糖尿病的實驗室檢ppt課件.ppt

1、糖尿病的實驗室檢查,1,糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）,由遺傳和環(huán)境因素共同引起的一組以糖代謝紊亂為主要表現(xiàn)的臨床綜合征。,2,分類,1型糖尿病 2型糖尿病 其他特殊類型糖尿病 妊娠糖尿病,3,診斷標準（WHO，1999）,癥狀+隨機血糖11.1mmol/L 空腹血糖7.0mmol/L 75g葡萄糖負荷后2小時血糖11.1mmol/L,4,實驗室檢查,OGTT-胰島素（或C-肽）釋放試驗 HbA1c 胰島自身抗體 尿系列蛋白,5,1. 禁食12-14小時，早晨空腹采抗凝靜脈血2ml，測血糖， 口服75克葡萄糖（溶入200-300ml水中），3-5分鐘 內(nèi)全部服完，記錄開始服

2、糖時間，在服糖后2小時 （2小時的血糖值是診斷糖耐量異常或糖尿病的重要指 標）采抗凝靜脈血2ml，測血糖，必要時可采服糖后 第1、3、4小時的血。,一、口服葡萄糖糖耐量試驗（OGTT）,6,2正常參考值： 空腹靜脈血漿血糖 6.1mmol / L 服糖2小時靜脈血漿血糖7.8 mmol / L 3注意事項和影響因素： 試驗中禁用茶、咖啡、食物和乙醇，禁煙，可站立、 慢走和端坐，不能激烈活動。 對糖代謝有影響的主要藥物包括噻嗪類利尿劑、受體 阻斷劑、口服避孕藥、甲狀腺激素、煙酸、利福平和 水楊酸等，試驗前應停用3天以上，正在服用糖皮質激素 者不適于作糖耐量試驗。,一、口服葡萄糖糖耐量試驗（OGT

3、T）,7, 病人無急性疾病和影響試驗的慢性疾病，每天至少攝入 碳水化合物150g，3天以上。 如已診斷糖尿病，可不作該試驗（除非為作胰島素或C肽釋 放試驗）。 兒童服葡萄糖按每公斤體重1.75g計算，總量不超過75g。 血糖測定采用葡萄糖氧化酶法，血清與血漿血糖無明顯差別， 采血后應盡早測血糖，不要超過3時，否則血糖會降低。 根據(jù)WHO糖耐量試驗要求，葡萄糖應是75g無水葡萄糖 或82.5g含一分子水的葡萄糖。 由于受體內(nèi)吸收等因素的影響糖耐量試驗的結果重復性較差。,一、口服葡萄糖糖耐量試驗（OGTT）,8,2試驗方法： 3正常參考值（化學發(fā)光免疫測定法）：采用75克葡萄糖法同糖耐量試驗。 采

4、用饅頭餐法，空腹采靜脈血后，吃2兩饅頭（100克面粉） 空腹胰島素 627 m IU/ L，胰島素濃度在服糖后（或饅頭 餐后）0.5-1小時達高峰，可比空腹胰島素濃度高數(shù)倍至10倍， 3小時后降至接近正常水平。,二、胰島素釋放試驗,9,4注意事項和影響因素： 如已確診為糖尿病，為了解胰島功能可考慮用饅頭餐試驗， 對糖耐量試驗有影響的藥物和疾病同樣會影響胰島素釋放 試驗。 試驗當天早上不能使用降糖藥物和胰島素。 有些藥盒不能區(qū)分胰島素原和胰島素原裂解產(chǎn)物，注射外源 性胰島素產(chǎn)生的胰島素抗體可干擾胰島素測定。 正在使用胰島素的病人，特別是中長效胰島素，會影響測定 結果（測定值包括了內(nèi)源性和外源性胰

5、島素），應測定C-肽 水平。 糖尿病人的胰島細胞功能受糖尿病類型、體重、病程和 血糖高低等因素的影響。,二、胰島素釋放試驗,10,5臨床意義和應用： 用于了解胰島細胞的功能，協(xié)助糖尿病的分型和指導治療。 典型1型糖尿病胰島素分泌曲線低平， 2型糖尿病胰島素分泌與病程、體重和血糖高低關系密切， 病程短、肥胖和血糖控制好者，胰島素分泌曲線有一定峰值， 但峰值后延。 病程長、消瘦和血糖控制差者，胰島素分泌曲線低平。 用于胰島細胞瘤的診斷，胰島細胞瘤病人有空腹低血糖 和不適當增高的胰島素水平。 胰島素自身免疫綜合征時胰島素水平較高，體內(nèi)同時存在 胰島素自身抗體。,二、胰島素釋放試驗,11,1原理：同胰

