臨床生物化學(xué)課件模板-042(共95)

1、臨床生物化學(xué)課件模板- 42，臨床生物化學(xué) :二，采樣時間，二，采樣時間：TDM工作中的采樣時間對其測量結(jié)果的臨床價值有很大影響，是開展TDM工作必須考慮的基本問題。 根據(jù)TDM的目的和患者的具體情況，應(yīng)用本章第二節(jié)介紹的藥代動力學(xué)理論，應(yīng)根據(jù)以下原則確定采樣時間。 (1)為了計算個體的藥動學(xué)模型和參考，只能在兩點(diǎn)確定唯一的直線，這種情況下，血藥濃度測定的誤差、采樣時間是否合適對藥動學(xué)參數(shù)有明顯的影響。臨床生物化學(xué) :二、采樣時間、二、采樣時間：血管外用藥和多室模型馀數(shù)法求藥代動力學(xué)參數(shù)時，假設(shè)時間t足夠大，解相方程式的計算可以不考慮吸收相和分布相的影響。 因此，采樣時間的選定應(yīng)遵循以下兩個原

2、則：在與血藥濃度隨時間變化有關(guān)的指數(shù)方程式中，各指數(shù)項(xiàng)的采樣必須少于3點(diǎn)，即，各相的直線方程式的確定至少在3點(diǎn)以上，另外，在藥時曲線中，在轉(zhuǎn)折點(diǎn)附近至少為了更準(zhǔn)確地判明轉(zhuǎn)折點(diǎn)去除相采樣時間盡可能長，時間寬度至少超過了兩個半壽命。臨床生物化學(xué) :二、采樣時間、二、采樣時間：在實(shí)際工作中，可以根據(jù)上述原則，結(jié)合與藥物有關(guān)的集體藥代動力學(xué)模型和參數(shù)資料，具體決定采樣時間。 理想情況下，一次用藥就可以連續(xù)完成所有樣品。 如果條件不被認(rèn)可，則多藥給藥后的分次抽樣累積法，也就是多藥給藥時，可以參考小組資料，推定達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)后，分別給藥后在不同的時間進(jìn)行抽樣。 如果在采樣期間內(nèi)各藥代動力學(xué)參數(shù)不變化，將每次

3、給藥前的血中濃度(Css)min視為零，則可以將這些點(diǎn)累積，并視為在一次給藥間隔時間內(nèi)的不同時間進(jìn)行處理。 臨床生物化學(xué)、采樣時間、2、采樣時間：此時，每次采樣時間的選定按照上述原則進(jìn)行。 但是，本方法不可靠，特別是排除半壽命比給藥間隔近的人的話，誤差會變大。 (二)藥品監(jiān)測、調(diào)整方案應(yīng)在達(dá)到穩(wěn)定濃度后進(jìn)行采樣。 定速靜脈滴注時，穩(wěn)定血藥的濃縮幾乎維持在一定的水平，所以在達(dá)到穩(wěn)定后，隨時可以進(jìn)行取樣測定。 多藥間隔給藥時，穩(wěn)態(tài)血藥濃度在一定范圍內(nèi)變動，為了測定峰值濃度還是谷濃度，應(yīng)根據(jù)臨床的需要決定。 臨床生物化學(xué) :二，采樣時間，二，采樣時間： 4444444444444444航空航空航空在

4、此情況下，如果患者的個人藥代動力學(xué)參數(shù)已知，請在一個給藥間隔內(nèi)的到達(dá)時間(tp )和下一次給藥前，分別采血、臨床生物化學(xué) :二、采樣時間、二、采樣時間：雙室模型藥物(Css)max必須是去除相開始段。 如果參照患者個人藥動學(xué)參數(shù)不明，只參考組資料制定的藥品使用方案，大眾資料的平均到達(dá)峰值時間tp不一定代表具體的患者的tp。 但是，無論如何，任何藥物、任何身體都會每次給藥(Css)min，因此，在這種情況下，最好僅在給藥前對(Css)min進(jìn)行采樣測定，根據(jù)(Css)min和有效血中濃度范圍，特別是下限的關(guān)系來調(diào)整給藥量。臨床生物化學(xué) :二、采樣時間、二、采樣時間： 22222222222222

