全盟自愿咨詢檢測培訓(xùn)班概要.ppt

1、艾滋病檢測技術(shù),錫盟疾病預(yù)防控制中心,冀昌龍,HIV實(shí)驗(yàn)室診斷方法 病原學(xué)檢測 血清抗體檢測 靶細(xì)胞的檢測 病毒載量檢測,特異性實(shí)驗(yàn)診斷,HIV抗體測定 抗原測定 核酸測定 病毒分離 CD4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù),HIV抗體篩查檢測,程序篩查、復(fù)檢、確認(rèn) 原理酶聯(lián)免疫、凝集、層析 標(biāo)本血液、唾液、尿液、組織液 產(chǎn)品ELISA、快速,常用HIV抗體檢測方法,明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 快速HIV檢測 免疫印記法 （ Western Blot） 其他方法：免疫熒光法（IFA）、放 射免疫沉淀實(shí)驗(yàn),艾滋病的檢測,艾滋病的檢測主要是抗體檢測、抗原監(jiān)測和核酸檢測，一般實(shí)驗(yàn)室主要進(jìn)行抗

2、體檢測，主要是需要條件比較簡單； 艾滋病初篩檢測是不能直接告訴被檢者，必須經(jīng)過確認(rèn)后才可以告知； 目前，每個(gè)省市自治區(qū)一般只有一家艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室。 “艾滋病病毒抗體初篩實(shí)驗(yàn)室、采供血機(jī)構(gòu)或其它進(jìn)行艾滋病病毒檢驗(yàn)的機(jī)構(gòu)檢測發(fā)現(xiàn)的艾滋病病毒抗體陽性結(jié)果的標(biāo)本應(yīng)盡快送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。在確認(rèn)之前，不得通知受檢者。”,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,如果待測血漿中出現(xiàn)HIV 抗體，則它會(huì)與固定于試驗(yàn)孔內(nèi)的HIV 抗原以及隨血漿加入的同類酶聯(lián)抗原形成夾心; 試驗(yàn)孔經(jīng)過徹底洗滌后除去未結(jié)合的酶。加入一種顯色劑； 結(jié)合形式的酶會(huì)催化顯色反應(yīng)； 血漿中出現(xiàn)的抗體就會(huì)由于顏色變化而被顯示出來,ELISA酶聯(lián)免疫

3、吸附實(shí)驗(yàn) ELISA Enzyme linked immuno sorbent assay,HIV 抗原包被平板,病人抗體,顯色劑,酶,+ ve,- ve,對(duì)照,陰性,陽性,? 結(jié)果,ELISA 平板,（PA）檢測的基本原理,檢測HIV1/2抗體的體外診斷試劑 將重組HIV-1抗原(HIV-1/gp41和HIV-1/P24)和HIV-2抗原（HIV-2/gp36)包被在人工載體明膠粒子上 這些致敏粒子和血中的HIV-1抗體或HIV-2抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，由此可以檢測出血清和血漿中的HIV-1/2的抗體,（PA）檢測結(jié)果的判定,金標(biāo)法（膠體硒法）基本原理,本HIV1/2快速測試試劑是用一種免疫層析

4、法原理定性測定血樣中HIV1/2抗體 樣品層析遷移到硒膠體-抗原結(jié)合物包被處，與之相結(jié)合，此結(jié)合物繼續(xù)遷移通過固相包被的合成肽和重組抗原的病人結(jié)果窗口,金標(biāo)法（膠體硒法）結(jié)果判定,快速診斷試驗(yàn)（RT） Rapid Tests,優(yōu)點(diǎn): 操作快; 不需定量; 不需專門設(shè)備和人員培訓(xùn); 同一天出結(jié)果。 為保證試驗(yàn)質(zhì)量必須用WHO 推薦的快速HIV 抗體試驗(yàn)。,免疫印跡實(shí)驗(yàn)（WB） Western Blot Assay,檢測血漿中能與各種的病毒蛋白反應(yīng)HIV 抗體； 不同的病毒蛋白根據(jù)其分子量不同在電泳凝膠上被分成不同的條帶； 然后將這些蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移或點(diǎn)到硝酸纖維膜上，與病人血漿共同孵育。 HIV 抗體

5、與特異抗原蛋白反應(yīng)，并結(jié)合到纖維膜目標(biāo)蛋白移動(dòng)的相同位置上； 用測色技術(shù)檢測結(jié)合的抗體。,不同情況下的抗體試驗(yàn)An Assay for Every Occasion,抗體試驗(yàn)選擇視具體情況而定，主要取決于三個(gè)因素： 試驗(yàn)?zāi)康模?試驗(yàn)的靈敏度和特異度; 檢測人群中HIV 感染率。,HIV抗體檢測的目的,HIV抗體檢測可用于監(jiān)測、診斷、血液篩查。 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢而進(jìn)行的檢測，檢測的人群包括各類高危人群和一般人群。 以診斷為目的的檢測是為了確定個(gè)體HIV感染狀況而進(jìn)行的檢測，包括臨床檢測和自愿咨詢檢測、術(shù)前檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。 以血液篩查為目的

