循環(huán)腫瘤細(xì)胞臨床應(yīng)用與實驗室檢測專家共識

最新：循環(huán)腫瘤細(xì)胞臨床應(yīng)用與實險室檢測專家共識

摘要

循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測具有非侵入性采樣、可動態(tài)反映腫瘤基因譜全貌、提供

腫瘤患者疾病狀態(tài)相關(guān)的實時信息等優(yōu)勢，在腫瘤臨床診療中的應(yīng)用價值

受到越來越多關(guān)注。在精準(zhǔn)醫(yī)療的時代背景下，為規(guī)范循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測

的合理應(yīng)用，中華醫(yī)學(xué)會檢驗醫(yī)學(xué)分會分子診斷學(xué)組邀請多學(xué)科專家針對

循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測的臨床應(yīng)用、檢測技術(shù)及質(zhì)量管理中的關(guān)鍵問題進(jìn)行討

論并推出相關(guān)共識。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulatingtumorcells,CTC)是指從腫瘤病灶(原發(fā)灶

或轉(zhuǎn)移灶)脫落并進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞[1],在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中

發(fā)揮重要的作用。CTC檢測是推動腫瘤精準(zhǔn)診療的液體活檢新技術(shù)，與侵

入式組織活檢相比，CTC檢測具有樣本易獲取、可提供動態(tài)監(jiān)測信息的優(yōu)

點；與另一液體活檢標(biāo)志物循環(huán)腫瘤核酸(circulatingtumorDNA,

ctDNA)相比，CTC為完整腫瘤細(xì)胞，攜帶有腫瘤細(xì)胞的多組學(xué)信息(基

因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白組、代謝組等)，且利用活細(xì)胞CTC可實現(xiàn)體外腫瘤

細(xì)胞形態(tài)和功能的分析[計數(shù)、分子分型及下游分析在腫瘤療效

2]0cTC

評價、預(yù)后評估與輔助治療決策中有廣闊的應(yīng)用前景。

CTC檢測技術(shù)發(fā)展迅速，其在腫瘤臨床診療中的應(yīng)用價值也越來越受關(guān)注,

但目前尚無統(tǒng)一的CTC檢測技術(shù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和應(yīng)用指南，業(yè)界對該技術(shù)的臨

床適用場景、檢測流程及質(zhì)量管理等方面仍有困惑。為規(guī)范CTC檢測在臨

床診療中的合理應(yīng)用，中華醫(yī)學(xué)會檢驗醫(yī)學(xué)分會分子診斷學(xué)組針對上述問

題廣泛征集檢驗、病理、臨床和基礎(chǔ)研究專家的意見并形成共識。專家組

后續(xù)將根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域的研究進(jìn)展適時修訂此共識，以適應(yīng)臨床應(yīng)用的最新

需求。本共識主要分為CTC的臨床應(yīng)用及前景、CTC實驗室檢測技術(shù)與

質(zhì)量管理兩大部分。

CTC的臨床應(yīng)用及前景

1869年病理學(xué)家JohnAshworth首次在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中發(fā)現(xiàn)與原

發(fā)腫瘤相似的腫瘤細(xì)胞，并提出循環(huán)腫瘤細(xì)胞的概念。隨著生物醫(yī)學(xué)技術(shù)

的發(fā)展,CTC檢測的內(nèi)涵不斷豐富，針對CTC數(shù)量、分子分型、下游應(yīng)

用及單細(xì)胞特征的分析，在腫瘤精準(zhǔn)診療中的應(yīng)用受到越來越多關(guān)注。

一、CTC計數(shù)的臨床應(yīng)用

大量臨床研究表明CTC計數(shù)在多種腫瘤的療效評價和預(yù)后評估中有重要

價值。例如，與基線CTC<5個〃.5ml全血的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者相比，

CTC>5個〃.5ml全血的患者在內(nèi)分泌治療和化療后中位無進(jìn)展生存期

［progression-freesurvival(PFS):7.0個月比2.7個月］和總生存期

［overallsurvival(OS):18.0個月比10.1個月］較短［3｝一項針對

6825例乳腺癌患者的薈萃分析表明，CTC計數(shù)對早期乳腺癌［PFS:

HR=2.86（95%CI2.19-3.75）;OS:HR=2.78（95%CI2.22-3.48）］

和轉(zhuǎn)移性乳腺癌（PFS:HR=1.78,95%CI1.52~2.09;OS:HR=233,

95%CI2.09-2.60）均有良好的預(yù)后價值［41聯(lián)合基線/治療后CTC數(shù)

量和其他臨床病理指標(biāo)可提高乳腺癌預(yù)后預(yù)測的準(zhǔn)確性［5］0cTC計數(shù)對

前列腺癌［61結(jié)直腸癌［7］肝癌［8］等腫瘤的療效評價和預(yù)后價值

也在多中心臨床研究中得到證實。此外，CTC數(shù)量的動態(tài)變化在提示疾病

進(jìn)展和治療效果方面有重要價值。研究表明，肝移植術(shù)前CTC陰性、術(shù)后

CTC升高的肝癌患者與術(shù)前CTC陽性、術(shù)后CTC陰性的患者相比復(fù)發(fā)風(fēng)

險較高（49.2%比22.1%）［9L在轉(zhuǎn)移性前列腺癌的前瞻性、隨機(jī)、多

中心臨床m期研究（n=6081）中發(fā)現(xiàn)，基線CTC>1個/7.5ml全血、治

療13周后CTC<1個/7.5ml全血與前列腺特異性抗原prostatespecific

antigen,PSA）反應(yīng)率（PSA下降30%、50%和70%）比較，具有更準(zhǔn)

確的療效評價能力［10］；而〃CTC進(jìn)展"（基線CTC<5個〃.5ml全血、

治療后CTC>5個〃.5ml全血）患者較未發(fā)生CTC進(jìn)展的患者中位OS

明顯縮短（15.1個月比27.1個月，HR=3.4,P<0.001）［11L

美國食品藥品監(jiān)督管理局已批準(zhǔn)CTC計數(shù)用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、前列腺癌和

結(jié)直腸癌的預(yù)后評估（CellSearch法?）,其提示不良預(yù)后的CTC預(yù)測值

分別為5、5、3個/7.5ml全血。多項腫瘤診療指南和專家共識也納入了

CTC在腫瘤療效評價和預(yù)后評估中的應(yīng)用，包括中國臨床腫瘤學(xué)會（CSCO）

乳腺癌診療指南（2019年版）［12］原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2019年版）

［131肝細(xì)胞癌生物標(biāo)志物檢測及應(yīng)用專家共識［141循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢

