食品理化檢驗(yàn) 維生素的測(cè)定課件

1、第十一章 食品中維生素的測(cè)定,Determination of Vitamin in Food,一、概述 二、脂溶性維生素的測(cè)定（重點(diǎn)、難點(diǎn)） 三、水溶性維生素的測(cè)定（重點(diǎn)、難點(diǎn)）,1,學(xué)習(xí)交流PPT,一、概述,（一）維生素的分類及共性 （二）常見(jiàn)維生素的生理功能 （三） 維生素的測(cè)定意義,2,學(xué)習(xí)交流PPT,（一）維生素的分類 目前已發(fā)現(xiàn)的維生素約有二、三十種，按溶解性可分為兩大類： 脂溶性維生素：A、D、E、K等； 水溶性維生素：B、C等（如B1、B2、B6、B12和C等）,3,學(xué)習(xí)交流PPT,維生素都具有以下共同特點(diǎn)： 這些化合物或其前體化合物都在天然食物中存在； 它們不能供給機(jī)體熱能；

2、也不是構(gòu)成組織的基本原料； 主要功用是通過(guò)作為輔酶的成份調(diào)節(jié)代謝過(guò)程，需要量 極??； 它們一般在體內(nèi)不能合成，或合成量不能滿足生理需要，必須經(jīng)常從食物中攝??； 長(zhǎng)期缺乏任何一種維生素都會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的疾病。,4,學(xué)習(xí)交流PPT,維生素A：是人體必需營(yíng)養(yǎng)素，能促進(jìn)人體發(fā)育，防止眼膜 炎、夜盲癥等疾病。 維生素B1：也叫硫胺素，對(duì)人體的功能主要是防腳氣病、神經(jīng) 炎，幫助消化，促進(jìn)發(fā)育。 維生素B2：對(duì)人體功能防口角炎、皮膚炎，防止怕光現(xiàn)象。 維生素C：防壞血病，促進(jìn)外傷愈合，使機(jī)體增強(qiáng)抵抗力。 維生素D：調(diào)節(jié)體內(nèi)礦物鹽的平衡，特別是對(duì)人體內(nèi)鈣、磷的 代謝，并能防止軟骨病。,（二）常見(jiàn)維生素的生理功能,

3、5,學(xué)習(xí)交流PPT,（三）維生素的測(cè)定意義 評(píng)價(jià)食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值； 開(kāi)發(fā)利用富含維生素的食品資源； 指導(dǎo)人們合理調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)，防止維生素缺乏癥； 研究維生素在食品加工、貯存等過(guò)程中的穩(wěn)定性，指導(dǎo)制定合理的生產(chǎn)工藝條件及貯存條件，最大限度地保留各種維生素； 監(jiān)督維生素強(qiáng)化食品的強(qiáng)化劑量，防止維生素?cái)z入過(guò)多引起中毒。,6,學(xué)習(xí)交流PPT,二、脂溶性維生素的測(cè)定 脂溶性維生素的理化性質(zhì) 脂溶性維生素的測(cè)定方法,7,學(xué)習(xí)交流PPT,常與脂類物質(zhì)共存于食物中，攝食時(shí)一道被人體吸收。 1.溶解性： 不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑； 2.耐酸堿性： 維生素A、D對(duì)酸不穩(wěn)定，對(duì)堿穩(wěn)定

4、； 維生素E對(duì)酸穩(wěn)定，對(duì)堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在下或惰性氣體保護(hù)下，也能經(jīng)受堿的煮沸。,（一）脂溶性維生素的主要理化性質(zhì),8,學(xué)習(xí)交流PPT,3耐熱性、耐氧化性： 耐熱性 氧化性 VA 好，能經(jīng)受煮沸 易被氧化 （光、熱促其氧化） V D 好，能經(jīng)受煮沸 不易被氧化 V E 好，能經(jīng)受煮沸 在空氣中能慢慢被氧化 （光、熱、堿促其氧化）,9,學(xué)習(xí)交流PPT,根據(jù)上述性質(zhì)，測(cè)定脂溶性維生素時(shí)，通常： 皂化樣品 類脂物和維生素分開(kāi) 有機(jī)溶劑提取脂溶性維生素(不皂化物) 濃縮 溶于適當(dāng)?shù)娜軇?測(cè)定。 （食物中脂溶性維生素常與脂肪共存，一道被人體吸收，所以要除去脂肪，防止干擾。） 在皂化和濃縮時(shí)，為防

