DB31 2010-2012 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定

DB上海市地方標(biāo)準(zhǔn)DB31/2010—2012上海市食品藥品監(jiān)督管理局IDB31/2010—2012本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B為資料性附錄。I1DB31/2010—2012食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于火鍋醬料、湯料、調(diào)味油和固體類調(diào)味粉等火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因、蒂巴因的測定。2原理樣品用水或鹽酸溶液分散均勻、乙腈提取后，經(jīng)鹽析分層，乙腈提取液用鍵合硅固相萃取吸附劑凈化，離心，液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，罌粟堿、那可丁和蒂巴因采用外標(biāo)法定量，嗎啡和可待因采用內(nèi)標(biāo)法定量。3試劑與材料除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1甲醇（CH3OH色譜純。3.2乙腈（CH3CN色譜純。3.3甲酸（HCOOH色譜純。3.6氫氧化鈉（NaOH）。3.7無水硫酸鎂（MgSO4研磨后在500℃馬弗爐內(nèi)烘5h，200℃時取出裝瓶，貯于干燥器中，冷卻后備用。3.8無水醋酸鈉（CH3COONa）。3.9乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）填料：粒度40～70μm。3.10C18填料：粒度40～50μm。3.11鹽酸溶液（0.1mol/L量取鹽酸（3.4）9mL，加水至1L，搖勻備用。3.12甲酸銨溶液（10mmol/L準(zhǔn)確稱取1.26g甲酸銨（3.5）溶解于適量水中，定容至2L，混勻后備用。3.13甲酸甲醇溶液（0.5量取甲酸（3.3）1mL，置于200mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻備用。3.14氫氧化鈉溶液（1mol/L準(zhǔn)確稱取40g氫氧化鈉（3.6）溶解于適量水中，定容至1L，混勻后備用。3.15鹽酸罌粟堿、嗎啡、那可丁、磷酸可待因和蒂巴因標(biāo)準(zhǔn)品：純度不少于98％。3.16內(nèi)標(biāo)物質(zhì)：嗎啡-D3，可待因-D3。2DB31/2010—20123.17標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.0mg/mL精密稱取鹽酸罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和磷酸可待因標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲酸－甲醇溶液（3.13）配制成罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和可待因的濃度均為1.0mg/mL的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液。4℃避光保存，有效期三個月。3.18混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液：精密吸取濃度為1.0mg/mL的罌粟堿、那可丁、蒂巴因儲備液各1.0mL和濃度為1.0mg/mL的嗎啡、可待因儲備溶液各5mL于20mL容量瓶中，用乙腈（3.2）定容至刻度，搖勻，即得含罌粟堿、那可丁、蒂巴因濃度為50μg/mL和嗎啡、可待因濃度為250μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。4℃避光保存，有效期三個月。3.19同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液（5.0μg/mL分別精密吸取內(nèi)標(biāo)物質(zhì)（3.16）適量，用甲醇（3.1）配制成嗎啡-D3，可待因-D3的濃度均為5.0μg/mL的溶液。4℃避光保存，有效期三個月。3.20標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：分別精密吸取上述混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液（3.18）和同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液（3.19）250ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，內(nèi)標(biāo)溶液濃度均為50.0ng/mL。臨用新配。3.21甲酸乙腈溶液（0.1量取甲酸（3.3）1mL，加乙腈（3.2）稀釋至1L，搖勻，過濾。3.22甲酸甲酸銨溶液（0.1量取甲酸（3.3）1mL，加甲酸銨溶液（3.12）稀釋至1L，搖勻，3.24pH試紙：pH1～14。4儀器和設(shè)備4.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：帶電噴霧離子源（ESI）。4.2分析天平：感量為0.00001g和0.01g。4.3離心機(jī)：≥10000轉(zhuǎn)/分鐘。4.4超聲波清洗器。4.5渦旋混合器。5分析步驟5.1提取5.1.1火鍋醬料、湯料、調(diào)味油稱取2g試樣（精確至0.01g）于50mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入150μL同位素內(nèi)標(biāo)工作液（3.19再加入5mL水，振搖使分散均勻（醬類樣品必要時可加10mL水加入15mL乙腈（3.2渦旋振蕩1min，加入6g無水硫酸鎂（3.7）和1.5g無水醋酸鈉（3.8）的混合粉末（或以相當(dāng)?shù)氖惺凵唐反嫜杆僬駬u，渦旋振蕩1min，以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，取上清液待凈化。