中藥制劑分析試題.ppt

1、第二節(jié) 中藥制劑分析的一般程序,取樣,鑒別,含量測定,檢查,提取,純化,一、取樣 1.取樣均勻、合理、代表性 2.按規(guī)定方法取樣 （中藥材、中藥制劑）,二、鑒別 （一）顯微鑒別 在下列情況中應用：藥材及炮制品的外形鑒別特征不明顯或外形相似難于鑒別而組織構(gòu)造不同時；藥材破碎或呈粉末不易用肉眼辨認或區(qū)分時；含原藥材粉末的中藥制劑。,丸劑、片劑、膠囊劑、散劑 快速，簡便，覆蓋面大選擇原則 1、應選有專屬性的特征進行鑒別 2、多來源的藥材應選擇共有的特征進行鑒別,安宮牛黃丸 1、水牛角濃縮粉,2、麝香,3、珍珠,4、朱砂,5、雄黃,6、黃連,7、梔子,8、郁金,9、黃芩,顯微化學反應鑒別法：一般可取藥

2、材切片或粉末，中成藥取粉末，置載玻片上，滴加各種試劑，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察產(chǎn)生的結(jié)晶、沉淀物，以及特殊的顏色變化，作為鑒別特征。該法可以確定基礎(chǔ)品種中特殊化學成分的存在及在組織中的分布。,(二）化學鑒別 抗干擾能力差,顯色、熒光,例,二妙丸中蒼術(shù)的鑒別,蒼術(shù)酮 蒼術(shù)炔,（三）色譜鑒別 TLC法應用最多（Rf、顏色、熒光） GC法 適用于含揮發(fā)性成分的藥物 HPLC法常與含量測定同時進行,鑒定有臨床療效的已知成分 黃連 小檗堿（抗菌消炎） 麻黃 麻黃堿（支氣管哮喘） 烏頭 烏頭堿（毒性） 洋地黃 強心苷（強心） 延胡索 延胡索乙素（鎮(zhèn)痛）,陰、陽對照法 陽性對照 將要鑒別的藥材按制劑工藝處理

3、，再按鑒別方法提取的溶液 陰性對照 把制劑中要鑒別的藥材除去，用剩下的各味藥按制劑工藝處理，再按鑒別方法提取的溶液,OO O O O O O O O O O 陰 樣 陽 對 品 對,例,大補陰丸 黃柏的TLC法鑒別,例,薄層板的選擇,硅膠G板（可加0.3% 0.5% CMC-Na） 多用 氧化鋁板 常用于生物堿類藥物 聚酰胺板 常用于黃酮類及酚類 藥物 纖維素板 常用于氨基酸類藥物,（四）中藥鑒別新技術(shù)中藥指紋圖譜（色譜） 1.定義： 中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處理后，采用一定的色譜分析手段，得到的能夠標定該中藥材或中藥制劑特性的共有峰的色譜圖,2.色譜指紋圖譜的基本屬性 a.整體性 將指紋圖譜作

4、為一個整體來分析和比較它的綜合特征以達到鑒別的目的。 b.模糊性 強調(diào)分析、比較指紋圖譜的相似性，而不是完全相同。 是一種綜合的、量化的色譜鑒別手段。,色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量評價中能夠盡可能多地反應中藥的全貌。 不需要清楚每一個組分的化學結(jié)構(gòu)；不需要對每一個組分都進行定量；只要求不同批號的同一種藥品的指紋圖譜保持一致。,3. 指紋圖譜的應用,雅蓮,云蓮,味蓮,雅蓮,云蓮,I,III,II,訶 子,小訶子,大訶子,絨毛訶子,人參須根,人參主根,不同產(chǎn)地高良姜的氣相指紋圖譜,指紋圖譜研究過程中的注意事項： 1、在藥效學指導下進行研究，保證指紋圖譜反映的化學成分包括中藥材中有效部位所含的絕大部分成分

5、或有效成分的全部。 2、樣品的預處理過程及測定方法應簡便、經(jīng)濟、易行，且專屬性、準確度與重現(xiàn)性好。,水分 總灰分和酸不溶性灰分 重金屬 砷鹽 殘留農(nóng)藥,主要項目,雜質(zhì)來源及檢查意義 水分 結(jié)塊、霉變或有效成分水解 灰分 控制藥物本身及泥土、沙石等 無機雜質(zhì) 重金屬 環(huán)境污染和使用農(nóng)藥引入 砷鹽 劇毒，常由除草劑、殺蟲劑或 化肥引入 殘留農(nóng)藥 有毒,（一）水分測定法 烘干法（不含或少含揮發(fā)性成分） 甲苯法 （含揮發(fā)性成分） 減壓干燥法（含揮發(fā)性成分貴重藥） GC法,酸不溶性灰分的測定,（二）總灰分和酸不溶性灰分的測定 總灰分的測定,干法破壞（ChP）,濕法破壞（USP）,堿融法破壞 濕法破壞,堿