5、止維生素的氧化分解，常加入抗氧化劑(如焦性沒(méi)食子酸、維生素C等)。 對(duì)于A、D、E共存的樣品，或雜質(zhì)含量高的樣品，在皂化提取后，還需進(jìn)行層析分離。,10,學(xué)習(xí)交流PPT,常用的測(cè)定方法有: 薄層色譜法、分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。 高效液相色譜法：快速、高效、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)， 是我國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分析方法,（二）脂溶性維生素的測(cè)定方法,11,學(xué)習(xí)交流PPT,食品中VA和VE的測(cè)定 （GB5009.82-2003) 維生素A： 存在于動(dòng)物性脂肪中，主要來(lái)源于肝臟、魚(yú)干油、蛋類、乳類等動(dòng)物性食品中； 植物性食品中不合VA，但在深色果蔬中含有胡蘿卜素，它在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)閂A，故稱為VA原;

6、包括A1和A2。 維生素E：,12,學(xué)習(xí)交流PPT,（第一法）HPLC測(cè)定VA和VE,一、原理 食品樣品經(jīng)皂化處理后，用有機(jī)溶劑將食品中的脂溶性維生素（如維生素A、維生素E）從不可皂化的部分提取出來(lái)，經(jīng)過(guò)濃縮除去有機(jī)溶劑，再用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂?，用HPLC法C18反相柱將VA和VE分離，經(jīng)紫外檢測(cè)器，用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定其含量。,13,學(xué)習(xí)交流PPT,二、樣品處理 （1）皂化： 稱取適量樣品（含VA30g,VE40g）于三角瓶中，加30mL無(wú)水乙醇，振搖使樣品分散；加入5mL，100g/L抗壞血酸和2mL苯并e芘溶液（內(nèi)標(biāo)）混勻，加入10mL氫氧化鉀(1:1) ，混勻，于沸水浴上 回流30min，使皂化

7、完全（若有混濁現(xiàn)象，表示皂化完全），皂化后立即放入冰水中冷卻；,14,學(xué)習(xí)交流PPT,（2）提取： 將皂化液移入分液漏斗，先用50mL水分2次洗滌皂化瓶（若有渣，可經(jīng)過(guò)脫脂棉過(guò)濾），再用100mL無(wú)水乙醚分2次洗滌皂化瓶及殘?jiān)?，所有乙醚洗液并入分液漏斗中，振搖兩分鐘（注意放氣），靜止分層后，棄去水層；然后每次用100mL水將乙醚液洗至中性，需洗4-5次。,15,學(xué)習(xí)交流PPT,（3）濃縮： 將乙醚提取液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉濾入150mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶?jī)?nèi)，用約15mL 乙醚洗滌分液漏斗和無(wú)水硫酸鈉2次，洗液并入蒸發(fā)瓶中，于55水浴中減壓蒸餾并回收乙醚，待瓶中乙醚剩余約2mL時(shí)，取下蒸發(fā)瓶，用氮?dú)獯蹈梢颐?，隨

8、即加入2mL乙醇，充分混合、溶解提取物。將乙醇移入塑料離心管中，于離心機(jī)上離心5min，上清液供色譜分析用。,16,學(xué)習(xí)交流PPT,三、所需主要儀器 高效液相色譜（帶紫外分光檢測(cè)器） 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 高速離心機(jī)（帶離心管） 恒溫水浴鍋 紫外分光光度計(jì) 說(shuō)明：國(guó)標(biāo)中用其來(lái)標(biāo)定VA和VE的濃度,17,學(xué)習(xí)交流PPT,四、液相色譜分析 色譜參考條件： 預(yù)柱：ODS 10m（4mmx4.5cm) 分析柱：ODS 5m（4.6mmx25cm) 流動(dòng)相：甲醇：水98：2，混勻，臨用前脫氣； 紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)：300nm，量程0.02； 進(jìn)樣量：20L; 流速：1.651.70mL/min,18,學(xué)習(xí)交流PPT,

