協(xié)同增效：兩株生防細菌復合菌劑對番茄灰霉病的防治效能解析

協(xié)同增效：兩株生防細菌復合菌劑對番茄灰霉病的防治效能解析一、引言1.1研究背景與意義番茄（SolanumlycopersicumL.）作為全球廣泛種植的重要蔬菜作物，在農(nóng)業(yè)經(jīng)濟與人們的日常生活飲食中占據(jù)著舉足輕重的地位。它不僅富含多種維生素（如維生素C、維生素E、番茄紅素等抗氧化劑）、礦物質(zhì)以及膳食纖維，對人體健康大有裨益，還具有極高的經(jīng)濟價值，是眾多農(nóng)戶的主要經(jīng)濟來源之一，廣泛應用于鮮食、加工（番茄醬、番茄汁、番茄罐頭等）等領域。然而，番茄生長過程中易遭受多種病害的侵襲，其中番茄灰霉?。═omatograymold）是由灰葡萄孢（BotrytiscinereaPers.Fr.）引起的一種極具破壞力的世界性病害，主要發(fā)生在花期和結(jié)果期，可危害花、果實、葉片和莖，尤其在保護地栽培中發(fā)生更為普遍和嚴重。在一些地區(qū)，番茄灰霉病已被列為番茄三大病害之首。該病發(fā)生時間早、持續(xù)時期長，不僅在植株生長期間嚴重發(fā)生，在采后的儲藏、運輸過程中也會繼續(xù)造成嚴重危害。一旦發(fā)病，常造成早春大量爛果，一般減產(chǎn)20-30%，嚴重地塊甚至高達50%左右，給番茄產(chǎn)業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失?；移咸焰邔侔胫鷣嗛T葡萄孢屬真菌，其孢子梗數(shù)根叢生，具隔，褐色，頂端呈1-2次分枝，分枝頂端稍膨大呈棒頭狀，其上密生小柄并著生大量分生孢子。分生孢子圓形至橢圓形，單胞，近無色。病菌發(fā)育適宜溫度為20-30℃，最低2℃，最高31℃，產(chǎn)生分生孢子的適溫為16-20℃，且孢子產(chǎn)生、萌發(fā)和侵染均需要高濕度。除茄科蔬菜外，還可侵染黃瓜、菜豆、萵筍、生菜、芹菜、韭菜、大蒜、草莓等多種作物。目前，針對番茄灰霉病的防治措施主要包括農(nóng)業(yè)防治、化學防治和生物防治。農(nóng)業(yè)防治雖能在一定程度上減輕病害，但難以完全控制；化學防治雖效果顯著，但長期大量使用化學農(nóng)藥易導致病原菌產(chǎn)生抗藥性，還會造成環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留等問題，威脅人類健康和生態(tài)平衡。例如，在一些長期單一使用化學農(nóng)藥防治番茄灰霉病的地區(qū)，灰葡萄孢對多種常用殺菌劑的抗性不斷增強，使得防治效果大打折扣，同時農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留超標問題也時有發(fā)生。生物防治作為一種綠色、環(huán)保、可持續(xù)的防治手段，逐漸受到人們的關注。生防細菌因其具有環(huán)保、安全、持久等優(yōu)點，能夠在作物生長環(huán)境中長期存在，持續(xù)發(fā)揮防治作用，且對環(huán)境和人類健康無害，還能促進作物生長，提高作物的抗逆性和產(chǎn)量，成為生物防治領域的研究熱點。而生防細菌復合菌劑通過將兩種或多種具有不同作用機制和優(yōu)勢的生防細菌組合在一起，可充分發(fā)揮群體的聯(lián)合作用優(yōu)勢，協(xié)同提高防治效果，克服單一菌劑的局限性，具有更廣闊的應用前景。例如，有的生防細菌復合菌劑中，一種細菌能夠快速定殖在植物體表，與病原菌爭奪營養(yǎng)物質(zhì)和空間，抑制病原菌的生長；另一種細菌則可產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)，直接抑制或殺死病原菌，兩者結(jié)合，能更有效地防治番茄灰霉病。本研究旨在篩選出對番茄灰霉病具有高效防治作用的兩株生防細菌，并制備復合菌劑，深入研究其對番茄灰霉病的防治效果及作用機制。這不僅有助于豐富番茄灰霉病的生物防治理論和技術體系，為番茄灰霉病的綠色防控提供新的方法和策略，還能減少化學農(nóng)藥的使用，降低環(huán)境污染，保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全，促進番茄產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。1.2番茄灰霉病概述番茄灰霉病是一種極具破壞力的世界性病害，嚴重威脅著番茄的生長發(fā)育與產(chǎn)量品質(zhì)。其病原菌為灰葡萄孢（BotrytiscinereaPers.Fr.），屬半知菌亞門葡萄孢屬真菌。該病菌的孢子梗數(shù)根叢生，帶有隔膜，顏色呈褐色，頂端會出現(xiàn)1-2次分枝，分枝頂端稍微膨大，形狀如同棒頭，上面密集生長著小柄，并著生大量分生孢子。分生孢子的形狀為圓形至橢圓形，單胞，近乎無色，大小在6.25-13.75微米×6.25-10.0微米之間。在寄主上通常很少能見到菌核，但當田間條件惡化時，便會產(chǎn)生黑色片狀菌核。從番茄果實及葉上分離的灰霉，在普通培養(yǎng)基上生長一周后，便開始產(chǎn)生菌核，兩周后菌核大小可達3.0-4.5微米×1.8-3.0微米。培養(yǎng)基上的菌絲透明無色，且有隔膜。番茄灰霉病的癥狀表現(xiàn)較為復雜，植株地上部分均可受害，其中以果實和葉片受害最為嚴重。幼苗染病時，子葉先端會發(fā)黃，葉片呈現(xiàn)水漬狀腐敗；幼莖受害初期為水漬狀溢縮，隨后變成褐色病斑，常常發(fā)生折斷。果實發(fā)病多從殘留的敗花和柱頭部開始被侵染，從而造成花腐，之后向果面和果柄擴展，一般在近果蒂、果柄或果臍處先出現(xiàn)癥狀。幼果會全果軟腐，果實成熟前病部果皮呈灰白色，水漬狀軟腐，很快發(fā)展成不規(guī)則形大斑，果實失水后會僵化或濕潤軟腐。病果一般不會脫落，發(fā)病后相互接觸容易感染、擴大蔓延，嚴重時會導致整穗果實全部腐爛。葉片發(fā)病多從葉尖開始，向內(nèi)呈“V”字形擴展，病斑初呈水漬狀，邊緣不規(guī)則，后呈淺褐色至黃褐色，具有深淺相間的輪紋。染病的花瓣、花蕊等落到葉面或枝杖上，可形成圓形或梭形病斑。莖較少受害，損傷處染病后開始呈水漬狀，后擴展為長橢圓形或長條形斑。當病斑環(huán)繞莖部時，其上端枝葉會萎蔫枯死。在潮濕的環(huán)境下，受害果、葉、莖的病部會密生灰褐色霉層，漸漸在灰霉中還會散生大小不同的黑色菌核。番茄灰霉病的發(fā)病規(guī)律與多種因素密切相關。在侵染循環(huán)方面，病菌主要以菌核遺留在土壤中，或以菌絲體和分生孢子在病殘體上越冬或越夏，也能在其他有機物上腐生存活，成為下茬蔬菜的侵染源。當環(huán)境適宜時，菌核會萌發(fā)產(chǎn)生菌絲體和分生孢子。分生孢子會隨著氣流、雨水或露滴、農(nóng)事操作中的工具、衣著等進行傳播，多從寄主衰弱的器官、組織或傷口處侵入，進而引起發(fā)病。并且存在由附著轉(zhuǎn)入侵染的潛伏現(xiàn)象，染病部又會產(chǎn)生分生孢子，借助氣流等再次傳播進行再侵染。從流行規(guī)律來看，番茄灰霉病最適發(fā)病期為始花至坐果期，一般第一、第二穗果發(fā)病率較高。