維生素B12含量測定

1、分析化學(xué)實(shí)驗(yàn),維生素B12注射液鑒別、檢查和含量測定,P91實(shí)驗(yàn)十四,1、維生素B12主要來源是動(dòng)物性食物，存在于動(dòng)物肝臟、牛肉、豬肉、蛋、牛奶和奶酪中; 2、在吸收時(shí)需與鈣結(jié)合才能有利于人體的機(jī)能活動(dòng); 3、維生素B12能促進(jìn)紅血球的形成和再生，防止貧血； 4、促進(jìn)兒童發(fā)育；能使脂肪、碳水化合物、蛋白質(zhì)適宜地為體內(nèi)所利用。 5、主要用于治療惡性貧血，與葉酸合用治療因抗葉酸藥、脂肪瀉等引起的巨幼紅細(xì)胞性貧血。也用于多發(fā)性神經(jīng)炎、肝炎、肝硬化、白細(xì)胞減少癥等的輔助治療，目前療效有爭議。口服維生素B12僅用于已證實(shí)維生素B12吸收正常的營養(yǎng)性維生素B12缺乏。,維生素B12是含鈷的有機(jī)藥物； 為深

2、紅色結(jié)晶，又稱為紅色維生素B12或氰鈷胺； 是唯一含有主要礦物質(zhì)的維生素。 分子量：1355.38 分子式：C63H88CoN14O14P,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1、掌握Uvmini-1240型的使用方法。 2、掌握維生素B12注射液的紫外分光光度法鑒別及含量測定。 3、掌握吸收系數(shù)法定量測定的計(jì)算公式。 4、熟悉繪制吸收曲線的一般方法。,二、主要儀器與試藥 維生素B12注射液、維生素B12對(duì)照品 Mini-1240型紫外-可見分光光度儀、石英比色皿、50ml容量瓶，5ml 吸量管,精密儀器，小心！,三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1. 用標(biāo)示量0.5mg/ml維生素B12配制貯備液（樣品）：吸量管精密量取2.5ml

3、于50ml容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液（約25 g/ml）。 2 . 25 g/ml對(duì)照品溶液（實(shí)驗(yàn)室提供）,四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 實(shí)驗(yàn)原理：維生素B12分子結(jié)構(gòu)中有共軛體系，具有紫外吸收，故可采用紫外分光光度法鑒別和測定含量。 實(shí)驗(yàn)步驟： 1、取B12貯備液（約25 g/ml），以蒸餾水做空白液做光譜圖（粗掃描），在278nm，361nm，550nm處有吸收峰。 2、精測：在以上278nm，361nm，550nm波長分別1 范圍內(nèi)測定吸光度（每轉(zhuǎn)換一次波長以水做空白）記錄各最大吸收值。,儀器的使用方法 開機(jī)：打開電源，儀器初始化，約3min完成，然后預(yù)熱大約0.5h。 方法菜單：

4、 1，光度值 2，光譜 3，定量 4，選購程序包 5，系統(tǒng)設(shè)計(jì) - 輸入項(xiàng)目號(hào) 參數(shù) IC包 文件發(fā)送 PC控制,五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 鑒別：維生素B12吸收光譜上有三個(gè)吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。 檢查：A361/ A278 應(yīng)為1.70-1.88， A361/ A550應(yīng)為3.15-3.45 。 含量測定： 吸收系數(shù)法：利用上述361nm處測定得到的吸收度，按其吸收系數(shù)E11cm=207 計(jì)算含量及標(biāo)示量百分含量。,計(jì)算公式 維生素B12吸收光譜上有三個(gè)吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。維生素B12在361 nm的吸收峰干擾因素少，吸收又最強(qiáng)，中國藥典2010版規(guī)定：以361 nm處吸收峰的比吸光系數(shù)E1%1 cm值（207）為計(jì)算含量依據(jù) 本品為注射劑，采用紫外吸收系數(shù)法測定含量，其計(jì)算公式為： 按吸收系數(shù)法定量計(jì)算： C樣品（g/ml）=A36148.31,見P92,取對(duì)照品測A361做對(duì)照,A樣品 B12含量= 100% A對(duì)照,C=ECL,六、思考題 如果