9、測(cè)定 （1）配制標(biāo)準(zhǔn)溶液 VA標(biāo)準(zhǔn)溶液：將VA標(biāo)準(zhǔn)品用無(wú)水乙醇溶解配制成濃度為1mg/ml; VE標(biāo)準(zhǔn)溶液:用無(wú)水乙醇分別溶解-生育酚、-生育酚、-生育酚3種標(biāo)準(zhǔn)品，配制成濃度為1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液； 內(nèi)標(biāo)溶液：將苯并e芘用無(wú)水乙醇配制成濃度為10g/ml; （2）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 將一定量的VA標(biāo)準(zhǔn)溶液、3種VE標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液混和均勻，對(duì)其混和液進(jìn)行色譜分析，以維生素峰面積和內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為縱坐標(biāo)，以維生素濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（直線回歸方程）。,19,學(xué)習(xí)交流PPT,（3）樣品測(cè)定 取試樣濃縮液20l注入色譜儀中，進(jìn)行檢測(cè)； 定性：用標(biāo)準(zhǔn)物色譜峰的保留時(shí)間定性； 定量：根據(jù)色譜圖求出

10、某種維生素峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰 面積的比值，以此比值由回歸方程求出維生素含量； 五、結(jié)果計(jì)算 X：某種維生素的含量，mg/100g ：由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到的某種維生素含量，g/mL V：樣品濃縮后定容體積,mL m：樣品質(zhì)量，g,20,學(xué)習(xí)交流PPT,水溶性維生素的理化性質(zhì) 維生素B1的測(cè)定 維生素B2的測(cè)定 維生素C的測(cè)定,三、水溶性維生素的測(cè)定,21,學(xué)習(xí)交流PPT,易溶于水，不溶于大部分有機(jī)溶劑； 在酸性介質(zhì)中穩(wěn)定，在堿性條件下不穩(wěn)定； 易受空氣、光、熱、酶、金屬離子的影響。,（一）水溶性維生素的主要理化性質(zhì),22,學(xué)習(xí)交流PPT,（二）維生素B1的測(cè)定,VB1又叫硫胺素、抗神經(jīng)炎素 1、食品中

11、VB1的存在形式 常以游離態(tài)存在； 復(fù)合脂形式存在（磷蛋白）； 輔羧酶形式存在 VB1在酵母、米糠、麥胚、花生、黃豆以及綠色 的蔬菜和牛乳、蛋黃中比較豐富，動(dòng)物組織不如植物 含量豐富。,23,學(xué)習(xí)交流PPT, VB1在中性、堿性下不穩(wěn)定，易分解； VB1在酸性條件下穩(wěn)定，即使加熱酸性也穩(wěn)定； VB1為白色結(jié)晶，微溶于C2H5OH，不溶于乙醚或CHCl3，易溶于水。,2.VB1的性質(zhì),24,學(xué)習(xí)交流PPT,3.維生素B1的測(cè)定方法,紫外分光光度法: 適用于VB1含量高的樣品,靈敏度和準(zhǔn) 確度較差; 高效液相色譜法 適用于食品中微量VB1的測(cè)定 熒光法 世界各國(guó)都用熒光法測(cè)定; 熒光法是我國(guó)國(guó)家標(biāo)

12、準(zhǔn)分析方法（GB/T 5009.84-2003）,25,學(xué)習(xí)交流PPT, 原理： 硫胺素在堿性鐵氰化鉀溶液中，被氧化成一種蘭色熒光物質(zhì)，即為硫色素，在紫外光下，硫色素發(fā)出熒光，在一定條件下，其熒光強(qiáng)度與硫色素濃度成正比，即與硫胺素含量成正比。,26,學(xué)習(xí)交流PPT,（2）定量方法,標(biāo)準(zhǔn)曲線法： 配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測(cè)定熒光強(qiáng)度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測(cè)量未知試樣的熒光強(qiáng)度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度。,27,學(xué)習(xí)交流PPT,(3). 操作步驟 試樣處理 樣品勻漿（或粉碎）于低溫冰箱中冷凍保存。 提取 1) 水解 2) 酶解,28,學(xué)習(xí)交流PPT,吸附劑采用的是人造浮石。 將提取液加入人造浮石

