高中生物常用的菌種的篩選方法

高中生物常用的菌種的篩選方法

m施加選擇性壓力分開法

主要是利用不同種類的微生物其生長繁殖對環(huán)境和營養(yǎng)

的要求不同，如溫度、pH、滲透壓、氧氣、碳源、氮源等，

人為控制這些條件，使之利于某類或某種微生物生長，而不

利于其他種類微生物的生存，以達(dá)到使目的菌種占優(yōu)勢。而

得以快速分開純化的目的。如可以控制培養(yǎng)時(shí)的氧，可將好

氧微生物和厭氧微生物分開；通過控制溫度，可將嗜熱微生

物和非嗜熱微生物分開；控制pH,可將嗜酸、嗜堿微生物分

開等。在分開培養(yǎng)基中也可以加入不同的抗生素或試劑來增

加選擇性。如在分開放線菌和細(xì)菌時(shí)，可加入抗真菌抗生素;

分開真菌時(shí)，可加入抗細(xì)菌藥物。

(2)隨機(jī)分開方法

有些微生物的產(chǎn)物對篩選沒有直接的選擇性指示作用，因

此常采納隨機(jī)分開方法分開。

A、抗生素產(chǎn)生菌的分開抗生素產(chǎn)生菌的分開常用抑菌圈

法。實(shí)驗(yàn)必必需用工具菌：采納抗生素的敏感菌，傳統(tǒng)上常

用金黃色葡萄球菌和枯草桿菌。

B、抗腫瘤藥物產(chǎn)生菌的分開抗腫瘤藥物產(chǎn)生菌的分開常

用方法：生化誘導(dǎo)法、SOS生色檢測法、DNA修復(fù)能力突變

株。原理是利用DNA的損傷，微生物發(fā)生突變。BL生化誘

導(dǎo)法：將大腸桿菌的lacZ基因連接在人噬菌體的PL啟動子

下，當(dāng)DNA損傷時(shí)，誘發(fā)人阻遏物CI分解，PL啟動子啟動

lacZ基因轉(zhuǎn)錄，測定表達(dá)的'？-半乳糖昔酶活性，來檢測藥

物的存在。B2、SOS生色檢測法：利用當(dāng)DNA損傷時(shí)，可活

化yecA蛋白，進(jìn)而分解噬菌體的阻遏蛋白，再引起sifA基

因啟動lacZ基因轉(zhuǎn)錄，測定表達(dá)的?-半乳糖甘酶活性，來

檢測藥物的存在。

C、生長因子產(chǎn)生菌的分開以氨基酸產(chǎn)生菌為例，介紹篩

選方法。首先將待試菌接入加了抗真菌的化合物(如亞胺環(huán)

己酮)的分開培養(yǎng)基中生長，然后采納影印法，將菌落復(fù)印

到能支持氨基酸產(chǎn)生菌生長的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2-3天后，用

紫外線殺司長好的菌落，再往此平板上面鋪一層相應(yīng)營養(yǎng)缺

陷型菌株菌懸液，培養(yǎng)16小時(shí)后，被殺死的氨基酸產(chǎn)生菌

的菌落四周應(yīng)有一檢測菌的生長圈。

(3)目的微生物分開

A、依據(jù)形態(tài)篩選突變株

B、依據(jù)平板菌落生化反應(yīng)篩選變株透明圈法、呈色

圈法、抑菌圈法、渾濁圈法等。

①透明圈法：在平板培養(yǎng)基中加入溶解性較差的底物，使

培養(yǎng)基混濁。能分解底物的微生物便會在菌落四周產(chǎn)生透明

圈，圈的大小初步反應(yīng)該菌株利用底物的能力。該法在分開

水解酶產(chǎn)生菌時(shí)采納較多，如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核

酸酶產(chǎn)生菌都會在含有底物的選擇性培養(yǎng)基平板上形成肉

眼可見的透明圈。在分開某種產(chǎn)生有機(jī)酸的菌株時(shí)，也通常

采納透明圈法進(jìn)行初篩。在選擇性培養(yǎng)基中加入碳酸鈣，使

平板成混狀，將樣品懸浮液涂抹到平板上進(jìn)行培養(yǎng)，由于產(chǎn)

生菌能夠把菌落四周的碳酸鈣水解，形成清楚的透明圈，可

以輕易地鑒別出來。分開乳酸產(chǎn)生菌時(shí)，由于乳酸是一種較

強(qiáng)的有機(jī)酸，因此，在培養(yǎng)基中加入的碳酸鈣不僅有鑒別作

用，還有酸中和作用。

②變色圈法：關(guān)于一些不易產(chǎn)生透明圈產(chǎn)物的產(chǎn)生

菌，可在底物平板中加入指示劑或顯色劑，使所必需微生物

能被快速鑒別出來。如篩選果膠酶產(chǎn)生菌時(shí)，用含0.2%果膠

為惟一碳源的培養(yǎng)基平板，對含微生物樣品進(jìn)行分開，仔菌

落長成后，加入0.2%剛果紅溶液染色4h,具有分解果膠能

力的菌落四周便會出現(xiàn)絳紅色水解圈。在分開谷氨酸產(chǎn)生菌

時(shí)，可在培養(yǎng)基中加入溪百里酚藍(lán)，它是一種酸堿指示劑，

變色范圍在PH6.2?7.6,當(dāng)pH在6.2以下時(shí)為黃色，pH7.6

以上為藍(lán)色。假設(shè)平板上出現(xiàn)產(chǎn)酸菌，其菌落四周會變成黃

色，可以從這些產(chǎn)酸菌中篩選谷氨酸產(chǎn)生菌。③生長圈法：

生長圈法通常用于分開篩選氨基酸、核甘酸和維生素的產(chǎn)生

菌。工具菌是一些相對應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型菌株。將待檢菌涂布

于含高濃度的工具菌并缺少所必需營養(yǎng)物的平板上進(jìn)行培

養(yǎng)，假設(shè)某菌株能合成平板所必需的營養(yǎng)物，在該菌株的菌

落四周便會形成一個(gè)混濁的生長圈。如喋吟營養(yǎng)缺陷型大腸

桿菌（如E.coliP264）與不含喋吟的瓊脂混合倒平板，在其

上涂布含菌樣品保溫培養(yǎng)，四周出現(xiàn)生長圈的菌落即為喋