微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應用2004年

第1章第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應用一、培養(yǎng)基的配制1．培養(yǎng)基人們按照微生物對_______的不同需求，配制出供其_________的營養(yǎng)基質(zhì)。2．培養(yǎng)基的種類①按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和。②按功能可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。3．培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成各種培養(yǎng)基一般都含有、、和無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，此外還需要滿足微生物生長對、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及的需求。二、無菌技術(shù)1．獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關鍵：防止__________。2．消毒和滅菌消毒滅菌概念使用較為的物理、化學或生物等方法殺死物體或內(nèi)部一部分微生物使用的理化方法殺死物體內(nèi)外的微生物，包括____常用方法___消毒法、巴氏消毒法、___消毒法、紫外線消毒法____滅菌、干熱滅菌、____滅菌適用對象操作空間、雙手等接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等3.具體操作(1)對實驗操作的、操作者的衣著和手進行清潔和。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行。(3)實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與接觸。(4)為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在并在附近進行。三、微生物的純培養(yǎng)1．純培養(yǎng)：在微生物學中，將接種于內(nèi)，在合適條件下形成的含群體稱為培養(yǎng)物。由所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得的過程就是純培養(yǎng)。2．微生物純培養(yǎng)的步驟：微生物的純培養(yǎng)包括配制培養(yǎng)基、、、分離和培養(yǎng)等步驟。3．酵母菌的純培養(yǎng)(1)菌落：分散的微生物在適宜的表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的。(2)獲得單菌落的方法：法和法。(3)純培養(yǎng)過程：①制備培養(yǎng)基：→滅菌→。②接種和分離酵母菌Ⅰ.方法：通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。Ⅱ.操作步驟a.將放在灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。b.在冷卻接種環(huán)。同時拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞。c.將試管口通過火焰。d.在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。e.將試管口通過火焰，并塞上棉塞。f.在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃平行線，蓋上皿蓋。g.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的開始第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將相連。③培養(yǎng)酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和倒置，放入左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)h。易錯易混辨析(1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有時還需要加入一些特殊的物質(zhì)()(2)倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上()(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害()(4)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落()(5)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落()(6)無菌操作的對象只要是沒有生物活性的材料(如培養(yǎng)基、接種環(huán)等)都可采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌()(7)平板劃線法中每一次劃線后要將接種環(huán)灼燒()2.1微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應用參考答案一、1.營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖2．①固體培養(yǎng)基3.水碳源氮源pHO2二、1.雜菌污染2.消毒：溫和表面煮沸化學藥物滅菌：強烈的所有芽孢和孢子濕熱灼燒3.（1）空間消毒（2）滅菌（3）周圍的物品（4）超凈工作臺酒精燈火焰三、1.培養(yǎng)基特定種類微生物單一個體繁殖純培養(yǎng)物2.滅菌接種3.（1）固體培養(yǎng)基子細胞群體（2）平板劃線稀釋涂布平板(3)①配制培養(yǎng)基倒平板②Ⅰ.連續(xù)劃線Ⅱa