T-ESL 32005-2024 混合型飼料添加劑 L-肉堿

CCS65.120B46T/ESL湖北省飼料工業(yè)協(xié)會(huì)發(fā)布T/ESL32005-2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由湖北省飼料工業(yè)協(xié)會(huì)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：湖北楚維藥業(yè)有限公司、湖北國正質(zhì)量技術(shù)服務(wù)有限公司、黃岡大別山檢測認(rèn)證有限公司。本文件主要起草人：熊灃、鄭春生、覃小軍、許豐、何杰、王麗、張艷芳。1T/ESL32005-2024混合型飼料添加劑L-肉堿本文件規(guī)定了混合型飼料添加劑L-肉堿的術(shù)語和定義、技術(shù)要求、取樣、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則及標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期。本文件適用于以飼料添加劑L-肉堿為原料，加入二氧化硅等載體，經(jīng)混合均勻所制得的混合型飼料添加劑L-肉堿。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T601化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備GB/T602化學(xué)試劑雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備GB/T603化學(xué)試劑試驗(yàn)方法中所用制劑及制品的制備GB/T5917.1飼料粉碎粒度測定兩層篩篩分法GB/T5918飼料產(chǎn)品混合均勻度的測定GB/T6286—2021分子篩堆積密度測定方法GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB/T9724化學(xué)試劑pH值測定通則GB10648飼料標(biāo)簽GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T13079飼料中總砷的測定GB/T13080飼料中鉛的測定原子吸收光譜法GB/T14699飼料采樣NY/T3321飼料中L-肉堿的測定3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4技術(shù)要求4.1載體載體的種類見《飼料原料目錄》《飼料添加劑品種目錄》，并應(yīng)符合GB13078及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。4.2外觀與性狀產(chǎn)品色澤均一，呈粉末或顆粒狀，無結(jié)塊，有輕微的特征性氣味，有輕微引濕性。4.3粒度99%以上通過孔徑為0.85mm的試驗(yàn)篩。4.4混合均勻度2T/ESL32005-2024產(chǎn)品應(yīng)混合均勻，其混合均勻度變異系數(shù)（CV）≤7%。4.4理化指標(biāo)根據(jù)L-肉堿含量，將產(chǎn)品分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型。其理化指標(biāo)表1理化指標(biāo)ⅠⅡⅢⅣⅤ重金屬(以Pb計(jì))mg/kg）≤總砷(以As計(jì))mg/kg）≤a僅適用于以二氧化硅為載體時(shí)所制得的混合型飼料添加劑5取樣按照GB/T14699的規(guī)定執(zhí)行。6試驗(yàn)方法6.1外觀與性狀取適量試樣置于清潔、干燥的白色盤（瓷盤或同類容器）中，在自然光狀態(tài)下觀察其色澤和狀態(tài)，嗅其氣味。6.2粒度按GB/T5917.1的規(guī)定執(zhí)行。6.3L-肉堿含量按附錄A.2或NY/T3321的規(guī)定執(zhí)行。僅以二氧化硅為載體時(shí)，可按附錄A.3的規(guī)定執(zhí)行。其中NY/T3321為仲裁法。6.4水分按GB/T6435的規(guī)定執(zhí)行。6.5重金屬（以Pb計(jì)）按GB/T13080的規(guī)定執(zhí)行。6.6總砷按GB/T13079的規(guī)定執(zhí)行。6.7混合均勻度按GB/T5918的規(guī)定執(zhí)行，以L-肉堿為檢測指標(biāo)。6.8堆積密度按GB/T6286—2021中的第7章、第8章的規(guī)定執(zhí)行。6.9pH值3T/ESL32005-2024稱取試樣約5.0g（準(zhǔn)確至0.01g置于100mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，按照GB/T9724的規(guī)定進(jìn)行測定。6.10白度6.10.1儀器智能數(shù)字白度計(jì)。6.10.2測定方法6.10.2.1白度儀開機(jī)預(yù)熱30min。6.10.2.2用黑筒和標(biāo)準(zhǔn)白板對白度儀進(jìn)行校正，校正完成后，用直接測量法對標(biāo)準(zhǔn)白板進(jìn)行兩次測量，測量誤差符合儀器允許范圍。6.10.2.3取適量樣品裝入粉末皿中，蓋上玻璃片，用力擠壓，待玻璃片與粉末皿邊緣相平后，輕輕抽開玻璃片，把裝好樣的粉末皿放在試樣座上。按白度儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行測量，并讀取檢測數(shù)據(jù)。6.10.3數(shù)據(jù)處理取平行測定的算術(shù)平均值為測定結(jié)果,結(jié)果表示至小數(shù)點(diǎn)后一位。6.10.4精密度平行測定結(jié)果的絕對差值，不應(yīng)超過其算術(shù)平均值的10%。7檢驗(yàn)規(guī)則7.1組批以相同的原料、相同的生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一個(gè)批次。