13、交換柱中，VB1被吸附上去，吸附上去后，再用熱水淋洗，洗去雜質(zhì)，最后用熱的酸性氯化鉀（25%KCl-HAC）把VB1洗脫下來(lái)，這樣就得到純VB1。,樣品,熱水,酸性氯化鉀,收集酸性氯化鉀定容, 凈化,29,學(xué)習(xí)交流PPT, 氧化 靜置 過(guò)濾 脫水,30,學(xué)習(xí)交流PPT, 熒光強(qiáng)度測(cè)定(通過(guò)熒光分光光度計(jì)可以測(cè)得) 激發(fā)波長(zhǎng)365nm；發(fā)射波長(zhǎng)435nm； 激發(fā)波狹縫5nm；發(fā)射波狹縫5nm。 （4）方法說(shuō)明 本方法適用于各類食物中硫胺素的測(cè)定，但不適用于有吸附硫胺素能力的物質(zhì)和含有影響硫色素?zé)晒馕镔|(zhì)的樣品； 酸解、水解的目的：使結(jié)合型的VB1成為游離型的； 紫外線會(huì)破壞硫色素，所以硫色素形成后

14、，反應(yīng)瓶要用黑布遮蓋或在暗室中進(jìn)行熒光測(cè)定，并且要迅速測(cè)定；,31,學(xué)習(xí)交流PPT,維生素B2又稱核黃素 測(cè)定方法主要有： 微生物法、熒光法、HPLC法 GB/T 5009.85-2003 熒光法（第一法） 微生物法（第二法）,（三）維生素B2的測(cè)定,32,學(xué)習(xí)交流PPT,熒光法測(cè)維生素B2,1.原理 核黃素在440500nm波長(zhǎng)光照射下發(fā)生黃綠色熒光。在稀溶液中其熒光強(qiáng)度與核黃素的濃度成正比。在波長(zhǎng)525nm下測(cè)定其熒光強(qiáng)度。試液再加入低亞硫酸鈉(Na2S2O4)，將核黃素還原為無(wú)熒光的物質(zhì)，然后再測(cè)定試液中殘余熒光雜質(zhì)的熒光強(qiáng)度，兩者之差即為食品中核黃素所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度。 為使VB2游離出

15、來(lái)，采用需經(jīng)酸解和酶解 為消除干擾，試樣通過(guò)氧化處理和柱層析處理。,33,學(xué)習(xí)交流PPT,2.測(cè)定步驟 （1）樣品提取,稱樣,三角瓶,高壓水解,鹽酸溶液,調(diào)pH值,氫氧化鈉溶液,酶解,淀粉酶,定容,蛋白酶,34,學(xué)習(xí)交流PPT,（2）氧化去雜,樣品提取液,具塞試管,水,雙氧水,冰乙酸,高錳酸鉀,氧化去雜,褪色,標(biāo)準(zhǔn)液按相同方法進(jìn)行,35,學(xué)習(xí)交流PPT,（3）柱層析,樣品液,水,丙酮-乙酸-水混合液,水,收集洗脫液 定容,*標(biāo)準(zhǔn)液按相 同操作進(jìn)行,36,學(xué)習(xí)交流PPT,（4）熒光測(cè)定 激發(fā)光波長(zhǎng)440nm，發(fā)射光波長(zhǎng)525nm，測(cè)量樣品管及標(biāo)準(zhǔn)管的熒光值。 待樣品及標(biāo)準(zhǔn)的熒光值測(cè)量后，在各管的

16、剩余液中加0.1mL 20%低亞硫酸鈉溶液，立即混勻，在20s內(nèi)測(cè)出各管的熒光值，作為各自的空白值。,37,學(xué)習(xí)交流PPT,3.計(jì)算 X：樣品中核黃素含量，mg/100g A：試樣熒光值 B：試樣空白熒光值 C：標(biāo)準(zhǔn)熒光值 D：標(biāo)準(zhǔn)空白熒光值 m：樣品質(zhì)量，g m1：標(biāo)準(zhǔn)管中核黃素含量g f：稀釋倍數(shù) 100/1000：樣品核黃素含量的換算系數(shù),38,學(xué)習(xí)交流PPT,維生素C是一種已糖醛基酸，有抗壞血病的作用，所以被人們稱做抗壞血酸; 廣泛存在于植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、獼猴桃、柑橘等食品中含量較多。它是氧化還原酶之一，本身易被氧化，但在有些條件下又是一種抗氧

