Waters液相色譜原理培訓(xùn)

Waters液相色譜原理培訓(xùn)演講人：日期:CATALOGUE目錄02儀器結(jié)構(gòu)解析01液相色譜基本原理03分離機(jī)制與影響因素04操作流程規(guī)范05維護(hù)與故障排查06應(yīng)用領(lǐng)域與案例液相色譜基本原理01流動相與固定相作用流動相相互作用類型固定相流動相流速作為樣品分子的載體，通過流動相將樣品帶入色譜柱進(jìn)行分離。固定在色譜柱中的填料，具有不同的吸附能力，與樣品分子發(fā)生相互作用。包括吸附、溶解、離子交換等，決定了樣品分子的分離效果。流速會影響樣品分子在色譜柱中的保留時(shí)間和分離效果。分配系數(shù)與保留行為分配系數(shù)描述樣品分子在固定相和流動相之間的分配比例，決定了樣品分子的保留時(shí)間。01保留行為指樣品分子在色譜柱中的保留時(shí)間和分離效果，與分配系數(shù)密切相關(guān)。02影響因素溫度、壓力、流動相組成等都會影響分配系數(shù)和保留行為。03分離度通過調(diào)整分配系數(shù)，可以實(shí)現(xiàn)樣品分子在色譜柱中的最佳分離效果。04色譜圖基本構(gòu)成記錄樣品分子在色譜柱中分離情況的圖表，通常由色譜柱、檢測器和記錄儀組成。代表不同樣品分子在色譜柱中的保留時(shí)間和濃度，峰的高低表示濃度大小。在沒有樣品分子流出時(shí)，檢測器的信號水平，是測量樣品分子濃度的基準(zhǔn)。通過觀察色譜峰的形狀、位置和數(shù)量，可以了解樣品分子的組成和濃度信息。色譜圖色譜峰基線色譜圖分析儀器結(jié)構(gòu)解析02溶劑儲液器用于儲存液相色譜分析所需的溶劑，包括儲液瓶、脫氣裝置等。高壓輸液泵將儲液器中的溶劑輸送至分離柱，提供穩(wěn)定的流量和壓力。分離柱實(shí)現(xiàn)樣品中各組分的分離，是HPLC系統(tǒng)的核心部件。控制系統(tǒng)包括電器控制部分和計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)，用于控制儀器的運(yùn)行和數(shù)據(jù)采集。HPLC系統(tǒng)核心組件輸液泵與進(jìn)樣器原理輸液泵工作原理進(jìn)樣器結(jié)構(gòu)輸液泵類型進(jìn)樣方式通過柱塞或隔膜的往復(fù)運(yùn)動，將溶劑從儲液器吸入并推送至分離柱。包括高壓恒流泵、高壓梯度洗脫泵等，滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。包括進(jìn)樣針、進(jìn)樣閥、定量環(huán)等，實(shí)現(xiàn)樣品的自動進(jìn)樣和定量。有手動進(jìn)樣和自動進(jìn)樣兩種，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行選擇。檢測器類型及功能紫外檢測器基于樣品對紫外光的吸收特性進(jìn)行檢測，適用于具有紫外吸收的物質(zhì)。熒光檢測器基于樣品在熒光激發(fā)下的發(fā)射特性進(jìn)行檢測，適用于熒光物質(zhì)。示差折光檢測器基于樣品與流動相之間折光率的差異進(jìn)行檢測，適用于高濃度樣品或梯度洗脫。電化學(xué)檢測器基于樣品在電極表面的電化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行檢測，適用于電化學(xué)活性物質(zhì)。分離機(jī)制與影響因素03柱溫升高，分離度降低，保留時(shí)間縮短；柱溫降低，分離度增加，保留時(shí)間延長。流動相極性改變，化合物在固定相和流動相之間的分配系數(shù)變化，保留時(shí)間隨之改變。流速增加，保留時(shí)間縮短；流速降低，保留時(shí)間延長。不同固定相對不同化合物的吸附能力不同，保留時(shí)間也不同。保留時(shí)間調(diào)控原理柱溫流動相組成流速固定相選擇峰形與塔板理論對稱峰、拖尾峰、前伸峰等，峰形影響分離度和積分準(zhǔn)確性。峰形分類通過理論塔板數(shù)評價(jià)柱效，理論塔板數(shù)越高，分離效果越好。識別并糾正可能導(dǎo)致峰形異常的儀器問題或操作失誤。塔板理論調(diào)整儀器參數(shù)和操作條件，如進(jìn)樣量、柱溫、流動相組成等，以獲得對稱、尖銳的峰形。峰形優(yōu)化01020403峰形異常識別選擇性優(yōu)化策略調(diào)整流動相組成溫度優(yōu)化選擇合適的固定相樣品前處理改變流動相的極性、pH值等，以改變化合物在固定相和流動相之間的分配系數(shù)，提高分離選擇性。