6、融法,H+,（五）殘留農(nóng)藥的測定 1、總氯量的測定 2、總磷量的測定 3、GC法,中國藥典中藥制劑含量測定所占比例 版本 % 1977 1.48 1985 5.31 1990 8.73 1995 12.81 2000 62.09 （HPLC 36% TLCS 24% GC 3%),測定成分的選定原則 1.首選君藥及貴重藥、劇毒藥建立含量、限量測定方法 2.其次考慮臣藥及其他味藥 3.有效成分明確的，可選有效成分,4.成分類別清楚的，可測某一類總成分的含量 5.檢測成分應歸屬某單一藥味 6.檢測成分應與中醫(yī)用藥的功能主 治相近 7.確無法含量測定的，可測定浸出 物含量,（一）化學分析法 重量分析

7、法 容量分析法 特點 A、準確度、精密度高 B、抗干擾能力差,（二）分光光度法 UV法 比色法 特點 A、靈敏度高 B、簡便、快速 C、精密度稍低 D、干擾多,蘆丁,黃芩苷,小檗堿,丹皮酚,（三）TLCS法 測定薄層板上斑點對單色光的吸 收或反射的強度而進行定量的方法 特點 A、分離效果好 B、適用于無法用UV、HPLC 法測定的組分 C、準確度、精密度低于HPLC,2000年版中國藥典（2000年版）薄層掃描法品種,品種數(shù)量 TLCS數(shù)量 占總數(shù)% 534（藥材） 20 3.74 458（成藥） 32 6.99 978（總數(shù)） 52 10.73,1.選擇測定條件 （1）薄層色譜條件 分離好

8、不拖尾 （2）檢測方法 吸收測定法 熒光測定法 反射法 透射法 外標法 內(nèi)標法 （3）掃描方式 單波長 雙波長 線性掃描法 鋸齒掃描法,（4）散射參數(shù)SX 薄層板的散射使,Kubelka-Munk方程,2.注意事項 （1）薄層板 均勻、平整 （2）點樣量 準確 （3）斑點 應完全分離，不拖尾 （4）顯色劑 均勻、適當 （5）保護斑點 用相同大小潔凈玻璃 蓋住薄層板，并用透明膠紙封住邊緣，以起固定和隔絕空氣作用,外標法（兩點校正法）,（四） HPLC法 外標法和內(nèi)標法 RP HPLC 色譜柱 ODS 流動相 甲醇 - 水 PIC反離子 氫氧化四丁基銨 RP - PIC 反離子 烷基磺酸鹽 無機陰

9、離子,離子對色譜法（PIC） 極性流動相中加入離子對試劑，與被分析離子生成中性離子對，從而增加在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增大,2000年版中國藥典（2000年版）HPLC法品種,品種數(shù)量 HPLC數(shù)量 占總數(shù)% 534（藥材） 54 10.11 458（成藥） 48 10.48 978（總數(shù)） 102 20.59,應用實例-小青龍合劑,處方 麻黃125g 桂枝125g 白芍125g 干姜125 五味子125g 細辛62g 甘草(蜜炙) 法半夏188g,生物堿,桂皮醛,芍藥甙,揮發(fā)油,三萜皂甙,應用實例-小青龍合劑,制法 以上八味，細辛、桂枝提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與白

10、芍、麻黃、五味子、甘草加水煎煮至味盡，合并煎液，濾過，濾液和蒸餾后的水溶液合并，濃縮至約1000ml。法半夏、甘姜照流浸膏劑項下滲漉法，用70%乙醇作溶劑，浸漬24小時后進行滲漉，漉液濃縮，與上述藥液合并，靜置，濾過，濾液濃縮至1000ml，加入苯甲酸鈉3g與細辛、桂枝揮發(fā)油，攪勻，即得。,性狀 本品為棕黑色的液體；氣微香，味甜、微辛。 功能與主治 解表化飲，止咳平喘。用于風寒水飲，惡寒發(fā)熱，無汗，喘咳痰稀。 用法與用量 口服，一次10-20ml，一日3次，用時搖勻。,方藥分析： 君 麻黃發(fā)汗為君 臣 桂枝解表為臣 佐 甘草恐發(fā)汗太過, 佐以甘草緩 之 使 白芍、干姜、細辛、法半夏、五 味子幾