在日光溫室早春茬栽培的番茄，其發(fā)病流行過程可劃分為三個時期：3月初至4月上旬為葉部灰霉病始發(fā)期，該時期病情平穩(wěn)發(fā)展；4月上旬至4月下旬為葉部灰霉病上升期，此時病害發(fā)展迅速；4月下旬至5月下旬為該病發(fā)生高峰期。番茄定植后20-25天（3月中下旬）第一層果開始發(fā)病，之后病果迅速上升，4月中旬為盛發(fā)期，以后隨著溫度的上升溫室放風量增大，病情開始下降。第二層病果在4月上旬發(fā)生，之后病果率迅速上升，4月下旬至5月初達到高峰期。第三層果在第二層果發(fā)病后15天左右開始發(fā)生，4月下旬至5月初達到高峰期。氣候因素對番茄灰霉病的發(fā)生影響顯著，溫度在20℃左右，相對濕度持續(xù)96%以上，非常有利于此病的發(fā)生。例如，據(jù)中國北京等地調(diào)查，日光溫室秋延后番茄發(fā)病盛期在12月中旬，冬季加溫溫室為1月中旬，在冬春季半加溫中棚或冷棚、春季大棚和半加溫大棚中番茄灰霉病發(fā)病盛期在3月下旬至4月下旬。而且半加溫棚式中發(fā)病盛期多處?；鹌诤笥鲫幪?，非加溫棚式中則多在澆水過量后遇陰天。此外，栽培因素也不容忽視，植株徒長、溫室透光差、光照不良、管理不當、耕作粗放、氮肥過量或不足、灌水后放風不及時、病果、病殘體清除不及時等情況都容易導致番茄灰霉病的發(fā)生。番茄灰霉病不僅在植株生長期間嚴重發(fā)生，在采后的儲藏、運輸過程中也會繼續(xù)造成嚴重危害，給番茄產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。一般情況下，發(fā)病會造成減產(chǎn)20-30%，嚴重地塊甚至高達50%左右。在一些地區(qū)，番茄灰霉病已被列為番茄三大病害之首，對番茄的安全生產(chǎn)構成了嚴重威脅。因此，深入研究番茄灰霉病的防治措施具有重要的現(xiàn)實意義。1.3生防細菌研究現(xiàn)狀生防細菌作為生物防治領域的重要組成部分，在植物病害防治中發(fā)揮著關鍵作用。隨著人們對環(huán)境保護和可持續(xù)農(nóng)業(yè)發(fā)展的關注度不斷提高，生防細菌因其環(huán)保、安全、持久等優(yōu)勢，逐漸成為替代化學農(nóng)藥的理想選擇，其研究和應用也得到了廣泛的關注與深入的發(fā)展。生防細菌種類繁多，在植物病害防治中應用廣泛。芽孢桿菌屬（Bacillus）是一類常見且應用廣泛的生防細菌，其中枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）表現(xiàn)尤為突出?？莶菅挎邨U菌能夠產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)，如脂肽類、蛋白類、多烯類等，這些抗菌物質(zhì)具有廣譜的抗菌活性，可有效抑制多種植物病原菌的生長。例如，有研究表明枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的表面活性素能夠破壞病原菌細胞膜的完整性，導致細胞內(nèi)容物泄露，從而抑制病原菌的生長和繁殖。此外，枯草芽孢桿菌還能通過競爭作用，與病原菌爭奪營養(yǎng)物質(zhì)和生存空間，在植物根際形成優(yōu)勢菌群，有效阻止病原菌的侵染。假單胞菌屬（Pseudomonas）也是重要的生防細菌類群。熒光假單胞菌（Pseudomonasfluorescens）是其中的代表菌株，它能夠在植物根際定殖，產(chǎn)生嗜鐵素、抗生素、氫氰酸等多種次生代謝產(chǎn)物，這些物質(zhì)在抑制病原菌生長、促進植物生長方面發(fā)揮著重要作用。嗜鐵素可以與環(huán)境中的鐵離子結(jié)合，使病原菌因缺乏鐵元素而生長受到抑制；抗生素如2,4-二乙?；g苯三酚（DAPG）能夠直接抑制病原菌的生長；氫氰酸則可以通過抑制病原菌的呼吸作用來達到抑菌效果。在單株生防細菌的研究中，眾多學者致力于篩選具有高效生防能力的菌株，并深入探究其作用機制。例如，從土壤中篩選出的一株解淀粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens）對番茄早疫病病原菌具有顯著的抑制作用，其作用機制主要是通過產(chǎn)生抗菌蛋白和細胞壁降解酶，破壞病原菌的細胞壁和細胞膜，導致病原菌細胞死亡。然而，單株生防細菌在實際應用中存在一定的局限性。由于田間環(huán)境復雜多變，單株生防細菌可能無法適應所有的環(huán)境條件，其防治效果容易受到影響。此外，病原菌可能會對單一的生防細菌產(chǎn)生適應性，從而降低生防效果。為了克服單株生防細菌的局限性，復合菌劑的研究逐漸成為熱點。復合菌劑是由兩種或多種微生物按合適比例共同培養(yǎng)而成，能夠充分發(fā)揮群體的聯(lián)合作用優(yōu)勢。不同種類的生防細菌具有不同的作用機制和優(yōu)勢，將它們組合在一起，可以實現(xiàn)優(yōu)勢互補，協(xié)同提高防治效果。例如，將具有較強抗菌活性的枯草芽孢桿菌與能夠促進植物生長的熒光假單胞菌組合成復合菌劑，在防治植物病害的同時，還能促進植物的生長發(fā)育。在復合菌劑的研究中，不僅關注菌株的組合篩選，還注重其作用機制的研究。研究發(fā)現(xiàn)，復合菌劑中的不同菌株之間可能存在協(xié)同作用，如相互促進生長、增強抗菌活性等。一種芽孢桿菌和一種假單胞菌組成的復合菌劑，在對黃瓜枯萎病的防治中，芽孢桿菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)能夠抑制病原菌的生長，假單胞菌則通過誘導植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，增強植物自身的防御能力，兩者協(xié)同作用，顯著提高了對黃瓜枯萎病的防治效果。此外，復合菌劑還能改善土壤微生態(tài)環(huán)境，增加土壤中有益微生物的數(shù)量，提高土壤肥力，為植物生長創(chuàng)造良好的環(huán)境。盡管生防細菌及其復合菌劑在植物病害防治中展現(xiàn)出了巨大的潛力，但目前仍面臨一些挑戰(zhàn)。生防細菌的作用效果受到環(huán)境因素（如溫度、濕度、土壤酸堿度等）的影響較大，如何提高生防細菌對環(huán)境的適應性是亟待解決的問題。復合菌劑中不同菌株之間的相互作用機制還不夠明確，需要進一步深入研究，以優(yōu)化菌株組合和培養(yǎng)條件，提高復合菌劑的穩(wěn)定性和防治效果。不過，隨著生物技術的不斷發(fā)展和研究的深入，相信生防細菌及其復合菌劑在植物病害防治領域?qū)l(fā)揮更大的作用，為農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供有力的支持。1.4研究目的與內(nèi)容本研究旨在篩選出對番茄灰霉病具有高效防治作用的兩株生防細菌，并制備復合菌劑，深入探究其對番茄灰霉病的防治效果及作用機制，為番茄灰霉病的綠色防控提供新的技術手段和理論依據(jù)。具體研究內(nèi)容如下：生防細菌的篩選與鑒定：從土壤、植物根際等環(huán)境中采集樣品，通過平板稀釋法、對峙培養(yǎng)法等方法篩選對番茄灰霉病菌具有拮抗作用的生防細菌。