根據(jù)化合物的極性和官能團(tuán)特性，選擇合適的固定相類型，提高分離選擇性。調(diào)整柱溫，以改變化合物在固定相上的吸附能力和擴(kuò)散速度，提高分離選擇性。通過衍生化、萃取、濃縮等前處理方法，提高樣品中目標(biāo)化合物的濃度和純度，從而改善分離效果。操作流程規(guī)范04流動相配制要求溶劑選擇選擇合適的溶劑，保證樣品能夠充分溶解并且與固定相不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。01溶劑過濾使用前需進(jìn)行過濾，除去溶劑中的雜質(zhì)和微粒，避免堵塞液相色譜柱。02氣泡排除配制過程中需充分?jǐn)嚢?，并靜置脫氣，以避免氣泡進(jìn)入液相色譜系統(tǒng)。03穩(wěn)定性配制好的流動相需保持穩(wěn)定，避免放置時(shí)間過長導(dǎo)致溶劑揮發(fā)或變質(zhì)。04等度與梯度洗脫設(shè)置等度洗脫流動相的組成在整個(gè)分析過程中保持不變，適用于樣品中各組分性質(zhì)相似或分離度較高的情況。梯度洗脫流動相的組成隨分析時(shí)間逐漸變化，以提高分離效果，常用于復(fù)雜樣品的分析。梯度程序設(shè)置需設(shè)置合理的梯度程序，包括起始洗脫條件、終止洗脫條件、梯度變化速率等。平衡時(shí)間每個(gè)梯度變化后需設(shè)置一定的平衡時(shí)間，以確保液相色譜柱達(dá)到新的平衡狀態(tài)。數(shù)據(jù)采集參數(shù)設(shè)定根據(jù)樣品中各組分的性質(zhì)，選擇合適的檢測波長，以提高檢測靈敏度。設(shè)置合理的采樣頻率，避免數(shù)據(jù)采集過程中出現(xiàn)失真或漏采現(xiàn)象。根據(jù)樣品中各組分的峰寬，設(shè)置合適的峰寬參數(shù)，以確保數(shù)據(jù)采集的準(zhǔn)確性。采集到的數(shù)據(jù)需進(jìn)行必要的處理和分析，如峰面積計(jì)算、濃度計(jì)算等。檢測波長采樣頻率峰寬設(shè)定數(shù)據(jù)處理維護(hù)與故障排查05日常維護(hù)操作要點(diǎn)保持儀器清潔泄漏檢查檢查流動相和樣品儀器校準(zhǔn)每次使用后，用適當(dāng)?shù)娜軇┣逑戳髀废到y(tǒng)，防止樣品殘留和堵塞。確保流動相和樣品純凈，無雜質(zhì)和固體顆粒，以防止儀器堵塞和損壞。定期檢查泵、閥門和管路等部件是否泄漏，確保系統(tǒng)穩(wěn)定性和安全性。定期進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。清洗流動池用適當(dāng)?shù)娜軇┣逑戳鲃映?，以去除污染物質(zhì)和殘留物。更換流動相嘗試更換新的流動相，以排除舊流動相中的污染物質(zhì)。平衡系統(tǒng)重新平衡液相色譜系統(tǒng)，確保流動相和固定相之間的平衡。檢查溫度波動確保液相色譜柱和檢測器的溫度穩(wěn)定，避免溫度波動引起的基線漂移?；€漂移解決方案色譜柱再生方法反向沖洗采用與常規(guī)流動相相反的流動相進(jìn)行反向沖洗，以去除柱內(nèi)的雜質(zhì)和污染物。01弱溶劑淋洗用弱溶劑淋洗色譜柱，以去除強(qiáng)吸附的樣品和雜質(zhì)。02超聲清洗將色譜柱置于超聲清洗器中，利用超聲波的振動作用去除柱內(nèi)污染物。03灌注清洗用適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行長時(shí)間灌注清洗，以徹底去除柱內(nèi)污染物和恢復(fù)柱性能。04應(yīng)用領(lǐng)域與案例06制藥行業(yè)質(zhì)量控制藥品成分分析采用Waters液相色譜技術(shù)對藥品中的各類成分進(jìn)行分離、鑒定和定量，確保藥物的有效成分含量符合標(biāo)準(zhǔn)。藥物雜質(zhì)檢測制劑質(zhì)量控制通過液相色譜法檢測藥物中的雜質(zhì)和降解產(chǎn)物，控制藥物的純度和質(zhì)量。對不同劑型的藥物進(jìn)行質(zhì)量控制，如片劑、膠囊、注射劑等，確保其藥物成分均勻且符合標(biāo)準(zhǔn)。123環(huán)境污染物檢測大氣污染物分析利用液相色譜技術(shù)檢測大氣中的多環(huán)芳烴、苯系物等污染物，評估空氣質(zhì)量。01水體污染物檢測針對飲用水、地表水、廢水等樣品中的有機(jī)物、農(nóng)藥殘留等污染物進(jìn)行液相色譜分析，確保水質(zhì)安全。02土壤污染監(jiān)測通過液相色譜技術(shù)檢測土壤中的有機(jī)污染物和重金屬元素，為土壤污染治理提供數(shù)據(jù)支持。03食品添加劑分析