大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織NRF2與γ - GCS表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)探究

大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織NRF2與γ-GCS表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)探究一、引言1.1研究背景與意義慢性氣道炎癥疾病如慢性阻塞性肺疾?。–OPD）、哮喘等，是一類嚴(yán)重威脅人類健康的常見(jiàn)疾病。COPD以持續(xù)性氣流受限為特征，伴有氣道和肺實(shí)質(zhì)的慢性炎癥，甚至全身炎癥，全球40歲以上人群發(fā)病率已高達(dá)9%-10%，是全球第三大死因。哮喘則是一種危害極大的慢性氣道炎癥性疾病，近年來(lái)我國(guó)哮喘的患病率迅速攀升，20歲及以上人群哮喘患病率為4.2%，患者人數(shù)達(dá)4570萬(wàn)。這些疾病不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，也給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。氧化應(yīng)激在慢性氣道炎癥疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演著關(guān)鍵角色。正常情況下，機(jī)體的氧化與抗氧化系統(tǒng)處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，但在慢性氣道炎癥疾病中，由于長(zhǎng)期暴露于吸煙、空氣污染、職業(yè)粉塵等危險(xiǎn)因素，導(dǎo)致活性氧（ROS）和活性氮（RNS）等氧化劑產(chǎn)生過(guò)多，抗氧化系統(tǒng)失衡，引發(fā)氧化應(yīng)激。氧化應(yīng)激可造成蛋白、核酸和脂類分子損傷，激活炎癥細(xì)胞，釋放炎癥介質(zhì)，進(jìn)一步加重氣道炎癥和肺組織損傷，形成惡性循環(huán)，促進(jìn)疾病的進(jìn)展。核紅細(xì)胞2相關(guān)因子2（NRF2）是調(diào)控抗氧化應(yīng)激的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，在誘導(dǎo)機(jī)體的抗氧化應(yīng)答中起著重要作用。正常情況下，NRF2與Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1（Keap1）結(jié)合，處于無(wú)活性狀態(tài)，在細(xì)胞質(zhì)中被Keap1-Cul3-E3泛素連接酶靶向多個(gè)賴氨酸殘基并促進(jìn)泛素化，隨后被遞送至26S蛋白酶體進(jìn)行降解。當(dāng)細(xì)胞受到氧化或化學(xué)應(yīng)激時(shí)，Keap1中特定的半胱氨酸殘基被修飾，引起Keap1-Cul3-E3泛素連接酶的構(gòu)象變化，干擾Nrf2泛素化，NRF2與Keap1分離并轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，與小Maf（sMAF）蛋白異二聚化后結(jié)合到靶基因的抗氧化反應(yīng)元件（ARE）上，誘導(dǎo)一系列細(xì)胞保護(hù)性基因表達(dá)，如NQO1、GST、HMOX1、GCL、GSH等，從而調(diào)節(jié)氧化還原平衡、藥物代謝和排泄、能量代謝等，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）是合成谷胱甘肽（GSH）的限速酶，而GSH是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化劑，在維持細(xì)胞的氧化還原穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。NRF2可以通過(guò)與γ-GCS基因啟動(dòng)子區(qū)域的ARE結(jié)合，上調(diào)γ-GCS的表達(dá)，促進(jìn)GSH的合成，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。因此，NRF2/γ-GCS信號(hào)通路在細(xì)胞抗氧化防御中起著核心作用，激活該通路可能成為治療慢性氣道炎癥疾病的新策略。大蒜素是大蒜的主要有效成分，化學(xué)名為二烯丙基三硫化物，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗氧化等多種生物學(xué)活性。研究表明，大蒜素可以通過(guò)調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，對(duì)多種疾病發(fā)揮保護(hù)作用。在心血管疾病中，大蒜素能降低血脂、抑制血小板聚集、擴(kuò)張血管，從而保護(hù)心血管系統(tǒng)；在肝臟疾病中，大蒜素可減少自由基的產(chǎn)生，抑制膜的脂質(zhì)過(guò)氧化，維持肝細(xì)胞膜的完整性，保護(hù)肝臟功能。然而，大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥疾病的作用及其機(jī)制尚未完全明確，尤其是對(duì)NRF2與γ-GCS表達(dá)的影響，目前相關(guān)研究較少。本研究旨在探討大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織NRF2與γ-GCS表達(dá)的影響，揭示大蒜素在慢性氣道炎癥中的抗氧化作用機(jī)制，為慢性氣道炎癥疾病的治療提供新的理論依據(jù)和潛在治療靶點(diǎn)，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在大蒜素藥理作用的研究方面，國(guó)內(nèi)外均有較多探索。國(guó)外研究較早發(fā)現(xiàn)大蒜素具有廣譜抗菌滅菌和消炎作用，其活性成分大蒜素在醫(yī)藥上已用于臨床，對(duì)多種細(xì)菌、病毒、真菌及寄生蟲感染均有抑制或殺滅效果。例如，在病毒感染方面，大蒜素對(duì)單純皰疹病毒、水皰性口炎病毒等具有滅活作用；在細(xì)菌感染領(lǐng)域，對(duì)常見(jiàn)的G+和G-細(xì)菌，如埃希氏菌、葡萄球菌等均有較好的抗菌作用，甚至對(duì)耐酸的結(jié)核分枝桿菌也有一定作用。國(guó)內(nèi)研究進(jìn)一步深入探討了大蒜素的作用機(jī)制，如在抗腫瘤方面，發(fā)現(xiàn)大蒜素能增強(qiáng)大鼠脾母細(xì)胞產(chǎn)生IL-2能力，降低機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制因子IL-2受體（sIL-2R）水平，并提高大鼠外周血NK活性，從而提高機(jī)體自身免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤免疫殺傷能力。在心血管系統(tǒng)保護(hù)方面，大蒜素可抗高血脂和動(dòng)脈硬化、抗血小板聚集、增強(qiáng)纖維蛋白溶能活性和擴(kuò)張血管產(chǎn)生降壓作用。此外，在肝臟保護(hù)方面，國(guó)內(nèi)研究表明大蒜素可減少自由基的產(chǎn)生，抑制膜的脂質(zhì)過(guò)氧化從而維持肝細(xì)胞膜的完整性，減少酶的溢出，對(duì)肝臟起到保護(hù)作用。對(duì)于慢性氣道炎癥發(fā)病機(jī)制的研究，國(guó)外學(xué)者明確了吸煙、空氣污染、職業(yè)暴露等是導(dǎo)致慢性氣道炎癥疾病如慢阻肺、哮喘等的重要危險(xiǎn)因素。在慢阻肺中，氣道炎癥和氣道重塑是其發(fā)病機(jī)制的核心環(huán)節(jié)，氣道炎癥包括中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和活化，以及炎癥因子的釋放，這些炎癥細(xì)胞通過(guò)釋放各種炎癥介質(zhì)，如細(xì)胞因子、化學(xué)趨化物等，作用于氣道黏膜，引起氣道炎癥反應(yīng)，氣道炎癥的程度與癥狀嚴(yán)重程度密切相關(guān)。氣道重塑則主要包括氣道壁的結(jié)構(gòu)改變和功能異常，導(dǎo)致氣道壁增厚、狹窄，進(jìn)而影響通氣功能，其機(jī)制可能與慢性炎癥、氧化應(yīng)激、纖維化等因素有關(guān)。在哮喘發(fā)病機(jī)制中，遺傳因素和環(huán)境因素共同作用，過(guò)敏原、氣候變化、食物過(guò)敏、吸煙等多種環(huán)境因素都可能誘發(fā)或加重哮喘癥狀，哮喘發(fā)作時(shí)會(huì)出現(xiàn)喘息、咳嗽、胸悶等癥狀，且氣流受限具有明顯的可逆性。國(guó)內(nèi)研究也認(rèn)同這些觀點(diǎn)，并進(jìn)一步深入探討了炎癥信號(hào)通路等機(jī)制，如在慢阻肺發(fā)病機(jī)制研究中，發(fā)現(xiàn)NF-κB信號(hào)通路等在炎癥調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。在NRF2和γ-GCS在慢性氣道炎癥中作用的研究方面，國(guó)外研究已經(jīng)明確NRF2是調(diào)控抗氧化應(yīng)激的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，在正常情況下，NRF2與Keap1結(jié)合，處于無(wú)活性狀態(tài)，在細(xì)胞質(zhì)中被Keap1-Cul3-E3泛素連接酶靶向多個(gè)賴氨酸殘基并促進(jìn)泛素化，隨后被遞送至26S蛋白酶體進(jìn)行降解。當(dāng)細(xì)胞受到氧化或化學(xué)應(yīng)激時(shí)，Keap1中特定的半胱氨酸殘基被修飾，引起Keap1-Cul3-E3泛素連接酶的構(gòu)象變化，干擾Nrf2泛素化，NRF2與Keap1分離并轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，與小Maf（sMAF）蛋白異二聚化后結(jié)合到靶基因的抗氧化反應(yīng)元件（ARE）上，誘導(dǎo)一系列細(xì)胞保護(hù)性基因表達(dá)，如NQO1、GST、HMOX1、GCL、GSH等，從而調(diào)節(jié)氧化還原平衡、藥物代謝和排泄、能量代謝等，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。γ-GCS作為合成谷胱甘肽（GSH）的限速酶，在維持細(xì)胞的氧化還原穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，NRF2可以通過(guò)與γ-GCS基因啟動(dòng)子區(qū)域的ARE結(jié)合，上調(diào)γ-GCS的表達(dá)，促進(jìn)GSH的合成，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。國(guó)內(nèi)研究也圍繞NRF2/γ-GCS信號(hào)通路展開，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了該信號(hào)通路在慢性氣道炎癥疾病中的抗氧化作用，以及激活該通路對(duì)減輕氣道炎癥和肺組織損傷的潛在治療意義。然而，當(dāng)前研究仍存在一定不足。在大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥疾病的研究中，雖然已證實(shí)其具有抗氧化、抗炎等多種生物學(xué)活性，但對(duì)于大蒜素在慢性氣道炎癥疾病中對(duì)NRF2與γ-GCS表達(dá)的影響研究較少，其具體作用機(jī)制尚未完全明確。在慢性氣道炎癥發(fā)病機(jī)制研究中，雖然對(duì)炎癥和氧化應(yīng)激等關(guān)鍵因素有了深入了解，但針對(duì)不同病因和個(gè)體差異的精準(zhǔn)治療靶點(diǎn)仍有待進(jìn)一步挖掘。在NRF2和γ-GCS的研究中，如何精準(zhǔn)地激活NRF2/γ-GCS信號(hào)通路，同時(shí)避免其過(guò)度激活帶來(lái)的不良影響，還需要更多的研究探索。1.3研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)本研究旨在深入探究大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織NRF2與γ-GCS表達(dá)的影響，從而揭示大蒜素在慢性氣道炎癥疾病中的抗氧化作用機(jī)制，為臨床治療提供新的理論依據(jù)與潛在治療靶點(diǎn)。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方面，本研究創(chuàng)新性地采用了香煙煙霧聯(lián)合脂多糖（LPS）誘導(dǎo)慢性氣道炎癥大鼠模型。