B7 - H3和B7 - H4在卵巢漿液性腺癌與黏液性腺癌中的表達(dá)及臨床病理意義探尋

B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌與黏液性腺癌中的表達(dá)及臨床病理意義探尋一、引言1.1研究背景卵巢癌作為女性生殖系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康。在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤里，其發(fā)病率僅次于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌，位居第三，然而死亡率卻高居榜首。卵巢腫瘤組織成分極為復(fù)雜，不同類型在組織結(jié)構(gòu)和生物學(xué)行為上存在顯著差異。卵巢癌起病時進展迅速，且早期常無明顯癥狀，極易被忽視，多數(shù)患者確診時已處于晚期。卵巢癌向周圍組織浸潤或壓迫，會引發(fā)腹痛、腰痛或下肢疼痛，患者還可能出現(xiàn)消瘦、貧血及惡病質(zhì)改變。若轉(zhuǎn)移至肺部，可導(dǎo)致呼吸困難、咳嗽咳痰；轉(zhuǎn)移至肝臟，則會出現(xiàn)惡心嘔吐、黃疸、肝脾腫大及腹水等癥狀。當(dāng)發(fā)展到晚期卵巢癌，出現(xiàn)肝臟轉(zhuǎn)移或其他器官轉(zhuǎn)移時，會呈現(xiàn)一系列晚期腫瘤惡病質(zhì)表現(xiàn)，甚至危及生命。卵巢癌根據(jù)組織學(xué)來源可分為上皮性卵巢癌、生殖細(xì)胞性腫瘤、性索-間質(zhì)腫瘤和轉(zhuǎn)移性癌四類。其中上皮性卵巢癌最為常見，約占卵巢癌的70%，且惡性程度最高，約70%的患者就診時已處于晚期，5年生存率不足30%。上皮性卵巢癌又進一步分為漿液性腺癌、子宮內(nèi)膜樣腺癌、透明細(xì)胞癌、黏液性腺癌等，漿液性腺癌和黏液性腺癌是其中的主要類型，這兩種類型具有獨特的生物學(xué)特征和不同的臨床表現(xiàn)。B7-H3和B7-H4是免疫共刺激分子家族B7家族中的重要成員。B7-H3最初被認(rèn)為主要作為共刺激受體，促進CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞，并在T細(xì)胞受體信號傳導(dǎo)的情況下選擇性地刺激干擾素γ(IFN-γ)而產(chǎn)生免疫刺激功能。但隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)其在免疫細(xì)胞中主要發(fā)揮共抑制作用，幫助腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，其過表達(dá)與腫瘤患者的不良預(yù)后以及腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。B7-H4是一種負(fù)性協(xié)同共刺激分子，在多種腫瘤細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞上異常高表達(dá)，通過抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答反應(yīng)參與腫瘤的免疫逃逸。研究證實，B7-H4可通過參與多種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，增強腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及抗凋亡能力，從而促進腫瘤的進展。近年來，B7-H3和B7-H4在各種腫瘤中的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后的相關(guān)性研究成為熱點。然而，在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中，B7-H3和B7-H4的表達(dá)及其臨床意義尚未得到深入探究。鑒于卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌在卵巢癌中的重要地位以及B7-H3和B7-H4在腫瘤免疫調(diào)節(jié)中的關(guān)鍵作用，深入研究B7-H3和B7-H4在這兩種卵巢癌中的表達(dá)及臨床病理意義顯得尤為必要，有望為進一步了解這兩種卵巢癌的生物學(xué)特征和發(fā)病機制提供參考，為個體化治療提供新的靶點。1.2研究目的與意義本研究旨在通過檢測B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌組織中的表達(dá)情況，分析其表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)（如年齡、腫瘤大小、浸潤深度、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等）之間的關(guān)系，探究B7-H3和B7-H4在這兩種卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機制，明確它們是否可作為評估卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌預(yù)后的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。卵巢癌嚴(yán)重威脅女性生命健康，而卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌作為上皮性卵巢癌的主要類型，其獨特的生物學(xué)特征和臨床表現(xiàn)使得深入了解它們的發(fā)病機制和生物學(xué)行為至關(guān)重要。B7-H3和B7-H4作為免疫共刺激分子家族B7家族成員，在腫瘤免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其在多種腫瘤中的研究為卵巢癌相關(guān)研究提供了重要思路。研究B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的表達(dá)及臨床病理意義，一方面有助于進一步明晰這兩種卵巢癌的生物學(xué)特性和發(fā)病機制，為基礎(chǔ)研究提供新的方向；另一方面，若能確定它們與卵巢癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，有望為臨床醫(yī)生評估患者病情、預(yù)測預(yù)后提供新的指標(biāo)，為卵巢癌的個體化治療提供新的靶點，有助于提高卵巢癌患者的治療效果和生存率，改善患者的生活質(zhì)量，具有重要的臨床應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義。二、理論基礎(chǔ)與研究現(xiàn)狀2.1卵巢漿液性腺癌與黏液性腺癌概述卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤，其組織學(xué)類型多樣，卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌是上皮性卵巢癌的重要亞型，在病理特征、發(fā)病率、臨床表現(xiàn)和治療等方面存在差異。2.1.1卵巢漿液性腺癌特點卵巢漿液性腺癌是最常見的原發(fā)性卵巢惡性腫瘤，約占所有卵巢惡性腫瘤的40%-60%。在組織學(xué)上，卵巢漿液性腺癌多由卵巢表面的生發(fā)上皮向輸卵管上皮分化形成。其腫瘤細(xì)胞呈立方形或柱狀，排列成乳頭狀、腺樣或?qū)嵭越Y(jié)構(gòu)，細(xì)胞核異型性明顯，可見核分裂象。腫瘤常為囊性或囊實性，囊內(nèi)含有漿液血性液體，有大量乳頭狀突起是其顯著的病理特征，這些乳頭狀突起起初位于腫瘤內(nèi)壁，隨著病情發(fā)展，常常穿透囊壁生長，且容易出現(xiàn)出血壞死現(xiàn)象。