歐蒙抗核抗體譜(IgG)檢測標準操作規(guī)程

抗核抗體譜(IgG)檢測標準操作規(guī)程目的規(guī)范抗核抗體譜(IgG)檢測，保證結(jié)果的準確性。適用范圍檢驗科免疫組工作人員。試劑規(guī)格名稱與組成型號名稱：ANA譜1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENPB，dsDNA，核小體，組蛋白，核糖體P蛋白 類型：IgG 基質(zhì)：抗原包被的檢測膜條 規(guī)格：16×01(16)4.預期用途：用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗nRNP、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENPB、PCNA、dsDNA、核小體、組蛋白、核糖體P蛋白和AMAM2共14種不同抗原IgG類抗體。5.適應癥：夏普綜合征（MCTD），系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE），干燥綜合征，進行性系統(tǒng)性硬化癥，多肌炎皮肌炎、重疊綜合征、局限型進行性系統(tǒng)性硬化癥（CREST綜合征），原發(fā)性膽汁性肝硬化。6.臨床意義：抗核抗體識別是各種細胞核組分（細胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、細胞核蛋白及核糖蛋白?？商卣餍缘爻霈F(xiàn)于許多疾病中，尤其是風濕性疾病[3,4,5]。在炎癥性風濕性疾病中，這些抗核抗體的陽性率在20%到100%之間，以風濕性關節(jié)炎的陽性率最低，在20%至40%之間。因此，ANA鑒別診斷在對個別風濕疾病的確認十分必要，而且對自身免疫性疾病的進一步診斷也很有價值。[3,6,7,8,9,10,11]風濕疾病—夏普綜合征（混合結(jié)締組織病＝MCTD)[8]—系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE)[8,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22]—干燥綜合征（原發(fā)性干燥綜合征）[5],—系統(tǒng)性硬化癥（系統(tǒng)性硬皮病,SSc)[1,23],—局限型系統(tǒng)性硬化癥（CREST綜合征）[28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—類風濕性關節(jié)炎[5] 7.主要組成成分：成份規(guī)格規(guī)格標識1.包被抗原的檢測膜條：nRNP/Sm、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENPB、PCNA、dsDNA、核小體、組蛋白、核糖體P蛋白、AMAM2。 16條4x16條STRIPS2.陽性對照人IgG，100倍濃縮1x0.02ml4x0.02mlPOSCONTROL100x3.酶結(jié)合物堿性磷酸酶標記的羊抗人IgG，10倍濃縮 1x3ml4x3mlCONJUGATE10x4.樣本緩沖液直接使用 1x100ml3x100mlSAMPLEBUFFER5.清洗緩沖液10倍濃縮 1x50ml1x100mlWASHBUFFER10x6.底物液NBT/BCIP（四唑硝基苯胺蘭/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸鹽），直接使用 1×30ml 4×30ml SUBSTRATE7.溫育盤 2x8槽--- 8.產(chǎn)品說明書1份1份LOT 試劑批號 儲存溫度IVD 體外檢測 未開封可穩(wěn)定至8.儲存條件及有效期：2-8°C保存，不要冷凍。未開封前，除非特別說明，試劑盒自生產(chǎn)日起可穩(wěn)定18個月。稀釋后的酶結(jié)合物和清洗緩沖液需在一個工作日內(nèi)用完。9.樣本要求樣本：人血清或EDTA、肝素或檸檬酸鹽抗凝的血漿。穩(wěn)定性：待檢患者樣本于2-8°C可穩(wěn)定14天，稀釋后的樣本應在同一個工作日內(nèi)檢測。樣本稀釋：患者樣本用樣本緩沖液1:101稀釋，如可取15ul血清用1.5ml樣本緩沖液稀釋并用漩渦混勻器充分混勻。不可用加樣器混勻。10.檢驗方法10.1試劑的準備和穩(wěn)定性注意：使用前所有試劑均必須于室溫（18-25°C）平衡30分鐘。