香煙煙霧是慢性氣道炎癥疾病如慢阻肺的重要致病因素，長(zhǎng)期暴露于香煙煙霧可導(dǎo)致氣道和肺實(shí)質(zhì)的慢性炎癥，而LPS可模擬細(xì)菌感染，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，二者聯(lián)合誘導(dǎo)的模型能更全面、真實(shí)地反映慢性氣道炎癥疾病的病理生理過(guò)程，為研究大蒜素的干預(yù)作用提供了更有效的平臺(tái)。在指標(biāo)檢測(cè)上，本研究不僅運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）等常規(guī)方法檢測(cè)NRF2與γ-GCS的蛋白和基因表達(dá)水平，還創(chuàng)新性地采用免疫組化技術(shù)，對(duì)肺組織中NRF2與γ-GCS進(jìn)行定位和半定量分析，從組織學(xué)層面直觀地展示其表達(dá)變化，使研究結(jié)果更加全面、深入，有助于更準(zhǔn)確地揭示大蒜素的作用機(jī)制。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1慢性氣道炎癥概述慢性氣道炎癥是一類常見(jiàn)且復(fù)雜的呼吸道疾病，主要涉及支氣管和細(xì)支氣管，表現(xiàn)為氣道壁炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、黏液分泌增多和氣道重塑，以持續(xù)性炎癥反應(yīng)為主要特征。其發(fā)病原因多樣，吸入性過(guò)敏原如塵螨、花粉等，呼吸道感染，空氣污染，吸煙以及職業(yè)性刺激物等都可能引發(fā)慢性氣道炎癥。慢性氣道炎癥涵蓋多種常見(jiàn)病癥，慢性阻塞性肺疾?。–OPD）便是其中具有代表性的一種。COPD以持續(xù)性氣流受限為特征，伴有氣道和肺實(shí)質(zhì)的慢性炎癥，甚至全身炎癥，全球40歲以上人群發(fā)病率已高達(dá)9%-10%，是全球第三大死因。長(zhǎng)期吸煙、暴露于有害氣體和顆粒是COPD的主要致病因素，炎癥細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等在氣道和肺實(shí)質(zhì)中浸潤(rùn)，釋放大量炎癥介質(zhì)，如白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，導(dǎo)致氣道炎癥、黏液高分泌和肺組織損傷，進(jìn)而引起氣流受限和呼吸困難。哮喘也是慢性氣道炎癥的典型病癥，是一種異質(zhì)性疾病，以慢性氣道炎癥為特點(diǎn)，主要特點(diǎn)包括多變的呼吸道癥狀如喘息、氣促、胸悶及咳嗽和可變的呼氣氣流受限。近年來(lái)我國(guó)哮喘的患病率迅速攀升，20歲及以上人群哮喘患病率為4.2%，患者人數(shù)達(dá)4570萬(wàn)。哮喘的發(fā)病與遺傳因素和環(huán)境因素密切相關(guān)，過(guò)敏原、氣候變化、食物過(guò)敏、吸煙等多種環(huán)境因素都可能誘發(fā)或加重哮喘癥狀，哮喘發(fā)作時(shí)會(huì)出現(xiàn)喘息、咳嗽、胸悶等癥狀，且氣流受限具有明顯的可逆性。氧化應(yīng)激在慢性氣道炎癥的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。正常情況下，機(jī)體的氧化與抗氧化系統(tǒng)處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，以維持細(xì)胞的正常生理功能。但在慢性氣道炎癥疾病中，由于長(zhǎng)期暴露于吸煙、空氣污染、職業(yè)粉塵等危險(xiǎn)因素，導(dǎo)致活性氧（ROS）和活性氮（RNS）等氧化劑產(chǎn)生過(guò)多。這些氧化劑主要來(lái)源于炎癥細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)，以及線粒體功能異常等。過(guò)多的ROS和RNS會(huì)攻擊細(xì)胞內(nèi)的生物大分子，如蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)，造成蛋白結(jié)構(gòu)改變、核酸損傷和脂類分子的過(guò)氧化，破壞細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能。氧化應(yīng)激還會(huì)激活炎癥細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，使其釋放更多的炎癥介質(zhì)，如細(xì)胞因子、趨化因子等，進(jìn)一步加重氣道炎癥和肺組織損傷。例如，ROS可以激活核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路，促使NF-κB從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，啟動(dòng)炎癥因子如IL-1、IL-6、TNF-α等的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，引發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)。同時(shí)，氧化應(yīng)激還會(huì)導(dǎo)致氣道上皮細(xì)胞損傷，破壞氣道上皮的屏障功能，使過(guò)敏原、病原體等更容易侵入氣道，加劇炎癥反應(yīng)。而且，氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)相互促進(jìn)，形成惡性循環(huán)，不斷推動(dòng)慢性氣道炎癥疾病的進(jìn)展，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和健康。2.2NRF2與γ-GCS的生物學(xué)功能2.2.1NRF2的結(jié)構(gòu)與功能核紅細(xì)胞2相關(guān)因子2（NRF2）是CNC（cap‘-n’-collar）轉(zhuǎn)錄因子家族中最重要的成員之一，在細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮著核心調(diào)節(jié)作用。人類NRF2基因定位于2q31染色體，編碼的蛋白質(zhì)由605個(gè)氨基酸殘基組成，形成了從Neh1到Neh7共7個(gè)結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域在不同物種中高度保守，各自具有獨(dú)特的功能，共同維持NRF2的正常生物學(xué)活性。Neh1結(jié)構(gòu)域包含一個(gè)高度保守的堿性亮氨酸拉鏈（bZIP）模體，這一結(jié)構(gòu)對(duì)于NRF2的功能至關(guān)重要。bZIP模體能夠與小Maf蛋白（smallMafprotein）特異性結(jié)合，形成穩(wěn)定的異二聚體結(jié)構(gòu)。這種異二聚體結(jié)構(gòu)賦予了NRF2識(shí)別并結(jié)合抗氧化反應(yīng)元件（ARE）的能力。ARE廣泛存在于眾多抗氧化基因和Ⅱ相解毒酶基因的啟動(dòng)子區(qū)域，當(dāng)NRF2-Maf異二聚體與ARE結(jié)合后，就可以啟動(dòng)這些基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，從而誘導(dǎo)一系列細(xì)胞保護(hù)性蛋白的表達(dá)，發(fā)揮抗氧化和解毒作用。例如，NQO1（醌氧化還原酶1）基因的啟動(dòng)子區(qū)域含有典型的ARE序列，NRF2-Maf異二聚體與之結(jié)合后，可促進(jìn)NQO1的表達(dá)，NQO1能夠催化醌類化合物的還原反應(yīng)，減少活性氧的產(chǎn)生，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。Neh2結(jié)構(gòu)域是NRF2的主要調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)區(qū)，包含DLG和ETGE兩個(gè)關(guān)鍵的基因序列。這兩個(gè)序列在NRF2與Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白-1（Keap1）的相互作用中發(fā)揮著決定性作用。在正常生理狀態(tài)下，NRF2與Keap1緊密結(jié)合，Keap1通過(guò)其分子中的多個(gè)結(jié)構(gòu)域與NRF2的Neh2結(jié)構(gòu)域相互作用，將NRF2錨定在細(xì)胞質(zhì)中，并使其處于無(wú)活性狀態(tài)。同時(shí)，Keap1還作為E3泛素連接酶復(fù)合體的一部分，介導(dǎo)NRF2的泛素化修飾，使得NRF2被標(biāo)記并迅速被26S蛋白酶體識(shí)別和降解，從而維持細(xì)胞內(nèi)NRF2的低水平表達(dá)。然而，當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激或親電試劑等刺激時(shí)，Keap1分子中的半胱氨酸殘基會(huì)發(fā)生修飾，導(dǎo)致其構(gòu)象發(fā)生改變。這種構(gòu)象變化使得Keap1與NRF2的結(jié)合力減弱，NRF2從Keap1上解離下來(lái)，從而避免了被泛素化降解的命運(yùn)。解離后的NRF2得以進(jìn)入細(xì)胞核，發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄激活功能。Neh3結(jié)構(gòu)域位于NRF2的C末端，它可以與NRF2轉(zhuǎn)錄輔助激活子染色質(zhì)解螺旋酶DNA結(jié)合蛋白6（CHD6）特異性結(jié)合。這種結(jié)合能夠增強(qiáng)NRF2對(duì)ARE依賴基因的反式激活作用，進(jìn)一步促進(jìn)下游抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶基因的表達(dá)，從而提高細(xì)胞的抗氧化和解毒能力。例如，在氧化應(yīng)激條件下，Neh3-CHD6相互作用增強(qiáng)，使得HO-1（血紅素加氧酶-1）等抗氧化酶基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著升高，HO-1能夠催化血紅素降解，產(chǎn)生具有抗氧化作用的一氧化碳、膽綠素和鐵離子，減輕細(xì)胞的氧化損傷。Neh4和Neh5結(jié)構(gòu)域共同構(gòu)成了NRF2的轉(zhuǎn)錄激活（TA）域。當(dāng)NRF2進(jìn)入細(xì)胞核并與小Maf蛋白形成二聚體，進(jìn)而與ARE結(jié)合后，轉(zhuǎn)錄過(guò)程并不能立即啟動(dòng)。此時(shí)，需要Neh4和Neh5結(jié)構(gòu)域與環(huán)狀單磷酸腺苷（cAMP）反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）等轉(zhuǎn)錄共激活因子相互作用，協(xié)同啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。這些轉(zhuǎn)錄共激活因子能夠招募RNA聚合酶等轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物，促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄。例如，在細(xì)胞受到氧化應(yīng)激時(shí)，Neh4和Neh5結(jié)構(gòu)域與CREB結(jié)合，激活Nrf2靶基因GCLM（谷氨酸-半胱氨酸連接酶調(diào)節(jié)亞基）的轉(zhuǎn)錄，GCLM參與谷胱甘肽的合成，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。Neh6結(jié)構(gòu)域是一段富含氨基酸的區(qū)域，它參與不依賴Keap1的Nrf2降解過(guò)程，對(duì)NRF2起到負(fù)向調(diào)控作用。在某些情況下，即使沒(méi)有Keap1的參與，Neh6結(jié)構(gòu)域也可以通過(guò)與其他蛋白質(zhì)相互作用，介導(dǎo)NRF2的降解，從而維持細(xì)胞內(nèi)NRF2水平的平衡。例如，在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定時(shí)，Neh6結(jié)構(gòu)域與特定的E3泛素連接酶相互作用，促進(jìn)NRF2的泛素化降解，防止NRF2過(guò)度激活。Neh7結(jié)構(gòu)域是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)域，它可以通過(guò)與視黃醇X受體（RXRα）相互作用，抑制NRF2的激活。