2.2動(dòng)物細(xì)胞工程課件高二下學(xué)期生物人教版（2019）選擇性必修3

第2章第2節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程第二課動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體一/動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1/單克隆抗體及其應(yīng)用2/細(xì)胞融合技術(shù)一任務(wù)一：閱讀教材P48關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，回答下列問(wèn)題。1.什么是動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)？2.融合后遺傳物質(zhì)會(huì)發(fā)生怎樣的改變？3.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有哪些？4.動(dòng)物細(xì)胞融合有什么意義？可以用在哪些方面？細(xì)胞融合技術(shù)任務(wù)一：閱讀教材P48關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件，回答下列問(wèn)題。1.什么是動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)？2.融合后遺傳物質(zhì)會(huì)發(fā)生怎樣的改變？3.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有哪些？使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)形成的雜交細(xì)胞具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息物理法：化學(xué)法：生物法：電融合法聚乙二醇（PEG)與植物原生質(zhì)體融合的方法相同滅活的病毒（如：仙臺(tái)病毒）動(dòng)物特有一細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程：動(dòng)物細(xì)胞融合成功的標(biāo)志：細(xì)胞膜融合、細(xì)胞質(zhì)融合、細(xì)胞核融合進(jìn)行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞一細(xì)胞融合技術(shù)任務(wù)一：閱讀教材P48關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件，回答下列問(wèn)題。4.動(dòng)物細(xì)胞融合有什么意義？可以用在哪些方面？突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。①至今，種間、屬間、科間，甚至動(dòng)物和植物之間的細(xì)胞融合都已獲得成功。②研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。③為制造單克隆抗體開(kāi)辟了新途徑。一細(xì)胞融合技術(shù)植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前的處理方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合成功的標(biāo)志意義主要用途細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性用果膠酶和纖維素酶去除細(xì)胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞聚乙二醇（PEG）融合法、電融合法、離心法；高Ca2+-高pH融合法聚乙二醇（PEG）融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法再生出細(xì)胞壁細(xì)胞核的融合打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能獲得完整的雜種植株主要用于制造單克隆抗體一單克隆抗體及其應(yīng)用二膠體金法新冠病毒抗原檢測(cè)試劑盒單克隆抗體及其應(yīng)用二單克隆抗體及其應(yīng)用二單克隆抗體及其應(yīng)用二單克隆抗體及其應(yīng)用陽(yáng)了二單克隆抗體及其應(yīng)用思考：如何制備只與人流感病毒結(jié)合的高特異性抗體？二單克隆抗體及其應(yīng)用回憶：?jiǎn)栴}1：抗體是如何產(chǎn)生？抗體主要分布在哪里？在抗原的刺激下，B細(xì)胞增殖分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞分泌抗體。問(wèn)題2：一種B細(xì)胞是否可以分泌多種抗體？動(dòng)物特異性免疫中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類多大百萬(wàn)種。每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種特異性抗體二單克隆抗體及其應(yīng)用回憶：?jiǎn)栴}3：如何理解抗體的特異性呢？一定條件下，免疫系統(tǒng)僅能識(shí)別抗原其中的一部分，即抗原分子上的免疫活性區(qū)，上面有決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，稱為抗原決定基（antigenicdeterminant）一個(gè)天然抗原物質(zhì)可能有多種或多個(gè)抗原決定基一個(gè)初始B細(xì)胞及產(chǎn)生的子細(xì)胞中只能產(chǎn)生結(jié)合同一種抗原表位（抗原決定簇）的特異性抗體二單克隆抗體及其應(yīng)用任務(wù)二：閱讀教材P48-49關(guān)于單克隆抗體及其應(yīng)用，回答下列問(wèn)題。1.傳統(tǒng)方法是如何制備抗體的？傳統(tǒng)方法有什么缺點(diǎn)？2.與骨髓瘤細(xì)胞融合的是漿細(xì)胞還是B細(xì)胞？為什么？4.骨髓瘤細(xì)胞有什么特點(diǎn)？5.你認(rèn)為可能存在哪些融合方式？我們需要的是哪種融合方式？6.雜交瘤細(xì)胞具有什么特點(diǎn)？7.你能歸納制備單克隆抗體的步驟嗎？3.一種活化的B細(xì)胞產(chǎn)生多少種抗體？二單克隆抗體及其應(yīng)用任務(wù)二：閱讀教材P48-49關(guān)于單克隆抗體及其應(yīng)用，回答下列問(wèn)題。1.傳統(tǒng)方法是如何制備抗體的？傳統(tǒng)方法有什么缺點(diǎn)？3.一種活化的B細(xì)胞產(chǎn)生多少種抗體？4.骨髓瘤細(xì)胞有什么特點(diǎn)？反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，從血清中分離抗體產(chǎn)量低，純度低，特異性差一種無(wú)限增殖，具備癌細(xì)胞特點(diǎn)2.與骨髓瘤細(xì)胞融合的是漿細(xì)胞還是B細(xì)胞？為什么？B細(xì)胞漿細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞二單克隆抗體及其應(yīng)用任務(wù)二：閱讀教材P48-49關(guān)于單克隆抗體及其應(yīng)用，回答下列問(wèn)題。6.雜交瘤細(xì)胞具有什么特點(diǎn)？7.你能歸納制備單克隆抗體的步驟嗎？既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射抗原骨髓瘤細(xì)胞融合B-B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1多種雜交瘤細(xì)胞符合要求的雜交瘤細(xì)胞抗原-抗體雜交法