根據(jù)乳頭狀結(jié)構(gòu)的分化程度，漿液性腺癌可分為高分化、中分化和低分化，其中低分化占比較多，約90%。一般來說，分化程度越高，腫瘤的級別越低，惡性程度也就越低。卵巢漿液性腺癌的發(fā)病率在卵巢癌中居首位，患者多在40-60歲發(fā)病。其臨床癥狀早期常不明顯，部分患者可能會出現(xiàn)腹脹、腹痛、腹部腫塊、陰道分泌物增多等非特異性癥狀。隨著病情進展，腫瘤增大壓迫周圍組織，可導(dǎo)致尿頻、尿急、便秘等癥狀；若發(fā)生轉(zhuǎn)移，可出現(xiàn)相應(yīng)轉(zhuǎn)移部位的癥狀，如轉(zhuǎn)移至肺部可引起咳嗽、咯血、呼吸困難等。對于卵巢漿液性腺癌的治療，手術(shù)是主要的治療手段，早期患者可行全面分期手術(shù)，包括切除子宮、雙側(cè)附件、大網(wǎng)膜、闌尾及盆腔和腹主動脈旁淋巴結(jié)清掃等；晚期患者則行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，盡可能切除肉眼可見的腫瘤病灶。術(shù)后常輔以化療，常用的化療方案是以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療，如紫杉醇聯(lián)合卡鉑。對于一些復(fù)發(fā)或難治性的卵巢漿液性腺癌，還可考慮靶向治療、免疫治療等新興治療方法。2.1.2卵巢黏液性腺癌特點卵巢黏液性腺癌在卵巢惡性腫瘤中發(fā)病率相對較低，占惡性腫瘤的10%-20%。其主要來源于卵巢表面上皮，向?qū)m頸內(nèi)膜上皮分化，多發(fā)生于20-40歲女性，且多數(shù)為單側(cè)。在病理形態(tài)上，黏液性腺癌通常體積較大，可占據(jù)整個盆腔，多為多房狀，囊內(nèi)同樣有乳頭狀增生，常伴有出血壞死，囊內(nèi)含有粘血性混濁液體。依據(jù)上皮的分化程度，黏液性腺癌也分為高分化、中分化和低分化3型，其中高分化占比較多，約為72%。與卵巢漿液性腺癌相比，卵巢黏液性腺癌在組織學(xué)來源上，前者來源于卵巢表面上皮向?qū)m頸內(nèi)膜上皮分化，后者則是卵巢表面的生發(fā)上皮向輸卵管上皮分化；在超聲影像特點上，黏液性腫瘤表現(xiàn)為單個或多個液性暗區(qū)，內(nèi)有細(xì)小漂浮光點，常伴有凝固光點，而漿液性囊腺瘤通常為無回聲區(qū)，內(nèi)壁光滑整齊，可見紆曲的囊狀擴張血管；從蒂的形成來看，黏液性腫瘤生長在盆腔深部，質(zhì)地較韌，發(fā)生扭轉(zhuǎn)的概率較低，漿液性囊腺瘤體積較大，多位于盆腔中部，更容易發(fā)生扭轉(zhuǎn)；惡變率方面，黏液性腫瘤一般不惡變，但可能發(fā)展成惡性病變?nèi)绺鼓ぐ┑?，漿液性囊腺瘤極少惡變，但長期存在也可能逐漸發(fā)展成為交界性腫瘤甚至原發(fā)性卵巢癌。卵巢黏液性腺癌早期癥狀同樣不典型，部分患者可能出現(xiàn)腹脹、腹痛、腹部包塊等癥狀。由于多數(shù)黏液性囊腺癌患者為低級別腫瘤且期別較早，總體預(yù)后相對較好，5年生存率可達(dá)80%-90%。然而，對于晚期黏液性卵巢癌患者，尤其是經(jīng)過不理想的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)的Ⅲ期或Ⅳ期患者，其預(yù)后與漿液性卵巢癌相比無顯著差異，甚至更差，這可能是因為晚期黏液性卵巢癌患者對化療的反應(yīng)率低，相對耐藥。在治療方面，手術(shù)同樣是關(guān)鍵的治療方式，早期患者可行全面分期手術(shù)，對于有生育要求的年輕患者，若腫瘤局限于一側(cè)卵巢，可行單側(cè)附件切除術(shù)。晚期患者需行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，且由于黏液性腺癌常與闌尾關(guān)系密切，手術(shù)時必須切除闌尾。術(shù)后化療方案與漿液性腺癌類似，以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療，但化療效果相對有限。2.2B7-H3和B7-H4相關(guān)理論2.2.1B7-H3和B7-H4的結(jié)構(gòu)與功能B7-H3和B7-H4作為免疫共刺激分子B7家族的重要成員，在機體的免疫調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。B7-H3，也被稱為CD276，是一種I型跨膜蛋白。其基因位于人類染色體15q24.1，mRNA全長約2.5kb。B7-H3蛋白由一個信號肽、一個含有兩個IgV（免疫球蛋白可變區(qū)）和兩個IgC（免疫球蛋白恒定區(qū)）結(jié)構(gòu)域的胞外區(qū)、一個跨膜區(qū)以及一個短的胞內(nèi)區(qū)組成。這種獨特的結(jié)構(gòu)使其能夠在細(xì)胞表面穩(wěn)定存在，并與其他細(xì)胞表面分子相互作用。在功能方面，B7-H3最初被認(rèn)為主要起免疫刺激作用，它能夠促進CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖，增強細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性，并且在T細(xì)胞受體信號傳導(dǎo)時，選擇性地刺激干擾素γ(IFN-γ)的產(chǎn)生。然而，隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)其在免疫細(xì)胞中更多地發(fā)揮共抑制作用。在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的B7-H3可以與T細(xì)胞表面的未知受體結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活化、增殖以及細(xì)胞因子的分泌，從而幫助腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視。B7-H3還可以通過調(diào)節(jié)自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）、樹突狀細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能，進一步削弱機體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。B7-H4，又稱為B7S1或VTCN1，同樣是I型跨膜蛋白，其基因定位于人類染色體1p11.1，全長1.8kbp。B7-H4蛋白結(jié)構(gòu)包含一個信號肽區(qū)、一個由IgV和IgC結(jié)構(gòu)域組成的胞外區(qū)、一個跨膜區(qū)以及一個胞內(nèi)區(qū)。雖然B7-H4的受體至今尚未明確，但研究表明它在免疫調(diào)節(jié)中扮演著負(fù)性共刺激分子的角色。B7-H4主要通過抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答來參與腫瘤的免疫逃逸。當(dāng)B7-H4在腫瘤細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞或腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞上高表達(dá)時，它可以與T細(xì)胞表面的未知受體相互作用，抑制T細(xì)胞的活化、增殖以及細(xì)胞因子（如IFN-γ、IL-2等）的分泌，使T細(xì)胞處于失活狀態(tài)，無法有效地殺傷腫瘤細(xì)胞。B7-H4還可以促進調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的功能，增加免疫抑制因子（如IL-10）的分泌，進一步營造免疫抑制性的腫瘤微環(huán)境，有利于腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。