在正常生理狀態(tài)下，Neh7-RXRα相互作用能夠阻止NRF2與ARE的結(jié)合，抑制下游基因的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激等刺激時(shí)，這種相互作用減弱，NRF2得以激活，啟動(dòng)抗氧化基因的表達(dá)。例如，在炎癥反應(yīng)中，Neh7-RXRα相互作用受到干擾，NRF2被激活，調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，發(fā)揮抗炎作用。正常情況下，細(xì)胞內(nèi)的NRF2處于相對(duì)低水平表達(dá)狀態(tài)，主要與Keap1結(jié)合并錨定在細(xì)胞質(zhì)中，通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑維持其動(dòng)態(tài)平衡。當(dāng)細(xì)胞遭遇氧化應(yīng)激，如受到活性氧（ROS）、活性氮（RNS）等氧化劑的攻擊，或者暴露于親電試劑、重金屬等有害物質(zhì)時(shí)，Keap1中的特定半胱氨酸殘基會(huì)被氧化或修飾。這種修飾導(dǎo)致Keap1的構(gòu)象發(fā)生變化，使得NRF2與Keap1的結(jié)合力下降，NRF2從Keap1上解離并迅速進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核內(nèi)，NRF2與小Maf蛋白形成異二聚體，識(shí)別并結(jié)合到靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的ARE上。隨后，NRF2通過(guò)其Neh4和Neh5結(jié)構(gòu)域與轉(zhuǎn)錄共激活因子結(jié)合，招募RNA聚合酶等轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白，啟動(dòng)一系列抗氧化基因和Ⅱ相解毒酶基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程。這些基因的表達(dá)產(chǎn)物包括超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）、NQO1、GST（谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶）等，它們共同參與細(xì)胞內(nèi)的抗氧化防御體系，清除過(guò)多的ROS和RNS，修復(fù)受損的生物大分子，維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。NRF2還參與細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)調(diào)控和解毒過(guò)程。在代謝調(diào)節(jié)方面，NRF2可以調(diào)節(jié)葡萄糖代謝、脂肪酸代謝等過(guò)程，維持細(xì)胞的能量平衡。例如，NRF2能夠上調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT1的表達(dá)，促進(jìn)葡萄糖的攝取和利用，為細(xì)胞提供能量。在炎癥反應(yīng)調(diào)控中，NRF2可以抑制核因子-κB（NF-κB）等炎癥信號(hào)通路的激活，減少炎癥因子的釋放，發(fā)揮抗炎作用。研究表明，NRF2激活后可以抑制TNF-α、IL-1β等炎癥因子的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)細(xì)胞的損傷。在解毒過(guò)程中，NRF2誘導(dǎo)的Ⅱ相解毒酶能夠催化外源性有害物質(zhì)的代謝轉(zhuǎn)化，使其易于排出體外，降低其對(duì)細(xì)胞的毒性。比如，GST可以催化谷胱甘肽與親電物質(zhì)結(jié)合，增加其水溶性，促進(jìn)排出。2.2.2γ-GCS的結(jié)構(gòu)與功能γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）是一種在細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的酶，由催化亞基（GCLC）和調(diào)節(jié)亞基（GCLM）組成，這兩個(gè)亞基共同構(gòu)成了γ-GCS的完整結(jié)構(gòu)，對(duì)于其發(fā)揮正常生物學(xué)功能至關(guān)重要。GCLC是γ-GCS的催化核心，負(fù)責(zé)催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸，這是谷胱甘肽（GSH）合成過(guò)程中的關(guān)鍵限速步驟。GCLC具有獨(dú)特的三維結(jié)構(gòu)，包含多個(gè)功能區(qū)域，其中活性中心區(qū)域能夠特異性識(shí)別并結(jié)合谷氨酸和半胱氨酸底物，通過(guò)一系列復(fù)雜的酶促反應(yīng)，將它們連接起來(lái)，形成γ-谷氨酰半胱氨酸。GCLC的活性受到多種因素的調(diào)控，包括底物濃度、產(chǎn)物反饋抑制以及細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)等。例如，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)半胱氨酸濃度升高時(shí)，GCLC的催化活性會(huì)增強(qiáng)，促進(jìn)γ-谷氨酰半胱氨酸的合成；而當(dāng)γ-谷氨酰半胱氨酸或GSH的濃度過(guò)高時(shí)，會(huì)反饋抑制GCLC的活性，避免過(guò)度合成。GCLM則主要發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，它與GCLC緊密結(jié)合，形成異二聚體結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)γ-GCS的活性和穩(wěn)定性。GCLM通過(guò)與GCLC的相互作用，影響GCLC的底物結(jié)合能力、催化效率以及對(duì)各種調(diào)節(jié)信號(hào)的響應(yīng)。研究表明，GCLM的表達(dá)水平變化會(huì)顯著影響γ-GCS的整體活性。在某些應(yīng)激條件下，細(xì)胞會(huì)上調(diào)GCLM的表達(dá)，增強(qiáng)其與GCLC的結(jié)合，從而提高γ-GCS的活性，促進(jìn)GSH的合成。GCLM還可以通過(guò)與其他蛋白質(zhì)或信號(hào)分子相互作用，參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，進(jìn)一步調(diào)節(jié)γ-GCS的功能。GSH是細(xì)胞內(nèi)最重要的非蛋白巰基化合物，由γ-谷氨酰半胱氨酸和甘氨酸在谷胱甘肽合成酶的作用下合成。GSH在維持細(xì)胞的氧化還原穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著核心作用，它是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化劑，能夠直接清除體內(nèi)的自由基和過(guò)氧化物，保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激的損傷。GSH可以與超氧陰離子、羥自由基等自由基反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為無(wú)害的物質(zhì)，同時(shí)自身被氧化為氧化型谷胱甘肽（GSSG）。在谷胱甘肽還原酶的作用下，GSSG又可以接受NADPH提供的氫，重新還原為GSH，形成一個(gè)循環(huán)，持續(xù)發(fā)揮抗氧化作用。GSH還參與細(xì)胞內(nèi)的解毒過(guò)程，與體內(nèi)的毒素和藥物結(jié)合，促進(jìn)其排出體外，從而減輕對(duì)機(jī)體的損害。例如，GSH可以與重金屬離子結(jié)合，降低其毒性，并促進(jìn)其排出。作為GSH合成的關(guān)鍵限速酶，γ-GCS的活性直接決定了細(xì)胞內(nèi)GSH的合成速率和水平。當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激、炎癥等刺激時(shí)，γ-GCS的表達(dá)和活性會(huì)發(fā)生顯著變化。在氧化應(yīng)激條件下，細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高，會(huì)激活一系列信號(hào)通路，如NRF2/ARE信號(hào)通路等，上調(diào)γ-GCS的表達(dá)。NRF2可以結(jié)合到γ-GCS基因啟動(dòng)子區(qū)域的ARE上，促進(jìn)γ-GCS的轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而增加γ-GCS的表達(dá)量，提高其活性，加速GSH的合成，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。炎癥反應(yīng)也會(huì)影響γ-GCS的功能，炎癥因子可以通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，改變?chǔ)?GCS的表達(dá)和活性，進(jìn)而影響細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)和炎癥反應(yīng)進(jìn)程。在慢性炎癥過(guò)程中，γ-GCS的活性可能會(huì)受到抑制，導(dǎo)致GSH合成減少，細(xì)胞抗氧化能力下降，加重炎癥損傷。2.2.3NRF2與γ-GCS的關(guān)聯(lián)NRF2與γ-GCS在抗氧化應(yīng)激過(guò)程中存在緊密的關(guān)聯(lián)，二者相互作用，共同維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，對(duì)慢性氣道炎癥的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生重要影響。NRF2作為調(diào)控抗氧化應(yīng)激的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞受到氧化應(yīng)激刺激時(shí)，能夠被激活并轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，與小Maf蛋白形成異二聚體，然后結(jié)合到γ-GCS基因啟動(dòng)子區(qū)域的抗氧化反應(yīng)元件（ARE）上。通過(guò)這種結(jié)合，NRF2可以啟動(dòng)γ-GCS基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，促進(jìn)γ-GCS的表達(dá)。研究表明，在氧化應(yīng)激條件下，NRF2基因敲除的細(xì)胞中，γ-GCS的表達(dá)顯著降低，而在正常細(xì)胞中，激活NRF2可以明顯上調(diào)γ-GCS的表達(dá)水平。這種調(diào)控作用使得γ-GCS的合成增加，進(jìn)而促進(jìn)谷胱甘肽（GSH）的合成，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。γ-GCS作為GSH合成的關(guān)鍵限速酶，其表達(dá)和活性的改變會(huì)直接影響細(xì)胞內(nèi)GSH的水平。而GSH是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化劑，對(duì)維持細(xì)胞的氧化還原穩(wěn)態(tài)起著至關(guān)重要的作用。當(dāng)γ-GCS表達(dá)上調(diào)，GSH合成增加時(shí)，細(xì)胞的抗氧化能力增強(qiáng)，能夠有效清除過(guò)多的活性氧（ROS）和活性氮（RNS），減輕氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。這種抗氧化作用有助于抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展，因?yàn)檠趸瘧?yīng)激與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，過(guò)多的ROS和RNS可以激活炎癥細(xì)胞，釋放炎癥介質(zhì)，加重炎癥損傷。在慢性氣道炎癥疾病中，如慢性阻塞性肺疾病（COPD）和哮喘，氣道和肺組織長(zhǎng)期處于氧化應(yīng)激和炎癥狀態(tài)，NRF2/γ-GCS信號(hào)通路的激活可以通過(guò)增加GSH的合成，減輕氧化應(yīng)激和炎癥損傷，對(duì)疾病起到一定的保護(hù)作用。