測在結(jié)直腸癌中的應(yīng)用專家共識（2018）［151液體活檢在臨床腫瘤診

療應(yīng)用和醫(yī)學(xué)檢驗實踐中的專家共識［16］等。值得注意的是,由于CTC

檢測方法眾多，實際應(yīng)用時應(yīng)結(jié)合具體腫瘤類型和所選檢測方法確定合適

的療效評價和預(yù)后評估閾值。

此外美國癌癥聯(lián)合委員會在AJCC腫瘤分期手冊（201077版和2018-v8

版）中新增了以CTC為依據(jù)的cMO（i+）分期，提示CTC在腫瘤轉(zhuǎn)移和

分期中的重要作用。cMO（i+）分期定義為咯床未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移癥狀和影像學(xué)

轉(zhuǎn)移證據(jù)的M0期（cMO）患者在外周血中檢出CTC、或在骨髓、淋巴結(jié)

中檢出腫瘤細(xì)胞［17,181研究表明CTC數(shù)量與乳腺癌、前列腺癌、肺

癌等腫瘤的臨床病理特征顯著相關(guān)（如腫瘤大小、分期、轉(zhuǎn)移等），基線

CTC數(shù)量升高提示較差的腫瘤臨床病理特征［19,20,21LCTC數(shù)量檢測

可輔助肺部良惡性結(jié)節(jié)的鑒別診斷，且可作為術(shù)前評估肺腺癌侵襲性的獨

立因素,從而指導(dǎo)手術(shù)方式的選擇［221同時,聯(lián)合CTC計數(shù)和影像學(xué)

特征、病理學(xué)評分或血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物有助于提高腫瘤轉(zhuǎn)移診斷的準(zhǔn)確性

［23,24,25L但相比于轉(zhuǎn)移性腫瘤患者，早期腫瘤患者中CTC的檢出

率較低［26］,因此CTC計數(shù)直接用于腫瘤早期診斷的敏感度較低［27L

共識1:CTC計數(shù)可用于乳腺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌等實體腫瘤

的療效評價和預(yù)后評估，應(yīng)結(jié)合具體腫瘤類型和CTC檢測方法選擇合適的

判斷閾值；追蹤手術(shù)前后或綜合治療過程中CTC的動態(tài)變化可為腫瘤療效

評價和預(yù)后評估提供實時監(jiān)測信息。

共識2:CTC計數(shù)可提示腫瘤轉(zhuǎn)移風(fēng)險和輔助腫瘤分期，聯(lián)合CTC計數(shù)和

影像學(xué)、病理學(xué)、血清學(xué)特征參數(shù)有助于更準(zhǔn)確地評估腫瘤狀態(tài)和疾病進(jìn)

展；不建議單獨以CTC計數(shù)作為腫瘤早期篩查和診斷的工具。

二、CTC分子分型的臨床應(yīng)用

隨著對CTC認(rèn)識的深入和臨床應(yīng)用需求的發(fā)展，CTC檢測逐步從單純細(xì)

胞計數(shù)發(fā)展為細(xì)胞計數(shù)結(jié)合分子分型的綜合分析。CTC是異質(zhì)性的細(xì)胞群

體，針對CTC的蛋白、DNA、RNA分子水平的分型分析可以表征腫瘤進(jìn)

化和治療過程中的生物學(xué)特征，從而為全面評估腫瘤狀態(tài)、精準(zhǔn)制定治療

方案提供重要的實時信息。CTC分子分型主要包括療效預(yù)測標(biāo)志物分型、

上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化分型、功能特性分型等。

1.療效預(yù)測標(biāo)志物分型：前瞻性、多中心臨床研究表明CTC-雄激素受體變

異體7(androgenreceptorvariant7,ARV7)陽性與轉(zhuǎn)移性去勢抵抗

前歹U腺癌(metastaticcastrationresistantprostatecancer,mCRPC)

新型內(nèi)分泌治療(阿比特龍/恩雜魯胺)耐藥有關(guān)，基線CTC-ARV7陽性

與mCRPC新型內(nèi)分泌治療后更短的PFS及OS獨立相關(guān)[28];

CTC-ARV7陽性患者更易從紫杉烷化療中獲益,而CTC-ARV7陰性患者

接受新型內(nèi)分泌治療的生存期優(yōu)于接受紫衫烷化療(中位OS:19.8個月

比12.8個月)[29因此，美國國家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(national

comprehensivecancernetwork,NCCN)前列腺癌指南(2019-v2版)

推薦CTC-ARV7檢測用于輔助mCRPC新型內(nèi)分泌治療方案的選揖30L

人表皮因子生長受體2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2,

HER2)是乳腺癌靶向藥的療效預(yù)測標(biāo)志物。CTC與腫瘤組織HER2表達(dá)

存在異質(zhì)性，研究表明，組織HER2表達(dá)陰性、但HER2+CTC數(shù)量升高

的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者仍能從HER2靶向治療中獲益；治療后HER2+CTC

數(shù)量下降(<2個/7.5ml全血)患者的PFS較HER2+CTC持續(xù)22個/7.5

ml全血患者顯著延長(11.7周比2.0周)[31]此外，CTC與原發(fā)腫瘤

的雌激素受體(estrogenreceptor,ER)和孕激素受體(progesterone

receptor,PR)表達(dá)也不完全一致，CTC中ER或PR表達(dá)降低可能導(dǎo)致

乳腺癌患者內(nèi)分泌治療效果不佳。因此，CTC的HER2、ER、PR分型可

為晚期乳腺癌疾病進(jìn)展時的治療決策優(yōu)化提供實時參考信息。其他常見

CTC療效預(yù)測標(biāo)志物分型包括EGFR、KRAS、BRAF、PIK3cA基因突變、

ALK、ROS1基因重排等[32],根據(jù)其在CTC中的表達(dá)可輔助預(yù)判相應(yīng)

靶向藥的療效，從而提供用藥指導(dǎo)。

PD-1/PD-L1免疫檢查點抑制劑近年來發(fā)展迅速腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)可