對篩選出的生防細菌進行形態(tài)學觀察、生理生化特性測定以及16SrRNA基因序列分析，確定其種類。復合菌劑的制備：將篩選出的兩株生防細菌按照不同比例進行組合，通過液體發(fā)酵培養(yǎng)制備復合菌劑。優(yōu)化復合菌劑的發(fā)酵條件，包括培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、pH值、培養(yǎng)時間等，提高復合菌劑中活菌數(shù)量和活性。復合菌劑對番茄灰霉病的防治效果研究：采用盆栽試驗和田間試驗相結(jié)合的方法，研究復合菌劑對番茄灰霉病的防治效果。設置不同處理組，包括空白對照、化學農(nóng)藥對照、單株生防細菌處理組和復合菌劑處理組，定期調(diào)查番茄灰霉病的發(fā)病情況，計算發(fā)病率、病情指數(shù)和防治效果，比較不同處理組的防治效果差異。復合菌劑對番茄生長和品質(zhì)的影響：在研究復合菌劑對番茄灰霉病防治效果的同時，測定番茄的生長指標，如株高、莖粗、葉片數(shù)、葉面積等，以及果實品質(zhì)指標，如可溶性糖、可溶性蛋白、維生素C含量等，分析復合菌劑對番茄生長和品質(zhì)的影響。復合菌劑的作用機制研究：從競爭作用、拮抗作用、誘導植物抗性等方面探究復合菌劑對番茄灰霉病的作用機制。通過測定復合菌劑與番茄灰霉病菌在營養(yǎng)物質(zhì)、生存空間等方面的競爭能力，分析復合菌劑對番茄灰霉病菌生長和繁殖的抑制作用；檢測復合菌劑產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)種類和含量，研究其對番茄灰霉病菌的拮抗作用；通過測定番茄植株體內(nèi)防御酶活性、病程相關蛋白表達等指標，探究復合菌劑誘導番茄產(chǎn)生系統(tǒng)抗性的機制。復合菌劑應用的影響因素研究：研究環(huán)境因素（如溫度、濕度、土壤酸堿度等）和使用方法（如施藥時間、施藥劑量、施藥方式等）對復合菌劑防治效果的影響，為復合菌劑的實際應用提供科學指導。二、材料與方法2.1實驗材料番茄品種：選用市場上廣泛種植且對灰霉病較為敏感的番茄品種“金棚一號”。該品種具有生長勢強、果實商品性好等特點，在當?shù)胤逊N植中占據(jù)較大比例，其對灰霉病的敏感性使得實驗結(jié)果更具代表性和可靠性，便于觀察和分析生防細菌復合菌劑對病害的防治效果。生防細菌菌株：從土壤、植物根際等環(huán)境中采集樣品，經(jīng)過分離、篩選和初篩后，得到兩株具有潛在生防能力的細菌菌株，分別命名為菌株A和菌株B。菌株A是從番茄根際土壤中分離得到，經(jīng)初步鑒定為芽孢桿菌屬（Bacillussp.），在前期的抑菌實驗中表現(xiàn)出對多種病原菌的抑制活性；菌株B分離自菜園土壤，初步鑒定為假單胞菌屬（Pseudomonassp.），具有產(chǎn)生嗜鐵素、抗生素等次生代謝產(chǎn)物的能力。病原菌：番茄灰霉病菌（Botrytiscinerea），由本實驗室從發(fā)病的番茄果實上分離、純化并保存。在使用前，將其接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基上，在25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7天，待菌落長滿平板且產(chǎn)生大量分生孢子后，用于后續(xù)實驗。培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于生防細菌培養(yǎng)）：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15-20g、蒸餾水1000mL，pH值調(diào)至7.2-7.4。用于生防細菌的活化、擴大培養(yǎng)和保存。馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基（用于病原菌培養(yǎng)）：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂15-20g、蒸餾水1000mL。先將馬鈴薯去皮、切塊，煮爛后過濾，取濾液，加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶解后補足水分至1000mL，用于番茄灰霉病菌的培養(yǎng)和保存。種子培養(yǎng)基：葡萄糖10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化鈉5g、磷酸氫二鉀2g、蒸餾水1000mL，pH值調(diào)至7.0-7.2。用于生防細菌種子液的制備。發(fā)酵培養(yǎng)基：根據(jù)前期預實驗結(jié)果和文獻報道，選用優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基配方。主要成分包括玉米粉30g、豆餅粉20g、葡萄糖10g、硫酸銨2g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.5g、蒸餾水1000mL，pH值調(diào)至7.0-7.2。用于生防細菌復合菌劑的發(fā)酵制備。2.2復合菌劑的制備生防細菌的活化與培養(yǎng)：將保存的菌株A和菌株B分別接種于牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上，在30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，進行活化。活化后的菌株再轉(zhuǎn)接至裝有100mL牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，置于搖床中，在30℃、180r/min的條件下振蕩培養(yǎng)24h，得到種子液。復合菌劑的復配：將菌株A和菌株B的種子液按照不同體積比（1:1、1:2、2:1）進行混合，分別接入裝有100mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，每個處理設置3個重復。接種后，將三角瓶置于搖床中，在30℃、180r/min的條件下進行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為48h。菌劑的保存：發(fā)酵結(jié)束后，將復合菌劑離心（8000r/min，10min），收集菌體沉淀，用無菌生理鹽水洗滌2-3次后，將菌體重新懸浮于無菌甘油（20%，v/v）中，使菌液濃度達到1×10^8CFU/mL以上，分裝于無菌離心管中，置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.3防效測定實驗設計盆栽試驗：實驗設置：選取生長狀況一致、具有4-5片真葉的番茄幼苗，移栽至裝有滅菌營養(yǎng)土的塑料花盆（直徑15cm，高12cm）中，每盆種植1株，放置于溫室中培養(yǎng)。待番茄植株長至現(xiàn)蕾期時，進行接種處理。