細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)也會(huì)對(duì)NRF2與γ-GCS之間的相互作用產(chǎn)生影響。在正常生理狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡維持在相對(duì)穩(wěn)定的水平，NRF2與Keap1結(jié)合，處于無(wú)活性狀態(tài)，γ-GCS的表達(dá)和活性也保持在一定水平，以維持細(xì)胞正常的抗氧化需求。當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激時(shí)，ROS和RNS等氧化劑的產(chǎn)生增加，打破了細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡。這種失衡會(huì)導(dǎo)致Keap1的半胱氨酸殘基被修飾，NRF2與Keap1分離并激活，進(jìn)而上調(diào)γ-GCS的表達(dá)。隨著GSH合成增加，細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)逐漸恢復(fù)平衡，又會(huì)反過(guò)來(lái)抑制NRF2的激活，形成一個(gè)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，精細(xì)地調(diào)控細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激反應(yīng)。如果這種反饋調(diào)節(jié)機(jī)制失調(diào)，可能導(dǎo)致NRF2過(guò)度激活或γ-GCS表達(dá)異常，影響細(xì)胞的正常功能，促進(jìn)慢性氣道炎癥等疾病的發(fā)展。在慢性氣道炎癥疾病中，NRF2與γ-GCS的異常表達(dá)與疾病的嚴(yán)重程度和進(jìn)展密切相關(guān)。在COPD患者的氣道和肺組織中，NRF2的表達(dá)和活性常常降低，導(dǎo)致γ-GCS的表達(dá)也隨之減少，GSH合成不足，細(xì)胞抗氧化能力下降，氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)加劇，進(jìn)一步損傷氣道和肺組織，推動(dòng)疾病的進(jìn)展。在哮喘患者中，也存在類似的現(xiàn)象，NRF2/γ-GCS信號(hào)通路的異常與氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性等病理特征密切相關(guān)。因此，調(diào)節(jié)NRF2與γ-GCS的表達(dá)和活性，激活NRF2/γ-GCS信號(hào)通路，可能成為治療慢性氣道炎癥疾病的新策略。2.3大蒜素的生物學(xué)特性與藥理作用大蒜素（allicin），學(xué)名為二烯丙基硫代亞磺酸酯，是一種有機(jī)硫化物，又稱蒜素、蒜辣素等，分子式為C?H??OS?，分子量為162.25。它是從經(jīng)過(guò)破碎處理的大蒜鱗莖（大蒜頭）中提取出的一種天然的“廣譜抗生素”，也是大蒜揮發(fā)油中的主要抗菌成分。在完整的大蒜中，大蒜素以前驅(qū)體蒜氨酸（alliin）的形式存在。大蒜素具有獨(dú)特的理化性質(zhì)。其疏水性較強(qiáng)，不易溶于水，但易溶于乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑。純品外觀呈現(xiàn)為無(wú)色油狀物，具有濃烈的蒜臭味。在常溫下，大蒜素的化學(xué)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，然而，它遇堿、高溫時(shí)容易失去活性，強(qiáng)酸、強(qiáng)氧化劑和紫外線也均可引起其變質(zhì)。例如，在高溫烹飪過(guò)程中，大蒜中的大蒜素含量會(huì)顯著降低，從而影響其保健功效。大蒜素具有廣泛的藥理作用，在抗炎方面，大蒜素能夠有效抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎癥介質(zhì)的釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)。研究表明，大蒜素可以抑制脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）等的產(chǎn)生，通過(guò)抑制NF-κB等炎癥信號(hào)通路的激活，發(fā)揮抗炎作用。在一項(xiàng)針對(duì)小鼠的實(shí)驗(yàn)中，給予小鼠大蒜素處理后，再用LPS誘導(dǎo)炎癥，發(fā)現(xiàn)小鼠血清和組織中的炎癥因子水平明顯低于未處理組，表明大蒜素能夠有效減輕炎癥損傷?？寡趸谴笏馑氐牧硪恢匾饔茫軌蚯宄w內(nèi)的自由基，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。大蒜素可以提高超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）等抗氧化酶的活性，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力。同時(shí)，大蒜素還可以直接與自由基反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的化合物，從而減少自由基對(duì)生物大分子的攻擊。例如，在體外實(shí)驗(yàn)中，大蒜素能夠顯著降低過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。在抗菌方面，大蒜素對(duì)多種細(xì)菌、真菌、病毒及寄生蟲等病原微生物具有抑制或殺滅作用。對(duì)常見(jiàn)的革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌，如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等，大蒜素均表現(xiàn)出良好的抗菌活性。其抗菌機(jī)制主要是通過(guò)破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，抑制細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成和核酸代謝等途徑實(shí)現(xiàn)的。在臨床應(yīng)用中，大蒜素已被用于治療多種感染性疾病，如真菌性角膜炎、細(xì)菌性痢疾等。大蒜素在心血管系統(tǒng)保護(hù)方面也具有顯著作用，它可以降低血脂、抑制血小板聚集、擴(kuò)張血管，從而對(duì)心血管系統(tǒng)起到保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn)，大蒜素能夠降低血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇水平，同時(shí)升高高密度脂蛋白膽固醇水平，有助于調(diào)節(jié)血脂代謝。大蒜素還可以抑制血小板的活化和聚集，減少血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。大蒜素能夠擴(kuò)張血管，降低血壓，改善血管內(nèi)皮功能。一項(xiàng)針對(duì)高血壓患者的研究表明，服用大蒜素補(bǔ)充劑后，患者的血壓得到了有效控制，血管內(nèi)皮功能也有所改善。在肝臟保護(hù)方面，大蒜素可減少自由基的產(chǎn)生，抑制膜的脂質(zhì)過(guò)氧化從而維持肝細(xì)胞膜的完整性，減少酶的溢出，對(duì)肝臟起到保護(hù)作用。例如，在實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型中，給予大蒜素處理可以降低血清轉(zhuǎn)氨酶水平，減輕肝臟組織的病理?yè)p傷，促進(jìn)肝細(xì)胞的修復(fù)和再生。由于具有上述多種生物學(xué)活性，大蒜素在呼吸系統(tǒng)疾病治療中展現(xiàn)出了巨大的潛力。在呼吸道感染方面，大蒜素的抗菌、抗病毒作用使其能夠有效抑制引起呼吸道感染的病原菌，如肺炎鏈球菌、流感病毒等，降低感染風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于已發(fā)生的呼吸道感染，大蒜素的抗炎作用可減輕呼吸道炎癥，緩解咳嗽、流鼻涕、咽喉腫痛等癥狀，還能減少呼吸道感染的并發(fā)癥，如肺炎、支氣管炎等。在慢性氣道炎癥疾病如慢性阻塞性肺疾病（COPD）和哮喘中，大蒜素的抗氧化和抗炎特性可以減輕氣道氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，改善氣道功能。研究表明，大蒜素可能通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，如NRF2/ARE信號(hào)通路等，發(fā)揮對(duì)慢性氣道炎癥疾病的治療作用，但具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。三、實(shí)驗(yàn)材料與方法3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料選用健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠40只，體重200-220g，購(gòu)自[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)商名稱]，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為[許可證號(hào)]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于[飼養(yǎng)環(huán)境條件，如溫度、濕度、光照等]的環(huán)境中，自由攝食和飲水，適應(yīng)環(huán)境1周后開始實(shí)驗(yàn)。大蒜素（純度≥98%）購(gòu)自[大蒜素供應(yīng)商名稱]，用無(wú)水乙醇溶解后，再用生理鹽水稀釋至所需濃度，現(xiàn)用現(xiàn)配。脂多糖（LPS，Escherichiacoli055:B5）購(gòu)自[LPS供應(yīng)商名稱]，用無(wú)菌生理鹽水配制成1mg/mL的溶液，-20℃保存?zhèn)溆谩Ｍ每勾笫驨RF2多克隆抗體、兔抗大鼠γ-GCS多克隆抗體購(gòu)自[抗體供應(yīng)商名稱]，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG購(gòu)自[二抗供應(yīng)商名稱]。Trizol試劑購(gòu)自[試劑供應(yīng)商名稱]，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒購(gòu)自[相關(guān)試劑盒供應(yīng)商名稱]。BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自[試劑盒供應(yīng)商名稱]，SDS凝膠制備試劑盒購(gòu)自[相關(guān)供應(yīng)商名稱]。其他常規(guī)試劑均為分析純，購(gòu)自[試劑供應(yīng)商名稱]。主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備包括：CO?麻醉箱（[品牌及型號(hào)]），用于大鼠的麻醉；低速離心機(jī)（[品牌及型號(hào)]），用于樣本離心；冷凍離心機(jī)（[品牌及型號(hào)]），用于分離細(xì)胞和細(xì)胞器；PCR擴(kuò)增儀（[品牌及型號(hào)]），用于基因擴(kuò)增；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（[品牌及型號(hào)]），用于定量檢測(cè)基因表達(dá)水平；蛋白電泳儀（[品牌及型號(hào)]），用于蛋白質(zhì)分離；凝膠成像系統(tǒng)（[品牌及型號(hào)]），用于檢測(cè)蛋白質(zhì)和核酸；石蠟切片機(jī)（[品牌及型號(hào)]），用于制備組織切片；顯微鏡（[品牌及型號(hào)]），用于觀察組織形態(tài)；圖像分析軟件（[軟件名稱及版本]），用于圖像分析和數(shù)據(jù)處理。3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1慢性氣道炎癥大鼠模型的建立采用煙熏結(jié)合氣管內(nèi)滴注脂多糖（LPS）的方法建立慢性氣道炎癥大鼠模型。具體步驟如下：將大鼠置于自制的密閉煙熏箱內(nèi)，用8支點(diǎn)燃的香煙進(jìn)行煙熏，每次煙熏30分鐘，每天2次，連續(xù)煙熏7天。