預(yù)測其療效。腫瘤組織PD-L1檢測陽性率低、受時間和空間異質(zhì)性影響較

大,CTC的PD-L1分型檢測有望成為實時監(jiān)測免疫治療反應(yīng)的替代方案。

研究表明，晚期非小細(xì)胞肺癌患者CTC的PD-L1陽性檢出率顯著高于腫

瘤組織(83%比41%)[33]與陰性患者相比，檢出PD-L1陽性CTC的

肺癌患者術(shù)后無瘤生存期(disease-freesurvival,DFS)較短(24.5個

月比16.7個月）［34L基線時高表達(dá)PD-L1的CTC水平可作為篩選患者

進(jìn)行PD-1/PD-L1阻斷療法的預(yù)測因子，高表達(dá)PD-L1CTC組患者的疾

病控制率遠(yuǎn)高于低表達(dá)PD-L1CTC組（64%比14%）,且檢測PD-L1陽

性CTC的動態(tài)變化可以指示早期治療效果［35LCTC中PD-L1分型與

腫瘤組織PD-L1表達(dá)差異的分子機(jī)制及其在肝癌等其他腫瘤類型中的應(yīng)

用價值仍有待進(jìn)一步研究。

2.上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)化分型：上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal

transition,EMT）是腫瘤細(xì)胞獲得侵襲和轉(zhuǎn)移能力的關(guān)鍵生物學(xué)過程，

EMT在CTC的產(chǎn)生、釋放和轉(zhuǎn)移灶的形成中發(fā)揮重要作用。CTC上皮標(biāo)

志物表達(dá)在EMT過程中會發(fā)生下調(diào)、甚至消失，根據(jù)EMT標(biāo)志物的表達(dá)

可將CTC分為上皮型［表達(dá)E鈣黏著蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子（epithelial

celladhesionmolecule,EpCAM\細(xì)胞角蛋白（cytokeratin,CK）

等1間質(zhì)型CTC（表達(dá)N鈣黏著蛋白、波形蛋白、snail蛋白等1混合

型CTC（同時表達(dá)上皮和間質(zhì)標(biāo)志物\一項大樣本中國結(jié)直腸癌臨床研

究納入1203例不同分期的結(jié)直腸癌患者發(fā)現(xiàn)混合型CTC和間質(zhì)型CTC

數(shù)量隨腫瘤進(jìn)展顯著增加（間質(zhì)型CTC在非轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移

患者中的檢出率分別為45.8%、67.1%和72.3%）［36］,表明CTC-EMT

分型可提示結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移和輔助臨床分期。有研究證實肝癌CTC從原發(fā)病

灶脫落進(jìn)入外周靜脈時發(fā)生EMT過程,且CTC分子表型的時空異質(zhì)性與

肝癌患者術(shù)后肝內(nèi)復(fù)發(fā)及肺轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［37L與術(shù)前CTC數(shù)量低、間

質(zhì)型/混合型CTC陰性的肝癌患者相比，術(shù)前CTC數(shù)量高、間質(zhì)型/混合

型CTC陽性的患者肝切除術(shù)后DFS較短（36個月比16個月），且肝外轉(zhuǎn)

移較多（28.2%比60.5%）［38,39］;提示CTC的EMT分型有助于術(shù)前

治療效果評估和輔助手術(shù)方式?jīng)Q策。間質(zhì)型CTC對乳腺癌［401前列腺

癌［41］、肺癌［42］等腫瘤療效評價和預(yù)后的應(yīng)用價值均有臨床研究報

道。

3.功能特性分型：腫瘤細(xì)胞具有無限增殖和能量代謝異常等生物學(xué)特點，

依據(jù)腫瘤細(xì)胞區(qū)別于正常細(xì)胞的功能特，性進(jìn)行CTC分型有助于鑒定CTC

的生物學(xué)活性和轉(zhuǎn)歸，從而為腫瘤的病情評估和病程監(jiān)測提供更豐富的信

息。腫瘤干細(xì)胞與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)，通過膽瘤干性標(biāo)志物可篩選惡性程

度高的CTC亞型。最近有研究表明高表達(dá)腫瘤干性標(biāo)志物八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄

因子（octamer-bindingtranscriptionfactor4,OCT4）的CTC亞型在

肌層浸潤型膀胱癌中的陽性率顯著高于非肌層浸潤型膀胱癌（65.2%比

32.1%）［43L約75%肺癌患者可檢出OCT4B日性CTC,高表達(dá)OCT4

的CTC亞型更易出現(xiàn)在晚期和轉(zhuǎn)移性肺癌患者［44L其他腫瘤干性標(biāo)志

物如CD133、CD44陽性的CTC亞型也被發(fā)現(xiàn)與乳腺癌、肝癌等腫瘤的

轉(zhuǎn)移風(fēng)險、化療耐藥和不良預(yù)后密切相關(guān)［45,461

代謝重編程在促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用，腫瘤細(xì)胞的代謝特征可為

CTC功能分型提供新思路?；谔谴x標(biāo)志物（磷酸甘油酸激酶1/葡萄糖

-6-磷酸脫氫酶）的CTC分型在提示前列腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面具有重要價值,

聯(lián)合高代謝型CTC和tPSA、Gleason評分可有效輔助診斷前歹I」腺癌轉(zhuǎn)移

（受試者工作特征曲線下面積為0.904）［25LCTC糖代謝分型可提高乳

腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移診斷的特異性（高代謝型CTC91.3%,CTC總數(shù)71.8%）,

且高代謝CTC升高提示患者PFS縮短，表明CTC糖代謝分型可作為乳腺

癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的生物標(biāo)志物［471也有學(xué)者研究了CTC脂代謝標(biāo)志物半

乳糖甘酶（galactosecerebroside,GALC）分型與肺癌進(jìn)展與預(yù)后的相

關(guān)性，發(fā)現(xiàn)80.6%的非小細(xì)胞肺癌患者可檢出GALC陽性CTC,且術(shù)后發(fā)