11、藥合力共為使。 可外發(fā)汗，內(nèi)行水，散表里之邪。,漢代張仲景傷寒論小青龍湯 近代由重慶桐君閣中藥廠該湯劑為合劑 本方治療傷寒表不解，心下有水氣，干嘔，發(fā)熱而咳。近代也用于慢性支氣管炎，支氣管哮喘、肺氣腫，均見咳、喘、痰白清稀者。,供試品溶液與陰性對照液的制備： 取合劑10 ml，石油醚分3次萃取，合并石油醚萃取液油層，濃縮至1ml，為供試品溶液A； 水層用Na2CO3調(diào)PH11-12，用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，殘渣用1ml甲醇溶解，為供試品溶液B； 陰性對照液如上法同步進行。,1. 桂皮醛的鑒別 取供試品液A、陰性對照液、桂皮醛對照液（1ug/ml）15ul，點于同一硅膠G板上，

12、環(huán)己烷-乙酸乙酯（17：3）展開，晾干，噴2，4二硝基苯肼乙醇T.S，供試品A與對照品在相應位置上顯相同的橙色斑點，而陰性對照液無此斑點。,2. 細辛揮發(fā)油的鑒別 取供試品液A、陰性對照液、細辛揮發(fā)油對照液（1：10乙醚液）5ul，點于同一硅膠G板上，環(huán)己烷展開，晾干，噴10%香草醛濃硫酸T.S，加熱至顯色，供試品A與對照品在相應位置上顯相同的粉紅色斑點，而陰性對照液無此斑點。,3. 麻黃堿的鑒別 取供試品液B，陰性對照液，麻黃堿對照品液（1mg/ml）各5ul，點于同一硅膠G，氯仿-甲醇-濃氨水 （20：5：0.5）展開，晾干，噴茚三酮T.S，加熱至斑點顯色，供試品B與對照品在相應位置上顯相

13、同的藍紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。,取合劑5ml，上聚酰胺柱，DW洗脫，洗脫液水浴濃縮至干，用1ml甲醇溶解，為供試品溶液C； 聚酰胺柱再用95%乙醇洗脫，棄取洗脫液，用3M氨乙醇液洗脫，收集洗脫液水浴蒸干， 1ml甲醇溶解，為供試品溶液D。,4. 芍藥甙的鑒別 取供試品液C、陰性對照液、芍藥甙對照液（1mg/ml）10ul，點于同一硅膠G板上，氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸-甲酸（8：1：2：0.04）展開，晾干，噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯色，供試品C與對照品在相應位置上顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。,5. 甘草酸的鑒別 取供試品液D、陰性對照液、甘草酸銨對照液（2mg/ml）

14、2ul，點于同一硅膠G板上，乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-蒸餾水（30：2：2：4）展開，晾干，噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯色，UV燈365nm觀察，供試品D與對照品在相應位置上顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。,含量測定,HPLC法測定芍藥甙的含量 儀器與色譜條件 BECKMAN 332型高效液相色譜儀 163型可變波長紫外檢測儀，220nm 427型記錄及數(shù)據(jù)處理儀 色譜柱為YWGC18 流動相乙腈-水（15：85）,標準曲線制備 精密稱取芍藥甙5.08mg，溶于水至50ml量瓶中，定容，分別吸取0.50、1.00、1.50、2.00ml于10ml量瓶中定容。 回收率測定 精密吸取除去白芍

15、制成的合劑（即陰性對照液）0.3ml與適量芍藥甙對照品液，通過0.5g聚酰胺柱，用水洗脫至50ml量瓶中至刻度，依前述條件測定，平均回收率為99.42%，RSD為0.23%（n=3）。,樣品測定 取自制小青龍合劑搖勻，用濾紙過濾，精密吸取0.3ml濾液通過聚酰胺柱，以不同回收率測定條件進行測定。,分析實例萬氏牛黃清心丸,處方 牛黃10g 朱砂60g 黃連200g 黃芩120g 梔子120g 郁金80g,分析實例萬氏牛黃清心丸,制法以上六味，除牛黃外，朱砂水飛或粉碎成極細粉；其余黃連等四味粉碎成細粉；將牛黃研細，與上述粉末配研，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜100-200g制成大蜜丸，即得。,

