ELISA基礎知識和注意事項.ppt

1、2020/7/17，ELISA基礎知識和注意事項，2020/7/17，類別，ELISA的基本原理和相關概念特別是捕獲法處理ELISA結果的影響因素ELISA結果，2020/7/17酶催化劑具有高催化效率，可放大抗原抗體反應效應，使測定方法易感性高、2020/7/17、ELISA的基本原理、抗原或抗體結合在體外的固相載體表面后，仍可維持免疫學活性，并相互特異性結合。2020/7/17，抗原抗體復合物與酶催化劑靶二抗結合，加入合適的基質在酶催化劑作用下發(fā)色，顏色濃淡與專一性抗體水平成比例關系，可以定性和量化分析。2020/7/17、ELISA分類、抗原測定：競爭法(也可用于抗體測定)、雙抗體穿山鼠

2、開關法。 抗體測定：間接法、捕獲法、雙抗原穿山鼠開關法、2020/7/17、競爭法elisa、競爭法elisa原理樣品中抗原和一定量的酶催化劑標識牌抗原網絡沖突與固相抗體結合，樣品中的抗原含量越多，與固相結合的酶催化劑標識牌抗原越少，用于發(fā)色淺的小分子抗原和半抗原的定量時，測定抗體、2020/7/17、2020/7/17、二抗體穿山鼠開關法、二抗體穿山鼠開關法ELISA將特異的抗體包裹在固相載體表面，與標本中對應的抗原結合，洗滌后添加酶催化劑標的第二特異的抗體與抗原結合，添加基質而發(fā)色。 抗原檢測需要至少2個抗原決定分類星空衛(wèi)視、2020/7/17、包裹特異性抗體、2020/7/17、雙抗原穿

3、山鼠開關法、雙抗原穿山鼠開關法ELISA檢測標本中的總抗體(包括IgM和IgG型抗體)。 將特異性抗原包復于固相載體表面，與標本中的特異性IgM和IgG型抗體結合，洗滌后加入酶催化劑標的特異性抗原與對應的抗體結合，洗滌后基質發(fā)色、2020/7/17、2020/7/17、間接法、間接法elisa(innisa ) 加酶催化劑標識牌二抗只需對一種免疫球蛋白分子轉化包裹抗原，就可通過一種酶催化劑標識牌二抗檢測出與各種抗原結合的抗體，分別為2020/7/17、2020/7/17、捕獲法、ELISA(Capture ELISA ) 將專門用于檢測IgM的抗人IgM抗體包復在固相載體表面，與標本中所有人I

4、gM抗體結合，洗凈后加入專一性抗原與對應的專一性IgM抗體結合，洗凈后加入酶催化劑靶抗原專一性抗體，洗凈后加入基質發(fā)色。 2020/7/17、2020/7/17、區(qū)別理解、抗原檢測？ 是抗體嗎？ 包是什么？ 做什么標記？2020/7/17、間接法與捕獲法比較，間接法：假陰性、假陽性捕獲法：酶催化劑標識牌抗體要求高，2020/7/17、間接法的假陽性，2020/7/17質量控制血清可以是一定值也可以是不定值，可以購買也可以自己配合。 用自各兒配制時要注意選擇無脂肪血的血清和血漿，不能做試劑盒內的陽性對照。 以稀釋的血清為質量控制血清時，應考慮稀釋基質成分對結果的影響。 質量控制血清與臨床標本不符

5、，應注意結果分析，質量控制血清只能用于質量控制活動，不能用于標定器和評價方法。 用于室內質量控制的質量控制血清一般選擇CUTOFF值的2-3倍的質量控制品。 2020/7/17，室內質量控制：使用質量控制，控制實驗室內部實驗結果的可靠性。 室間質評價：為做評估各實驗室結果的可靠性的評價，可分為國家級和地方級的室間質評價。 可以理解為“各個實驗室的素質測評”。2020/7/17，閾值(CUTOFF值):閾值是判斷陰陽性或臨床意義水平的數值，閾值的確定是測量大量數據并用統(tǒng)計學方法確定的。 許多試劑提供閾值或閾值的修正方法。 本底：底色。 像ELISA HBsAg一樣，陽性發(fā)色，陰性不發(fā)色，背景是陰

6、性全體發(fā)色的情況。 ELISA抗HBcAb、陽性不顯色、陰性顯色、背景是整個陽性顯色的情況。 2020/7/17，靈敏度：可檢測的分析物的最小量表示檢測下限的能力。 相對靈敏度=真陽性/(真陽性假陰性) 100%測定方法及顯示方法：靈敏度標準品、質量控制血清、陽性標本稀釋終點、血清搖鏡頭屏及臨床標本陽性率。 2020/7/17，專一性：真陰性標本檢測能力。 相對專一性=真陰性/(真陰性假陽性) 100%測定及顯示方法：質量控制血清、血清盤、臨床標本陰性率。2020/7/17、Elisa結果的影響因素、試劑盒的選擇標本樣品和稀釋溫育洗版顯色質量控制、2020/7/17、試劑盒的選擇、同行試劑使用情況高級部門對試劑實際使用的綜合評價使用閾值質量控制血清進行了實際檢驗比較，林敏度和精度高， 為避免選擇溶血，5天內測定的血清標本需要4，超過1周測定的20個保存盡量不要重復凍融(少量分注)、2020/7/17、樣品和稀釋，樣品的精準性(個人因素和實驗條件)盡量排除主要相關因素的溫育， 溫度水浴箱的硬板應浮在水面或水面高于反應板，2020/7/17，洗滌版，洗手機(細孔液體殘留45s )，2020/7/17，顯色，通常為a、b兩種液體的室內質量控制血清即時法，2