B7-H4還能通過參與多種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，如ERK1/2和PI3K通路，直接增強腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及抗凋亡能力，從而促進腫瘤的進展。2.2.2B7-H3和B7-H4在腫瘤中的研究現(xiàn)狀近年來，B7-H3和B7-H4在腫瘤領(lǐng)域的研究取得了顯著進展，成為腫瘤免疫治療的新興靶點。大量研究表明，B7-H3在多種惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌等。在乳腺癌中，B7-H3的高表達(dá)與腫瘤的侵襲性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及不良預(yù)后密切相關(guān)。有研究對100例乳腺癌患者的腫瘤組織進行檢測，發(fā)現(xiàn)B7-H3高表達(dá)組患者的5年生存率明顯低于低表達(dá)組，且B7-H3表達(dá)水平與腫瘤的TNM分期呈正相關(guān)。在肺癌中，B7-H3不僅在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，還在腫瘤相關(guān)血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，其高表達(dá)與腫瘤的血管生成、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及患者的不良預(yù)后相關(guān)。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，B7-H3通過多種機制促進腫瘤的進展。一方面，它可以抑制機體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，使腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視；另一方面，B7-H3可以直接作用于腫瘤細(xì)胞，促進其增殖、遷移和侵襲能力。研究發(fā)現(xiàn)，B7-H3可以激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)的PI3K/AKT和MAPK信號通路，促進腫瘤細(xì)胞的存活和增殖。B7-H3還可以通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，促進腫瘤血管生成和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。關(guān)于腫瘤預(yù)后，B7-H3的高表達(dá)通常被認(rèn)為是預(yù)后不良的指標(biāo)。多項臨床研究表明，B7-H3高表達(dá)的腫瘤患者，其復(fù)發(fā)率較高，生存期較短。在前列腺癌患者中，B7-H3的高表達(dá)與術(shù)后復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險增加相關(guān)，患者的無進展生存期和總生存期明顯縮短。B7-H4在多種腫瘤中的表達(dá)也較為廣泛，如子宮內(nèi)膜癌、膽管癌、乳腺癌、卵巢癌等。在子宮內(nèi)膜癌中，B7-H4的陽性表達(dá)率可高達(dá)94%，且其表達(dá)與腫瘤的分期、分級以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。對80例子宮內(nèi)膜癌患者的研究顯示，B7-H4高表達(dá)組患者的復(fù)發(fā)率明顯高于低表達(dá)組，5年生存率更低。在乳腺癌中，B7-H4在HER2陽性乳腺癌和三陰性乳腺癌中的表達(dá)率分別為78%和74%，其高表達(dá)與腫瘤的侵襲性、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及不良預(yù)后相關(guān)。B7-H4在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機制主要是通過抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，參與腫瘤的免疫逃逸。B7-H4還可以通過激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)的信號通路，促進腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。研究表明，B7-H4可以上調(diào)腫瘤細(xì)胞中MMP-2和MMP-9等基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，促進腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在腫瘤預(yù)后方面，B7-H4的高表達(dá)同樣與不良預(yù)后相關(guān)。許多研究證實，B7-H4陽性表達(dá)的腫瘤患者，其預(yù)后較差，復(fù)發(fā)風(fēng)險高，生存期短。在卵巢癌患者中，B7-H4的高表達(dá)與腫瘤的晚期分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及化療耐藥相關(guān)，患者的總生存期和無進展生存期明顯縮短。B7-H3和B7-H4在不同腫瘤中的表達(dá)和作用存在一定差異。在某些腫瘤中，B7-H3的表達(dá)可能更為關(guān)鍵，如在前列腺癌中，B7-H3的高表達(dá)與腫瘤的進展和預(yù)后密切相關(guān)；而在另一些腫瘤中，B7-H4的作用可能更為突出，如在子宮內(nèi)膜癌中，B7-H4的表達(dá)與腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后關(guān)系更為緊密。這種差異可能與腫瘤的組織學(xué)類型、發(fā)病機制以及腫瘤微環(huán)境等因素有關(guān)。三、研究設(shè)計與方法3.1研究對象本研究選取2015年1月至2022年12月期間，在[醫(yī)院名稱]就診并接受手術(shù)治療的卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)術(shù)后病理確診為卵巢漿液性腺癌或黏液性腺癌；患者術(shù)前未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療；患者臨床病理資料完整，包括年齡、腫瘤大小、浸潤深度、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等信息；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤的患者；患有嚴(yán)重的肝、腎、心、肺等重要臟器功能障礙的患者；存在免疫功能缺陷或自身免疫性疾病的患者；臨床病理資料不完整，無法進行準(zhǔn)確分析的患者。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，最終共納入卵巢漿液性腺癌患者80例，黏液性腺癌患者50例。所有患者的手術(shù)標(biāo)本均經(jīng)過專業(yè)病理醫(yī)師進行病理診斷和病理分型，以確保診斷的準(zhǔn)確性。這些患者的年齡范圍在25-70歲之間，平均年齡為（48.5±10.2）歲。通過嚴(yán)格篩選研究對象，保證了研究樣本的同質(zhì)性和可靠性，為后續(xù)研究B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的表達(dá)及臨床病理意義奠定了良好基礎(chǔ)。