標(biāo)準(zhǔn)解讀

《DB32/T 3775-2020 豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-LAMP檢測方法》是一項(xiàng)地方標(biāo)準(zhǔn)，由江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布，旨在規(guī)范豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）病毒的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（RT-LAMP）檢測技術(shù)。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用RT-LAMP方法進(jìn)行PRRSV核酸檢測的操作流程、所需材料、儀器設(shè)備要求以及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。

標(biāo)準(zhǔn)首先介紹了適用范圍，明確指出適用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒RNA的快速篩查和診斷。接著，對術(shù)語和定義進(jìn)行了界定，確保讀者能夠準(zhǔn)確理解相關(guān)概念。在材料與試劑部分，列出了實(shí)驗(yàn)所需的所有生物化學(xué)試劑及耗材，并對它們的質(zhì)量提出了具體要求，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。

關(guān)于儀器設(shè)備，標(biāo)準(zhǔn)指定了開展RT-LAMP檢測所需的實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)施條件，包括但不限于恒溫水浴鍋、離心機(jī)等關(guān)鍵設(shè)備，并強(qiáng)調(diào)了這些設(shè)備應(yīng)符合國家相關(guān)安全標(biāo)準(zhǔn)。此外，還提供了詳細(xì)的樣品處理步驟，從樣本采集到核酸提取，再到最終的擴(kuò)增反應(yīng)設(shè)置，每一步都配有精確的操作指南和技術(shù)參數(shù)說明。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2020-04-08 頒布
  • 2020-05-15 實(shí)施
?正版授權(quán)
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文檔簡介

ICS6502020

B31..

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3775—2020

豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-LAMP

檢測方法

RT-LAMPmethodfordetectiongporcinereproductiveandrespiratory

syndromevirus

2020-04-08發(fā)布2020-05-15實(shí)施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3775—2020

目次

前言

…………………………Ⅰ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

縮略語

3……………………1

原理

4………………………1

試劑和儀器設(shè)備

5…………………………2

檢測程序

6…………………2

結(jié)果判定

7…………………4

安全和防污染措施

8………………………4

附錄規(guī)范性附錄試劑配制

A()…………5

附錄資料性附錄引物序列

B()…………6

DB32/T3775—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)提出并歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位南京農(nóng)業(yè)大學(xué)

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人姜平張日騰白娟熊富強(qiáng)王先煒李玉峰陳聞

:、、、、、、。

Ⅰ

DB32/T3775—2020

豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-LAMP

檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測原理試劑和儀器設(shè)備檢測程序和結(jié)果

RT-LAMP、、

判定

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬臨床樣品肺臟脾臟和血清和細(xì)胞培養(yǎng)物中豬繁殖與呼吸綜合征病毒的檢測同

(、);

時(shí)適用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒經(jīng)典型高致病性類型三種基因亞型的分型檢測

、、NADC30。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB19489

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范動(dòng)物檢疫

GB/T27401

獸醫(yī)診斷樣品采集保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范

NY/T541、

基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

SN/T1193

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒

PRRSV:(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus)

環(huán)介導(dǎo)的恒溫?cái)U(kuò)增

LAMP:(loop-mediatedisothermalamplification)

反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)的恒溫?cái)U(kuò)增

RT-LAMP:(reversetranscription,loop-mediatedisothermalamplifica-

tion)

4原理

豬繁殖與呼吸綜合征病毒主要引起豬繁殖與呼吸綜合征俗稱藍(lán)耳病該病毒有美洲

(PRRSV)(),

型和歐洲型兩個(gè)血清型美洲型又有多個(gè)基因亞型我國流行的美洲型主要有傳統(tǒng)型高致病

,。PRRSV、

性和類型毒株其主要區(qū)別存在于病毒的基因環(huán)介導(dǎo)的恒溫?cái)U(kuò)增是一種體

NADC30,Nsp2。(LAMP)

外恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)用于快速檢測是一種逆轉(zhuǎn)錄用于檢測本標(biāo)準(zhǔn)

,DNA。RT-LAMPLAMP,RNA。

根據(jù)開放閱讀框架基因序列非結(jié)構(gòu)蛋白基因序列設(shè)計(jì)

RT-LAMP,PRRSV7(ORF7)、ORF1a(Nsp2)

組引物建立種檢測方法即和其中的

4,4RT-LAMP(LAMP1、LAMP2、LAMP3LAMP4),LAMP1

特異性引物識別基因和的特異性引物識別基因每種

ORF7,LAMP2、LAMP3LAMP4Nsp2。LAMP

引物均包括兩對內(nèi)外引物內(nèi)引物與外引物與和一對環(huán)引物與利用

、(

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