5、652若不知道個體的tp，則分別在與集團(tuán)tp平均值鄰接前后的時間進(jìn)行采樣測定，血中濃度是否接近最小中毒濃度(三)急性藥物中毒的診斷和處理應(yīng)前后及時采樣測定，后者根據(jù)臨床需要，必要時采樣，監(jiān)測急救效果。在臨床生物化學(xué) :三、樣品預(yù)處理、三、樣品預(yù)處理：TDM工作中，除了可以用少數(shù)方法將收集的樣品直接應(yīng)用于測量外，還經(jīng)常進(jìn)行必要的預(yù)處理。 預(yù)處理的目的是以適當(dāng)?shù)姆椒ūM量減少干擾成分，濃縮純化待測物質(zhì)，提高檢測的靈敏度和特異性，減少對機(jī)器的損害，而不破壞待測藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。 預(yù)處理包括脫蛋白、提取和化學(xué)誘導(dǎo)化。 (1)脫蛋白TDM常用的血清(漿)、唾液和尿等含有或少量蛋白質(zhì)，妨礙多種測定方法，造成機(jī)

6、器的污染損害。臨床生物化學(xué) :三、樣品預(yù)處理、三、樣品預(yù)處理：脫蛋白的方法有沉淀離心法、色譜法、超濾法和速度離心法等。 其中沉淀離心法最簡便快捷，且可根據(jù)提取要求選擇合適的酸、堿和有機(jī)溶劑，與提取同步進(jìn)行，所以最好選擇。 藥物與血漿蛋白質(zhì)的結(jié)合多由離子鍵、氫鍵、VanderWaals引力等弱力形成。 蛋白質(zhì)變性沉淀同時破壞該結(jié)合并釋放藥物，因此用沉淀離心法去除了蛋白質(zhì)的體液標(biāo)本，最后測定的藥物濃度是同時包含游離藥物和蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物的總濃度。臨床生物化學(xué) :三、樣品預(yù)處理、三、樣品預(yù)處理：顯然，當(dāng)需要單獨(dú)測定游離藥物濃度時，不能采用該方法，而應(yīng)采用溫和復(fù)雜費(fèi)時間的色譜、超濾法或速度離心法。 可

7、以去除蛋白質(zhì)，不會釋放出結(jié)合蛋白質(zhì)的藥。 (二)提取除免疫化學(xué)法外，還必須提取TDM中使用的多種檢測方法，以盡可能選擇性地濃縮測定成分，提高檢測靈敏度，改善檢測方法的特異性，減少干擾。 臨床生物化學(xué) :三、樣品預(yù)處理、三、樣品預(yù)處理：提取方法分為液-液提取和液-固提取兩種。 液-液萃取多為有機(jī)化合物，其中弱酸、弱堿較多。 在pH不同的溶液中，會發(fā)生程度不同的解離。 因此，選擇對測定物的溶解度高，即使不與使用的標(biāo)本混合也不乳化的有機(jī)溶劑，根據(jù)測定物的酸堿性和pKa、氧化或堿性樣品，使測定物以盡可能高的脂溶性分子狀態(tài)存在，主要分配到有機(jī)溶劑中。臨床生物化學(xué)、樣本預(yù)處理、三、樣本預(yù)處理：在此條件下可

8、以排除高極性的噪聲成分。 通過離心分離有機(jī)相和水相(樣品)，可以達(dá)到萃取的目的。 必要時，可以根據(jù)上述原理將待測成分再提到pH的適當(dāng)水相中，進(jìn)一步排除高脂溶性的干擾物質(zhì)。 這種方法被稱為液-液提取，因?yàn)闃悠泛吞崛〗橘|(zhì)都是液相的。 液固提取也稱為固相柱提取，是近年來發(fā)展起來的提取方法。 臨床生物化學(xué) :三，樣品預(yù)處理，三，樣品預(yù)處理：可以根據(jù)待測物體的理化性質(zhì)選擇合適的常壓短柱，TDM中常用的是疏水填充柱。 目標(biāo)標(biāo)本(多進(jìn)行脫蛋白質(zhì)處理)通過該柱后，用適當(dāng)強(qiáng)度的溶劑洗提，選擇性地收集含有目標(biāo)成分的洗提液部分，可以達(dá)到理想的提取目的。 也可以用強(qiáng)度不同的溶劑階段性地溶出，僅收集溶出的測定對象成分。

