pcr崗前考試題及答案

pcr崗前考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR的中文名稱是（）A.基因測序技術(shù)B.聚合酶鏈反應C.核酸雜交技術(shù)D.基因克隆技術(shù)答案：B2.在PCR反應中，起催化合成DNA作用的酶是（）A.限制性內(nèi)切酶B.TaqDNA聚合酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.DNA連接酶答案：B3.PCR反應的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.72℃C.55-60℃D.37℃答案：A4.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應的基本成分（）A.模板DNAB.引物C.蛋白酶D.dNTPs答案：C5.PCR引物的長度一般為（）A.5-10個核苷酸B.15-30個核苷酸C.50-100個核苷酸D.100-200個核苷酸答案：B6.下列關于PCR循環(huán)次數(shù)的說法正確的是（）A.循環(huán)次數(shù)越多越好B.一般為20-30次C.循環(huán)次數(shù)只與模板量有關D.循環(huán)10次就足夠了答案：B7.PCR反應中，引物與模板的結(jié)合發(fā)生在（）A.變性階段B.退火階段C.延伸階段D.預變性階段答案：B8.用于檢測PCR產(chǎn)物大小的常用方法是（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.蛋白質(zhì)印跡法C.免疫熒光法D.放射性核素標記法答案：A9.如果PCR反應沒有得到預期產(chǎn)物，可能的原因不包括（）A.引物設計錯誤B.模板量過多C.反應體系中加入了RNA酶D.延伸時間過長答案：D10.在進行PCR實驗時，為防止污染，以下做法錯誤的是（）A.實驗前對操作臺面進行消毒B.試劑和耗材在使用前進行高壓滅菌C.在不同的實驗區(qū)域隨意走動D.實驗過程中戴手套并經(jīng)常更換答案：C二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可應用于以下哪些領域（）A.基因診斷B.法醫(yī)學鑒定C.古生物學研究D.基因工程答案：ABCD2.影響PCR反應的因素包括（）A.模板純度B.引物質(zhì)量C.酶的活性D.反應溫度和時間答案：ABCD3.以下哪些是PCR引物設計的原則（）A.引物長度合適B.避免引物自身形成二級結(jié)構(gòu)C.引物之間不能互補D.引物的GC含量在40%-60%之間答案：ABCD4.PCR反應體系通常包括（）A.模板B.引物C.Taq酶D.緩沖液和dNTPs答案：ABCD5.在PCR實驗中，防止污染的措施有（）A.嚴格分區(qū)操作B.使用帶濾芯的槍頭C.定期對儀器設備進行清潔和維護D.實驗結(jié)束后對實驗室進行消毒答案：ABCD6.以下關于PCR產(chǎn)物特異性的說法正確的是（）A.受引物特異性影響B(tài).受退火溫度影響C.受模板復雜性影響D.受循環(huán)次數(shù)影響答案：ABC7.可用于提高PCR反應特異性的方法有（）A.提高退火溫度B.優(yōu)化引物設計C.減少模板量D.延長延伸時間答案：AB8.以下屬于PCR常見問題的是（）A.無擴增產(chǎn)物B.非特異性擴增C.假陽性結(jié)果D.擴增效率低答案：ABCD9.在進行定量PCR時，需要考慮的因素有（）A.熒光染料或探針的選擇B.標準曲線的繪制C.引物和模板的濃度D.反應體系的均一性答案：ABCD10.PCR反應中模板的來源可以是（）A.基因組DNAB.質(zhì)粒DNAC.cDNAD.線粒體DNA答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應只能擴增DNA，不能擴增RNA。（）答案：錯誤2.Taq酶在高溫下容易失活。（）答案：錯誤3.引物在PCR反應中可以重復使用。（）答案：錯誤4.PCR反應中，延伸時間越長，產(chǎn)物量越多。（）答案：錯誤5.只要有模板、引物和酶，就可以進行PCR反應。（）答案：錯誤6.在PCR反應中，變性溫度越高越好。（）答案：錯誤7.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應。（）答案：錯誤8.引物濃度過高會導致非特異性擴增。（）答案：正確9.PCR反應產(chǎn)物一定是特異性的。（）答案：錯誤10.進行PCR實驗時，不同的樣本可以同時在一個反應管中進行擴增。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應的基本原理。答案：PCR反應是一種體外模擬天然DNA復制過程的核酸擴增技術(shù)。以DNA為模板，以一對與模板互補的寡核苷酸為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復制的機制沿著模板鏈延伸合成新的DNA鏈。經(jīng)過變性、退火、延伸三個基本步驟的多次循環(huán)，使特定的DNA片段得到大量擴增。2.請說明PCR引物設計時需要注意的一個特殊點并解釋原因。答案：要避免引物3'端互補。原因是引物3'端是延伸的起始位點，如果3'端互補會形成引物二聚體，消耗引物和dNTPs，導致PCR反應失敗，無法得到正確的擴增產(chǎn)物。3.在PCR實驗中，如果出現(xiàn)非特異性擴增，可能的原因有哪些？答案：可能原因包括引物設計不合理（如長度不合適、引物間互補等）、退火溫度過低、模板純度低、酶量過多、dNTPs濃度過高、循環(huán)次數(shù)過多等。4.簡述PCR技術(shù)在基因診斷中的應用意義。答案：PCR技術(shù)可快速擴增特定基因片段。在基因診斷中，能檢測基因的突變、缺失、插入等異常情況，有助于疾病的早期診斷、確定病原體類型、判斷遺傳疾病的攜帶者等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論如何確保PCR反應的準確性。答案：確保模板質(zhì)量，純度要高；精心設計引物，遵循設計原則；使用活性良好的Taq酶；準確控制反應溫度和時間；嚴格防止污染，實驗分區(qū)操作等。2.分析在定量PCR中，如何提高定量的準確性？答案：選擇合適的熒光染料或探針；準確繪制標準曲線；優(yōu)化引物和模板濃度；保證反應體系均一性；嚴格控制反應條件等。3.探討PCR實驗中污染的來源及如何徹底消除污染。答案：污染來源有樣本交叉污染、試劑污