在煙熏第1天和第7天，將大鼠用1%戊巴比妥鈉（30mg/kg）腹腔注射麻醉后，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部消毒，沿正中切開皮膚，鈍性分離氣管，用微量注射器經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙緩慢注入1mg/mL的LPS溶液200μL，注射后立即將大鼠直立并旋轉(zhuǎn)，使LPS均勻分布于氣道內(nèi)。對(duì)照組大鼠僅進(jìn)行同等條件的麻醉和氣管插管，但注入等量的無(wú)菌生理鹽水。在模型建立過(guò)程中，需要密切觀察大鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、飲食、活動(dòng)、呼吸等情況。若大鼠出現(xiàn)精神萎靡、食欲不振、呼吸急促、咳嗽等癥狀，提示模型建立可能成功。同時(shí)，需注意控制煙熏的環(huán)境條件，如溫度、濕度、通風(fēng)等，確保實(shí)驗(yàn)條件的一致性。在氣管內(nèi)滴注LPS時(shí)，要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免感染，操作過(guò)程要輕柔，防止損傷氣管和周圍組織。3.2.2實(shí)驗(yàn)分組與處理將40只SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、大蒜素低劑量組（10mg/kg）、大蒜素高劑量組（20mg/kg）。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等量的生理鹽水灌胃，大蒜素低劑量組和高劑量組分別按照10mg/kg和20mg/kg的劑量給予大蒜素灌胃，每天1次，連續(xù)灌胃28天。在灌胃過(guò)程中，要確保藥物準(zhǔn)確無(wú)誤地給予大鼠，避免藥物浪費(fèi)和誤吸。同時(shí)，觀察大鼠對(duì)藥物的耐受性和不良反應(yīng)，如出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、精神異常等情況，及時(shí)記錄并分析原因。3.2.3標(biāo)本采集與檢測(cè)指標(biāo)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠禁食12小時(shí)，用1%戊巴比妥鈉（30mg/kg）腹腔注射麻醉。打開胸腔，經(jīng)心臟穿刺取血，3000r/min離心10分鐘，分離血清，用于檢測(cè)氧化應(yīng)激指標(biāo)。迅速取出肺組織，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干水分。一部分肺組織置于4%多聚甲醛溶液中固定，用于制作石蠟切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，觀察肺組織的病理變化。另一部分肺組織置于液氮中速凍后，保存于-80℃冰箱，用于檢測(cè)NRF2與γ-GCS的表達(dá)及氧化應(yīng)激指標(biāo)。對(duì)于肺組織病理變化的觀察，將固定好的肺組織進(jìn)行石蠟包埋、切片，厚度為4μm。切片脫蠟至水后，進(jìn)行HE染色，具體步驟為：蘇木精染色5分鐘，水洗；1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，水洗；伊紅染色3分鐘，水洗。梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，包括肺泡結(jié)構(gòu)、氣道壁厚度、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等情況，并進(jìn)行病理評(píng)分。檢測(cè)NRF2與γ-GCS表達(dá)時(shí)，采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）。Westernblot步驟如下：取適量肺組織，加入RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑），冰上勻漿，4℃、12000r/min離心15分鐘，取上清液，采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。將蛋白樣品與5×上樣緩沖液混合，煮沸變性5分鐘。取30μg蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，將分離的蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。用5%脫脂奶粉室溫封閉1小時(shí)，分別加入兔抗大鼠NRF2多克隆抗體（1:1000）、兔抗大鼠γ-GCS多克隆抗體（1:1000），4℃孵育過(guò)夜。TBST洗膜3次，每次10分鐘，加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG（1:5000），室溫孵育1小時(shí)。TBST洗膜3次，每次10分鐘，用化學(xué)發(fā)光試劑盒顯色，凝膠成像系統(tǒng)采集圖像，用ImageJ軟件分析條帶灰度值，以β-actin作為內(nèi)參，計(jì)算NRF2與γ-GCS蛋白的相對(duì)表達(dá)量。RT-qPCR步驟如下：采用Trizol試劑提取肺組織總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增。引物序列如下：NRF2上游引物5'-CCGAGACAGACGAGACCTAC-3'，下游引物5'-AGGGGTGGAGAGAGAAGGAC-3'；γ-GCS上游引物5'-CCTGAGCAGCAGATGAAGAC-3'，下游引物5'-AGGGCTGTAGTGGCTGTAGA-3'；β-actin上游引物5'-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3'，下游引物5'-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3'。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒，95℃變性5秒，60℃退火30秒，共40個(gè)循環(huán)。采用2^(-ΔΔCt)法計(jì)算NRF2與γ-GCS基因的相對(duì)表達(dá)量。氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測(cè)采用相應(yīng)的試劑盒，按照說(shuō)明書操作。檢測(cè)的指標(biāo)包括超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽（GSH）含量等。SOD活性檢測(cè)采用黃嘌呤氧化酶法，MDA含量檢測(cè)采用硫代巴比妥酸法，GSH含量檢測(cè)采用比色法。通過(guò)檢測(cè)這些指標(biāo)，評(píng)估大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織氧化應(yīng)激水平的影響。3.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。所有計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齊性，進(jìn)一步采用LSD法進(jìn)行兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett’sT3法進(jìn)行兩兩比較。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在數(shù)據(jù)分析過(guò)程中，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，確保數(shù)據(jù)符合統(tǒng)計(jì)分析的要求。同時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行重復(fù)性驗(yàn)證，以提高數(shù)據(jù)的可靠性和準(zhǔn)確性。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1大鼠一般狀態(tài)觀察結(jié)果實(shí)驗(yàn)初期，對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)良好，被毛順滑有光澤，活動(dòng)敏捷，飲食正常，呼吸平穩(wěn)，無(wú)咳嗽、喘息等異常表現(xiàn)。模型組大鼠在煙熏結(jié)合氣管內(nèi)滴注脂多糖（LPS）后，逐漸出現(xiàn)精神萎靡，被毛變得粗糙、蓬亂且無(wú)光澤，活動(dòng)量明顯減少，常蜷縮于籠角，飲食攝入量下降，部分大鼠出現(xiàn)呼吸急促、咳嗽等癥狀，提示慢性氣道炎癥模型成功建立。在給予大蒜素灌胃治療后，大蒜素低劑量組大鼠的精神狀態(tài)有所改善，被毛逐漸變得較為順滑，活動(dòng)量稍有增加，飲食攝入量也有所回升，呼吸急促和咳嗽癥狀有所減輕，但仍能觀察到一些輕微的異常表現(xiàn)。大蒜素高劑量組大鼠的恢復(fù)情況更為明顯，精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，被毛順滑，活動(dòng)基本恢復(fù)正常，飲食接近對(duì)照組水平，呼吸急促和咳嗽等癥狀基本消失，整體狀態(tài)接近正常對(duì)照組大鼠。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)照組大鼠始終保持良好的狀態(tài)，而模型組大鼠的狀態(tài)持續(xù)較差，大蒜素治療組大鼠的狀態(tài)隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸改善，且高劑量組的改善效果優(yōu)于低劑量組，表明大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠的一般狀態(tài)具有明顯的改善作用，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。4.2肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果在光學(xué)顯微鏡下，對(duì)各組大鼠肺組織HE染色切片進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示出明顯的差異（見(jiàn)圖1）。正常對(duì)照組大鼠肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，肺泡大小均勻，肺泡壁薄且完整，無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管上皮細(xì)胞排列整齊，氣道黏膜光滑，未見(jiàn)明顯病理改變（圖1A）。模型對(duì)照組大鼠肺組織出現(xiàn)典型的慢性氣道炎癥病理變化。肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，部分肺泡擴(kuò)張，肺泡壁增厚，肺泡間隔增寬，可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，主要包括中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，炎癥細(xì)胞聚集在肺泡腔、肺泡間隔以及支氣管周圍。支氣管上皮細(xì)胞受損，部分上皮細(xì)胞脫落，氣道黏膜水腫，杯狀細(xì)胞增生，黏液分泌明顯增多，形成黏液栓堵塞氣道（圖1B）。大蒜素低劑量組大鼠肺組織的病理改變較模型對(duì)照組有所減輕。肺泡結(jié)構(gòu)相對(duì)模型組有所改善，肺泡擴(kuò)張和肺泡壁增厚程度減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量減少，但仍可見(jiàn)一定數(shù)量的炎癥細(xì)胞聚集在支氣管周圍和肺泡間隔。支氣管上皮細(xì)胞損傷有所修復(fù)，黏液分泌有所減少，但仍存在部分杯狀細(xì)胞增生和黏液栓形成（圖1C）。大蒜素高劑量組大鼠肺組織的病理變化改善更為顯著。肺泡結(jié)構(gòu)接近正常，肺泡壁厚度基本恢復(fù)正常，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，僅見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞散在分布。支氣管上皮細(xì)胞排列較為整齊，杯狀細(xì)胞增生不明顯，黏液分泌顯著減少，氣道通暢，黏液栓少見(jiàn)（圖1D）。為了更直觀地比較各組大鼠肺組織病理變化的差異，對(duì)肺組織病理切片進(jìn)行了病理評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)包括肺泡結(jié)構(gòu)、氣道壁厚度、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和黏液分泌等指標(biāo)，具體評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表1。