從第一次使用起，試劑盒如保存在2-8°C，并且在沒有污染的情況下，可穩(wěn)定至所標示的有效期。 -包被抗原的檢測膜條：直接使用。為防止膜條發(fā)生冷凝，只有當膜條平衡到室溫后才可打開包裝。取出膜條后應立即密封好原包裝并將其保存于2-8°C。 -陽性對照：100倍濃縮。使用時用干凈的吸管從瓶中吸取所需陽性對照，用樣本緩沖液1:101稀釋如：15ul陽性對照用1.5ml樣本緩沖液稀釋并充分混勻。已稀釋的陽性對照應在同一個工作日用完。檢測膜條上有一條質(zhì)控帶，如果質(zhì)控帶出現(xiàn)強的顏色反應說明實驗操作正確。膜條包被抗原的位置上出現(xiàn)的白色條帶應判為陰性?？乖捌湓跈z測膜條上的位置：DL1590-3G歐蒙印跡法檢測膜條包被有如下抗原：nRNP/Sm：小牛和兔胸腺提取物，經(jīng)親和層析純化的天然U1-nRNP。Sm：牛脾臟和胸腺提取物，經(jīng)親和層析純化的天然Sm。SS-A：牛脾臟和胸腺提取物，經(jīng)親和層析純化的天然SS-A。Ro-52：重組的Ro-52（52kDa），相應的人cDNA用桿狀病毒系統(tǒng)在昆蟲細胞中表達。SS-B：小牛和兔胸腺提取物，經(jīng)親和層析純化的天然SS-B。Scl-70：牛和兔胸腺提取物，經(jīng)親和層析純化的天然Scl-70（DNA拓撲異構(gòu)酶1）。PM-Scl：重組抗原，相應的人cDNA用桿狀病毒系統(tǒng)在昆蟲細胞中表達。Jo-1：小牛和兔胸腺提取物，經(jīng)親和層析純化的天然Jo-1（組氨酰-tRNA合成酶）。CENPB：重組的著絲點蛋白B，相應的人cDNA用桿狀病毒系統(tǒng)在昆蟲細胞中表達。PCNA：重組的PCNA（36kDa），相應的人cDNA用桿狀病毒系統(tǒng)在昆蟲細胞中表達。dsDNA：從鮭魚睪丸提取物中高度純化的天然雙鏈DNA。核小體：從牛胸腺提取物中純化的天然核小體。組蛋白：從牛胸腺提取物中純化的各種類型組蛋白的混合物。核糖體P蛋白：小牛和兔胸腺提取物，用親和層析純化的天然核糖體P蛋白。AMAM2：從豬心臟提取物中純化的天然M2抗原（丙酮酸脫氫酶復合物）。根據(jù)抗原帶著色的深淺，可將結(jié)果分為陰性、可疑和陽性?？乖瓗е纳顪\結(jié)果無色陰性著色非常弱可疑著色中到較強陽性著色與質(zhì)控帶強度相同強陽性根據(jù)EUROLineScan判讀結(jié)果，可將結(jié)果分為陰性、可疑和陽性。等級EUROLineScan著色強度結(jié)果o0-5陰性(+)6-10可疑+11-25弱陽性++26-50陽性+++51-256強陽性用歐蒙印跡法檢測自身抗體時，應同時采用間接免疫熒光法實驗。這樣一方面可確保結(jié)果的可靠性，排除假陽性反應；另一方面，歐蒙HEp-2細胞，特別是HEp-2細胞與靈長類肝冰凍組織切片的生物薄片馬賽克的間接免疫熒光法可檢測抗核抗體的范圍非常廣，而歐蒙印跡法檢測膜條上的抗原種類非常有限，只能檢測有限的抗體。13.產(chǎn)品性能指標13.1定標：檢測膜條上各種抗原的反應性已用疾病控制中心（美國亞特蘭大）提供的人參考血清 這些CDC血清的特異性已用免疫熒光模型（基質(zhì)：HEp-2細胞和靈長類肝臟）、雙向免疫擴散或?qū)α髅庖唠娪镜慕Y(jié)果進行驗證，這些血清不是單一特異性的。13.2檢測范圍：歐蒙印跡法為定性檢測方法，沒有檢測范圍，樣本稀釋度為1:101。13.3交叉反應：高質(zhì)量抗原（抗原和抗原的來源）確保了檢測系統(tǒng)的高特異性。本歐蒙印跡法檢測試劑可特異檢測IgG類抗nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、PM-Scl、Jo-1、CENPB、PCNA、dsDNA、核小體、組蛋白、核糖體P蛋白、AMAM2抗體，未發(fā)現(xiàn)與其它自身抗體之間的交叉反應。13.4干擾：血紅蛋白濃度小于5mg/ml的溶血、甘油三脂濃度小于20mg/ml的脂血和膽紅素濃度小于0.4ml/ml的黃疸對檢測結(jié)果沒有影響。13.5批內(nèi)和批間差異：通過比較同一樣本在相同時間內(nèi)多次檢測結(jié)果的差異來研究批內(nèi)差異；批批差異為用不同批號產(chǎn)品對同一樣本進行檢測所得的差異。每一次實驗，抗原帶著色的深淺都在額定范圍內(nèi)。該歐蒙印跡法試劑具有很好的批內(nèi)和批間重復性。14.注意事項14.1