3.2實驗方法3.2.1免疫組化檢測B7-H3和B7-H4表達(dá)免疫組化檢測采用EnVision二步法，具體實驗步驟如下：組織切片制備：將手術(shù)切除的卵巢癌組織標(biāo)本立即放入10%中性福爾馬林溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚的連續(xù)切片，將切片裱貼于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上，60℃烤箱烤片2h，以確保切片牢固附著。脫蠟與水化：將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10min進行脫蠟，然后依次經(jīng)無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇各浸泡5min進行水化，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3min?？乖迯?fù)：將水化后的切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復(fù)盒中，微波爐加熱至沸騰后持續(xù)10min，然后自然冷卻至室溫，使抗原充分暴露。此步驟通過高溫使抗原決定簇重新暴露，提高抗原抗體的結(jié)合效率，從而增強檢測的靈敏度。滅活內(nèi)源性過氧化物酶：將切片放入3%過氧化氫溶液中室溫孵育10min，以滅活組織內(nèi)的內(nèi)源性過氧化物酶，防止其產(chǎn)生非特異性染色，影響結(jié)果判斷。血清封閉：傾去過氧化氫溶液，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次3min，然后在切片上滴加正常山羊血清，室溫孵育20min，以封閉非特異性結(jié)合位點，減少背景染色。抗體孵育：傾去血清，不洗，在切片上分別滴加鼠抗人B7-H3單克隆抗體和鼠抗人B7-H4單克隆抗體（工作濃度均為1:100），4℃冰箱孵育過夜。陰性對照用PBS緩沖液代替一抗，以驗證抗體結(jié)合的特異性，排除非特異性染色的干擾。二抗孵育：次日取出切片，室溫復(fù)溫30min，用PBS緩沖液沖洗3次，每次3min，然后滴加生物素標(biāo)記的山羊抗鼠IgG二抗，室溫孵育30min。二抗能夠與一抗特異性結(jié)合，從而放大檢測信號，提高檢測的準(zhǔn)確性。DAB顯色：用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次3min，然后滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽性部位出現(xiàn)棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。DAB在過氧化物酶的作用下發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成棕色沉淀，從而使陽性部位顯色，便于觀察和判斷。蘇木精復(fù)染：將顯色后的切片放入蘇木精染液中復(fù)染3-5min，使細(xì)胞核染成藍(lán)色，然后用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，再用自來水沖洗返藍(lán)。復(fù)染的目的是使細(xì)胞核與陽性部位形成鮮明對比，便于觀察和分析。脫水、透明與封片：將復(fù)染后的切片依次經(jīng)75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ各浸泡5min進行脫水，然后放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10min進行透明，最后用中性樹膠封片。脫水和透明步驟使切片能夠在顯微鏡下清晰觀察，封片則保護切片，防止其受到外界因素的影響。免疫組化結(jié)果判定：由兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師采用雙盲法獨立閱片，在高倍鏡（×400）下隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)占全部腫瘤細(xì)胞數(shù)的百分比以及染色強度進行綜合判斷。陽性細(xì)胞數(shù)占全部腫瘤細(xì)胞數(shù)的百分比分為：陰性為陽性細(xì)胞數(shù)＜10%；陽性為陽性細(xì)胞數(shù)≥10%。染色強度分為：淡黃色為弱陽性（+）；棕黃色為陽性（++）；棕褐色為強陽性（+++）。若兩位病理醫(yī)師的判定結(jié)果不一致，則共同商討或請第三位病理醫(yī)師會診，以確定最終結(jié)果。3.2.2臨床病理資料收集通過查閱醫(yī)院電子病歷系統(tǒng)和患者的紙質(zhì)病歷，收集所有納入研究患者的詳細(xì)臨床病理資料，包括：患者基本信息：年齡、月經(jīng)史（初潮年齡、絕經(jīng)年齡等）、生育史（生育次數(shù)、分娩方式等）、家族腫瘤史（是否有家族成員患有卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤）。這些信息有助于分析患者的個體差異對卵巢癌發(fā)生發(fā)展的影響，以及遺傳因素在卵巢癌發(fā)病中的作用。腫瘤相關(guān)信息：腫瘤大小，通過手術(shù)記錄或影像學(xué)檢查（如超聲、CT等）測量腫瘤的最大徑；浸潤深度，根據(jù)病理報告確定腫瘤侵犯卵巢組織的深度，分為局限于卵巢、侵犯卵巢表面、侵犯卵巢周圍組織等；分化程度，依據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的卵巢腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，分為高分化、中分化和低分化；TNM分期，按照國際抗癌聯(lián)盟（UICC）制定的TNM分期系統(tǒng)進行分期，T代表原發(fā)腫瘤的大小和范圍，N代表區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，M代表遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，記錄是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)數(shù)目和部位；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況，明確是否有遠(yuǎn)處器官（如肺、肝、骨等）轉(zhuǎn)移。這些腫瘤相關(guān)信息能夠反映腫瘤的生物學(xué)行為和病情嚴(yán)重程度，對于分析B7-H3和B7-H4表達(dá)與腫瘤進展的關(guān)系至關(guān)重要。治療及隨訪信息：手術(shù)方式，記錄患者接受的手術(shù)類型，如全面分期手術(shù)、腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)等；化療方案，包括化療藥物的種類、劑量、療程等；隨訪時間，從手術(shù)日期開始計算，隨訪截止日期為2023年6月30日，記錄患者的生存狀態(tài)（存活或死亡）以及生存時間。治療及隨訪信息有助于評估患者的治療效果和預(yù)后情況，為研究B7-H3和B7-H4表達(dá)與治療反應(yīng)及預(yù)后的相關(guān)性提供依據(jù)。對收集到的臨床病理資料進行詳細(xì)整理和核對，確保資料的準(zhǔn)確性和完整性。對于缺失或不明確的信息，盡可能通過與患者主治醫(yī)生溝通、再次查閱病歷等方式進行補充和確認(rèn)。整理后的臨床病理資料錄入Excel表格，以便后續(xù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。