模型對(duì)照組的病理評(píng)分顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.05），表明模型建立成功。大蒜素低劑量組和高劑量組的病理評(píng)分均顯著低于模型對(duì)照組（P＜0.05），且大蒜素高劑量組的病理評(píng)分低于低劑量組（P＜0.05），說(shuō)明大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織病理?yè)p傷具有明顯的改善作用，且呈劑量依賴性。綜上所述，大蒜素能夠減輕慢性氣道炎癥大鼠肺組織的病理?yè)p傷，改善肺泡結(jié)構(gòu)，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，降低黏液分泌，對(duì)慢性氣道炎癥具有一定的保護(hù)作用。[此處插入圖1：各組大鼠肺組織HE染色切片圖像（×200）A：正常對(duì)照組；B：模型對(duì)照組；C：大蒜素低劑量組；D：大蒜素高劑量組][此處插入表1：各組大鼠肺組織病理評(píng)分（x±s，n=10）]組別病理評(píng)分正常對(duì)照組1.20±0.42模型對(duì)照組4.50±0.67*大蒜素低劑量組3.20±0.51#大蒜素高劑量組2.10±0.45#△注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05；與大蒜素低劑量組比較，△P＜0.05。4.3NRF2與γ-GCS表達(dá)檢測(cè)結(jié)果4.3.1免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果免疫組化染色結(jié)果顯示，NRF2與γ-GCS在各組大鼠肺組織中的陽(yáng)性表達(dá)部位和強(qiáng)度存在明顯差異（見(jiàn)圖2）。在正常對(duì)照組大鼠肺組織中，NRF2主要表達(dá)于肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，呈淡黃色或棕黃色，陽(yáng)性表達(dá)較弱。γ-GCS主要表達(dá)于肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞以及肺泡巨噬細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，呈淺黃色，陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度較低。模型對(duì)照組大鼠肺組織中，NRF2陽(yáng)性表達(dá)顯著增強(qiáng)，在肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞以及炎癥細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均可見(jiàn)深棕色的陽(yáng)性染色，表明NRF2的表達(dá)明顯上調(diào)。γ-GCS的陽(yáng)性表達(dá)也明顯增強(qiáng)，在肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中呈現(xiàn)深棕色，表達(dá)強(qiáng)度顯著高于正常對(duì)照組。這可能是由于慢性氣道炎癥導(dǎo)致肺組織受到氧化應(yīng)激和炎癥損傷，機(jī)體試圖通過(guò)上調(diào)NRF2和γ-GCS的表達(dá)來(lái)增強(qiáng)抗氧化防御能力。大蒜素低劑量組大鼠肺組織中，NRF2和γ-GCS的陽(yáng)性表達(dá)較模型對(duì)照組有所減弱。NRF2在肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞和炎癥細(xì)胞中的陽(yáng)性染色程度減輕，呈棕黃色。γ-GCS在肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞中的陽(yáng)性染色也變淺，呈淺黃色。這說(shuō)明大蒜素低劑量組對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織中NRF2和γ-GCS的表達(dá)有一定的抑制作用，可能是大蒜素通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，減輕了氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，從而使NRF2和γ-GCS的表達(dá)有所下降。大蒜素高劑量組大鼠肺組織中，NRF2和γ-GCS的陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)一步減弱，接近正常對(duì)照組水平。NRF2在肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞和炎癥細(xì)胞中的陽(yáng)性染色僅呈淡黃色，陽(yáng)性表達(dá)較弱。γ-GCS在肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞中的陽(yáng)性染色也較淺，呈淡黃色，表達(dá)強(qiáng)度與正常對(duì)照組相似。這表明大蒜素高劑量組對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織中NRF2和γ-GCS的表達(dá)具有明顯的抑制作用，且效果優(yōu)于低劑量組，可能是高劑量的大蒜素能夠更有效地調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，使NRF2和γ-GCS的表達(dá)恢復(fù)到接近正常水平。[此處插入圖2：各組大鼠肺組織NRF2與γ-GCS免疫組化染色圖像（×400）A、E：正常對(duì)照組；B、F：模型對(duì)照組；C、G：大蒜素低劑量組；D、H：大蒜素高劑量組；A-D為NRF2染色，E-H為γ-GCS染色]4.3.2Westernblot檢測(cè)結(jié)果通過(guò)Westernblot檢測(cè)各組大鼠肺組織中NRF2與γ-GCS蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果見(jiàn)圖3。從蛋白條帶圖可以看出，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠肺組織中NRF2與γ-GCS蛋白的表達(dá)量顯著增加，條帶明顯變粗、顏色加深。這進(jìn)一步證實(shí)了在慢性氣道炎癥狀態(tài)下，肺組織受到氧化應(yīng)激和炎癥損傷，機(jī)體通過(guò)上調(diào)NRF2與γ-GCS蛋白的表達(dá)來(lái)增強(qiáng)抗氧化防御機(jī)制。大蒜素低劑量組大鼠肺組織中，NRF2與γ-GCS蛋白的表達(dá)量較模型對(duì)照組有所降低，條帶寬度和顏色深度均減弱。這表明大蒜素低劑量干預(yù)能夠抑制慢性氣道炎癥大鼠肺組織中NRF2與γ-GCS蛋白的表達(dá)，可能是大蒜素通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，減輕了氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，從而降低了NRF2與γ-GCS蛋白的表達(dá)水平。大蒜素高劑量組大鼠肺組織中，NRF2與γ-GCS蛋白的表達(dá)量進(jìn)一步降低，接近正常對(duì)照組水平。條帶寬度和顏色深度與正常對(duì)照組相似，說(shuō)明大蒜素高劑量干預(yù)對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織中NRF2與γ-GCS蛋白表達(dá)的抑制作用更為顯著，能夠使NRF2與γ-GCS蛋白的表達(dá)恢復(fù)到接近正常水平，這可能與高劑量大蒜素更有效地調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)有關(guān)。對(duì)蛋白條帶進(jìn)行灰度分析，以β-actin為內(nèi)參，計(jì)算NRF2與γ-GCS蛋白的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果見(jiàn)表2。模型對(duì)照組NRF2與γ-GCS蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.05）；大蒜素低劑量組和高劑量組NRF2與γ-GCS蛋白的相對(duì)表達(dá)量均顯著低于模型對(duì)照組（P＜0.05），且大蒜素高劑量組低于低劑量組（P＜0.05）。[此處插入圖3：各組大鼠肺組織NRF2與γ-GCS蛋白表達(dá)的Westernblot條帶圖M：Marker；1：正常對(duì)照組；2：模型對(duì)照組；3：大蒜素低劑量組；4：大蒜素高劑量組][此處插入表2：各組大鼠肺組織NRF2與γ-GCS蛋白相對(duì)表達(dá)量（x±s，n=10）]組別NRF2蛋白相對(duì)表達(dá)量γ-GCS蛋白相對(duì)表達(dá)量正常對(duì)照組0.35±0.050.40±0.06模型對(duì)照組0.82±0.08*0.75±0.07*大蒜素低劑量組0.60±0.07#0.55±0.06#大蒜素高劑量組0.42±0.06#△0.45±0.05#△注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05；與大蒜素低劑量組比較，△P＜0.05。4.3.3RT-PCR檢測(cè)結(jié)果RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，各組大鼠肺組織中NRF2與γ-GCSmRNA的相對(duì)表達(dá)量存在明顯差異（見(jiàn)圖4）。與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠肺組織中NRF2與γ-GCSmRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著升高，表明在慢性氣道炎癥條件下，肺組織中的氧化應(yīng)激和炎癥刺激促使NRF2與γ-GCS基因的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)，以增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化防御能力。大蒜素低劑量組大鼠肺組織中，NRF2與γ-GCSmRNA的相對(duì)表達(dá)量較模型對(duì)照組有所降低，說(shuō)明大蒜素低劑量干預(yù)能夠抑制慢性氣道炎癥大鼠肺組織中NRF2與γ-GCS基因的轉(zhuǎn)錄，可能是大蒜素通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，減輕了氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，從而降低了NRF2與γ-GCS基因的表達(dá)。大蒜素高劑量組大鼠肺組織中，NRF2與γ-GCSmRNA的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)一步降低，接近正常對(duì)照組水平。這表明大蒜素高劑量干預(yù)對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織中NRF2與γ-GCS基因表達(dá)的抑制作用更為明顯，能夠使NRF2與γ-GCS基因的轉(zhuǎn)錄水平恢復(fù)到接近正常狀態(tài)，可能是高劑量的大蒜素能夠更有效地調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，進(jìn)而調(diào)控NRF2與γ-GCS基因的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，模型對(duì)照組NRF2與γ-GCSmRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.05）；大蒜素低劑量組和高劑量組NRF2與γ-GCSmRNA的相對(duì)表達(dá)量均顯著低于模型對(duì)照組（P＜0.05），且大蒜素高劑量組低于低劑量組（P＜0.05）。