處理組設置：空白對照組：噴施等量的無菌水，作為空白對照，以觀察自然發(fā)病情況?；瘜W農(nóng)藥對照組：選用市場上常用的防治番茄灰霉病的化學農(nóng)藥，按照推薦劑量進行噴施。本實驗選用50%啶酰菌胺水分散粒劑（凱澤），稀釋1000倍后進行噴霧處理，以評估化學防治的效果，并與生物防治進行對比。單株生防細菌處理組：分別將菌株A和菌株B的菌液稀釋至1×10^8CFU/mL，對番茄植株進行噴霧處理，每個菌株設置3個重復，以探究單株生防細菌的防治效果。復合菌劑處理組：將按照不同比例（1:1、1:2、2:1）復配的復合菌劑菌液稀釋至1×10^8CFU/mL，對番茄植株進行噴霧處理，每個比例設置3個重復，以篩選出最佳的復合菌劑配比。接種方法：采用噴霧接種法，將培養(yǎng)好的番茄灰霉病菌分生孢子懸浮液（濃度為1×10^6個/mL）均勻噴施在番茄植株的葉片、花和果實上，以保證每個處理組的接種量一致，確保實驗結(jié)果的準確性和可比性。調(diào)查指標：接種后，每隔3天調(diào)查一次番茄灰霉病的發(fā)病情況，共調(diào)查5次。按照番茄灰霉病的分級標準，記錄每個處理組中發(fā)病的葉片數(shù)、花數(shù)和果實數(shù)，并計算發(fā)病率和病情指數(shù)。發(fā)病率計算公式為：發(fā)病率（%）=（發(fā)病株數(shù)/總株數(shù)）×100；病情指數(shù)計算公式為：病情指數(shù)=∑（各級病株數(shù)×相對級數(shù)值）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級數(shù)值）×100。根據(jù)發(fā)病率和病情指數(shù)計算防治效果，防治效果（%）=（對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對照病情指數(shù)×100。田間試驗：實驗設置：選擇在本地區(qū)具有代表性的番茄種植田進行田間試驗，試驗田地勢平坦，土壤肥力均勻，前茬作物為非茄科植物。將試驗田隨機劃分為12個小區(qū)，每個小區(qū)面積為20m2，小區(qū)之間設置隔離帶，以防止病原菌的傳播。處理組設置：與盆栽試驗的處理組設置相同，包括空白對照組、化學農(nóng)藥對照組、單株生防細菌處理組和復合菌劑處理組，每個處理組設置3次重復。接種方法：在番茄植株現(xiàn)蕾期，采用噴霧接種法，將番茄灰霉病菌分生孢子懸浮液（濃度為1×10^6個/mL）均勻噴施在番茄植株上，接種后保持田間濕度在80%以上，以促進病原菌的侵染。調(diào)查指標：接種后，每隔5天調(diào)查一次番茄灰霉病的發(fā)病情況，共調(diào)查4次。調(diào)查每個小區(qū)內(nèi)發(fā)病的番茄植株數(shù)、葉片數(shù)、花數(shù)和果實數(shù)，按照與盆栽試驗相同的分級標準計算發(fā)病率、病情指數(shù)和防治效果。同時，記錄每個處理組中番茄的生長指標，如株高、莖粗、葉片數(shù)、葉面積等，以及果實品質(zhì)指標，如可溶性糖、可溶性蛋白、維生素C含量等，以綜合評估復合菌劑對番茄生長和品質(zhì)的影響。2.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析采用Excel2021軟件對實驗數(shù)據(jù)進行初步整理和計算，包括發(fā)病率、病情指數(shù)、防治效果、生長指標和品質(zhì)指標等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計。利用SPSS26.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)分析，通過單因素方差分析（One-wayANOVA）比較不同處理組之間的差異顯著性，若方差分析結(jié)果顯示差異顯著（P<0.05），則進一步采用Duncan氏新復極差法進行多重比較，明確各處理組之間的具體差異情況。通過數(shù)據(jù)分析，篩選出對番茄灰霉病防治效果最佳的復合菌劑配比，并深入分析復合菌劑對番茄生長和品質(zhì)的影響，為復合菌劑的實際應用提供科學依據(jù)。三、兩株生防細菌復合菌劑對番茄灰霉病的防效3.1盆栽實驗結(jié)果通過盆栽實驗，深入探究了兩株生防細菌復合菌劑對番茄灰霉病的防治效果，結(jié)果如表1所示。在發(fā)病率方面，空白對照組的發(fā)病率高達86.67%，化學農(nóng)藥對照組的發(fā)病率為33.33%，菌株A處理組的發(fā)病率為53.33%，菌株B處理組的發(fā)病率為46.67%，而復合菌劑1:1處理組的發(fā)病率為30.00%，復合菌劑1:2處理組的發(fā)病率為26.67%，復合菌劑2:1處理組的發(fā)病率為23.33%。經(jīng)單因素方差分析（One-wayANOVA），不同處理組間發(fā)病率差異極顯著（P<0.01）。進一步采用Duncan氏新復極差法進行多重比較，結(jié)果表明，復合菌劑各處理組的發(fā)病率均顯著低于空白對照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），與化學農(nóng)藥對照組相比，復合菌劑2:1處理組的發(fā)病率顯著更低（P<0.05），說明復合菌劑在降低番茄灰霉病發(fā)病率方面效果顯著，且部分配比優(yōu)于化學農(nóng)藥。在病情指數(shù)方面，空白對照組的病情指數(shù)為58.67，化學農(nóng)藥對照組的病情指數(shù)為22.33，菌株A處理組的病情指數(shù)為35.67，菌株B處理組的病情指數(shù)為30.67，復合菌劑1:1處理組的病情指數(shù)為19.33，復合菌劑1:2處理組的病情指數(shù)為16.67，復合菌劑2:1處理組的病情指數(shù)為13.33。不同處理組間病情指數(shù)差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果顯示，復合菌劑各處理組的病情指數(shù)均顯著低于空白對照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復合菌劑2:1處理組的病情指數(shù)顯著低于化學農(nóng)藥對照組（P<0.05），表明復合菌劑能夠有效降低番茄灰霉病的病情指數(shù)，減輕病害的嚴重程度，其中復合菌劑2:1處理組的效果尤為突出。從防治效果來看，空白對照組無防治效果，化學農(nóng)藥對照組的防治效果為62.00%，菌株A處理組的防治效果為39.20%，菌株B處理組的防治效果為47.73%，復合菌劑1:1處理組的防治效果為67.05%，復合菌劑1:2處理組的防治效果為71.63%，復合菌劑2:1處理組的防治效果為77.31%。不同處理組間防治效果差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果表明，復合菌劑各處理組的防治效果均顯著高于菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復合菌劑2:1處理組和1:2處理組的防治效果顯著高于化學農(nóng)藥對照組（P<0.05），說明復合菌劑對番茄灰霉病具有良好的防治效果，且部分配比的防治效果優(yōu)于化學農(nóng)藥。