16、古方為糊丸，亦有水丸,性狀本品為紅棕色至棕褐色的大蜜丸；氣特異，味甜、微澀、苦。 功能主治清熱解毒，鎮(zhèn)驚安神。用于熱邪內(nèi)閉，煩躁不安，神昏譫語，小兒高熱驚厥。,方藥分析 本方來源于明.痘疹世醫(yī)心法 ，本方為清心開竅劑，主治熱邪內(nèi)陷心包所致竅閉神昏癥。 方中牛黃，清心解毒，豁痰開竅為君藥；黃連、黃芩、梔子清熱瀉火，為臣藥；朱砂清心，重鎮(zhèn)安神，郁金行氣開竅共為佐使藥，合用以奏透邪瀉熱，開竅安神之效。,方藥分析 牛黃清熱解毒藥，主含膽酸類成分。 黃連清熱燥濕藥，主要為小檗堿。 黃芩清熱燥濕藥，主要為黃酮類。 梔子清熱瀉火藥，主含梔子甙。 朱砂安神藥，主含硫化汞（HgS）。 郁金活血去瘀藥，主含揮發(fā)油

17、。,鑒別,顯微鑒別 郁金糊化淀粉團塊幾乎無色。 梔子種皮石細胞。 黃芩纖維淡黃色，梭形，厚壁，孔溝細。 黃連纖維鮮黃色，壁稍厚，紋孔明顯。 朱砂不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗紅棕色、鮮紅色或棕黃色。,郁金糊化淀粉團塊 梔子種皮石細胞 黃芩纖維 黃連纖維 朱砂不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗紅棕色、鮮紅色或棕黃色,化學鑒別 1. 朱砂的鑒別 取本品3g，加水適量，研勻，反復洗去懸浮物，可得少量朱紅色沉淀，取出，加入鹽酸1ml及銅片少量，加熱煮沸，銅片由黃色變?yōu)殂y白色。 HgS+2HCl+CuCuCl2+Hg+H2S 在酸性條件下，朱砂與銅片發(fā)生置換反應析出金屬汞，在銅片表面形成銀白色汞齊。,2. 人工牛黃

18、的鑒別 取本品，剪碎，加硅藻土0.6g，研勻，加氯仿10ml、冰醋酸0.5ml，加熱回流30min,放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。 膽酸和豬去氧膽酸加乙醇制成1ml含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。,TLC法 CMC-Na，硅膠G 展開劑 醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇 （32:6:1:1） 顯色劑 10%磷鉬酸乙醇液， 1100C,10min,人工牛黃,供試品,牛黃空白,豬去氧膽酸,膽酸,3. 黃芩的鑒別 供試品溶液的制備：取本品3g，剪碎，加硅藻土0.5g，研勻，加甲醇20ml，加熱回流1hr,放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。 對照品溶液的制備：黃

19、芩甙對照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。,TLC法 CMC-Na，硅膠G （4%醋酸鈉） 展開劑 醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水 （5:3:1:1） 顯色劑 2%三氯化鐵乙醇液,使斑點更為集中,-OH與Fe+3絡(luò)合,黃芩甙,供試品,黃芩空白,4. 梔子的鑒別 供試品溶液的制備：取本品3g，加乙醚15ml，研磨，棄去乙醚。殘渣揮干乙醚，加醋酸乙酯30ml，加熱回流1hr,放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇3ml溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。 對照品溶液的制備：梔子甙對照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。,TLC法 CMC-Na，硅膠G 展開劑 醋酸乙酯-丙酮-甲酸

20、-水 （10 : 7 : 2 : 0.5） 顯色劑 10%硫酸乙醇 1050C, 10min,梔子甙,供試品,梔子空白,5. 黃連的鑒別 供試品溶液的制備：取含量測定項下剩余的鹽酸-甲醇提取液4ml，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，使成1ml作為供試品溶液。,對照藥材溶液的制備：黃連對照藥材50mg，加甲醇10ml，回流加熱15min ,濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液。 對照品溶液的制備：再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含 0.5mg的溶液，作為對照品溶液。,TLC法 硅膠G CMC-Na 展開劑 苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液（12:6:3:3:1） 顯色劑 UV（365nm）,公式品,含量測定 1. 朱砂 取本品約5g，剪碎，精密稱定，置250ml凱氏燒瓶中，加硫酸30ml與硝酸鉀8g，加熱俟溶液至近無色，放冷，轉(zhuǎn)入250ml錐形瓶中，用水50ml分次洗滌