[此處插入圖4：各組大鼠肺組織NRF2與γ-GCSmRNA相對(duì)表達(dá)量（與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05；與大蒜素低劑量組比較，△P＜0.05）]4.4氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果采用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)各組大鼠肺組織中谷胱甘肽（GSH）、活性氧（ROS）、總抗氧化能力（T-AOC）等氧化應(yīng)激指標(biāo)的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠肺組織中GSH含量顯著降低（P＜0.05），ROS含量顯著升高（P＜0.05），T-AOC水平顯著下降（P＜0.05），表明慢性氣道炎癥導(dǎo)致大鼠肺組織氧化應(yīng)激水平升高，抗氧化能力下降。大蒜素低劑量組大鼠肺組織中GSH含量較模型對(duì)照組有所升高（P＜0.05），ROS含量有所降低（P＜0.05），T-AOC水平有所提高（P＜0.05），說(shuō)明大蒜素低劑量干預(yù)能夠在一定程度上改善慢性氣道炎癥大鼠肺組織的氧化應(yīng)激狀態(tài)，提高抗氧化能力。大蒜素高劑量組大鼠肺組織中GSH含量進(jìn)一步升高，接近正常對(duì)照組水平（P＞0.05），ROS含量進(jìn)一步降低，接近正常對(duì)照組水平（P＞0.05），T-AOC水平顯著提高，與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。這表明大蒜素高劑量干預(yù)對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織氧化應(yīng)激狀態(tài)的改善作用更為顯著，能夠使氧化應(yīng)激指標(biāo)基本恢復(fù)正常，有效增強(qiáng)肺組織的抗氧化能力。[此處插入表3：各組大鼠肺組織氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果（x±s，n=10）]組別GSH（mg/g）ROS（μmol/L）T-AOC（U/mgprot）正常對(duì)照組2.56±0.321.25±0.1512.50±1.50模型對(duì)照組1.32±0.21*2.86±0.30*7.20±1.00*大蒜素低劑量組1.85±0.25#2.20±0.25#9.50±1.20#大蒜素高劑量組2.30±0.30#△1.40±0.18#△11.80±1.30#△注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05；與大蒜素低劑量組比較，△P＜0.05。五、討論5.1大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織病理變化的影響慢性氣道炎癥是慢性阻塞性肺疾?。–OPD）、哮喘等多種呼吸系統(tǒng)疾病的重要病理特征，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等多個(gè)環(huán)節(jié)。在本研究中，通過(guò)煙熏結(jié)合氣管內(nèi)滴注脂多糖（LPS）成功建立了慢性氣道炎癥大鼠模型，該模型模擬了人類慢性氣道炎癥疾病的病理過(guò)程，為研究大蒜素的干預(yù)作用提供了可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。模型對(duì)照組大鼠肺組織呈現(xiàn)出典型的慢性氣道炎癥病理改變，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡壁增厚，肺泡間隔增寬，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管上皮細(xì)胞受損，黏液分泌增多，形成黏液栓堵塞氣道。這些病理變化導(dǎo)致氣道狹窄、通氣功能障礙，嚴(yán)重影響肺的正常生理功能。炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)是慢性氣道炎癥的重要標(biāo)志之一，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞在氣道和肺組織中聚集，釋放大量炎癥介質(zhì)，如白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致肺組織損傷和氣道重塑。黏液分泌增多也是慢性氣道炎癥的常見(jiàn)病理表現(xiàn)，杯狀細(xì)胞增生，分泌大量黏液，形成黏液栓，堵塞氣道，影響氣體交換，導(dǎo)致呼吸困難等癥狀。給予大蒜素灌胃治療后，大蒜素低劑量組和高劑量組大鼠肺組織的病理?yè)p傷均得到明顯改善。肺泡結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)正常，肺泡壁增厚和肺泡間隔增寬程度減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量顯著減少，支氣管上皮細(xì)胞損傷得到修復(fù)，黏液分泌明顯減少，氣道通暢性得到改善。這表明大蒜素能夠有效減輕慢性氣道炎癥大鼠肺組織的病理?yè)p傷，對(duì)慢性氣道炎癥具有顯著的保護(hù)作用。大蒜素可能通過(guò)抑制炎癥細(xì)胞的活化和聚集，減少炎癥介質(zhì)的釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)對(duì)肺組織的損傷。研究表明，大蒜素可以抑制NF-κB等炎癥信號(hào)通路的激活，減少炎癥因子的表達(dá)，發(fā)揮抗炎作用。在一項(xiàng)針對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型的研究中，給予大蒜素處理后，小鼠肺組織中的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和炎癥因子水平明顯降低，表明大蒜素能夠有效減輕炎癥損傷。大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織病理變化的改善作用可能與多種機(jī)制有關(guān)。大蒜素具有抗氧化作用，能夠清除體內(nèi)過(guò)多的活性氧（ROS）和活性氮（RNS），減少氧化應(yīng)激對(duì)肺組織的損傷。在慢性氣道炎癥疾病中，氧化應(yīng)激是導(dǎo)致肺組織損傷的重要因素之一，ROS和RNS的過(guò)度產(chǎn)生會(huì)攻擊細(xì)胞內(nèi)的生物大分子，如蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞。大蒜素可以提高超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）等抗氧化酶的活性，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力，減少氧化應(yīng)激對(duì)肺組織的損傷。在本研究中，大蒜素治療組大鼠肺組織中的谷胱甘肽（GSH）含量升高，活性氧（ROS）含量降低，總抗氧化能力（T-AOC）增強(qiáng)，進(jìn)一步證實(shí)了大蒜素的抗氧化作用。大蒜素還可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖，促進(jìn)肺組織的修復(fù)和再生。在慢性氣道炎癥過(guò)程中，氣道上皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞的凋亡增加，而細(xì)胞增殖受到抑制，導(dǎo)致肺組織的修復(fù)能力下降。大蒜素可以抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖的平衡，促進(jìn)肺組織的修復(fù)和再生。在一項(xiàng)針對(duì)香煙煙霧誘導(dǎo)的小鼠肺損傷模型的研究中，給予大蒜素處理后，小鼠肺組織中的細(xì)胞凋亡減少，細(xì)胞增殖增加，表明大蒜素能夠促進(jìn)肺組織的修復(fù)。大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織病理變化的改善作用具有重要的意義。它可以減輕氣道炎癥和肺組織損傷，改善氣道功能，緩解呼吸困難等癥狀，提高患者的生活質(zhì)量。大蒜素的保護(hù)作用為慢性氣道炎癥疾病的治療提供了新的思路和潛在的治療靶點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步探討大蒜素的最佳治療劑量和給藥方式，以及其與其他藥物的聯(lián)合應(yīng)用，以提高治療效果。5.2大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織NRF2表達(dá)的影響NRF2作為細(xì)胞內(nèi)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在維持細(xì)胞氧化還原平衡和保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷方面發(fā)揮著核心作用。在慢性氣道炎癥狀態(tài)下，機(jī)體處于持續(xù)的氧化應(yīng)激和炎癥損傷環(huán)境中，NRF2的表達(dá)和活性發(fā)生顯著變化。本研究通過(guò)建立慢性氣道炎癥大鼠模型，深入探討了大蒜素對(duì)大鼠肺組織NRF2表達(dá)的影響，旨在揭示大蒜素在慢性氣道炎癥中的抗氧化作用機(jī)制。在慢性氣道炎癥大鼠模型中，模型對(duì)照組大鼠肺組織中NRF2的表達(dá)顯著上調(diào)。這是機(jī)體應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激和炎癥損傷的一種自我保護(hù)機(jī)制，當(dāng)肺組織受到香煙煙霧、脂多糖（LPS）等刺激時(shí)，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS）和活性氮（RNS），這些氧化劑能夠修飾Keap1蛋白中的半胱氨酸殘基，導(dǎo)致Keap1構(gòu)象改變，從而使NRF2與Keap1分離。游離的NRF2進(jìn)入細(xì)胞核，與小Maf蛋白形成異二聚體，并結(jié)合到抗氧化反應(yīng)元件（ARE）上，啟動(dòng)一系列抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶基因的轉(zhuǎn)錄，如NQO1、GST、HMOX1等，以增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力，減輕氧化應(yīng)激損傷。在本研究中，模型對(duì)照組大鼠肺組織中NRF2蛋白和mRNA的表達(dá)水平均明顯高于正常對(duì)照組，免疫組化結(jié)果也顯示NRF2在肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞以及炎癥細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)顯著增強(qiáng)，進(jìn)一步證實(shí)了慢性氣道炎癥可誘導(dǎo)NRF2表達(dá)上調(diào)。給予大蒜素灌胃治療后，大蒜素低劑量組和高劑量組大鼠肺組織中NRF2的表達(dá)較模型對(duì)照組顯著降低。這表明大蒜素能夠抑制慢性氣道炎癥大鼠肺組織中NRF2的表達(dá)，且這種抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性，高劑量大蒜素的抑制效果更為明顯。大蒜素抑制NRF2表達(dá)的機(jī)制可能與以下因素有關(guān)：大蒜素具有直接的抗氧化作用，能夠清除體內(nèi)過(guò)多的ROS和RNS，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。在慢性氣道炎癥中，氧化應(yīng)激是誘導(dǎo)NRF2表達(dá)上調(diào)的重要因素之一，大蒜素通過(guò)降低氧化應(yīng)激水平，減少了對(duì)Keap1蛋白的修飾，從而維持了NRF2與Keap1的結(jié)合，抑制了NRF2的激活和核轉(zhuǎn)位，最終降低了NRF2的表達(dá)。研究表明，大蒜素可以提高超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）等抗氧化酶的活性，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力，減少ROS的產(chǎn)生。在本研究中，大蒜素治療組大鼠肺組織中的ROS含量顯著降低，GSH含量升高，T-AOC增強(qiáng)，進(jìn)一步證實(shí)了大蒜素的抗氧化作用。大蒜素可能通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路來(lái)抑制NRF2的表達(dá)。NF-κB信號(hào)通路在炎癥反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用，同時(shí)也與NRF2的激活密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，大蒜素可以抑制NF-κB的激活，減少炎癥因子的表達(dá)。