17、化劑。,（三）維生素C的測(cè)定,39,學(xué)習(xí)交流PPT,維生素C具有較強(qiáng)的還原性，對(duì)光敏感，氧化后的產(chǎn)物稱為脫氫抗壞血酸，仍然具有生理活性；進(jìn)一步水解則生成2，3 -二酮古樂(lè)糖酸，失去生理作用。 在食品中維生素C就是以還原型、脫氫型和二酮古樂(lè)糖酸型這3種形式存在的；食品分析中的所謂總抗壞血酸是指抗壞血酸和脫氫抗壞血酸二者的總量，不包括2，3 -二酮古樂(lè)糖酸和進(jìn)一步氧化的產(chǎn)物。,40,學(xué)習(xí)交流PPT,維生素C 的測(cè)定方法,測(cè)定維生素C 的方法有： 熒光法，高效液相色譜法，2，4 二硝基苯肼比色法， 2，6 二氯靛酚滴定法，等 GB/T 5009.862003 蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸含量測(cè)定方

18、法 第一法：熒光法 第二法：2，4二硝基苯肼比色法,41,學(xué)習(xí)交流PPT,（1）原理： 試樣中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫抗壞血酸后，與鄰苯二胺反應(yīng)生成有熒光的喹唔啉，其熒光強(qiáng)度與抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測(cè)定食品中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。 注意：脫氫抗壞血酸可與硼酸結(jié)合生成復(fù)合物，而不與鄰苯二胺反應(yīng)生成熒光物質(zhì)，由此可以消除雜質(zhì)的干擾。（空白試驗(yàn)）,（第一法）熒光法（測(cè)總抗壞血酸）,42,學(xué)習(xí)交流PPT,（2）試劑： 偏磷酸冰醋酸溶液：稱取15g偏磷酸，加入40mL冰醋酸，加水稀釋至500mL過(guò)濾后，貯存于冰箱中； 硫酸：0.15mol/L 偏磷酸乙酸硫酸溶液：稱取15

19、g偏磷酸，加入40mL冰醋酸，用0.015molL-1硫酸稀釋至500mL； 乙酸鈉溶液：稱取500g乙酸鈉溶解并稀釋至1L； 硼酸乙酸鈉溶液：稱取硼酸9g，加入35mL乙酸鈉溶液，用水稀釋至1000mL； 鄰苯二胺溶液：稱取20mg鄰苯二胺鹽酸鹽溶于100mL水中；,43,學(xué)習(xí)交流PPT,抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.500g抗壞血酸溶于偏磷酸冰醋酸溶液中，定容至500mL容量瓶中，吸取上述溶液5mL，再用偏磷酸冰醋酸溶液定容至50mL； 抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：100g/mL 百里酚藍(lán)指示劑(麝香草酚藍(lán))：變色范圍pH1.2(紅)2.8(黃)； 活性炭：取50g活性炭加入250mL10%鹽酸

20、，加熱至沸，減壓過(guò)濾，用蒸餾水沖洗活性炭，檢查濾液中無(wú)鐵離子為止，于110120烘干。 （3）儀器：熒光分光光度計(jì)或具有350nm及430nm 波長(zhǎng)的熒光計(jì)；搗碎機(jī)。,44,學(xué)習(xí)交流PPT,（4）操作步驟： 試樣的制備：稱取100克鮮樣,加100mL偏磷酸-乙酸溶液，倒入搗碎機(jī)內(nèi)打成勻漿，先取少量樣品加入1滴百里酚藍(lán)，若顯紅色(pH=1.2)，即用偏磷酸冰醋酸溶液定容至100mL；若顯黃色(pH=2.8)，即用偏磷酸冰醋酸硫酸溶液定容至100mL，定容后過(guò)濾備用。 測(cè)定： 氧化處理：將上述濾液及抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用液各100ml轉(zhuǎn)入三角瓶中加入12g活性炭振搖12分鐘，過(guò)濾。即試樣氧化液和標(biāo)準(zhǔn)氧化