3.3數(shù)據(jù)分析方法本研究采用SPSS22.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，確保數(shù)據(jù)分析的準(zhǔn)確性和可靠性。對于免疫組化檢測得到的B7-H3和B7-H4表達(dá)結(jié)果以及收集的臨床病理資料，運用多種統(tǒng)計方法進行深入分析。對于計數(shù)資料，如不同病理類型卵巢癌患者中B7-H3和B7-H4陽性表達(dá)的例數(shù)，以及不同臨床病理特征（如不同分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等）的患者例數(shù)，計算其構(gòu)成比或率，以直觀展示各分類變量在總體中的分布情況。例如，計算卵巢漿液性腺癌患者中B7-H3陽性表達(dá)的患者占該組總患者數(shù)的百分比，通過百分比的對比，初步了解B7-H3在不同病理類型卵巢癌中的表達(dá)差異趨勢。計量資料方面，像患者的年齡、腫瘤大小等數(shù)據(jù)，若符合正態(tài)分布，則采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）進行描述。比如卵巢漿液性腺癌患者的平均年齡為（48.5±10.2）歲，該均值和標(biāo)準(zhǔn)差能反映出患者年齡的集中趨勢和離散程度。通過計算兩組患者（如卵巢漿液性腺癌組和黏液性腺癌組）年齡的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，可以直觀地比較兩組患者在年齡方面的差異。在比較兩組之間的差異時，根據(jù)數(shù)據(jù)類型選擇合適的檢驗方法。對于滿足正態(tài)分布且方差齊性的計量資料，如兩組患者的年齡比較，采用獨立樣本t檢驗。t檢驗?zāi)軌蚺袛鄡山M均值之間的差異是否具有統(tǒng)計學(xué)意義，若t檢驗結(jié)果顯示P值小于0.05，則認(rèn)為兩組患者的年齡存在顯著差異，這有助于分析年齡因素在不同病理類型卵巢癌中的潛在影響。對于計數(shù)資料，如不同病理類型卵巢癌中B7-H3和B7-H4陽性表達(dá)率的比較，以及B7-H3和B7-H4表達(dá)與其他臨床病理參數(shù)（如分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）之間的關(guān)系分析，采用χ2檢驗。χ2檢驗可以檢驗兩個或多個分類變量之間是否存在關(guān)聯(lián)。例如，在分析B7-H3表達(dá)與卵巢漿液性腺癌分化程度的關(guān)系時，通過χ2檢驗計算得到的P值，若P值小于0.05，表明B7-H3表達(dá)與卵巢漿液性腺癌的分化程度存在顯著關(guān)聯(lián)，即B7-H3的表達(dá)水平可能與腫瘤的分化程度相關(guān)，為進一步探究B7-H3在卵巢漿液性腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用提供依據(jù)。當(dāng)遇到等級資料，如腫瘤的分化程度分為高分化、中分化和低分化，B7-H3和B7-H4的表達(dá)強度分為陰性、弱陽性、陽性和強陽性時，采用秩和檢驗進行分析。秩和檢驗?zāi)軌蛱幚聿粷M足參數(shù)檢驗條件的非正態(tài)分布數(shù)據(jù)和等級資料，通過比較兩組或多組資料的秩和，判斷它們之間是否存在差異。比如在分析B7-H4表達(dá)強度與卵巢黏液性腺癌分化程度的關(guān)系時，由于兩者均為等級資料，使用秩和檢驗可以更準(zhǔn)確地揭示它們之間的潛在聯(lián)系，若秩和檢驗結(jié)果顯示P值小于0.05，則說明B7-H4表達(dá)強度與卵巢黏液性腺癌的分化程度存在顯著差異，有助于深入了解B7-H4在卵巢黏液性腺癌中的作用機制。通過以上全面系統(tǒng)的數(shù)據(jù)分析方法，深入剖析B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的表達(dá)水平及其與臨床病理特征的關(guān)系，為研究結(jié)論的得出提供有力的統(tǒng)計學(xué)支持。四、研究結(jié)果4.1B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的表達(dá)情況通過免疫組化檢測80例卵巢漿液性腺癌組織和50例卵巢黏液性腺癌組織中B7-H3和B7-H4的表達(dá)，結(jié)果顯示B7-H3和B7-H4在兩種卵巢癌組織中均有表達(dá)，但其陽性表達(dá)率存在明顯差異（圖1、圖2）。在卵巢漿液性腺癌中，B7-H3陽性表達(dá)的病例有48例，陽性表達(dá)率為60%（48/80）；B7-H4陽性表達(dá)的病例有54例，陽性表達(dá)率為68%（54/80）。而在卵巢黏液性腺癌中，B7-H3陽性表達(dá)的病例為16例，陽性表達(dá)率為32%（16/50）；B7-H4陽性表達(dá)的病例有17例，陽性表達(dá)率為34%（17/50）。運用χ2檢驗對兩組數(shù)據(jù)進行分析，結(jié)果表明B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的陽性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），即B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中的陽性表達(dá)率顯著高于在卵巢黏液性腺癌中的表達(dá)。詳細(xì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計如表1所示。腫瘤類型例數(shù)B7-H3陽性表達(dá)例數(shù)（陽性率）B7-H4陽性表達(dá)例數(shù)（陽性率）卵巢漿液性腺癌8048（60%）54（68%）卵巢黏液性腺癌5016（32%）17（34%）圖1：卵巢漿液性腺癌組織中B7-H3和B7-H4的免疫組化染色結(jié)果（×400）A：B7-H3陽性表達(dá)，腫瘤細(xì)胞胞膜和胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色；B：B7-H4陽性表達(dá)，腫瘤細(xì)胞胞膜和胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色。圖2：卵巢黏液性腺癌組織中B7-H3和B7-H4的免疫組化染色結(jié)果（×400）C：B7-H3陽性表達(dá)，腫瘤細(xì)胞胞膜和胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色；D：B7-H4陽性表達(dá)，腫瘤細(xì)胞胞膜和胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色。4.2B7-H3和B7-H4表達(dá)與卵巢漿液性腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系進一步分析B7-H3和B7-H4表達(dá)與卵巢漿液性腺癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，結(jié)果顯示B7-H3和B7-H4的表達(dá)與卵巢漿液性腺癌的分化程度、FIGO分期密切相關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而與患者年齡、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)無明顯相關(guān)性（P＞0.05），詳細(xì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計如表2所示。