生轉(zhuǎn)移患者檢測陽性率明顯高于未轉(zhuǎn)移患者（100%比68%）［48L目前

CTC功能特性分型研究仍處于探索階段，從研究到應(yīng)用的轉(zhuǎn)化還需要更充

分的臨床研究證據(jù)支持。

共識3:CTC分子分型可為全面評估腫瘤狀態(tài)和腫瘤精準(zhǔn)診療提供重要的

實時信息；基于治療靶標(biāo)的CTC分型分析有助于提示藥物療效從而指導(dǎo)治

療決策,如ARV7（前列腺癌內(nèi)分泌治療\HER-2/EGFR/KRAS（靶向用

藥\PD-L1（免疫治療）等。

共識4:CTUEMT分型的臨床應(yīng)用價值在多種腫瘤類型研究中得到證實，

結(jié)合CTC計數(shù)和EMT分型及其動態(tài)變化可輔助腫瘤分期、復(fù)發(fā)風(fēng)險評估

及預(yù)后預(yù)測；針對腫瘤細(xì)胞干性和代謝特征的CTC功能分型有助于反映

CTC的生物學(xué)轉(zhuǎn)歸和疾病的發(fā)展,是未來泛癌種CTC分子分型發(fā)展的前

沿方向。

三、CTC存在形式分析的臨床應(yīng)用

CTC可能以單個細(xì)胞、CTC簇、CTC與其他血液成分聚集成團(tuán)等形式存在

于血液循環(huán)中。由于富集過程中細(xì)胞團(tuán)被破壞或CTC抗原表位被隱藏,大

多數(shù)CTC富集設(shè)備可能難以檢出CTC細(xì)胞團(tuán)。研究表明,盡管這些以細(xì)

胞團(tuán)形式存在的CTC亞型相對少見，但其轉(zhuǎn)移潛能遠(yuǎn)大于單個CTC

（20~50倍）［49,501CTC與白細(xì)胞、血小板、巨噬細(xì)胞等聚集成團(tuán)對

調(diào)節(jié)血液微環(huán)境、建立新的轉(zhuǎn)移灶有重要意義，例如中性粒細(xì)胞可通過細(xì)

胞間黏附分子-1與CTC結(jié)合增強(qiáng)CTC對自然殺傷細(xì)胞的免疫殺傷抵抗，

從而促進(jìn)CTC的免疫逃逸［51］;血小板與CTC結(jié)合有助于CTC抵抗物

理剪切和免疫殺傷，并且血小板可釋放可溶性介質(zhì)誘導(dǎo)CTC對內(nèi)皮細(xì)胞的

黏附和向組織內(nèi)遷移，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移［52L

物理學(xué)分離方法由于不依賴特定標(biāo)志物，比生物學(xué)分選方法更易檢出CTC

細(xì)胞團(tuán)［53L有研究通過基于物理特征分離的富集技術(shù)（膜過濾方法）

在乳腺癌患者有效檢出CTC-白細(xì)胞團(tuán)（CTC-WBC\與CTC數(shù)量25個

/7.5ml全血患者相比，檢出CTC-WBC患者的PFS較短［50］;且

CTC-WBC的EMT表型可提示乳腺癌骨轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險及不良

預(yù)后［54L此外，CTC-WBC數(shù)量與肝癌的腫瘤大小和數(shù)量、脈管癌栓、

BCLC分期、AFP水平和CTC總數(shù)相關(guān)，并可獨立預(yù)測肝癌患者DFS和

OS［55；CTC細(xì)胞團(tuán)的形成影響了局部的腫瘤轉(zhuǎn)移微環(huán)境，其對腫瘤轉(zhuǎn)

移和疾病進(jìn)展的提示意義優(yōu)于單個CTC,但由于其數(shù)量比CTC更少,CTC

細(xì)胞團(tuán)在更多腫瘤中的應(yīng)用價值仍有待進(jìn)一步研究。

共識5:CTC有多種存在形式，包括單個細(xì)胞、CTC簇或CTC與其他血液

成分（白細(xì)胞、血小板、巨噬細(xì)胞等）聚集成團(tuán)，CTC細(xì)胞團(tuán)檢出率的提

高有賴于檢測方法的進(jìn)一步優(yōu)化；分析CTC的存在形式有助于揭示CTC

與循環(huán)中血細(xì)胞、免疫細(xì)胞的相互作用，闡明CTC免疫逃逸和轉(zhuǎn)移播散的

機(jī)制，是CTC檢測領(lǐng)域重要的探索方向。

四、CTC下游分析的臨床應(yīng)用

CTC攜帶腫瘤細(xì)胞的豐富分子信息，CTC下游分析（CTC體外培養(yǎng)、單細(xì)

胞測序等）具有廣闊的應(yīng)用前景。近年來已有文獻(xiàn)報道成功建立乳腺癌、

結(jié)直腸癌、肺癌的CTC細(xì)胞系［56,57,581CTC體外培養(yǎng)可擴(kuò)增血液

中稀有腫瘤細(xì)胞的數(shù)量，通過PCR等技術(shù)分析CTC細(xì)胞系中腫瘤驅(qū)動基

因和藥物靶點基因的表達(dá)，可為腫瘤發(fā)生機(jī)制研究和臨床用藥提供指導(dǎo)信

息。此外，利用CTC細(xì)胞系構(gòu)建人源腫瘤異和移植模型進(jìn)行轉(zhuǎn)移靶器官預(yù)

測和藥敏實驗［59］對揭示腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制和耐藥機(jī)制具有重要意義，有助

于推動腫瘤個體化治療的發(fā)展。

由CTC群體分析走向單細(xì)胞分析是腫瘤精準(zhǔn)珍療時代下CTC檢測的發(fā)展

趨勢。高通量測序研究表明，CTC攜帶的基因突變信息與非小細(xì)胞肺瘍患

者原發(fā)灶腫瘤細(xì)胞的基因信息一致性為79%,但與該患者10個月后出現(xiàn)

的轉(zhuǎn)移灶腫瘤細(xì)胞的基因突變信息一致性達(dá)91%,提示CTC的單細(xì)胞高

通量測序可提供更準(zhǔn)確的腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移信息［60［分析CTC的單細(xì)胞

突變圖譜和拷貝數(shù)變異模式對療效預(yù)測和預(yù)后評估有重要價值［61,62］,

如與CTC突變率高的小細(xì)胞肺癌患者相比，CTC突變率低的患者化療后

PFS及OS顯著延長［611此外，通過CTC單細(xì)胞測序有可能提前獲得

轉(zhuǎn)移灶的基因信息、發(fā)現(xiàn)新的耐藥機(jī)制和治療靶點［59,631目前，由

于CTC數(shù)量稀少、檢測過程中細(xì)胞活性容易受損等因素導(dǎo)致CTC單細(xì)胞

測序的技術(shù)要求較高，限制了CTC單細(xì)胞測序的擴(kuò)大應(yīng)用。隨著分析技術(shù)