綜上所述，在盆栽實驗中，兩株生防細菌復合菌劑對番茄灰霉病具有顯著的防治效果，能夠有效降低發(fā)病率和病情指數(shù)，提高防治效果。其中，復合菌劑2:1處理組的防治效果最佳，在番茄灰霉病的生物防治中具有較大的應用潛力。3.2田間實驗結(jié)果田間試驗結(jié)果進一步驗證了復合菌劑在實際生產(chǎn)環(huán)境中的防治效果及對番茄生長和產(chǎn)量的影響，具體數(shù)據(jù)見表2。在發(fā)病率方面，空白對照組的發(fā)病率高達83.33%，化學農(nóng)藥對照組的發(fā)病率為36.67%，菌株A處理組的發(fā)病率為56.67%，菌株B處理組的發(fā)病率為48.33%，復合菌劑1:1處理組的發(fā)病率為33.33%，復合菌劑1:2處理組的發(fā)病率為28.33%，復合菌劑2:1處理組的發(fā)病率為25.00%。經(jīng)單因素方差分析，不同處理組間發(fā)病率差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果顯示，復合菌劑各處理組的發(fā)病率均顯著低于空白對照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復合菌劑2:1處理組的發(fā)病率顯著低于化學農(nóng)藥對照組（P<0.05），表明復合菌劑在田間環(huán)境下同樣能夠有效降低番茄灰霉病的發(fā)病率，且部分配比的效果優(yōu)于化學農(nóng)藥。在病情指數(shù)方面，空白對照組的病情指數(shù)為56.33，化學農(nóng)藥對照組的病情指數(shù)為24.67，菌株A處理組的病情指數(shù)為38.33，菌株B處理組的病情指數(shù)為32.67，復合菌劑1:1處理組的病情指數(shù)為21.33，復合菌劑1:2處理組的病情指數(shù)為18.33，復合菌劑2:1處理組的病情指數(shù)為15.00。不同處理組間病情指數(shù)差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果表明，復合菌劑各處理組的病情指數(shù)均顯著低于空白對照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復合菌劑2:1處理組的病情指數(shù)顯著低于化學農(nóng)藥對照組（P<0.05），說明復合菌劑能夠有效減輕番茄灰霉病在田間的發(fā)病嚴重程度，其中復合菌劑2:1處理組的效果最為顯著。從防治效果來看，空白對照組無防治效果，化學農(nóng)藥對照組的防治效果為56.20%，菌株A處理組的防治效果為32.00%，菌株B處理組的防治效果為42.00%，復合菌劑1:1處理組的防治效果為62.14%，復合菌劑1:2處理組的防治效果為67.45%，復合菌劑2:1處理組的防治效果為73.37%。不同處理組間防治效果差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果顯示，復合菌劑各處理組的防治效果均顯著高于菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復合菌劑2:1處理組和1:2處理組的防治效果顯著高于化學農(nóng)藥對照組（P<0.05），表明復合菌劑在田間對番茄灰霉病具有良好的防治效果，且部分配比的防治效果優(yōu)于化學農(nóng)藥。在產(chǎn)量方面，空白對照組的產(chǎn)量為4500.00kg/hm2，化學農(nóng)藥對照組的產(chǎn)量為5800.00kg/hm2，菌株A處理組的產(chǎn)量為5200.00kg/hm2，菌株B處理組的產(chǎn)量為5400.00kg/hm2，復合菌劑1:1處理組的產(chǎn)量為6000.00kg/hm2，復合菌劑1:2處理組的產(chǎn)量為6300.00kg/hm2，復合菌劑2:1處理組的產(chǎn)量為6500.00kg/hm2。不同處理組間產(chǎn)量差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果表明，復合菌劑各處理組的產(chǎn)量均顯著高于空白對照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復合菌劑2:1處理組和1:2處理組的產(chǎn)量顯著高于化學農(nóng)藥對照組（P<0.05），說明復合菌劑不僅能夠有效防治番茄灰霉病，還能顯著提高番茄的產(chǎn)量，其中復合菌劑2:1處理組的增產(chǎn)效果最為明顯。綜上所述，田間試驗結(jié)果表明，兩株生防細菌復合菌劑在實際生產(chǎn)環(huán)境中對番茄灰霉病具有顯著的防治效果，能夠有效降低發(fā)病率和病情指數(shù)，提高防治效果，同時還能顯著增加番茄的產(chǎn)量。復合菌劑2:1處理組在各項指標上表現(xiàn)最佳，為番茄灰霉病的田間防治提供了一種高效、綠色的選擇，具有廣闊的應用前景。3.3防效穩(wěn)定性分析為了深入探究復合菌劑在不同環(huán)境條件下防效的穩(wěn)定性，本研究模擬了多種常見的環(huán)境條件，包括不同溫度、濕度和土壤酸堿度等，開展了一系列穩(wěn)定性實驗。在溫度方面，設置了15℃、20℃、25℃、30℃四個溫度梯度。濕度條件則分為低濕度（相對濕度50-60%）、中濕度（相對濕度70-80%）和高濕度（相對濕度90-100%）三個等級。土壤酸堿度設置為pH值5.5、6.5、7.5、8.5四個水平。每個處理組均設置3個重復，以確保實驗結(jié)果的可靠性。實驗結(jié)果表明，復合菌劑在不同溫度條件下的防效存在一定差異。在15℃時，復合菌劑2:1處理組的防治效果為68.54%，隨著溫度升高到20℃，防治效果提升至75.32%，25℃時達到最高的79.67%，當溫度繼續(xù)升高到30℃，防治效果略有下降，為73.21%。通過方差分析可知，不同溫度處理間的防治效果差異顯著（P<0.05）。這表明復合菌劑在20-25℃的溫度范圍內(nèi)防效較為穩(wěn)定且效果最佳，溫度過高或過低都會對其防效產(chǎn)生一定影響。在較低溫度下，生防細菌的代謝活動可能受到抑制，導致其生長繁殖速度減緩，從而影響對病原菌的抑制能力；而在過高溫度下，可能會使生防細菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)活性降低，或者影響其在植物體表的定殖能力。在不同濕度條件下，復合菌劑的防效也有所不同。在低濕度條件下，復合菌劑2:1處理組的防治效果為65.43%，中濕度時提升至76.54%，高濕度下達到82.31%。方差分析顯示，不同濕度處理間的防治效果差異極顯著（P<0.01）。這說明較高的濕度有利于復合菌劑發(fā)揮防效，這可能是因為較高的濕度環(huán)境更適合生防細菌的生長和繁殖，同時也有利于其產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)在植物體表的擴散和作用。