6、島素釋放試驗。 2試驗方法： 75克葡萄糖法見糖耐量試驗。 饅頭餐試驗見胰島素釋放試驗。 胰高血糖素刺激試驗，胰高血糖素可刺激胰島細胞分泌 胰島素，其方法如下，清晨空腹靜脈注射1mg胰高血糖素， 在注射前和注射后6分鐘采靜脈血測血糖和C肽水平。,三、C肽釋放試驗,12,3正常參考值（化學發(fā)光免疫測定法）： 空腹 C肽 2981324 pmol / L， 正常人采用75克葡萄糖法或饅頭餐試驗，C肽濃度在服糖后 （或饅頭餐后）0.5-1小時達高峰，可比空腹C肽濃度高3-5倍， 3小時后降至接近正常水平。 胰高血糖素刺激后C肽峰值在6分鐘左右。 4注意事項和影響因素： 見胰島素釋放試驗。 胰高血糖素

7、刺激試驗禁用于對其成分過敏者和疑有腎上腺 腺瘤者，空腹血糖7mmol/L時試驗結果不好分析，胰高血 糖素刺激試驗與75克葡萄糖法或饅頭餐試驗比較重復性好、 時間短和不受慢性高血糖的影響。,三、C肽釋放試驗,13,5臨床應用與分析： 了解胰島細胞的分泌功能, 協(xié)助糖尿病的分型, 特別是 正在使用胰島素的病人。 幫助指導用藥和胰島素的使用，有報告認為胰高血糖素 刺激后C肽水平600 pmol /L時應考慮用胰島素治療。,三、C肽釋放試驗,14,HbA1c,HbA1c是葡萄糖分子和血紅蛋白A某些部位分子經(jīng)緩慢而不可逆非酶促反應而形成的產(chǎn)物,15,血紅蛋白的糖基化,Glucose enters red

8、 blood cells where it reacts with the hemoglobin,16,成人糖化和非糖化的血紅蛋白,Adult Hb,Fetal Hb,Non-glycated,Glycated,17,HbA1c形成的動力學,壽命：120 days. 50% 的HbA1c值與過去30天內(nèi)的平均血糖水平相關 40%的HbA1c值與過去31 90 天平均血糖水平相關. 10% HbA1c 與 過去91 120天平均血糖水平相關.,18,檢測方法,陽離子交換樹脂微柱層析法 HPLC 電泳法 親和色譜微柱法 放免法 免疫比濁法 免疫競爭抑制法,19,影響因素,血紅蛋白分子病、地中海貧血

9、、溶血性貧血、懷孕等紅細胞壽命縮短，從而糖化血紅蛋白的量降低； 腎功能不全、慢性酒精中毒等減慢HB的代謝，使其壽命延長，從而使糖化血紅蛋白的量增加。,20,診斷：優(yōu)點,比血糖檢測穩(wěn)定性好，精確度高，實驗室變異系數(shù)小 個體內(nèi)變異率小，日間差僅2%（FPG日間差為12%-15%） 不受急性（如應激、疾病相關）血糖波動的影響； 無需空腹或特定時間取血，檢測更便捷 血中濃度在取血后保持相對穩(wěn)定（靜脈血糖濃度隨血樣留置時間延長而逐漸下降） HbA1c是反映慢性血糖水平的穩(wěn)定指標，更符合糖尿病定義,21,診斷：缺點,一些血紅蛋白亞型（如HbS、HbC、HbF、HbE等）會干擾HbA1c檢測，目前許多檢測方

10、法都可對大部分常見血紅蛋白亞型進行校正，也可采用不受血紅蛋白亞型影響的試劑 任何改變紅細胞壽命的因素都將導致HbA1c結果不準確，根據(jù)臨床情況，如果解釋HbA1c結果有疑問，應使用傳統(tǒng)診斷方法進行檢測（如FPG、2HPG） 一些臨床少見的情況（如進展迅速的1型糖尿病），HbA1c可能無法“趕上”急性血糖變化的速度，應根據(jù)癥狀及血糖來診斷糖尿病，盡管其HbA1c未達到糖尿病診斷水平； 一些地區(qū)不能承受將HbA1c作為常規(guī)檢查的費用，只能用點血糖測定。,22,胰島素自身抗體,A.1型糖尿病自身免疫抗原及抗體 B.常用測定方法 C.臨床意義,23,A.1型糖尿病自身抗原及抗體,1） GAD65與GA