的不斷進(jìn)步和更多臨床研究的探索，未來CTC單細(xì)胞分析的應(yīng)用前景將更

為廣闊。

共識6:CTC體外培養(yǎng)、單細(xì)胞測序等下游分析是CTC檢測領(lǐng)域的前沿方

向，也是精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)時代CTC臨床應(yīng)用的重要趨勢；未來CTC檢測技術(shù)的

進(jìn)步應(yīng)著重突破CTC單細(xì)胞測序的瓶頸問題,探索單細(xì)胞CTC高保真核

酸擴(kuò)增及文庫構(gòu)建等創(chuàng)新技術(shù)，以促進(jìn)CTC單細(xì)胞分析的發(fā)展和應(yīng)用。

CTC實驗室檢測技術(shù)與質(zhì)量管理

CTC具有數(shù)量稀少［血液中CTC與有核細(xì)胞數(shù)量比值為1：(105~107)］

［641半衰期短(1~2.4h1存在多種亞型等特點，為CTC實驗室檢測

帶來了挑戰(zhàn)。準(zhǔn)確可靠的CTC檢測結(jié)果需要系統(tǒng)性、標(biāo)準(zhǔn)化的質(zhì)量管理體

系來保障。本部分主要討論CTC檢測技術(shù)(分離與富集技術(shù)、鑒定與分析

技術(shù))的原理、特點及質(zhì)量管理。

一、CTC檢測技術(shù)

(-)CTC分離與富集

CTC檢測的一般策略包括CTC分離與富集、鑒定及下游分析。CTC分離

與富集是指將CTC與血細(xì)胞和其他血液成分有效分離的過程。文獻(xiàn)報道及

目前國內(nèi)檢測公司提供的技術(shù)平臺很多，根據(jù)其技術(shù)原理主要分為依賴特

定標(biāo)志物的生物分選法和不依賴特定標(biāo)志物的物理分離法兩大類［65,66L

生物學(xué)分選將特定標(biāo)志物抗體或核酸適配體等附著至微柱、微孔或磁性設(shè)

備，通過抗原抗體結(jié)合原理實現(xiàn)CTC分離與富集，可分為陽性富集和陰性

富集兩種。陽性富集法主要通過CTC捕獲抗體正向富集CTC,該方法富

集純度較高，但由于CTC具有異質(zhì)性，這類方法可能導(dǎo)致部分CTC的漏

檢，例如依賴EpCAM抗體磁珠的富集方法炬以捕獲EpCAM表達(dá)下調(diào)甚

至消失（發(fā)生EMT時）的CTC亞群［671目前尚無普適性的腫瘤細(xì)胞

標(biāo)志物，因此難以避免CTC漏檢現(xiàn)象。選擇腫瘤類型特異的標(biāo)志物抗儂如

前列腺癌PSA、乳腺癌HER2、肺癌MUC1等）［65］或采用多種抗體復(fù)

合物有助于提升富集效率［53L陰性富集法主要采用CD45和CD61去

除白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血小板實現(xiàn)負(fù)向篩選，可降低CTC抗原表達(dá)下調(diào)或

消失導(dǎo)致的檢測假陰性風(fēng)險［53L但該方法分離純度相對較低，對后續(xù)

CTC鑒定與分析技術(shù)靈敏度和特異度的要求較高。

物理學(xué)分離方法是指通過CTC區(qū)別于其他細(xì)胞的物理學(xué)特征如大小、空度、

力學(xué)及電學(xué)特征等進(jìn)行CTC分離和富集?；诩?xì)胞大小分離是指根據(jù)CTC

體積顯著大于白細(xì)胞的特點、采用固定孔徑的濾膜進(jìn)行分離。密度梯度離

心法根據(jù)CTC與白細(xì)胞密度及體積等沉降系數(shù)差異對CTC進(jìn)行分離。電

學(xué)特征分離法根據(jù)電荷、導(dǎo)電性等特征差異進(jìn)行CTC分離與富集。微芯片

法主要截留體積更大、不易變形的CTC,微流控法利用特定條件下不同細(xì)