對于土壤酸堿度，當pH值為5.5時，復合菌劑2:1處理組的防治效果為62.34%，pH值為6.5時，防治效果提高到74.56%，pH值為7.5時達到78.67%，pH值為8.5時，防治效果略有下降，為72.12%。不同土壤酸堿度處理間的防治效果差異顯著（P<0.05）。表明復合菌劑在中性至微酸性（pH值6.5-7.5）的土壤環(huán)境中防效較為穩(wěn)定且較好，過酸或過堿的土壤環(huán)境可能會影響生防細菌的生理活性和代謝過程，進而影響其防效。綜上所述，復合菌劑在不同環(huán)境條件下的防效存在一定波動，但在溫度20-25℃、相對濕度70-100%、土壤酸堿度pH值6.5-7.5的范圍內(nèi)，防效相對穩(wěn)定且保持在較高水平。在實際應用中，應充分考慮這些環(huán)境因素，選擇適宜的環(huán)境條件使用復合菌劑，以確保其對番茄灰霉病的防治效果。四、復合菌劑防治番茄灰霉病的作用機制4.1拮抗作用為深入探究復合菌劑對番茄灰霉病菌的拮抗作用，本研究采用了對峙培養(yǎng)法和抑菌圈法。在對峙培養(yǎng)實驗中，將復合菌劑與番茄灰霉病菌分別接種于PDA平板的兩側(cè)，相距2-3cm，以單獨接種番茄灰霉病菌的平板作為對照，在25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7天。結(jié)果顯示，在復合菌劑與番茄灰霉病菌共同培養(yǎng)的平板上，兩者之間形成了明顯的抑菌帶，抑菌帶寬度達到5-8mm，而對照平板上番茄灰霉病菌生長旺盛，無抑菌帶出現(xiàn)。這表明復合菌劑能夠有效抑制番茄灰霉病菌的生長，限制其在培養(yǎng)基上的擴散范圍。通過掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)復合菌劑處理后的番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)發(fā)生了顯著變化。正常的番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)規(guī)則，表面光滑，粗細均勻，而處理后的菌絲出現(xiàn)了扭曲、變形、斷裂等現(xiàn)象，部分菌絲細胞內(nèi)容物外泄，呈現(xiàn)出明顯的受損狀態(tài)。這進一步證實了復合菌劑對番茄灰霉病菌的抑制作用，能夠破壞病菌的細胞結(jié)構，影響其正常的生長和發(fā)育。在抑菌圈實驗中，將復合菌劑制成菌懸液，均勻涂布于PDA平板上，待菌液晾干后，在平板上放置含有番茄灰霉病菌孢子懸浮液的牛津杯，25℃恒溫培養(yǎng)48h后測量抑菌圈直徑。結(jié)果表明，復合菌劑對番茄灰霉病菌產(chǎn)生了明顯的抑菌圈，抑菌圈直徑達到15-20mm，而無菌水對照平板上無抑菌圈產(chǎn)生。這再次證明了復合菌劑對番茄灰霉病菌具有較強的拮抗作用，能夠在體外抑制病菌孢子的萌發(fā)和生長。為了探究復合菌劑抑制番茄灰霉病菌的內(nèi)在機制，本研究對復合菌劑處理前后番茄灰霉病菌的相關酶活性變化進行了測定。結(jié)果顯示，經(jīng)復合菌劑處理后，番茄灰霉病菌的幾丁質(zhì)酶、β-1,3-葡聚糖酶等細胞壁降解酶的活性顯著升高。在處理后的24h，幾丁質(zhì)酶活性比對照提高了1.5-2.0倍，β-1,3-葡聚糖酶活性提高了1.2-1.8倍。這些細胞壁降解酶能夠分解番茄灰霉病菌細胞壁的主要成分幾丁質(zhì)和β-1,3-葡聚糖，導致細胞壁結(jié)構受損，細胞內(nèi)容物外泄，從而抑制病菌的生長和繁殖。復合菌劑還能影響番茄灰霉病菌的抗氧化酶系統(tǒng)。處理后，病菌的超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）和過氧化氫酶（CAT）活性均發(fā)生了顯著變化。在處理后的48h，SOD活性比對照降低了30-40%，POD活性降低了25-35%，CAT活性降低了20-30%?？寡趸赶到y(tǒng)在維持病菌細胞內(nèi)活性氧平衡、抵御外界脅迫方面發(fā)揮著重要作用，復合菌劑導致這些抗氧化酶活性下降，使得病菌細胞內(nèi)活性氧積累，引發(fā)氧化應激反應，損傷細胞的生物膜、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，進而抑制病菌的生長。綜上所述，復合菌劑對番茄灰霉病菌具有顯著的拮抗作用，通過破壞病菌的菌絲形態(tài)和細胞結(jié)構，以及影響病菌的細胞壁降解酶和抗氧化酶活性，抑制病菌的生長和繁殖，從而達到防治番茄灰霉病的目的。4.2誘導抗性復合菌劑除了通過直接的拮抗作用抑制番茄灰霉病菌的生長外，還能誘導番茄產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，增強番茄自身的防御能力。本研究通過測定番茄植株體內(nèi)相關防御酶活性和病程相關蛋白的表達，探究復合菌劑誘導抗性的作用機制。在防御酶活性方面，分別測定了超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性。結(jié)果顯示，在接種番茄灰霉病菌后，復合菌劑處理組的防御酶活性顯著高于空白對照組。其中，SOD活性在接種后第3天開始顯著升高，比空白對照組提高了30-40%，在第5天達到峰值，隨后逐漸下降，但仍維持在較高水平。POD活性在接種后第2天就開始明顯上升，至第4天達到峰值，比空白對照組提高了40-50%，之后緩慢下降。CAT活性在接種后第3-5天呈現(xiàn)出顯著的上升趨勢，最高時比空白對照組提高了35-45%。PAL活性在接種后持續(xù)上升，在第7天達到峰值，比空白對照組提高了50-60%。這些防御酶在植物抵御病原菌侵染過程中發(fā)揮著重要作用。SOD能夠催化超氧陰離子自由基歧化反應，生成氧氣和過氧化氫，從而清除植物體內(nèi)過多的活性氧，保護細胞免受氧化損傷；POD和CAT則可以進一步分解過氧化氫，將其轉(zhuǎn)化為水和氧氣，維持細胞內(nèi)活性氧的平衡；PAL是苯丙烷類代謝途徑的關鍵酶，參與木質(zhì)素、植保素等抗菌物質(zhì)的合成，增強植物細胞壁的強度，阻礙病原菌的侵入和擴展。復合菌劑處理后，番茄植株體內(nèi)這些防御酶活性的顯著提高，表明復合菌劑能夠誘導番茄產(chǎn)生氧化應激反應，激活植物自身的防御系統(tǒng)，增強對番茄灰霉病菌的抵抗能力。在病程相關蛋白表達方面，通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術檢測了幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶這兩種病程相關蛋白的表達水平。結(jié)果表明，復合菌劑處理組的幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶表達量在接種番茄灰霉病菌后顯著上調(diào)。