7.2出廠檢驗(yàn)出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目為外觀與性狀、水分、L-肉堿，以二氧化硅為載體時(shí)需增加堆積密度、pH值、白度等指標(biāo)為出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目。產(chǎn)品檢驗(yàn)合格并附合格證方可出廠。7.3型式檢驗(yàn)第4章規(guī)定的所有指標(biāo)為型式檢驗(yàn)項(xiàng)目。在正常生產(chǎn)情況下，每年至少進(jìn)行1次型式檢驗(yàn)。有下列情況之一時(shí)，亦應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a)產(chǎn)品定型投產(chǎn)時(shí)；b)生產(chǎn)工藝或主要原料來源有較大改變，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)；c)停產(chǎn)3個(gè)月以上，重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí)；e)產(chǎn)品質(zhì)量管理部門提出檢驗(yàn)要求時(shí)。7.4規(guī)則判定7.4.1所有檢驗(yàn)項(xiàng)目全部合格，判定為該批次產(chǎn)品合格；7.4.2檢驗(yàn)結(jié)果中重金屬（以Pb計(jì)）和總砷指標(biāo)不合格時(shí)即判該批產(chǎn)品不合格，不準(zhǔn)許復(fù)檢；其它指標(biāo)有不符合本文件第4章規(guī)定時(shí)，允許在原抽樣批次中加倍抽樣進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果有指標(biāo)不符合本文件第4章規(guī)定時(shí)，則判定該批次產(chǎn)品不合格。7.4.3各項(xiàng)目指標(biāo)的極限數(shù)值判定按GB/T8170修約值比較法執(zhí)行。8標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期8.1標(biāo)簽應(yīng)符合GB10648的規(guī)定。4T/ESL32005-20248.2包裝本品采用具有防潮、密封等功能的包裝材料，其包裝規(guī)格可根據(jù)客戶和市場需求而定，其凈含量允差見國家市場監(jiān)督管理總局[2023]第70號(hào)令的規(guī)定。8.3運(yùn)輸運(yùn)輸過程中應(yīng)避免日曬雨淋，受熱及碰撞，搬運(yùn)裝卸應(yīng)小心輕放，不得與有毒有害或其他有污染物品混裝、混運(yùn)。8.4貯存應(yīng)置于常溫、清潔、干燥的室內(nèi)倉庫中，不得與有毒有害物品混貯。8.5保質(zhì)期未開啟包裝的產(chǎn)品，在上述規(guī)定的運(yùn)輸、貯存條件下，保質(zhì)期由生產(chǎn)企業(yè)自行制定，具體期限應(yīng)在產(chǎn)品標(biāo)簽中注明。5T/ESL32005-2024L-肉堿含量的測定A.1一般規(guī)定本文件所用試劑和水在未注明其他要求時(shí)，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。試驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)溶液、雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑和制品在未注明其他要求時(shí)，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。A.2分光光度法A.2.1原理試樣經(jīng)過水提取，用高氯酸沉淀蛋白質(zhì)后過濾。濾液經(jīng)堿皂化后使溶液中結(jié)合態(tài)的L-肉堿游離出來。L-肉堿與乙酰輔酶A在乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶的催化下反應(yīng)生成乙酰肉堿和游離的輔酶A。游離的輔酶A和2-硝基苯甲酸反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，其顏色深淺與游離的輔酶A含量成正比。因游離的輔酶A與L-肉堿是等摩爾反應(yīng)關(guān)系，可間接求出試樣中L-肉堿含量。A.2.2試劑和材料A.2.2.1試劑A.2.2.1.1高氯酸。A.2.2.1.2氫氧化鈉。A.2.2.1.3氫氧化鉀。A.2.2.1.42-硝基苯甲酸。A.2.2.1.5N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸。A.2.2.1.6乙二胺四乙酸二鈉。A.2.2.1.7L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%。A.2.2.1.8乙酰輔酶A：在2℃~8℃保存。A.2.2.1.9乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶：在2℃~8℃保存。A.2.2.2試劑配制A.2.2.2.1高氯酸溶液（13%）：13mL高氯酸（A.2.2.1.1）稀釋至100mL。A.2.2.2.3氫氧化鉀溶液（4.0mol/L稱取22.4g氫氧化鉀（A.2.2.1.3）用水溶解，冷卻后稀釋A.2.2.2.4顯色儲(chǔ)備液：分別稱取50mg2-硝基苯甲酸（A.2.2.1.4）、5.96gN-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸（A.2.2.1.5）、185mg乙二胺四乙酸二鈉（A.2.2.1.6）溶于30mL去離子水中，用10mol/L氫氧化鈉溶液（A.2.2.2.2）調(diào)pH值至7.4～7.6，然后用水定容至50mL。此液置于4℃冰箱中可保存3個(gè)月。A.2.2.2.5顯色工作液：吸取5.0mL顯色儲(chǔ)備液（A.2.2.2.4）用水定容至25mL。