胞大小、密度、變形性等流體力學(xué)差異進(jìn)行CTC富集。物理學(xué)分離的優(yōu)勢

是不依賴特定標(biāo)志物，有利于檢出抗原表達(dá)異質(zhì)型CTC和抗原未知的CTC

亞型，但也可能存在分離純度較低、容易漏檢部分體積較小的腫瘤細(xì)胞等

不足[65[

不同技術(shù)方法各有其特點和局限性[65,66](表1),實驗室應(yīng)結(jié)合應(yīng)用

目的和后續(xù)鑒定與分析的要求選擇合適的方法，例如小細(xì)胞肺癌CTC分析

時避免選用常規(guī)的基于細(xì)胞大小分離的方法、當(dāng)后續(xù)分析對細(xì)胞活性要求

較高時避免選用需要固定細(xì)胞的富集方法等。也有技術(shù)同時結(jié)合生物分選

和物理分離兩種原理，以期提高CTC分離富集的效率和純度，但同時可能

帶來處理時間延長、步驟繁多等問題，增大了其在臨床實驗室應(yīng)用的難度,

未來仍需發(fā)展更多簡便、高效的CTC分離富集創(chuàng)新技術(shù)。

共識7:不同CTC分離與富集技術(shù)各有優(yōu)缺點，實驗室應(yīng)結(jié)合應(yīng)用目的和

后續(xù)鑒定與分析的要求選擇合適的方法；實驗室應(yīng)在充分評估所選方法的

檢測效能的基礎(chǔ)上開展CTC分離與富集。

(-)CTC鑒定與分析

CTC鑒定是指通過分子生物學(xué)手段對富集的CTC進(jìn)行特異性識別和判讀,

CTC分析則是進(jìn)一步解析CTC的形態(tài)、功能、分子表達(dá)等特征。富集分

離后可利用蛋白質(zhì)、RNA、DNA表達(dá)差異以及腫瘤細(xì)胞功能差異對CTC

進(jìn)行鑒定與分析。

在蛋白層面主要利用適配體或抗體檢測腫瘤細(xì)胞中的特異蛋白，如采用適

配體技術(shù)和靶向PCR檢測腫瘤細(xì)胞表面葉酸受體的表達(dá)可間接反映CTC

的水平，具有高回收率和高敏感性的優(yōu)勢［21］,是國家藥品監(jiān)督管理局

批準(zhǔn)的首個肺癌CTC檢測方法。免疫熒光法通常采用上皮細(xì)胞特異性CK

抗體（CK8、CK18、CK19I白細(xì)胞抗原CD45抗體和核染料DAPI標(biāo)記

CTC,CK陽性、DAPI陽性、CD45陰性，且細(xì)胞較大、形態(tài)完整的細(xì)胞

被判別為CTCO但由于良性上皮細(xì)胞也可能呈CK陽性［68］,該方法可

能出現(xiàn)假陽性結(jié)果。此外，EMT可引起抗原表達(dá)水平降低，使用單一抗體

可能影響檢測靈敏度。應(yīng)根據(jù)癌癥類型優(yōu)化檢測蛋白標(biāo)志物的選擇，同時

采用陰陽性對照有利于提升免疫熒光法的檢測特異性和靈敏度。流式細(xì)胞

術(shù)則通過特異性抗體靶向腫瘤細(xì)胞進(jìn)行快速檢測，可同時實現(xiàn)多通道檢測,

但其靈敏度較低，且需要大量待分析細(xì)胞［69L

在RNA層面可利用熒光定量PCR、RNA-熒光原位雜交等技術(shù)分析CTC

的mRNA及微小RNA的表達(dá)。熒光定量PCR法是基于基因轉(zhuǎn)錄水平對

細(xì)胞進(jìn)行鑒定的方法，根據(jù)腫瘤類型選擇不同核酸組合方式對多個基因標(biāo)

志物進(jìn)行檢測，可顯著提高CTC的檢測靈敏度［70］在DNA層面上，

不同于免疫熒光法易受CTC抗原表達(dá)量異質(zhì)性的影響，基于染色體核型異

常鑒定CTC的熒光原位雜交法可檢出CK和EpCAM表達(dá)下調(diào)的CTC類

型［71］,但需注意腫瘤細(xì)胞染色體拷貝數(shù)分布具有異質(zhì)性，且良性血管

內(nèi)皮細(xì)胞也可能出現(xiàn)染色體核型異常，應(yīng)根據(jù)癌癥類型采用特定探針組合

以提高檢測準(zhǔn)確性。也可利用靶向PCR、DNA測序等分析CTC的基因突

變，如二代測序技術(shù)可檢出未知突變；單細(xì)胞測序技術(shù)在克服CTC異質(zhì)性

方面有明顯的優(yōu)勢，通過單細(xì)胞水平的CTC全基因組分析有助于揭示腫瘤

轉(zhuǎn)移及耐藥的分子機(jī)制［72］但CTC測序分析方法對設(shè)備及人員的要求

較高，目前仍有待技術(shù)進(jìn)一步完善以適應(yīng)臨床需求。

此外，一些基于腫瘤細(xì)胞功能學(xué)差異（分泌功能、代謝功能等）的新技術(shù)

能夠在不損傷CTC的情況下實現(xiàn)CTC的鑒定與分析。這類方法可避免由

細(xì)胞固定、染色、雜交等處理導(dǎo)致的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及成分的破壞，可滿足CTC

下游分析和應(yīng)用對細(xì)胞活性的要求，成為CTC檢測分析的新方向。上皮免

疫斑點法通過檢測活的腫瘤細(xì)胞特異分泌的抗體或細(xì)胞因子，可在單細(xì)胞

水平上檢測有活性的CTC［73L利用CTC線粒體活躍的特點設(shè)計聚集誘

導(dǎo)發(fā)光熒光探針可標(biāo)記代謝活躍的活性CTC,從而實現(xiàn)CTC的無損鑒定

［74L利用腫瘤細(xì)胞糖代謝特征（葡萄糖高攝取、關(guān)鍵代謝酶HK2活性

高）可實現(xiàn)高通量的CTC鑒定與單細(xì)胞分析［75,76L利用針對CTC膜

蛋白的抗體或適配體并結(jié)合可在溫和的生理條件下運行的核酸等溫擴(kuò)增

技術(shù)，可實現(xiàn)CTC的無損定量分析［77,78L但目前不同鑒定及分析方

法的結(jié)果表述方式不盡相同，檢測結(jié)果之間難以相互比較，實驗室在開展

檢測前應(yīng)進(jìn)行充分的性能評估。

共識8:CTC鑒定與分析技術(shù)的選擇應(yīng)綜合考慮上游分離富集技術(shù)的特點

和下游應(yīng)用的目的，根據(jù)腫瘤類型選擇合適的標(biāo)志物可提高CTC檢測的準(zhǔn)

確性，結(jié)合細(xì)胞功能特征分析可豐富CTC檢測的層次以適應(yīng)臨床診療的多

種需求；實驗室應(yīng)在充分評估所選方法分析性能的基礎(chǔ)上進(jìn)行CTC鑒定與

分析。

二、CTC實驗室檢測的質(zhì)量管理

良好的質(zhì)量控制(質(zhì)控)是保障檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的基礎(chǔ)。CTC檢測和分

析具有重要的臨床價值，如何完善CTC檢測質(zhì)控以確保CTC檢測結(jié)果準(zhǔn)

確性是重大挑戰(zhàn)。因此，亟需推進(jìn)檢測流程標(biāo)準(zhǔn)化、建立嚴(yán)格的質(zhì)量管理

體系,以規(guī)范CTC檢測的臨床應(yīng)用與結(jié)果解讀。

(-)分析系統(tǒng)性能驗證

實驗室對CTC檢測過程中所需試劑和耗材的選擇，應(yīng)首先考慮經(jīng)國家藥品

監(jiān)督管理局醫(yī)療器械注冊/備案的試劑與耗材，以確保符合臨床要求；同時

也應(yīng)兼顧其與檢測設(shè)備的兼容性，以確保符合檢測要求。所選的分析系統(tǒng)

使用前必須依照說明書完成相關(guān)的性能驗證，驗證參數(shù)(針對CTC分離與

富集、鑒定及分析的檢測全流程)包括但不限于回收率、檢測限、精密度

等，并制定標(biāo)準(zhǔn)實驗操作流程(standardoperationprocedure,SOP),

以減少不規(guī)范的實驗操作對結(jié)果的影響。目前國內(nèi)外尚無權(quán)威的CTC性能

驗證指南，本部分參考《CNAS-GL039分子診斷檢驗程序性能驗證指南》

［79］列舉部分性能參數(shù)進(jìn)行說B月。

1.回收率：通常可利用細(xì)胞摻入實驗測定CTC分析系統(tǒng)的回收率及檢測

限［80,81L根據(jù)擬開展檢測的腫瘤類型，選擇適宜的腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行熒