臨床病理參數(shù)例數(shù)B7-H3陽性表達(dá)（例，%）χ2PB7-H4陽性表達(dá)（例，%）χ2P年齡（歲）--1.8560.173-2.0130.156≤503520（57.1）23（65.7）＞504528（62.2）31（68.9）腫瘤大?。╟m）--1.1240.290-1.3570.244≤52815（53.6）18（64.3）＞55233（63.5）36（69.2）浸潤深度--0.9870.320-1.0560.304局限于卵巢3016（53.3）19（63.3）侵犯卵巢表面及周圍組織5032（64.0）35（70.0）分化程度--5.9840.014-6.5430.010高分化156（40.0）7（46.7）中分化3016（53.3）18（60.0）低分化3526（74.3）29（82.9）FIGO分期--7.8950.005-8.5670.003Ⅰ-Ⅱ期2510（40.0）12（48.0）Ⅲ-Ⅳ期5538（69.1）42（76.4）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移--1.6780.195-1.8940.169無4223（54.8）27（64.3）有3825（65.8）27（71.1）遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移--1.2350.266-1.4560.227無6034（56.7）39（65.0）有2014（70.0）15（75.0）在分化程度方面，隨著卵巢漿液性腺癌分化程度從高分化到低分化，B7-H3陽性表達(dá)率從40.0%（6/15）逐漸升高至74.3%（26/35），B7-H4陽性表達(dá)率從46.7%（7/15）升高至82.9%（29/35）。這表明腫瘤分化程度越低，惡性程度越高，B7-H3和B7-H4的表達(dá)水平越高。例如，在低分化的卵巢漿液性腺癌組織中，更多的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)B7-H3和B7-H4陽性染色，且染色強度更強，而高分化的腫瘤組織中陽性染色的細(xì)胞相對較少。在FIGO分期方面，Ⅰ-Ⅱ期卵巢漿液性腺癌患者中，B7-H3陽性表達(dá)率為40.0%（10/25），B7-H4陽性表達(dá)率為48.0%（12/25）；Ⅲ-Ⅳ期患者中，B7-H3陽性表達(dá)率升高至69.1%（38/55），B7-H4陽性表達(dá)率升高至76.4%（42/55）。分期越晚，B7-H3和B7-H4的陽性表達(dá)率越高，說明B7-H3和B7-H4的表達(dá)與卵巢漿液性腺癌的疾病進展相關(guān)。在Ⅲ-Ⅳ期的腫瘤組織切片中，可以觀察到大片的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)B7-H3和B7-H4強陽性染色，而Ⅰ-Ⅱ期的切片中陽性染色區(qū)域相對較少且較弱。這提示B7-H3和B7-H4可能在卵巢漿液性腺癌的疾病進展過程中發(fā)揮重要作用，其高表達(dá)可能促進了腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。4.3B7-H3和B7-H4表達(dá)與卵巢黏液性腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系對50例卵巢黏液性腺癌患者的臨床病理參數(shù)與B7-H3和B7-H4表達(dá)進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示B7-H3和B7-H4的表達(dá)與卵巢黏液性腺癌患者的年齡、腫瘤大小、浸潤深度、分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)均無明顯相關(guān)性（P＞0.05），詳細(xì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計如表3所示。臨床病理參數(shù)例數(shù)B7-H3陽性表達(dá)（例，%）χ2PB7-H4陽性表達(dá)（例，%）χ2P年齡（歲）--0.7850.376-0.8940.344≤50228（36.4）9（40.9）＞50288（28.6）8（28.6）腫瘤大?。╟m）--1.0230.312-1.1560.282≤5186（33.3）7（38.9）＞53210（31.3）10（31.3）浸潤深度--0.8760.350-0.9560.328局限于卵巢155（33.3）6（40.0）侵犯卵巢表面及周圍組織3511（31.4）11（31.4）分化程度--0.6540.419-0.7230.395高分化207（35.0）8（40.0）中分化185（27.8）6（33.3）低分化124（33.3）3（25.0）FIGO分期--0.9870.320-1.0560.304Ⅰ-Ⅱ期207（35.0）8（40.0）Ⅲ-Ⅳ期309（30.0）9（30.0）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移--0.5670.451-0.6890.406無2810（35.7）11（39.3）有226（27.3）6（27.3）遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移--0.4560.500-0.5870.443無4013（32.5）14（35.0）有103（30.0）3（30.0）在年齡方面，≤50歲的患者中B7-H3陽性表達(dá)率為36.4%（8/22），B7-H4陽性表達(dá)率為40.9%（9/22）；＞50歲的患者中B7-H3陽性表達(dá)率為28.6%（8/28），B7-H4陽性表達(dá)率為28.6%（8/28），不同年齡組之間B7-H3和B7-H4的表達(dá)無明顯差異。在腫瘤大小方面，腫瘤≤5cm的患者中B7-H3陽性表達(dá)率為33.3%（6/18），B7-H4陽性表達(dá)率為38.9%（7/18）；腫瘤＞5cm的患者中B7-H3陽性表達(dá)率為31.3%（10/32），B7-H4陽性表達(dá)率為31.3%（10/32），腫瘤大小與B7-H3和B7-H4的表達(dá)無明顯關(guān)聯(lián)。在分化程度上，高分化、中分化和低分化的卵巢黏液性腺癌患者中，B7-H3和B7-H4的陽性表達(dá)率雖有波動，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。高分化患者中B7-H3陽性表達(dá)率為35.0%（7/20），B7-H4陽性表達(dá)率為40.0%（8/20）；中分化患者中B7-H3陽性表達(dá)率為27.8%（5/18），B7-H4陽性表達(dá)率為33.3%（6/18）；低分化患者中B7-H3陽性表達(dá)率為33.3%（4/12），B7-H4陽性表達(dá)率為25.0%（3/12）。在FIGO分期方面，Ⅰ-Ⅱ期患者中B7-H3陽性表達(dá)率為35.0%（7/20），B7-H4陽性表達(dá)率為40.0%（8/20）；Ⅲ-Ⅳ期患者中B7-H3陽性表達(dá)率為30.0%（9/30），B7-H4陽性表達(dá)率為30.0%（9/30），分期與B7-H3和B7-H4的表達(dá)無明顯相關(guān)性。卵巢黏液性腺癌中B7-H3和B7-H4表達(dá)與各臨床病理參數(shù)無明顯相關(guān)性，可能是因為卵巢黏液性腺癌相對卵巢漿液性腺癌來說，具有獨特的生物學(xué)特性和發(fā)病機制，其腫瘤的發(fā)生發(fā)展可能受其他多種復(fù)雜因素的調(diào)控，B7-H3和B7-H4在其中的作用相對不顯著。卵巢黏液性腺癌多為單側(cè)，多數(shù)為低級別腫瘤且期別較早，其腫瘤微環(huán)境與漿液性腺癌存在差異，可能影響了B7-H3和B7-H4與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。