A.2.2.2.6乙酰輔酶A溶液：稱取20.0mg乙酰輔酶A（A.2.2.1.8）溶于2.0mL水中。臨用時(shí)配制。A.2.2.2.7乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液：吸取100μL乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶（A.2.2.1.9）懸浮液，經(jīng)1500r/min離心10min，棄去上層清液，沉淀用2mL水溶解。臨用時(shí)配制。A.2.2.2.8L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（80μg/mL）：準(zhǔn)確稱取20mg（精確至0.0001g）于102℃±2℃烘箱中烘2h的L-肉堿（A.2.2.1.7），用水定容至250mL容量瓶中。此液置于4℃冰箱中可保存1個(gè)月。A.2.2.2.9L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（A.2.2.2.8）0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。此溶液僅限于當(dāng)天使用。A.2.3儀器設(shè)備6T/ESL32005-2024A.2.3.1分析天平：感量0.1mg。A.2.3.2pH計(jì)：精度0.01。A.2.3.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥1500r/min。A.2.3.4恒溫水浴鍋：溫度可控制在40℃±2℃。A.2.3.5分光光度計(jì)。A.2.4分析步驟A.2.4.1試樣處理準(zhǔn)確稱取5g（精確至0.0001gMb）混合均勻的試樣于燒杯中，用30mL40℃溫水溶解，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中。加入10mL13%高氯酸溶液（A.2.2.2.1），混合均勻后靜止20min。用蒸餾水定容至刻度（Va），混勻，用定量濾紙過濾。取濾液20mL（Vb用4mol/L氫氧化鉀溶液（A.2.2.2.3）調(diào)pH值為12.5～13.0后，置于40℃水浴60min。冷卻后用13%高氯酸（A.2.2.2.1）調(diào)pH值為7.0～7.5。將樣液轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，用蒸餾水定容?；靹蚝笾糜?℃冰箱中過夜。將試樣處理液從冰箱中取出放置至室溫，取上清液用0.45μm濾膜過濾后備用。A.2.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制吸取L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液（A.2.2.2.9）2.0mL于1cm比色皿中，加入0.8mL顯色工作液（A.2.2.2.5）和100μL乙酰輔酶A溶液（A.2.2.2.6），蓋上比色皿蓋，混合均勻后放入分光光度計(jì)中，分光光度計(jì)的波長調(diào)為412nm，5min后歸零。迅速加入100μL乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液（A.2.2.2.7），混合均勻后放入分光光度計(jì)中，反應(yīng)10min后記錄吸光值。以L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液（A.2.2.2.9）的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。A.2.4.3試樣測定取2.0mL試樣處理液按A.2.4.2的步驟測定其吸光值。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得待測試樣液的濃度（Cb）。A.2.5試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中L-肉堿的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（S）表示，單位為毫克每千克（mg/kg），按式（A.1）計(jì)算。S=.............................................................(A.1)式中：S——樣品中L-肉堿含量，單位為毫克每千克（mg/kgCb——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的試樣處理液濃度，單位為微克每毫升(μg/mLVa——試樣定容體積，單位為毫升（mL）；50——濾液稀釋后的體積，單位為毫升（mLMb——試樣的質(zhì)量，單位為克（gVb——移取濾液的體積，單位為毫升（mL）。結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果表示至小數(shù)點(diǎn)后一位。A.2.6精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過其算術(shù)平均值的10%。A.2.7其他本文件檢出限為6mg/kg，定量限為20mg/kg。A.3電位滴定法A.3.1原理以冰乙酸為溶劑，采用電位滴定法以高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定L-肉堿結(jié)構(gòu)中的堿性氮。7T/ESL32005-2024A.3.2試劑與溶液A.3.2.1冰乙酸。A.3.2.2乙酸酐。A.3.2.3高氯酸。A.3.2.4高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液:c(HClO4)=0.1mol/L。按GB/T601制備和標(biāo)定。A.3.3儀器設(shè)備A.3.3.1分析天平：感量0.1mg。A.3.3.2電位滴定儀。A.3.4分析步驟稱取折純后含L-肉堿0.1g（精確至0.0001g）左右的樣品，置于250mL具塞三角瓶中，加