2 人類性染色質(zhì)小體的制備和觀察

1、實驗二人類性染色質(zhì)小體（巴氏小體）的制備與觀察,一、目的,1，掌握人類x小體（巴氏小體）玻片標本制作方法。 2，觀察識別巴氏小體形態(tài)特征及所在部位，鑒定個體的性別。,二、原理,巴氏小體又稱X小體：正常女性，位于間期細胞核中，緊貼核膜內(nèi)緣，大小約11.5 um，呈現(xiàn)三角或橢圓形小體，數(shù)量為x染色體數(shù)減一。巴氏小體是由于女性兩個X染色體中的一個失活形成的。 具有兩個（或以上）X染色體的細胞中，不活化的X染色體所濃縮形成的緊密結(jié)構(gòu)。 它會依附在細胞核邊緣的核膜內(nèi)側(cè)，雖然此染色體上的小部份區(qū)域能保持著活躍的狀態(tài)，但大多數(shù)的基因都是不會表現(xiàn)的。只有位于性腺之細胞內(nèi)的巴爾氏體在進行減數(shù)分裂時會再度活化。,

2、Lyon的劑量補償學說認為：女性有兩個X染色體，但所表達的絕大部分遺傳物質(zhì)與只有1個X染色體的男性是一樣多的。 這是因為女性的X染色體中只有1個保持活性，而另一個是晚復制的，沒有活性。該失活的染色體在形態(tài)學上呈異染色體，即DNA螺旋壓的很緊，染色深而致密，稱之為巴氏小體。,三、實驗材料,口腔粘膜細胞，毛根鞘細胞，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，牙簽，吸管，固定液（乙醇:冰醋酸3:1），乙醇，二甲苯，卡寶品紅染液,四、實驗步驟,1）取材 口腔粘膜細胞：受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮23次，第1次舍去，第2，3次分別涂于干凈載玻片上。 發(fā)根細胞：拔取女性帶有毛囊的頭發(fā)（約2c

3、m），置于載玻片上。,2）固定 口腔粘膜細胞加入新配置的固定液（95%乙醇:冰醋酸3:1），固定30min以上，空氣干燥。,2）固定 毛囊細胞-拔取一根毛根比較大的毛發(fā)，在一張干凈的載玻片中央滴一滴45%的醋酸，靜置約5分鐘，待毛根稍軟后，用鑷子尖把外層毛囊的組織細胞輕輕刮下，棄去毛干。將細胞用解剖針在載玻片上均勻攤平，并在空氣中晾干。 實驗改進意見：拿起上述發(fā)根的梢部，將其上毛囊細胞輕輕蹭于另一干凈載片上即可達到轉(zhuǎn)移的目的。（若用刀片或鑷子將毛囊細胞刮下，可造成細胞的堆積，同樣會出現(xiàn)多層細胞的現(xiàn)象。1根發(fā)根的毛囊細胞可以轉(zhuǎn)移到3-4張載片上，以達到充分利用實驗材料的目的。觀察時又可以看到清晰

4、的單層涂布細胞，便于觀察統(tǒng)計。）,3）染色、制片 滴加染液，室溫10min（勿干）； 在95%的酒精中分色1-3分鐘； 在無水乙醇中繼續(xù)分色兩次，每次1分鐘 用二甲苯透明兩次，每次約3分鐘； 加蓋玻片，壓片。,巴氏小體為女性細胞中所特有的染色體結(jié)構(gòu)，是1條X染色體呈異固縮狀態(tài)所形成，各實驗室所統(tǒng)計的觀察率不盡相同，從30一50不等，有些實驗室中在男性的細胞中發(fā)現(xiàn)X小體有2%的出現(xiàn)率，但小體結(jié)構(gòu)不規(guī)范、典型。 巴氏小體常位于核膜內(nèi)側(cè)。直徑為1m左右，其形狀有微凸形、三角形、卵形、短棒形和雙球形等。觀察時需注意巴氏小體與細胞的比例。 正常女性細胞中僅可觀察到1個巴氏小體，而正常男性細胞中無巴氏小體或僅在個別細胞中有不典型的巴氏小體存在。,箭頭所示為巴氏小體（女性細胞左中存在，男性細胞右中沒有）,六、注意事項,1在實驗中取材時應該注意安全； 2如果用毛囊細胞進行試驗，采樣前應清 洗頭發(fā)，因出油后拔取毛發(fā)時不易帶出毛囊細胞。,程序,取材：受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮23次，第1次舍去，第2，3次分別涂于干凈載玻片上。 固定：口腔粘膜細胞加入新配置的固定液（95%乙醇:冰醋酸3:1），固定30min以上，空氣干燥。（固定液勿干） 染色、制片：滴