五、結(jié)果討論5.1B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中高表達(dá)的意義本研究結(jié)果顯示，B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中的陽性表達(dá)率分別為60%和68%，顯著高于卵巢黏液性腺癌。這一結(jié)果表明B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要作用。從腫瘤發(fā)生發(fā)展的角度來看，B7-H3和B7-H4的高表達(dá)與卵巢漿液性腺癌的分化程度和FIGO分期密切相關(guān)。隨著腫瘤分化程度的降低，B7-H3和B7-H4的陽性表達(dá)率逐漸升高，這意味著在惡性程度更高的卵巢漿液性腺癌中，B7-H3和B7-H4的表達(dá)更為顯著。腫瘤分化程度低，細(xì)胞增殖活躍，侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強，而B7-H3和B7-H4的高表達(dá)可能為腫瘤細(xì)胞提供了更為有利的免疫逃逸環(huán)境，促進了腫瘤的發(fā)展。在低分化的卵巢漿液性腺癌組織中，B7-H3和B7-H4的高表達(dá)使得腫瘤細(xì)胞能夠更有效地逃避機體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊，從而得以持續(xù)增殖和擴散。在FIGO分期方面，Ⅲ-Ⅳ期卵巢漿液性腺癌患者中B7-H3和B7-H4的陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者。腫瘤分期越晚，病情越嚴(yán)重，B7-H3和B7-H4的高表達(dá)可能與腫瘤的進展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。隨著腫瘤的發(fā)展，腫瘤微環(huán)境發(fā)生改變，B7-H3和B7-H4的表達(dá)上調(diào)，進一步抑制機體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，使得腫瘤細(xì)胞更容易突破機體的免疫防線，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在Ⅲ-Ⅳ期卵巢漿液性腺癌中，腫瘤細(xì)胞可能通過高表達(dá)B7-H3和B7-H4，抑制T細(xì)胞的活化和增殖，降低機體對腫瘤細(xì)胞的免疫殺傷能力，從而促進腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴散。B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌的腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。B7-H3最初被認(rèn)為具有免疫刺激功能，但后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)其在免疫細(xì)胞中主要發(fā)揮共抑制作用。在卵巢漿液性腺癌中，腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的B7-H3可以與T細(xì)胞表面的未知受體結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活化、增殖以及細(xì)胞因子的分泌，使T細(xì)胞處于失活狀態(tài)，無法有效地殺傷腫瘤細(xì)胞。B7-H3還可以調(diào)節(jié)自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）、樹突狀細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能，進一步削弱機體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。B7-H4作為負(fù)性共刺激分子，同樣通過抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答參與腫瘤的免疫逃逸。在卵巢漿液性腺癌中，B7-H4的高表達(dá)可以與T細(xì)胞表面的未知受體相互作用，抑制T細(xì)胞的活化、增殖以及細(xì)胞因子（如IFN-γ、IL-2等）的分泌，使T細(xì)胞無法發(fā)揮正常的免疫功能。B7-H4還可以促進調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的功能，增加免疫抑制因子（如IL-10）的分泌，營造免疫抑制性的腫瘤微環(huán)境，有利于腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。從治療方面來看，B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中的高表達(dá)為腫瘤的治療提供了潛在的靶點。目前，針對B7-H3和B7-H4的靶向治療研究正在不斷開展。在一些腫瘤的研究中，通過單克隆抗體阻斷B7-H3和B7-H4的功能，能夠增強機體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，抑制腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。在動物實驗中，使用抗B7-H3單克隆抗體處理攜帶卵巢漿液性腺癌的小鼠，發(fā)現(xiàn)腫瘤的生長明顯受到抑制，小鼠的生存期延長。這表明通過靶向B7-H3和B7-H4，有可能打破腫瘤的免疫逃逸機制，恢復(fù)機體的抗腫瘤免疫功能，為卵巢漿液性腺癌的治療提供新的策略。除了單克隆抗體，ADC藥物也是研究的熱點之一。翰森制藥自主研發(fā)的ADC新藥HS-20093，由全人源化的B7-H3單抗與拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑有效載荷共價連接而成，在治療肺癌、肉瘤、頭頸癌及其他實體瘤的研究中顯示出一定的療效。這為卵巢漿液性腺癌的治療提供了新的思路，未來有望開發(fā)出針對B7-H3和B7-H4的ADC藥物，用于卵巢漿液性腺癌的治療。5.2B7-H3和B7-H4與卵巢漿液性腺癌臨床病理參數(shù)相關(guān)性的分析本研究發(fā)現(xiàn)，B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中的表達(dá)與分化程度、FIGO分期呈正相關(guān)。這一結(jié)果具有重要的臨床意義，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展機制密切相關(guān)。從腫瘤的分化程度來看，分化程度低的腫瘤細(xì)胞具有更高的增殖活性和更強的侵襲轉(zhuǎn)移能力。B7-H3和B7-H4在低分化卵巢漿液性腺癌中的高表達(dá)，可能是腫瘤細(xì)胞為了適應(yīng)其快速增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的需求而產(chǎn)生的一種自我保護機制。低分化的腫瘤細(xì)胞需要逃避機體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊，B7-H3和B7-H4通過抑制T細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能，為腫瘤細(xì)胞營造了一個相對安全的免疫逃逸環(huán)境，從而促進腫瘤的生長和發(fā)展。有研究表明，B7-H3可以激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)的PI3K/AKT和MAPK信號通路，促進腫瘤細(xì)胞的存活和增殖。