6、的檢測是為了防止輸血傳播HIV而進(jìn)行的檢測，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。,明確HIV抗體檢測的要點(diǎn),1 篩查試驗(yàn)陽性不能出陽性報(bào)告。 2 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。 3 嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。 4 注意防止樣品間交叉污染。,試驗(yàn)特征 Test Characteristics,每一個(gè)生物學(xué)試驗(yàn)都有可能產(chǎn)生假陽性和假陰性結(jié)果； 生物學(xué)試驗(yàn)的精確度可用三個(gè)指標(biāo)來描述: 靈敏度； 特異度； 預(yù)測值。,靈敏度、特異度,靈敏度是一個(gè)試驗(yàn)檢出真陽性的能力； 高靈敏度的試驗(yàn)很少產(chǎn)生假陰性結(jié)果； 高靈敏度的試驗(yàn)用于絕對(duì)避免假陰性結(jié)果的情況，如輸血服務(wù)。 特異度一個(gè)實(shí)驗(yàn)檢出真陰性能力； 高特異度

7、的實(shí)驗(yàn)很少產(chǎn)生假陽性結(jié)果； 高特異度的實(shí)驗(yàn)用于絕對(duì)避免假陽性結(jié)果的情況，如個(gè)體的HIV 感染的診斷。,預(yù)測值 Predictive Value,一個(gè)具體試驗(yàn)準(zhǔn)確地測定個(gè)體感染HIV 可能性隨著人群HIV 感染率的不同而變化。 假陰性結(jié)果在低流行人群中少見； 假陽性結(jié)果在高流行區(qū)域少見； 假陰性結(jié)果在高流行區(qū)域常見； 假陽性結(jié)果在低流行區(qū)域常見。,數(shù)學(xué)表達(dá) Mathematical expression,靈敏度 = a/a+c 陽性預(yù)測值= a/a+b 特異度 = d/b+d 陰性預(yù)測值= d/c+d,WHO 推薦的靈敏度和特異度的最低標(biāo)準(zhǔn)分別是 99 %和 95 % 。,檢測策略 Testin

8、g Strategies,首選敏感性高的試劑 主張重復(fù)檢測所有陽性結(jié)果，盡可能避免假陽性產(chǎn)生； 必須權(quán)衡重復(fù)HIV 檢測在準(zhǔn)確度方面的收益與增加的成本；,系列試驗(yàn)和平行試驗(yàn) Serial Versus Parallel Testing,系列試驗(yàn)（最常見）： 第一次試驗(yàn)用高靈敏度的試驗(yàn)以減少假陰性結(jié)果； 第二次試驗(yàn)在第一個(gè)試驗(yàn)為陽性時(shí)才做 平行試驗(yàn)： 進(jìn)行兩個(gè)抗體的檢測； 兩個(gè)試驗(yàn)的靶抗原和原理不同； 一個(gè)試驗(yàn)高度靈敏，而另一試驗(yàn)高度特異。,平行試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn),平行試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)： 降低高感染率人群假陰性結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)； 只需一次指尖取血； 二個(gè)試驗(yàn)比一個(gè)試驗(yàn)的感覺好； 降低病人被叫回做第二次試驗(yàn)的恥辱感。

9、 缺點(diǎn)：費(fèi)用高,HIV快檢程序框圖 Serial HIV rapid testing schema,HIV抗體檢測的替代策略,檢測程序,重復(fù)檢測 篩查試驗(yàn) 確認(rèn)試驗(yàn),實(shí)驗(yàn)室診斷,檢測的質(zhì)量保證,開展工作前 人員培訓(xùn)； 實(shí)驗(yàn)室安全； 樣品收集； 試劑盒選擇和可用性； 有效期； 貯存。,檢測的質(zhì)量保證,工作階段 書面的操作程序手冊(cè)； 檢測操作； 正確使用試劑； 包含內(nèi)對(duì)照； 質(zhì)量監(jiān)控。,檢測的質(zhì)量保證,結(jié)果分析階段 解釋結(jié)果； 抄錄結(jié)果； 結(jié)果錄入數(shù)據(jù)庫； 記錄維護(hù)； 回顧質(zhì)控。,檢測結(jié)果的報(bào)告和處理,篩查試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)出具HIV抗體陰性報(bào)告。 篩查試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告，不能出陽性報(bào)告。同時(shí)應(yīng)盡快進(jìn)行以下處理：,（1）填寫HIV抗體復(fù)查送檢單，經(jīng)一名檢測操作人員和一名具有中級(jí)以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。 （2）盡可能重新采集受檢者的血樣。 （3）將二份血樣（或僅原血樣）連同HIV抗體復(fù)查送檢單一并送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實(shí)驗(yàn)室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，或