsinastragalusHighperformanceliquidchromatography2024-12-12發(fā)布 2024-12-31實施寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會 發(fā)布T/NAIA0347-2024T/NAIA0347-2024II前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會提出并歸口?；瘜W(xué)分析測試協(xié)會。霞、茍春林、張鋒鋒、王彩艷、陳翔、開建榮、張學(xué)玲、張小飛。T/NAIA0347-2024T/NAIA0347-2024PAGEPAGE1黃芪中7種黃酮類物質(zhì)含量的測定高效液相色譜法范圍本文件規(guī)定了黃芪中黃酮類物質(zhì)的液相色譜測定方法。本文件適用于黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、槲皮苷、木樨草苷、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷、金絲桃苷、芒柄花苷和芒柄花黃素的液相色譜法測定。本文件的方法檢出限：毛蕊異黃酮葡萄糖苷、金絲桃苷、芒柄花黃素的方法檢出限為0.075mg/kg，槲皮苷、木樨草苷、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷、芒柄花苷的方法檢出限為0.15mg/kg。規(guī)范性引用文件（有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法術(shù)語和定義本文件沒有需要規(guī)定的術(shù)語和定義。原理儀檢測和確證，外標(biāo)法定量。試劑與材料除非另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。乙腈（CH3CN）：色譜純。甲醇（CH3OH）：色譜純。磷酸（H3PO4）：毛蕊異黃酮葡萄糖苷（Calycosin-7-glucoside，CAS20633-67-4，純度≥98%）皮苷（quercitrinCAS522-12-398%）、木樨草苷（cynarosideCAS號5373-11-598%）、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷（kaempferol-3-O-rutinosideCAS號17650-84-9，純度≥98%）、金絲桃苷（Hyperoside，CAS482-36-0，純度≥98%）、芒柄花苷（Ononin，CAS號486-62-4，純度≥98%）和芒柄花黃素（formononetin，CAS號485-72-3，純度≥98%）的液相色譜法測定。標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：分別準(zhǔn)確稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、槲皮苷、木樨草苷、ft奈酚-3-O-10mg（10.0mL1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，0℃~4℃貯存。0.1%磷酸溶液（體積分?jǐn)?shù)）：1mL1000mL。微孔濾膜：0.22μm，有機(jī)相。離心管：50mL。儀器與設(shè)備液相色譜儀：配有紫外檢測器。6.2 0.01g0.0001g。高速萬能粉碎機(jī)：10000r/min。超聲波清洗機(jī)。離心機(jī)：4000r/min。渦旋混合器。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。分析步驟試樣的制備將試樣去除雜質(zhì)，60℃烘箱中烘干48h，用高速萬能粉碎機(jī)粉碎，四分法分取，過40目篩，置于密封袋中備用。試樣的提取2g（0.01g）50mL30mL甲醇，30min，放入離心機(jī)，4000r/min3min，過濾，再取殘渣加20mL25mL0.22μm待測定。同試樣進(jìn)行空白試驗，除不稱取樣品外，均按試樣步驟進(jìn)行。液相色譜參考條件a）色譜柱：C18柱，250mm×4.6mm（i.d），5μm，或性能相當(dāng)者；b）柱溫：40℃；流速：0.8mL/min；流動相：A0.1%磷酸溶液（5.6），B1；進(jìn)樣量：10.0μL。檢測波長：203nm。表1流動相及其梯度條件（VA+VB）時間(min)流速(mL/min)VA(%)VB(%)0.000.8901015.000.8752525.000.8653545.000.8455553.000.8257560.000.8901065.000.89010標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用甲醇將將7種黃酮標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液逐級稀釋得到濃度為0mg/L、0.5mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。依次由低到高進(jìn)行檢測，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。測定7.3給出的參考色譜條件，取標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品定容液（7.2）依次上機(jī)進(jìn)行測定，以色譜峰保留時間定性。定量采用外標(biāo)-校準(zhǔn)曲線法定量測定。保證所測樣品中組分的響應(yīng)值均在儀器的線性范圍內(nèi)。結(jié)果計算和表達(dá)試樣中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、槲皮苷、木樨草苷、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷、金絲桃苷、芒柄花苷和芒柄花黃素的含量按式（1）計算：式中：

X1000m1000

……（1）X——試樣中被測物殘留量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；——試樣溶液中被測物的含量，單位為毫克每升（mg/L）；V——試樣定容溶液體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。注：測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的10%。色譜圖標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品中7