2024-2025學(xué)年高二生物人教版選擇性必修3同步練習(xí) 實(shí)驗(yàn)微專題二 DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定

實(shí)驗(yàn)微專題二DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定一、實(shí)驗(yàn)原理1.DNA片段的擴(kuò)增PCR利用了DNA的熱變性原理，通過調(diào)節(jié)溫度來控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合。2.瓊脂糖凝膠電泳(1)帶電粒子：DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。(2)遷移動(dòng)力與方向：在電場的作用下，帶電分子會向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，這個(gè)過程就是電泳。(3)遷移速率：在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。(4)檢測：凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來。二、方法步驟三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1.為避免外源DNA等因素的污染，PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理。2.該實(shí)驗(yàn)所需材料可以直接從公司購買，緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在－20℃儲存。使用前，將所需試劑從冰箱拿出，放在冰塊上緩慢融化。3.在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時(shí)，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換。4.在進(jìn)行操作時(shí)，一定戴好一次性手套。5.PCR擴(kuò)增不能隨意加大試劑用量。四、關(guān)鍵點(diǎn)撥1.未出現(xiàn)擴(kuò)增條帶的主要原因(1)TaqDNA聚合酶失活。(2)引物出現(xiàn)質(zhì)量問題。(3)Mg2＋濃度過低。(4)變性時(shí)的溫度低，變性時(shí)間短。2.出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增條帶的主要原因(1)模板DNA出現(xiàn)污染。(2)引物特異性不強(qiáng)或形成引物二聚體。(3)Mg2＋濃度過高。(4)復(fù)性時(shí)的溫度過低等。例1(2022·天津一中高二期中)下列有關(guān)電泳的敘述，錯(cuò)誤的是()A.電泳是指帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程B.待測樣品中DNA分子的大小和構(gòu)象、凝膠的濃度等都會影響DNA在電泳中的遷移速率C.進(jìn)行電泳時(shí)，帶電分子會向著與其所帶電荷相同的電極移動(dòng)D.PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定答案C解析由于同性相斥、異性相吸，帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)，C錯(cuò)誤。例2用PCR方法檢測轉(zhuǎn)基因植株是否成功導(dǎo)入目的基因時(shí)，得到以下電泳圖譜，其中1號為DNA標(biāo)準(zhǔn)樣液(Marker)，10號為蒸餾水，PCR時(shí)加入的模板DNA如圖所示。據(jù)此作出的分析，不合理的是()A.PCR產(chǎn)物的分子大小在250～500bp之間B.3號樣品為不含目的基因的載體DNAC.9號樣品對應(yīng)植株不是所需的轉(zhuǎn)基因植株D.10號確定反應(yīng)體系等對結(jié)果沒有干擾答案B解析PCR過程中，可以通過設(shè)計(jì)特定的引物來擴(kuò)增特定的DNA片段，4～9號是轉(zhuǎn)基因植株，理論上應(yīng)包含目的基因，結(jié)合2號野生型和10號蒸餾水組的結(jié)果，推測包含目的基因的片段大小應(yīng)為250～500bp，A正確；3號PCR結(jié)果包含250～500bp片段，應(yīng)包含目的基因，B錯(cuò)誤；9號PCR結(jié)果