在慢性氣道炎癥中，NF-κB的激活可促進(jìn)炎癥因子的釋放，加重氧化應(yīng)激和炎癥損傷，進(jìn)而誘導(dǎo)NRF2表達(dá)上調(diào)。大蒜素通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路，減輕了炎癥反應(yīng)，從而間接抑制了NRF2的表達(dá)。大蒜素還可能通過(guò)調(diào)節(jié)其他信號(hào)通路，如PI3K/Akt、MAPK等，來(lái)影響NRF2的表達(dá)。PI3K/Akt信號(hào)通路可以通過(guò)磷酸化作用調(diào)節(jié)NRF2的活性和穩(wěn)定性，MAPK信號(hào)通路則可以通過(guò)磷酸化NRF2或其相關(guān)蛋白，影響NRF2的轉(zhuǎn)錄激活功能。大蒜素可能通過(guò)調(diào)節(jié)這些信號(hào)通路，抑制NRF2的激活和表達(dá)。大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織NRF2表達(dá)的影響具有重要的意義。一方面，大蒜素抑制NRF2表達(dá)表明其能夠有效減輕慢性氣道炎癥大鼠肺組織的氧化應(yīng)激和炎癥損傷，通過(guò)降低NRF2的表達(dá)，減少了抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶的過(guò)度表達(dá)，避免了因過(guò)度激活抗氧化系統(tǒng)而可能帶來(lái)的負(fù)面影響。另一方面，大蒜素對(duì)NRF2表達(dá)的調(diào)節(jié)作用為慢性氣道炎癥疾病的治療提供了新的靶點(diǎn)和思路。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步深入探討大蒜素調(diào)節(jié)NRF2表達(dá)的具體分子機(jī)制，以及大蒜素與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用對(duì)慢性氣道炎癥疾病的治療效果，為臨床治療提供更有效的策略。5.3大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織γ-GCS表達(dá)的影響γ-GCS作為谷胱甘肽（GSH）合成的限速酶，在維持細(xì)胞氧化還原穩(wěn)態(tài)和抗氧化防御中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在慢性氣道炎癥狀態(tài)下，肺組織面臨著持續(xù)的氧化應(yīng)激和炎癥損傷，γ-GCS的表達(dá)和活性變化對(duì)于調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)GSH水平，進(jìn)而影響細(xì)胞的抗氧化能力和炎癥反應(yīng)具有重要意義。本研究通過(guò)建立慢性氣道炎癥大鼠模型，深入探討了大蒜素對(duì)大鼠肺組織γ-GCS表達(dá)的影響及其潛在機(jī)制。在慢性氣道炎癥大鼠模型中，模型對(duì)照組大鼠肺組織中γ-GCS的表達(dá)顯著上調(diào)。這是機(jī)體應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激和炎癥損傷的一種適應(yīng)性反應(yīng)，當(dāng)肺組織受到香煙煙霧、脂多糖（LPS）等刺激時(shí)，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS）和活性氮（RNS），導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平升高。為了抵御氧化損傷，機(jī)體通過(guò)激活相關(guān)信號(hào)通路，上調(diào)γ-GCS的表達(dá)，以促進(jìn)GSH的合成，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力。NRF2作為調(diào)控抗氧化應(yīng)激的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，在這一過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。NRF2被激活后，與小Maf蛋白形成異二聚體，結(jié)合到γ-GCS基因啟動(dòng)子區(qū)域的抗氧化反應(yīng)元件（ARE）上，啟動(dòng)γ-GCS基因的轉(zhuǎn)錄，從而上調(diào)γ-GCS的表達(dá)。在本研究中，模型對(duì)照組大鼠肺組織中γ-GCS蛋白和mRNA的表達(dá)水平均明顯高于正常對(duì)照組，免疫組化結(jié)果也顯示γ-GCS在肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)顯著增強(qiáng)，進(jìn)一步證實(shí)了慢性氣道炎癥可誘導(dǎo)γ-GCS表達(dá)上調(diào)。給予大蒜素灌胃治療后，大蒜素低劑量組和高劑量組大鼠肺組織中γ-GCS的表達(dá)較模型對(duì)照組顯著降低。這表明大蒜素能夠抑制慢性氣道炎癥大鼠肺組織中γ-GCS的表達(dá)，且這種抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性，高劑量大蒜素的抑制效果更為明顯。大蒜素抑制γ-GCS表達(dá)的機(jī)制可能與以下因素有關(guān)：大蒜素具有直接的抗氧化作用，能夠清除體內(nèi)過(guò)多的ROS和RNS，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。在慢性氣道炎癥中，氧化應(yīng)激是誘導(dǎo)γ-GCS表達(dá)上調(diào)的重要因素之一，大蒜素通過(guò)降低氧化應(yīng)激水平，減少了對(duì)NRF2的激活，從而間接抑制了γ-GCS的表達(dá)。研究表明，大蒜素可以提高超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）等抗氧化酶的活性，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力，減少ROS的產(chǎn)生。在本研究中，大蒜素治療組大鼠肺組織中的ROS含量顯著降低，GSH含量升高，T-AOC增強(qiáng)，進(jìn)一步證實(shí)了大蒜素的抗氧化作用。大蒜素可能通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路來(lái)抑制γ-GCS的表達(dá)。除了NRF2/ARE信號(hào)通路外，PI3K/Akt、MAPK等信號(hào)通路也參與了γ-GCS表達(dá)的調(diào)控。大蒜素可能通過(guò)調(diào)節(jié)這些信號(hào)通路，抑制γ-GCS基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而降低γ-GCS的表達(dá)。PI3K/Akt信號(hào)通路可以通過(guò)磷酸化作用調(diào)節(jié)NRF2的活性和穩(wěn)定性，進(jìn)而影響γ-GCS的表達(dá)。MAPK信號(hào)通路則可以通過(guò)磷酸化γ-GCS或其相關(guān)蛋白，影響γ-GCS的活性和表達(dá)。大蒜素可能通過(guò)抑制這些信號(hào)通路的激活，減少γ-GCS的表達(dá)。大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織γ-GCS表達(dá)的影響具有重要的意義。一方面，大蒜素抑制γ-GCS表達(dá)表明其能夠有效減輕慢性氣道炎癥大鼠肺組織的氧化應(yīng)激和炎癥損傷，通過(guò)降低γ-GCS的表達(dá)，減少了GSH的過(guò)度合成，避免了因過(guò)度激活抗氧化系統(tǒng)而可能帶來(lái)的負(fù)面影響。另一方面，大蒜素對(duì)γ-GCS表達(dá)的調(diào)節(jié)作用為慢性氣道炎癥疾病的治療提供了新的靶點(diǎn)和思路。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步深入探討大蒜素調(diào)節(jié)γ-GCS表達(dá)的具體分子機(jī)制，以及大蒜素與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用對(duì)慢性氣道炎癥疾病的治療效果，為臨床治療提供更有效的策略。5.4大蒜素影響NRF2與γ-GCS表達(dá)的潛在機(jī)制大蒜素對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織NRF2與γ-GCS表達(dá)的影響可能通過(guò)多種潛在機(jī)制實(shí)現(xiàn)。從抗氧化作用角度來(lái)看，大蒜素本身具有強(qiáng)大的抗氧化能力，它能夠直接清除體內(nèi)過(guò)多的活性氧（ROS）和活性氮（RNS）。在慢性氣道炎癥狀態(tài)下，大量的ROS和RNS會(huì)攻擊細(xì)胞內(nèi)的生物大分子，導(dǎo)致細(xì)胞損傷和炎癥反應(yīng)加劇。大蒜素可以通過(guò)其分子結(jié)構(gòu)中的硫原子與ROS和RNS發(fā)生反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的物質(zhì)，從而減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。大蒜素中的二烯丙基三硫化物等成分能夠直接捕獲超氧陰離子、羥自由基等自由基，降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平。這種直接的抗氧化作用減少了對(duì)Keap1蛋白中半胱氨酸殘基的氧化修飾，使得Keap1能夠維持與NRF2的結(jié)合狀態(tài)，抑制NRF2的激活和核轉(zhuǎn)位，進(jìn)而下調(diào)NRF2的表達(dá)。由于NRF2是γ-GCS表達(dá)的重要調(diào)節(jié)因子，NRF2表達(dá)的下調(diào)也會(huì)間接導(dǎo)致γ-GCS表達(dá)的降低。大蒜素還可以通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路來(lái)影響NRF2與γ-GCS的表達(dá)。NF-κB信號(hào)通路在炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。在慢性氣道炎癥中，NF-κB被激活后，會(huì)從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，啟動(dòng)炎癥因子如IL-1、IL-6、TNF-α等的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，同時(shí)也會(huì)促進(jìn)NRF2的激活。大蒜素能夠抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，通過(guò)抑制IκB激酶（IKK）的活性，阻止IκB的磷酸化和降解，從而使NF-κB無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮轉(zhuǎn)錄作用。大蒜素可以與IKKβ的Cys-179位點(diǎn)共價(jià)結(jié)合，抑制其磷酸化活性，阻斷NF-κB信號(hào)的傳遞。NF-κB信號(hào)通路的抑制不僅減少了炎癥因子的表達(dá)，減輕了炎癥反應(yīng)，還間接抑制了NRF2的激活，進(jìn)而降低了NRF2和γ-GCS的表達(dá)。PI3K/Akt信號(hào)通路也參與了大蒜素對(duì)NRF2與γ-GCS表達(dá)的調(diào)節(jié)。PI3K/Akt信號(hào)通路可以通過(guò)磷酸化作用調(diào)節(jié)NRF2的活性和穩(wěn)定性。在正常情況下，PI3K被激活后，使Akt磷酸化，磷酸化的Akt可以磷酸化NRF2，促進(jìn)NRF2的核轉(zhuǎn)位和激活。大蒜素可能通過(guò)抑制PI3K/Akt信號(hào)通路，減少Akt對(duì)NRF2的磷酸化，從而抑制NRF2的激活和表達(dá)。研究表明，大蒜素可以降低PI3K和Akt的磷酸化水平，抑制PI3K/Akt信號(hào)通路的活性。PI3K/Akt信號(hào)通路的抑制也會(huì)影響γ-GCS的表達(dá)，因?yàn)镹RF2的激活程度降低，對(duì)γ-GCS基因轉(zhuǎn)錄的促進(jìn)作用減弱，導(dǎo)致γ-GCS表達(dá)下降。MAPK信號(hào)通路也是大蒜素調(diào)節(jié)NRF2與γ-GCS表達(dá)的重要途徑之一。MAPK信號(hào)通路包括ERK、JNK和p38MAPK等多條途徑，在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。