21、液，待測(cè)定。,45,學(xué)習(xí)交流PPT,各取10mL標(biāo)準(zhǔn)氧化液于2個(gè)100mL容量瓶中，分別標(biāo)明“標(biāo)準(zhǔn)”及“標(biāo)準(zhǔn)空白” 各取10mL試樣氧化液于2個(gè)100mL容量瓶中，分別標(biāo)明“試樣”及“試樣空白” 于“標(biāo)準(zhǔn)空白”及“試樣空白”中各加5mL硼酸-乙酸鈉溶液，混合搖動(dòng)15min，用水稀釋至100mL，在4冰箱中放置23小時(shí)，即得“標(biāo)準(zhǔn)空白”溶液及“試樣空白”溶液，備用。 于“試樣”及“標(biāo)準(zhǔn)”中各加5mL /L乙酸鈉溶液，用水稀釋至100mL,即得“試樣”溶液及“標(biāo)準(zhǔn)”溶液，備用。,46,學(xué)習(xí)交流PPT,標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備： 取上述“標(biāo)準(zhǔn)”溶液（抗壞血酸含量10g/mL）0.5、1.0、1.5和2.0mL

22、標(biāo)準(zhǔn)系列，取雙份分別置于10mL帶蓋試管中，再用水補(bǔ)充至2.0mL。（平行2次，做標(biāo)準(zhǔn)曲線） 取中“標(biāo)準(zhǔn)空白”溶液，“樣品空白”溶液及 “樣品”溶液各2mL，分別置于10mL帶蓋試管中。在暗室中迅速向各試管中加入5mL鄰苯二胺溶液，振搖混合，在室溫下反應(yīng)35min，于激發(fā)光波長(zhǎng)338nm、發(fā)射光波長(zhǎng)420nm處測(cè)定熒光強(qiáng)度。標(biāo)準(zhǔn)系列熒光強(qiáng)度分別減去標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的抗壞血酸含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或進(jìn)行相關(guān)計(jì)算，其直線回歸方程供計(jì)算時(shí)使用。,47,學(xué)習(xí)交流PPT,（5）結(jié)果計(jì)算： 式中 X-試樣中抗壞血酸及脫氫抗壞血酸總含量，mg/100g； c-由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得或由回歸方程算得

23、試樣溶液濃度，g/mL m-試樣的質(zhì)量，g； V-熒光反應(yīng)所用試樣體積，mL； F-試樣溶液的稀釋倍數(shù)。,48,學(xué)習(xí)交流PPT,（第二法）2，4二硝基苯肼比色法 1.原理 先將樣品中的還原型抗壞血酸用活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，加2，4二硝基苯肼生成紅色脎，根據(jù)脎在硫酸溶液中的含量與總抗壞血酸含量成正比進(jìn)行比色測(cè)定。,49,學(xué)習(xí)交流PPT,2.試劑 提取Vc用：20g/L草酸，10 g/L草酸 氧化處理用：活性炭（經(jīng)HCl處理無(wú)鐵離子） 控制氧化用：20g/L硫脲、10g/L硫脲 顯色用：20g/L2，4二硝基苯肼溶液，硫酸 1mg/mL抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 3.主要儀器 恒溫箱或恒溫水浴鍋 紫外可

24、見(jiàn)分光光度計(jì) 組織搗碎機(jī),50,學(xué)習(xí)交流PPT,4.操作步驟 樣品中Vc的提取和處理 提取（樣品制備） 干樣：樣品（1-4g）+適量10 g/L草酸，磨成勻漿，用10 g/L草酸定容至100mL容量瓶。過(guò)濾，得提取液。 鮮樣：樣品+等量的20 g/L草酸，搗碎成勻漿，取1040g勻漿，用10 g/L草酸定容至100mL容量瓶。過(guò)濾，得提取液。 注意：不易過(guò)濾的樣品，可離心沉淀后取上清液再過(guò)濾。,51,學(xué)習(xí)交流PPT,氧化處理 取25mL提取液+2g活性炭，振搖1min，過(guò)濾。要棄去初濾液； 取10mL氧化提取液+10mL20g/L硫脲； 此20mL氧化稀釋液為待測(cè)液，相當(dāng)于把提取液稀釋了2倍。,52,學(xué)習(xí)交流PPT,（2）呈色反應(yīng) 取3支帶塞試管，各加入4mL氧化稀釋液，留一支空白，另兩支各加1.0mL20g/L2，4二硝基苯肼溶液，37恒溫3h。 取出，空