9、 此種提取柱已經(jīng)有幾種商品化生產(chǎn)，可供選擇。 臨床生物化學(xué) :三、樣品預(yù)處理、三、樣品預(yù)處理：本方法比液-液提取麻煩，但具有回收率和提取特異性高的優(yōu)點(diǎn)。 (三)化學(xué)衍生化反應(yīng)用分光法和色譜法測定藥物時，可以根據(jù)測定對象物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和測定方法的要求，通過化學(xué)衍生化反應(yīng)特異地導(dǎo)入發(fā)色(可見光分光法)、發(fā)光(紫外、熒光、磷光)基，提高測定的靈敏度和特異性。 氣相色譜法時，對待測物進(jìn)行甲硅烷化、烷基化、鹵化、?；?，提高待測物的熱穩(wěn)定性和揮發(fā)性，改善分離效果，適用于特殊的檢測器。臨床生物化學(xué) :三、樣品預(yù)處理、三、樣品預(yù)處理：要用HPLC柱前誘導(dǎo)分離測定手性異構(gòu)體藥物，需要在對象物中引入手性拆分基。

10、臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：本質(zhì)上藥物為化學(xué)物質(zhì)，其測定方法均為臨床化學(xué)常用技術(shù)。 但是，體液中的藥物多以g/ml或ng/ml水平存在，其檢查不僅受到同時存在的多種結(jié)構(gòu)類似的內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，也受到與原型藥只有很小差異的代謝物質(zhì)的干擾。 部分藥物的TDM除原型藥外，還需要同時檢查具有藥理活性的代謝物。 另一方面，藥物的有效濃度范圍和中毒水平，結(jié)合很多臨床觀察確定，在任何實(shí)驗(yàn)室建立的測定方法都需要較高的比較性。 臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：以下僅結(jié)合藥物測定的特殊要求，對常用臨床化學(xué)技術(shù)進(jìn)行評價介紹。 (1)

11、分光法的很多藥物和代謝物本身在紫外光區(qū)域存在吸收峰值，如果一部分藥物和代謝物被激發(fā)，其本身就能發(fā)出熒光，另外，還有能通過分光法檢測特異的顯色反應(yīng)的藥物。 但是，不論可見光分光光度法、紫外光度法、熒光光度法，用于體液中的藥物檢查時，存在靈敏度低、特異性差的缺點(diǎn)，特別容易被代謝物妨礙。臨床生物化學(xué) :采用第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)、第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：提取、二波長、示差、導(dǎo)數(shù)分光光度法等試圖提高靈敏度和特異性，但根本無法克服上述缺點(diǎn)。 但是，光譜法操作簡單，必要的儀器配備在一般的臨床實(shí)驗(yàn)室，檢測成本低，容易普及。 血藥濃度水平高，用適當(dāng)?shù)姆椒ǜ牧脊庾V法滿足臨床需求，成為阿司匹林、對乙酰氨基

12、酚、氨茶堿、苯內(nèi)鈉、苯巴比妥鈉等目前仍可采用的方法。 臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：火焰輻射光譜法和原子吸收光譜法特異性和靈敏度高，操作簡便，但只能用于體內(nèi)少量存在的含金屬離子的藥物。 在TDM中可以用于鋰鹽、鉑鹽的檢測。 (二)色譜也稱色譜。 色譜作用分離樣品中理化性質(zhì)不同的成分，配合適當(dāng)?shù)臋z測器可以同時進(jìn)行定性和定量的工作。 特異性高，能同時檢測同一樣品中的不同成分，是色譜的共同優(yōu)點(diǎn)，在TDM中尤其有意義。 臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：薄層色譜(TLC )對定量點(diǎn)樣品技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)，使用掃描定量，但其靈敏

13、度和再現(xiàn)性還比其他色譜低，除用于毒物檢測外，在TDM工作中應(yīng)用得很少由于60年代末期成熟的氣相色譜(GC )和高效液相色譜(HPLC )相繼發(fā)展，實(shí)現(xiàn)了高效的色譜分離和檢測，可以用微機(jī)控制色譜條件、程序和數(shù)據(jù)處理，其特異性、靈敏度和再現(xiàn)性臨床生物化學(xué) :第六節(jié)常用藥物濃度測定技術(shù)，第六節(jié)常用藥物濃度測定技術(shù)：采用內(nèi)標(biāo)本法定量，可以消除部分操作誤差，提高檢測結(jié)果的可靠性。 HPLC與GC相比，由于不需要將樣品高溫氣化，所以一般不進(jìn)行衍生化處理，另一方面，HPLC的固定相的種類多，流動相通過改變其構(gòu)成成分和比例進(jìn)一步變化。 兩者適當(dāng)組合，可分離測定大多數(shù)有機(jī)化合物藥物。 實(shí)際上，PS和PS等先進(jìn)可