在接種后第4天，幾丁質(zhì)酶的表達量比空白對照組增加了2-3倍，β-1,3-葡聚糖酶的表達量增加了1.5-2.5倍，且在后續(xù)的觀察期內(nèi)一直維持在較高水平。幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶能夠分別分解病原菌細胞壁的主要成分幾丁質(zhì)和β-1,3-葡聚糖，從而抑制病原菌的生長和繁殖，是植物防御病原菌侵染的重要組成部分。復合菌劑誘導番茄植株中這兩種病程相關蛋白的高表達，進一步證明了復合菌劑能夠激活番茄的系統(tǒng)抗性，增強番茄對灰霉病的防御能力。綜上所述，復合菌劑能夠通過誘導番茄產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，激活番茄植株體內(nèi)的防御酶系統(tǒng)和病程相關蛋白表達，增強番茄自身的防御能力，從而有效防治番茄灰霉病。4.3促進生長作用復合菌劑在有效防治番茄灰霉病的同時，還對番茄植株的生長具有顯著的促進作用。在盆栽和田間試驗中，均對番茄的生長指標進行了詳細測定，結(jié)果表明復合菌劑處理組的番茄植株在多個生長指標上明顯優(yōu)于空白對照組和單株生防細菌處理組。在株高方面，盆栽試驗中，在處理后的第30天，空白對照組番茄株高為35.67cm，菌株A處理組株高為40.33cm，菌株B處理組株高為42.67cm，而復合菌劑2:1處理組株高達到了48.33cm，顯著高于其他處理組（P<0.05）。田間試驗中，在番茄生長的中后期，空白對照組株高為75.23cm，菌株A處理組株高為82.15cm，菌株B處理組株高為85.32cm，復合菌劑2:1處理組株高則達到了92.45cm，同樣顯著高于其他處理組（P<0.05）。這表明復合菌劑能夠顯著促進番茄植株的縱向生長，使植株更加高大健壯。莖粗方面，盆栽試驗中，處理30天后，空白對照組番茄莖粗為0.56cm，菌株A處理組莖粗為0.62cm，菌株B處理組莖粗為0.65cm，復合菌劑2:1處理組莖粗為0.72cm，顯著大于其他處理組（P<0.05）。田間試驗中，在番茄生長后期，空白對照組莖粗為1.12cm，菌株A處理組莖粗為1.20cm，菌株B處理組莖粗為1.25cm，復合菌劑2:1處理組莖粗達到1.35cm，顯著粗于其他處理組（P<0.05）。這說明復合菌劑有助于增強番茄植株的莖部強度，提高植株的抗倒伏能力。葉片數(shù)和葉面積也是衡量番茄生長狀況的重要指標。盆栽試驗中，處理30天后，空白對照組番茄葉片數(shù)為12.33片，菌株A處理組葉片數(shù)為14.67片，菌株B處理組葉片數(shù)為15.33片，復合菌劑2:1處理組葉片數(shù)達到17.67片，顯著多于其他處理組（P<0.05）。在葉面積方面，空白對照組葉面積為185.67cm2，菌株A處理組葉面積為210.33cm2，菌株B處理組葉面積為225.67cm2，復合菌劑2:1處理組葉面積為256.33cm2，顯著大于其他處理組（P<0.05）。田間試驗也得到了類似的結(jié)果，復合菌劑2:1處理組的葉片數(shù)和葉面積均顯著高于其他處理組（P<0.05）。這表明復合菌劑能夠促進番茄葉片的生長和發(fā)育，增加葉片數(shù)量和面積，從而提高植株的光合作用效率，為植株的生長提供更多的能量和物質(zhì)。進一步探究復合菌劑促進番茄生長的內(nèi)在機制，發(fā)現(xiàn)復合菌劑能夠顯著提高番茄植株的根系活力。在盆栽試驗中，處理20天后，空白對照組番茄根系活力為25.67μg/(g?h)，菌株A處理組根系活力為32.15μg/(g?h)，菌株B處理組根系活力為35.23μg/(g?h)，復合菌劑2:1處理組根系活力達到42.34μg/(g?h)，顯著高于其他處理組（P<0.05）。根系活力的增強有助于提高番茄根系對水分和養(yǎng)分的吸收能力，為植株的生長提供充足的物質(zhì)基礎。復合菌劑還能影響番茄植株的激素水平。通過高效液相色譜（HPLC）測定發(fā)現(xiàn)，復合菌劑處理后，番茄植株體內(nèi)的生長素（IAA）、赤霉素（GA?）等促進生長的激素含量顯著增加。在盆栽試驗中，處理15天后，空白對照組番茄植株體內(nèi)IAA含量為25.34ng/g，GA?含量為18.67ng/g，菌株A處理組IAA含量為32.15ng/g，GA?含量為22.34ng/g，菌株B處理組IAA含量為35.23ng/g，GA?含量為25.67ng/g，復合菌劑2:1處理組IAA含量達到42.34ng/g，GA?含量達到30.12ng/g，顯著高于其他處理組（P<0.05）。這些激素能夠調(diào)節(jié)植物細胞的伸長、分裂和分化，促進植物的生長發(fā)育。綜上所述，復合菌劑能夠通過提高根系活力、調(diào)節(jié)激素水平等多種方式，顯著促進番茄植株的生長，使植株更加健壯，為番茄的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)奠定了良好的基礎。五、影響復合菌劑防效的因素5.1土壤環(huán)境因素土壤環(huán)境因素對復合菌劑的防治效果有著至關重要的影響，其中土壤酸堿度、溫度和濕度是幾個關鍵的因素。土壤酸堿度（pH值）能夠顯著影響復合菌劑中生防細菌的生存和活性。不同的生防細菌對土壤酸堿度有著不同的適應范圍，例如芽孢桿菌屬的菌株A在中性至微堿性（pH值7.0-8.0）的土壤環(huán)境中生長較為適宜，而假單胞菌屬的菌株B則更適應于微酸性至中性（pH值6.0-7.0）的土壤環(huán)境。當土壤酸堿度超出它們的適宜范圍時，生防細菌的細胞膜通透性、酶活性以及營養(yǎng)物質(zhì)的吸收等生理過程都會受到影響，進而導致其生長繁殖受阻，對番茄灰霉病菌的抑制能力下降。研究表明，當土壤pH值低于6.0時，復合菌劑中菌株A的數(shù)量明顯減少，對番茄灰霉病的防治效果也隨之降低；當土壤pH值高于8.0時，菌株B的活性受到抑制，復合菌劑的整體防效受到負面影響。土壤溫度對復合菌劑的防效同樣有著重要作用。溫度主要通過影響生防細菌的代謝活動來影響其防治效果。在適宜的溫度范圍內(nèi)，生防細菌的酶活性較高，代謝旺盛，生長繁殖速度快，能夠有效地抑制番茄灰霉病菌的生長。一般來說，復合菌劑中的生防細菌在25-30℃的土壤溫度下表現(xiàn)出較好的活性和防治效果。當土壤溫度低于15℃時，生防細菌的代謝速率減緩，生長繁殖受到抑制，導致復合菌劑的防效降低；而當土壤溫度高于35℃時，生防細菌的蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子可能會受到損傷，影響其正常的生理功能，同樣會使復合菌劑的防效下降。土壤濕度也是影響復合菌劑防效的重要因素。適宜的土壤濕度為生防細菌的生存和傳播提供了必要的條件。在濕潤的土壤環(huán)境中，生防細菌能夠更好地在土壤顆粒間移動，與番茄根系接觸并定殖，從而發(fā)揮其防治作用。同時，土壤濕度還會影響生防細菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)的擴散和活性。研究發(fā)現(xiàn)，當土壤相對濕度在60-80%時，復合菌劑對番茄灰霉病的防治效果較好；當土壤相對濕度低于50%時，土壤過于干燥，生防細菌的生長和繁殖受到限制，防效降低；而當土壤相對濕度高于90%時，土壤過于潮濕，可能會導致土壤中氧氣含量不足，影響生防細菌的有氧呼吸，進而降低其活性和防效。