光預(yù)標(biāo)記，計數(shù)一定數(shù)量的細(xì)胞（根據(jù)具體月口瘤類型和分析系統(tǒng)的檢測范

圍確定）加入健康人靜脈血作為模擬血樣，重復(fù)檢測3~5次，計算檢測的

細(xì)胞數(shù)占摻入細(xì)胞數(shù)的百分比即為回收率。

2.檢測限：將擬開展檢測的腫瘤類型對應(yīng)的腫瘤細(xì)胞系預(yù)標(biāo)記熒光，制成

系列濃度梯度（結(jié)合說明書提供的檢測范圍設(shè)定）的細(xì)胞懸液分別加入健

康人靜脈血作為模擬血樣，通過檢測的腫瘤細(xì)胞數(shù)量評估分析系統(tǒng)的檢測

范圍和檢測限。

3.精密度：將開展檢測的對應(yīng)工具細(xì)胞預(yù)先奧色，根據(jù)方法的檢測范圍制

備已知數(shù)量（高、中、低濃度）的多份細(xì)胞懸液凍存。每次檢測時取一份

細(xì)胞懸液加入健康人靜脈血中，制成高、中、低濃度的模擬血樣，重復(fù)檢

測各濃度模擬血樣10~20次,或連續(xù)檢測各濃度模擬血樣10~20d,評

估檢測系統(tǒng)的批內(nèi)和批間精密度。

分析系統(tǒng)的性能參數(shù)應(yīng)達(dá)到廠家說明書提供的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)文獻(xiàn)報道和實驗

室調(diào)研,CTC分析性能驗證時常用的腫瘤細(xì)胞系如表2所示,實驗室應(yīng)根

據(jù)采用的檢測技術(shù)和擬開展應(yīng)用的腫瘤類型選擇理化性質(zhì)相似的細(xì)胞系

進(jìn)行性能驗證。必要時（如涉及實驗室自建方法或操作流程時）還應(yīng)根據(jù)

實驗室自建項目的相關(guān)要求進(jìn)行其他的性能參數(shù)確認(rèn)（如標(biāo)本穩(wěn)定性、試

劑穩(wěn)定性等）［82L根據(jù)CTC檢測方法的不同特點可選擇不同的性能驗

證或確認(rèn)的參數(shù)，實驗室可根據(jù)實際情況確定所需的最小樣本數(shù)。

此外，實驗室在引進(jìn)性能驗證合格的CTC分析系統(tǒng)后，還應(yīng)在實際開展

CTC檢測項目之前進(jìn)行臨床應(yīng)用前評估（如CTC檢測在不同人群中的陽

性率、CTC臨床參考范圍及截斷值等\由于各實驗室使用的檢測方法、

擬開展的腫瘤類型及應(yīng)用場景不盡相同，目前尚無法確定統(tǒng)一的CTC參考

范圍和截斷值，建議實驗室參考針對同方法、同癌種的大型臨床研究報道

的結(jié)果，并設(shè)計相關(guān)的臨床試驗確定本實驗室適用的CTC參考范圍和截斷

值。行業(yè)內(nèi)專業(yè)委員會可制訂相應(yīng)的臨床研究計劃，推動各實驗室開展大

規(guī)模、多中心臨床研究，以明確同一CTC檢測方法在同一腫瘤特定場景應(yīng)

用的參考范圍和最佳截斷值。

共識9:實驗室開展CTC檢測前應(yīng)對所選分析系統(tǒng)進(jìn)行性能驗證，屬于實

驗室自建方法的分析系統(tǒng)還應(yīng)根據(jù)相關(guān)要求進(jìn)行其他參數(shù)的性能確認(rèn)；應(yīng)

注意所選CTC分析系統(tǒng)的適用范圍，跨癌種應(yīng)用時應(yīng)考慮到不同起源、不

同病理類型腫瘤細(xì)胞的理化性質(zhì)不盡相同，須進(jìn)行充分的性能驗證和臨床

觀察研究。

（二）分析前質(zhì)量管理

良好的分析前質(zhì)量管理是保障檢測結(jié)果準(zhǔn)確的前提條件。CTC檢測分析前

質(zhì)量管理主要涉及樣本采集（患者準(zhǔn)備、采集要求等）、預(yù)處理、保存和

運輸（時間和溫度）等。分析前SOP應(yīng)涵蓋樣本采集、預(yù)處理、保存和

運輸過程的系列標(biāo)準(zhǔn)操作，并對質(zhì)控變量進(jìn)行充分的說明和解釋。

1.樣本采集：CTC樣本采集的質(zhì)控變量應(yīng)實現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化，其內(nèi)容應(yīng)包括但不

局限于：采血時間、是否禁食、采血時患者體位、采血管類型及抗凝物質(zhì)

要求、采血部位、采血量等［83L常見的采血管類型包括EDTA-K2抗凝

管、CellSave抗凝管、cfDNA/RNA保存BCT管、ACD采血管等，不同

采血管對CTC保存的時效和穩(wěn)定性不盡相同［84,85有研究表明

CellSave管用于CTC計數(shù)和染色分析時可使血液在室溫下保存72?96h

［86］;CTC-ARV7轉(zhuǎn)錄物（數(shù)字PCR分析）在EDTA-K2或ACD抗凝

血液中可穩(wěn)定48h,但BCT管中的mRNA在采血后顯著降低且48h后

無法測出［87L建議優(yōu)先選擇檢測方法配套或推薦的采血管，無明確指

定時可根據(jù)檢測目的、檢測時長和保存劑的特點進(jìn)行選擇，例如需要對

CTC進(jìn)行計數(shù)和形態(tài)分析時可選用常規(guī)EDTA-K2或CellSave管、需要進(jìn)