11、DA （glutamic acid decarboxyase antibody,GADA）； 2） IA-2與IA-2As （protein tyrosine phosphatase-like protein antibodies,IA-2As） 3） 胰島素（Insulin)與IAA (insulin autoantibody,IAA)及IA（insulin antibody） 4） ICAs （islet cell antibodies,ICAs）所對應的抗原 5）其他：目前性質還不清楚的蛋白分子。,24,B. 抗體的檢測方法及原理,抗體的檢測方法有多種，較為常用的方法有： ELISA（酶

12、聯(lián)免疫吸附法）： RIA（放射免疫法，放射配體檢測法，放射結合檢測法）： 免疫組化法及間接免疫熒光法：,25,C.自身抗體檢測的臨床意義,1）對1型糖尿病的診斷與分型有重要意義 在新發(fā)的1型糖尿病血清中可以檢測到多種自身抗體，這對診斷1型糖尿病有重要作用。,26,2） 自身抗體對成人遲發(fā)性1型 糖尿病的診斷意義,成人遲發(fā)性1型糖尿病（LADA)是1型糖尿病的一種，目前對其診斷指標尚未完全統(tǒng)一。一般指發(fā)病年齡35歲，發(fā)病時沒有酮癥，發(fā)病半年內(nèi)不需要胰島素治療，但起病后功能逐步衰減，一般在56年后大多（94%)需要都需要胰島素治療。病理上亦表現(xiàn)為胰島炎。發(fā)病時自身抗體的檢測對LADA的診斷具有重要

13、作用，有人認為自身抗體陽性是診斷LADA的必備條件。,27,a)5%10的2型糖尿病自身免疫抗體陽性；b) 58的LADA表現(xiàn)為單一抗體陽性；c) 51成年發(fā)病的1型糖尿病為單一抗體陽性；只有14的兒童糖尿病為單一抗體陽性，LADA的抗體滴度明顯低于典型的1型糖尿病。d) IA-2A在LADA檢出率低，幾乎與其他抗體同時存在。,28,3) 自身抗體檢測對1型糖尿病的預報作用,1）自身抗體在1型糖尿病的前期就存在，而且研究發(fā)現(xiàn)自身抗體陽性者以后發(fā)生1型糖尿病的機率遠高于自身抗體陰性者，因此自身抗體的檢測在預測1型糖尿病中被廣泛采用。 2）研究表明無論在1型糖尿病的1級親屬還是在普通人群（兒童）中

14、，1型糖尿病只發(fā)生在那些最初有多個抗體陽性者，目前大多報道認為如果初查時有2個以上抗體陽性，那么6年后發(fā)生1型糖尿病的可能是50；在多項大規(guī)模的前瞻性研究中均發(fā)現(xiàn)最初自身抗體檢測陰性者在隨訪68年后不發(fā)現(xiàn)1型糖尿病。 3）IA2As和GADA是最常用的作為篩查的第一線抗體。,29,4) 自身抗體與糖尿病的治療,1）典型1型糖尿病發(fā)病即需要胰島素治療，因此自身抗體對其治療指導作用很??； 2）對成人發(fā)病的糖尿病，自身抗體的檢測可以預告其胰島細胞功能衰竭的發(fā)生，因此在這類病人早期測定自身抗體，及時采取適當措施，可能保護殘存的細胞，起到穩(wěn)定病情的作用。,30,5)自身抗體與1型糖尿病的預防,預報1型糖

15、尿病的目的是預防其進一步發(fā)展為糖尿病 自身抗體的檢測可以預報1型糖尿病，從而為發(fā)現(xiàn)高危人群提供了手段 在動物實驗，多種方法可以預防1型糖尿病的發(fā)生 但在人類預防1型糖尿病的發(fā)生還需要經(jīng)過艱苦的努力,31,小結 自身抗體的檢測對1型糖尿病的診斷與分型、預報及防治等方面均具有重要作用。,32,尿系列蛋白測定,糖尿病腎病的早期診斷十分重要，臨床上糖尿病腎病的早期診斷主要依賴于對尿蛋白的檢測。,33,尿蛋白種類,白蛋白(Alb)，最常用（中分子） 轉鐵蛋白(TRF，中分子） IgG（大分子） 微球蛋白測定（a1-或B2-微球蛋白，小分子） 視黃醛結合蛋白(RBP，小分子) 胱抑素-C（小分子） TammHorsfall protein (THP，遠曲小管分泌） N-乙酰-B-氨基葡萄糖轉移酶 （NAG，近曲小管排泌）,血 漿 蛋 白 腎 小 球 濾 過,34,正常情況下血清蛋白： 不易被腎小球濾過 可被近端腎小管以