5.1.2固體類調(diào)味粉稱取2g試樣（精確至0.01g）于50mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入150μL同位素內(nèi)標(biāo)工作液（3.19再加入5mL鹽酸溶液（3.11）溶液，超聲處理30分鐘，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值呈中性，加入15mL乙腈（3.2渦旋振蕩1min，加入6g無水硫酸鎂（3.7）和1.5g無水醋酸鈉（3.8）的混合粉末（或以相當(dāng)?shù)氖惺凵唐反嫜杆僬駬u，渦旋振蕩1min，以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，取上清液待凈化。3DB31/2010—20125.2凈化稱取50mg(±5mg）PSA（3.9100mg(±5mg）無水硫酸鎂（3.7100mg(±5mg）C18粉末（3.10）置于2mL聚四氟乙烯具塞離心管中(或以相當(dāng)?shù)氖惺凵唐反嬉迫?.5mL上清液（5.1）至此離心管中，渦旋混合1min，以10000轉(zhuǎn)/分鐘離心2min，移取上清液，0.22μm濾膜（3.23）過濾，取濾液待測。6測定6.1參考液相色譜條件a)色譜柱：BEHHILIC（粒徑1.7μm，2.1×100mm），或相當(dāng)者；b)進(jìn)樣量：5μL；c)柱溫：40℃;d)流速：0.3mL/min；e）流動相：A相（3.21）：含0.1%甲酸的乙腈，B相（3.22）：含0.1%甲酸的10mmol/L甲酸銨溶液，按表1進(jìn)行梯度洗脫。表1梯度洗脫程序6.2參考質(zhì)譜條件a)離子化方式：電噴霧電離；b)掃描方式：正離子掃描；c)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮氣；使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求，參考條件見附錄A。6.3定性測定在相同實驗條件下測定標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，如果樣品溶液中檢出的色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中的某種組分色譜峰的保留時間一致，樣品溶液的定性離子相對豐度比與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的定性離子相對豐度比進(jìn)行比較時，相對偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在該組分。表2定性確定時相對離子豐度的最大允許偏差>506.4定量測定4DB31/2010—2012在儀器最佳狀態(tài)下，對標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣，以罌粟堿、那可丁和蒂巴因的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，罌粟堿、那可丁和蒂巴因的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，外標(biāo)法定量；以嗎啡和可待因的峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)，嗎啡和可待因的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，內(nèi)標(biāo)法定量。在上述色譜和質(zhì)譜條件下，7種化合物的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提取離子（定量）質(zhì)譜圖參見附錄B。6.5空白試驗除不稱取樣品外，按5.1、5.2步驟進(jìn)行后測定。7分析結(jié)果的表述樣品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴的含量按下式計算：…………………(1)X—試樣中各待測物的含量，單位為微克每千克(μg/kgc—從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出的供試品溶液中各待測物的濃度，單位為微克每升(μg/LV—樣液的提取體積，此處為15，單位為毫升（mLm—試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8方法精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20％。9方法檢出限和定量限8μg/kg。定量限分別為25μg/kg、125μg/kg、25μg/kg、125μg/kg、25μg/kg。10方法準(zhǔn)確度罌粟堿、那可丁和蒂巴因添加濃度范圍為25μg/kg～250μg/kg，嗎啡、可待因添加濃度范圍為125μg/kg～1250μg/kg時，回收率為70％～110％。5DB31/2010—2012(資料性附錄)質(zhì)譜/質(zhì)譜測定參考條件5種生物堿及2個內(nèi)標(biāo)化合物的定性離子對、定量離子對、去簇電壓（DP）及碰撞氣能量（CE）見表A.1。表A.17種化合物的定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞氣能量6DB31/2010—2012(資料性附錄)7種化合物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的提取離子（定量）質(zhì)譜圖2.04