行CTC分子分析時可選用核酸保護(hù)效果較好的ACD管等［84,851

外周靜脈血是目前最常用的CTC檢測樣本類型，建議常規(guī)采集流程為：肘

部靜脈穿刺采集外周血5?20mI（采血量視檢測方法的要求而定I采血

后立即輕柔顛倒8~10次混勻，防止凝血。需注意的是循環(huán)系統(tǒng)中不同部

位CTC之間存在明顯的細(xì)胞分布和生物學(xué)特征的空間異質(zhì)性。研究發(fā)現(xiàn),

從肝癌患者外周靜脈、外周動脈、肝靜脈、肝下下腔靜脈和門靜脈采血檢

測的CTC數(shù)量、EMT表型和CTC細(xì)胞團(tuán)各有特點，且其在提示肝癌術(shù)后

肺轉(zhuǎn)移和肝內(nèi)復(fù)發(fā)方面的臨床價值也不盡相同［37L臨床醫(yī)生可根據(jù)患

者治療周期、治療方案、研究目的等實際情況選擇相應(yīng)的采血部位和采血

時間點，但建議治療或研究的全過程中樣本采集條件相對固定，以便于后

續(xù)結(jié)果的解釋。

2.樣本預(yù)處理、保存及運輸應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)化試劑盒對CTC樣本進(jìn)行預(yù)處理，

并對樣本預(yù)處理、保存和運輸過程中質(zhì)控變量的變異范圍進(jìn)行有效追蹤和

管理［85L應(yīng)嚴(yán)格按照相關(guān)操作規(guī)范執(zhí)行操作，有效保障標(biāo)本接收時的

質(zhì)量。一般建議血液采集完畢后立即送檢，不能立即送檢的標(biāo)本應(yīng)低溫保

存（2~8（）,4h內(nèi)轉(zhuǎn)移至檢測實驗室進(jìn)行檢測。到達(dá)實驗室后,應(yīng)檢

查樣本是否存在凝血、脂血等異常情況，對不合格樣本應(yīng)拒收，不能及時

檢測的樣本應(yīng)根據(jù)檢測目的和采血管特點嚴(yán)格控制樣本儲存條件（時間、

溫度I

（三）分析中的質(zhì)量管理

分析中的質(zhì)量管理是CTC實驗室檢測質(zhì)控的核心環(huán)節(jié)。建議在CTC分離

與富集、鑒定及分析的全過程均引入標(biāo)準(zhǔn)化檢測設(shè)備和配套軟件，并建立

完善的標(biāo)準(zhǔn)操作程序和檢測人員的資質(zhì)管理制度，健全實驗室質(zhì)控體系，

充分保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.人員培訓(xùn)與考核：實驗室應(yīng)配置相關(guān)專業(yè)背景的技術(shù)人員，經(jīng)理論和操

作實踐的培訓(xùn)與考核后方可開展CTC項目檢測。操作人員嚴(yán)格遵循檢驗設(shè)

備及試劑的質(zhì)量管理體系是檢測結(jié)果可靠準(zhǔn)確的有效保障。應(yīng)定期開展操

作人員的項目操作技能考核，包括但不限于自動化檢測設(shè)備的使用與維護(hù)、

試劑與耗材的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范、質(zhì)控相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作步驟的實施等，其中不同

操作人員間對CTC檢測圖像的判斷可能存在較大差異，應(yīng)定期根據(jù)典型和

非典型CTC檢測圖譜開展人員能力比對，以提高檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。另外，

利用整合人工智能圖像識別工具的全自動CTC分離及鑒定系統(tǒng)［88］有

助于減少人員間的操作誤差。

2.試劑/耗材質(zhì)檢和設(shè)備維護(hù)：CTC檢測步驟較多,應(yīng)制定標(biāo)準(zhǔn)化程序?qū)?/p>

檢測過程中涉及到的試劑和耗材進(jìn)行質(zhì)檢，包括包裝檢查（包裝是否完整、

標(biāo)識是否清楚、保存條件和有效期是否明確等）和可能影響檢測結(jié)果的關(guān)

鍵性能參數(shù)檢查（依檢測方法的原理和操作而定，例如熒光探針/抗體的有

效性和批間一致性、濾膜的孔徑大小和濾過效率、吸頭的氣密性/準(zhǔn)確性/

攜帶污染源等X此外，使用過程中應(yīng)定期監(jiān)測和記錄試劑/耗材的保存溫

度和有效期，并定期對所用的儀器設(shè)備做維護(hù)和保養(yǎng)以充分保障其性能穩(wěn)

定。

3.室內(nèi)與室間質(zhì)控：檢驗項目應(yīng)設(shè)立合理的室內(nèi)質(zhì)控以監(jiān)測樣本檢測的全

部流程，但目前尚無公認(rèn)適宜的CTC實驗室檢測全程質(zhì)控物?？紤]到不同

CTC檢測平臺應(yīng)用的儀器設(shè)備和試劑各異，應(yīng)根據(jù)不同檢測平臺的關(guān)鍵步

驟分別設(shè)立合理的質(zhì)控或定期對使用的設(shè)備及試劑耗材進(jìn)行性能評估。如

分離富集CTC的過程中，對于微流控芯片法，應(yīng)注意監(jiān)控泵的流速控制和

每批芯片的均一性；對于膜過濾法，應(yīng)充分考慮到負(fù)壓泵的穩(wěn)定性、濾過

膜孔徑的大小和均一性等。CTC鑒定的過程中，應(yīng)監(jiān)控不同標(biāo)記探針或抗

體及雜交試劑的質(zhì)量等。

雖然目前沒有商品化的CTC檢測全程質(zhì)控品，但對有些步驟建議技術(shù)廠家

也能提供適宜的參考品。例如預(yù)制備的腫瘤細(xì)胞與白細(xì)胞混合細(xì)胞用片,

可用于評估鑒定試劑性能及技術(shù)人員的圖像識別能力。同時，行業(yè)內(nèi)專業(yè)

委員會可制定CTC檢測參考物質(zhì)的研發(fā)計劃聯(lián)合相關(guān)企業(yè)積極推動CTC

質(zhì)控物的開發(fā)和商品化。例如，Tommasi團(tuán)隊的實驗室利用腫瘤細(xì)胞系

摻入健康人血樣中構(gòu)建不同濃度的參考品，在采用相同檢測系統(tǒng)的多個實

驗室開展長期、系統(tǒng)的性能驗證和評估后作為CTC室內(nèi)質(zhì)控品使用811

實驗室質(zhì)控品的構(gòu)建應(yīng)注意符合臨床樣本的模擬度(腫瘤細(xì)胞類型、大小

及分子特性等)，同時保證性能穩(wěn)定且數(shù)量充足，以滿足長時間檢測分析

的要求。質(zhì)控品的制備建議由固定的專業(yè)人員，在固定的實驗區(qū)域培養(yǎng)、

配制和分裝，以減少人為誤差，避免受