篩選2體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體5.你認(rèn)為可能存在哪些融合方式？我們需要的是哪種融合方式？B細(xì)胞+B細(xì)胞（B1和B2細(xì)胞等等）B細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞

（骨髓瘤和B1/2/3/..細(xì)胞等等）骨髓瘤細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞?二單克隆抗體及其應(yīng)用知識(shí)拓展：第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。②人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒(méi)有S途徑，但能不斷分裂增殖。篩選出雜交瘤細(xì)胞方法？B淋巴細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能無(wú)限增殖，死亡骨髓瘤細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能無(wú)限增殖，死亡雜交瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖，生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入氨基蝶呤二將這些雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)并稀釋單克隆抗體及其應(yīng)用資料：有限稀釋法，用細(xì)胞培養(yǎng)液將雜交瘤細(xì)胞稀釋至每毫升含有7-8個(gè)細(xì)胞，在按每孔0.1ml,分別注入到細(xì)胞培養(yǎng)板，再用倒置相差顯微鏡嚴(yán)格檢查，每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞。二單克隆抗體及其應(yīng)用二單克隆抗體及其應(yīng)用二抗原1單克隆抗體及其應(yīng)用二抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性單克隆抗體及其應(yīng)用二補(bǔ)充：若不是滴入每個(gè)孔中的不是一個(gè)雜交瘤細(xì)胞，可再進(jìn)行多次稀釋并檢測(cè)！單克隆抗體及其應(yīng)用第一步：將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行稀釋，每個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞。第二步：將克隆化培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞加入到固定有人流感病毒特異抗原NP蛋白的96孔板，孵育（抗原-抗體結(jié)合）1h。第三步：PBS洗滌3次，再加入羊抗鼠二抗反應(yīng)40min。經(jīng)PBS洗滌3次，加入顏色反應(yīng)底物。第四步：觀察并記錄培養(yǎng)顏色變化。產(chǎn)生抗人流感抗體的孔內(nèi)，會(huì)發(fā)生顏色反應(yīng)。產(chǎn)生非抗人流感抗體的孔內(nèi)，不會(huì)發(fā)生顏色變化。拓展：二單克隆抗體及其應(yīng)用（1）作為診斷試劑（2）用于運(yùn)載藥物和治療疾病二1.ADC的抗體和藥物各具有什么作用？2.除了細(xì)胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用，即通過(guò)特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞；藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞?？梢杂梅派湫酝凰貥?biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療。一些作用于細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過(guò)阻斷腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路來(lái)抑制其生長(zhǎng)，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進(jìn)行治療。單克隆抗體及其應(yīng)用二3.單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應(yīng)用上各具有什么優(yōu)勢(shì)？單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應(yīng)，因此檢測(cè)的特異性和靈敏度大大提高；生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)、冷凍保存和復(fù)蘇利用，有利于控制產(chǎn)品的質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)診斷試劑盒。ADC能夠協(xié)同發(fā)揮抗體特異性識(shí)別的靶向作用和細(xì)胞毒素對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，因此它在臨床上具有靶點(diǎn)清楚、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。單克隆抗體及其應(yīng)用二練習(xí)與應(yīng)用一、概念檢測(cè)1.下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交比較的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.它們的原理都涉及細(xì)胞膜的流動(dòng)性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細(xì)胞D.前者主要為了獲得細(xì)胞產(chǎn)品，后者主要為了獲得雜種植株C練習(xí)與應(yīng)用2.科學(xué)家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是（）A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養(yǎng)單個(gè)B淋巴細(xì)胞可以獲得針對(duì)SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合,經(jīng)誘導(dǎo)后融合的細(xì)胞即為雜交瘤細(xì)胞D.將純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，從小鼠血清中分離出的抗體為單克