14、靠的檢測方法的應(yīng)用促進(jìn)了TDM的形成和發(fā)展。臨床生物化學(xué) :第六節(jié)常用藥物濃度檢測技術(shù)，第六節(jié)常用藥物濃度檢測技術(shù)：特別是HPLC已成為TDM的重要檢測技術(shù)，常被用作評價其他方法的參考方法。 當(dāng)然，GC和HPLC一般要求樣品預(yù)處理，兩種方法使用的設(shè)備昂貴而難以普及。 但是，從發(fā)展角度來看，HPLC仍然是國內(nèi)TDM的主要分析方法。 近年來發(fā)展起來的GC質(zhì)譜、HPLC-質(zhì)譜的在線檢測，大大提高了這種分析手段的性能。 臨床生物化學(xué) :第6節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第6節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：(3)免疫化學(xué)法很多藥物由于是半抗原或抗原，會引起過敏反應(yīng)。 如果能調(diào)制出與這些藥物相對應(yīng)的特異性抗體，就能根據(jù)

15、抗原抗體反應(yīng)的特異性，用免疫化學(xué)法檢測出這些藥物。 TDM應(yīng)用的免疫化學(xué)法一般采用競爭免疫分析，定量添加的少量特異抗體和標(biāo)本中的相應(yīng)抗原和半抗原性藥物與定量添加的標(biāo)記藥物之間發(fā)生競爭結(jié)合，測定標(biāo)記藥物和抗體結(jié)合的抑制程度，并與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行比較，可以定量樣品中的藥物。 臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：免疫化學(xué)法靈敏度極高，多達(dá)到ng至pg檢測水平，能滿足所有藥物TDM要求的該方法所需標(biāo)本量少，一般無需預(yù)處理，操作簡單，商品化試劑盒這些都是免疫化學(xué)法的優(yōu)點(diǎn)。 但是，TDM中免疫法存在的主要問題是特異性容易受到干擾。 干擾因素除來源于內(nèi)源性物質(zhì)外，都是

16、抗原性決定基沒有變化的被檢測藥物的代謝，或具有相同抗原性的其他藥物和代謝物。 臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：如強(qiáng)心藥地高辛、地高辛代謝物地高辛可與地高辛抗體結(jié)合。 很明顯，在體內(nèi)代謝幾乎沒有變化而原型排泄的藥物，對代謝物的干涉很少，特別適用于慶大霉素等氨基糖苷類抗生素的免疫法檢查。 當(dāng)然，如果不具備完全或半抗原性的藥物，制造出特異的抗體，就不能用免疫化學(xué)法進(jìn)行TDM。 但總的來說，免疫化學(xué)方法的上述優(yōu)點(diǎn)是TDM檢測技術(shù)發(fā)展的主要方向。 臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：免疫化學(xué)法根據(jù)標(biāo)記物的性質(zhì)，可分為放射免疫法、

17、熒光免疫法和酶免疫法三種。 根據(jù)測定中是否分離與抗體結(jié)合的標(biāo)記物，可分為多相(需要分離)和均勻相(不分離)免疫分析法兩種。 放射免疫法存在放射性污染，為多相系統(tǒng)，分離結(jié)合和未結(jié)合的標(biāo)記物操作復(fù)雜，影響因素多，分離效果直接影響測定結(jié)果，但靈敏度高，標(biāo)記技術(shù)比較成熟，國內(nèi)生產(chǎn)的TDM試劑盒多。 臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：熒光免疫法根據(jù)反應(yīng)系統(tǒng)和定量方法不同，還可以分為幾類。 與放射免疫法相比，熒光免疫法多無放射性污染，操作簡單，容易普及。 國外生產(chǎn)的TDM試劑盒，相當(dāng)一部分屬于這一類，還由TDM熒光偏振光免疫分析裝置生產(chǎn)。 酶免疫分析法是目前國外TDM免疫分析中最常用的方法，特別是同質(zhì)酶免疫分析法。 臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術(shù)：本法除了具有熒光免疫法的優(yōu)點(diǎn)之外，還能選擇合適的標(biāo)記酶，實(shí)現(xiàn)目前廣泛普及的多種自動分析儀的自動化操作，有利于其普及。特別是近年來，在TDM的酶免疫分析中，應(yīng)用酶偶聯(lián)反應(yīng)原理，用輔酶黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD )標(biāo)記藥物，使葡萄糖氧化酶蛋白、偶聯(lián)輔助酶過氧化物酶及基質(zhì)和顯色劑4 -氯1 -萘酚固化為薄膜臨床生物化學(xué) :第六節(jié)藥