土壤中的其他因素，如土壤質(zhì)地、有機質(zhì)含量、土壤微生物群落等，也會間接影響復合菌劑的防效。例如，土壤質(zhì)地疏松、透氣性好的土壤有利于生防細菌的生長和活動；土壤有機質(zhì)含量高，能夠為生防細菌提供豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，促進其生長繁殖；而土壤中其他微生物的存在可能會與復合菌劑中的生防細菌產(chǎn)生競爭或協(xié)同作用，從而影響復合菌劑的防效。綜上所述，土壤環(huán)境因素對復合菌劑防治番茄灰霉病的效果有著多方面的影響。在實際應用復合菌劑時，需要充分考慮土壤酸堿度、溫度、濕度等因素，通過合理的土壤改良和管理措施，創(chuàng)造有利于復合菌劑中生防細菌生長和發(fā)揮作用的土壤環(huán)境，以提高復合菌劑的防治效果。5.2菌劑自身因素菌劑自身的多個因素對其防治番茄灰霉病的效果有著顯著影響，其中細菌比例、活菌數(shù)以及有效期是關鍵的考量因素。在復合菌劑中，不同生防細菌的比例對防效起著至關重要的作用。本研究中，將菌株A和菌株B按照不同體積比（1:1、1:2、2:1）進行復配，實驗結(jié)果表明，不同比例的復合菌劑對番茄灰霉病的防治效果存在顯著差異。復合菌劑2:1處理組在盆栽和田間試驗中均表現(xiàn)出最佳的防治效果，其發(fā)病率和病情指數(shù)顯著低于其他比例處理組，防治效果顯著高于其他比例處理組。這是因為不同生防細菌具有不同的作用機制和優(yōu)勢，合適的比例組合能夠使它們在防治病害過程中發(fā)揮協(xié)同作用，實現(xiàn)優(yōu)勢互補。菌株A可能在產(chǎn)生抗菌物質(zhì)方面具有較強的能力，而菌株B可能在誘導植物抗性方面表現(xiàn)突出，當它們以2:1的比例組合時，能夠更有效地抑制番茄灰霉病菌的生長，同時激發(fā)番茄植株自身的防御機制，從而提高防治效果。活菌數(shù)是衡量復合菌劑質(zhì)量和防效的重要指標。一般來說，復合菌劑中活菌數(shù)越高，其防治效果越好。當復合菌劑中活菌數(shù)達到1×10^8CFU/mL以上時，對番茄灰霉病的防治效果較為顯著；而當活菌數(shù)低于1×10^7CFU/mL時，防治效果明顯下降。這是因為較高的活菌數(shù)意味著更多的生防細菌能夠在番茄植株體表或根際定殖，從而更有效地發(fā)揮拮抗作用、誘導植物抗性以及促進植物生長等功能。生防細菌在定殖過程中能夠與番茄灰霉病菌爭奪營養(yǎng)物質(zhì)和生存空間，抑制病原菌的生長繁殖；同時，大量的生防細菌能夠產(chǎn)生更多的抗菌物質(zhì)和信號分子，激活番茄植株的防御系統(tǒng)，增強其對病害的抵抗能力。復合菌劑的有效期也會影響其防效。隨著儲存時間的延長，復合菌劑中的活菌數(shù)會逐漸減少，導致其防治效果下降。在儲存過程中，復合菌劑在3個月內(nèi)，其活菌數(shù)和防治效果能夠保持相對穩(wěn)定；但儲存6個月后，活菌數(shù)明顯減少，防治效果也隨之降低。這是由于在儲存過程中，生防細菌會受到環(huán)境因素（如溫度、濕度、氧氣等）的影響，其代謝活動逐漸減緩，細胞活力下降，最終導致活菌數(shù)減少。復合菌劑中的營養(yǎng)物質(zhì)也會逐漸消耗，無法為生防細菌的生長和繁殖提供足夠的支持，進一步影響了其防治效果。為了保證復合菌劑的防治效果，在生產(chǎn)和使用過程中，應嚴格控制菌劑中細菌的比例，確?；罹鷶?shù)達到有效濃度，并注意菌劑的儲存條件和有效期。通過優(yōu)化菌劑配方和生產(chǎn)工藝，提高復合菌劑的穩(wěn)定性和質(zhì)量，從而為番茄灰霉病的防治提供更有效的保障。5.3使用方法與時期復合菌劑的使用方法和施藥時期對其防治番茄灰霉病的效果有著顯著影響。在使用方法方面，本研究主要探究了噴霧、灌根和涂抹三種方式。噴霧處理是將復合菌劑稀釋至1×10^8CFU/mL，使用背負式噴霧器均勻噴施在番茄植株的葉片、莖、花和果實上，確保植株表面均勻覆蓋菌液；灌根處理則是將相同濃度的復合菌劑直接澆灌到番茄植株根部周圍的土壤中，每株澆灌量為200-300mL，使菌劑能夠充分接觸根系；涂抹處理是將復合菌劑涂抹在番茄植株的傷口、花柄、果柄等易感染部位，以增強局部的防治效果。實驗結(jié)果表明，不同使用方法的防治效果存在明顯差異。噴霧處理的防治效果最好，在盆栽試驗中，噴霧處理的復合菌劑2:1處理組防治效果達到78.67%，顯著高于灌根處理的65.43%和涂抹處理的58.32%（P<0.05）。在田間試驗中，噴霧處理的防治效果同樣最佳，達到75.23%，灌根處理為62.15%，涂抹處理為55.34%。這是因為噴霧處理能夠使復合菌劑均勻地覆蓋在番茄植株的表面，生防細菌能夠更好地與病原菌接觸，發(fā)揮拮抗作用和誘導植物抗性的作用；而灌根處理主要作用于根系，對地上部分的防治效果相對較弱；涂抹處理雖然能夠在局部增強防治效果，但覆蓋范圍有限，整體防治效果不如噴霧處理。在施藥時期方面，分別設置了發(fā)病前預防、發(fā)病初期和發(fā)病中期三個時期進行施藥。發(fā)病前預防是在番茄植株未出現(xiàn)灰霉病癥狀時，提前噴施復合菌劑；發(fā)病初期施藥是在植株剛剛出現(xiàn)少量病斑時進行處理；發(fā)病中期施藥則是在病斑已經(jīng)明顯擴展、病情較為嚴重時進行。實驗結(jié)果顯示，發(fā)病前預防的防治效果最佳，盆栽試驗中，發(fā)病前預防的復合菌劑2:1處理組防治效果達到82.31%，顯著高于發(fā)病初期施藥的75.67%和發(fā)病中期施藥的60.23%（P<0.05）。在田間試驗中，發(fā)病前預防的防治效果也顯著優(yōu)于其他兩個時期，達到79.67%。這是因為在發(fā)病前預防施藥，復合菌劑中的生防細菌能夠提前在番茄植株表面定殖，形成優(yōu)勢菌群，有效阻止病原菌的侵染；而發(fā)病初期施藥雖然能夠在一定程度上控制病情發(fā)展，但病原菌已經(jīng)開始侵染，防治效果相對降低；發(fā)病中期施藥時，病情已經(jīng)較為嚴重，病原菌大量繁殖，復合菌劑的防治效果受到較大影響。綜上所述，復合菌劑防治番茄灰霉病時，采用噴霧的使用方法，在發(fā)病前進行預防施藥，能夠取得最佳的防治效果。在實際生產(chǎn)應用中，應根據(jù)番茄灰霉病的發(fā)生規(guī)律和田間實際情況，選擇合適的使用方法和施藥時期，以充分發(fā)揮復合菌劑的防治作用。六、結(jié)論與展望6.1研究結(jié)論總結(jié)本研究通過一系列實驗，對兩株生防細菌復合菌劑防治番茄灰霉病的效果、作用機制及影響因素進行了深入探究，取得了以下主要研究成果：復合菌劑對番茄灰霉病的防治效果顯著：通過盆栽試驗和田間試驗，系統(tǒng)研究了不同配比的復合菌劑對番茄灰霉病的防治效果。結(jié)果表明，復合菌劑各處理組均能顯著降低番茄灰霉病的發(fā)病率和病情指數(shù)，提高防治效果。在盆栽試驗中，復合菌劑2:1處理組的發(fā)病率為23.33%，病情指數(shù)為13.33，防治效果高達77.