在低分化的卵巢漿液性腺癌中，B7-H3的高表達(dá)可能進一步增強了這些信號通路的活性，使得腫瘤細(xì)胞能夠更快地增殖和擴散。對于FIGO分期，隨著分期的進展，腫瘤的侵襲范圍逐漸擴大，轉(zhuǎn)移風(fēng)險增加。B7-H3和B7-H4在Ⅲ-Ⅳ期卵巢漿液性腺癌中的高表達(dá)，提示它們可能參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移過程。在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細(xì)胞需要突破機體的免疫防線，B7-H3和B7-H4通過抑制免疫細(xì)胞的功能，降低了機體對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷能力，使得腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，B7-H4可以上調(diào)腫瘤細(xì)胞中MMP-2和MMP-9等基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，促進腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在Ⅲ-Ⅳ期卵巢漿液性腺癌中，B7-H4的高表達(dá)可能通過上調(diào)這些基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，增強了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。B7-H3和B7-H4與卵巢漿液性腺癌分化程度和FIGO分期的正相關(guān)關(guān)系，對臨床病情評估和預(yù)后判斷具有重要的指導(dǎo)作用。在臨床實踐中，醫(yī)生可以通過檢測患者腫瘤組織中B7-H3和B7-H4的表達(dá)水平，更準(zhǔn)確地評估腫瘤的惡性程度和病情進展情況。對于B7-H3和B7-H4高表達(dá)的患者，提示腫瘤的分化程度可能較低，分期較晚，預(yù)后相對較差。醫(yī)生可以根據(jù)這些信息，制定更合理的治療方案，加強對患者的監(jiān)測和隨訪。在卵巢漿液性腺癌患者中，若檢測到B7-H3和B7-H4高表達(dá)，且患者處于Ⅲ-Ⅳ期，醫(yī)生可能會考慮更積極的治療策略，如增加化療藥物的劑量或聯(lián)合使用靶向治療藥物。對于低分化且B7-H3和B7-H4高表達(dá)的患者，可能需要更密切地監(jiān)測病情變化，及時調(diào)整治療方案，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。在一項臨床研究中，對100例卵巢漿液性腺癌患者進行隨訪，發(fā)現(xiàn)B7-H3和B7-H4高表達(dá)組患者的5年生存率明顯低于低表達(dá)組，且復(fù)發(fā)率更高。這進一步證實了B7-H3和B7-H4表達(dá)水平與卵巢漿液性腺癌預(yù)后的相關(guān)性，為臨床醫(yī)生判斷患者預(yù)后提供了有力的依據(jù)。5.3B7-H3和B7-H4在卵巢黏液性腺癌中表達(dá)及與臨床病理參數(shù)關(guān)系分析在卵巢黏液性腺癌中，B7-H3和B7-H4的表達(dá)與各臨床病理參數(shù)無明顯相關(guān)性。這可能與卵巢黏液性腺癌自身獨特的生物學(xué)特性和發(fā)病機制密切相關(guān)。卵巢黏液性腺癌多為單側(cè)發(fā)生，多數(shù)為低級別腫瘤且期別較早，其腫瘤微環(huán)境與卵巢漿液性腺癌存在顯著差異。從組織學(xué)來源來看，卵巢黏液性腺癌主要來源于卵巢表面上皮向?qū)m頸內(nèi)膜上皮分化，這種獨特的分化途徑可能影響了B7-H3和B7-H4的表達(dá)調(diào)控機制。與卵巢漿液性腺癌相比，卵巢黏液性腺癌的腫瘤細(xì)胞可能通過其他不同的分子機制來調(diào)節(jié)自身的生長、增殖和免疫逃逸，使得B7-H3和B7-H4在其中的作用相對不突出。卵巢黏液性腺癌的腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的組成和功能狀態(tài)可能與漿液性腺癌不同。研究表明，腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞如T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等在腫瘤的免疫監(jiān)視和免疫逃逸中發(fā)揮著重要作用。在卵巢黏液性腺癌的腫瘤微環(huán)境中，這些免疫細(xì)胞的浸潤程度、活化狀態(tài)以及分泌的細(xì)胞因子等可能與漿液性腺癌存在差異，從而影響了B7-H3和B7-H4與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。卵巢黏液性腺癌中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可能分泌更多的免疫抑制因子，營造了一個免疫抑制性更強的微環(huán)境，使得B7-H3和B7-H4的表達(dá)對腫瘤進展的影響被其他因素所掩蓋。與卵巢漿液性腺癌中B7-H3和B7-H4表達(dá)與分化程度、FIGO分期呈正相關(guān)相比，卵巢黏液性腺癌的這種無相關(guān)性進一步凸顯了兩種卵巢癌在生物學(xué)行為上的差異。卵巢漿液性腺癌中B7-H3和B7-H4的高表達(dá)與腫瘤的惡性程度和疾病進展密切相關(guān)，而在卵巢黏液性腺癌中，腫瘤的發(fā)展可能更多地依賴于其他分子標(biāo)志物或信號通路。這提示在臨床診斷和治療中，對于卵巢黏液性腺癌和漿液性腺癌，需要分別關(guān)注不同的生物學(xué)指標(biāo)，制定更加精準(zhǔn)的診斷和治療策略。未來的研究可以進一步深入探討卵巢黏液性腺癌中影響腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵分子機制，尋找其他可能與卵巢黏液性腺癌臨床病理參數(shù)密切相關(guān)的分子標(biāo)志物。可以采用基因芯片、蛋白質(zhì)組學(xué)等高通量技術(shù)，全面分析卵巢黏液性腺癌組織中的基因表達(dá)譜和蛋白質(zhì)表達(dá)譜，篩選出潛在的關(guān)鍵分子。也可以深入研究卵巢黏液性腺癌腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的相互作用，探索如何通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境來提高卵巢黏液性腺癌的治療效果。對B7-H3和B7-H4在卵巢黏液性腺癌中的作用機制進行更深入的研究，或許可以發(fā)現(xiàn)其在特定條件下對腫瘤的影響，為卵巢黏液性腺癌的治療提供新的思路。六、研究結(jié)論與展望6.1研究結(jié)論總結(jié)本研究通過對卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌組織中B7-H3和B7-H4的表達(dá)進行檢測，并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，得出以下重要結(jié)論：B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中均有表達(dá)，但在卵巢漿液性腺癌中的陽性表達(dá)率顯著高于卵巢黏液性腺癌。這表明B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能扮演著更為關(guān)鍵的角色，其表達(dá)水平的差異可能與兩種卵巢癌不同的生物學(xué)特性相關(guān)。在卵巢漿液性腺癌中，B7-H3和B7-H4的表達(dá)與腫瘤的分化程度和FIGO分期密切相關(guān)。隨著腫瘤分化程度