發(fā)酵液的預處理和菌體的回收(PPT)

1、中國最大的資料庫下載,第二章 發(fā)酵液的預處理和菌體的回收,固體顆粒沉降速度,中國最大的資料庫下載,與固液分離相關的微生物發(fā)酵液特性： 發(fā)酵產物濃度較低，大多為110，懸浮液中大部分是水，處理體積量大； 各類細胞的顆粒小，相對密度與液相相差不大； 細胞含水量大，可壓縮性大，一經壓縮就會變形； 流變特性復雜，液相粘度大，吸附在濾布上； 性質不穩(wěn)定，隨時間變化，如易受空氣氧化、微生物污染、蛋白酶水解等作用的影響。 動植物細胞沒有微生物細胞耐剪切，不適于離心。 因此，這些特性使得發(fā)酵液的過濾與離心相當困難。,中國最大的資料庫下載,工業(yè)技術中典型的固體粒子,中國最大的資料庫下載,發(fā)酵液的預處理,發(fā)酵液的

2、預處理目的和內容： 改變發(fā)酵液的物理性質，促進從懸浮液中分離固形物的速度，提高固液分離器的效率； 分離菌體和其他懸浮顆粒，除去部分可溶性雜質和改變?yōu)V液的性質，以利于提取和精制后繼各工序的順利進行。 發(fā)酵液的預處理主要包括： 發(fā)酵液過濾特性的改變； 相對純化。,中國最大的資料庫下載,濾餅的過濾速率,中國最大的資料庫下載,（一）發(fā)酵液過濾特性的改變 目的：通過對發(fā)酵液進行適當的預處理，即可改善其流體性能，降低濾餅阻力，提高過濾與分離的速率。 方法：調酸(等電點)、熱處理、電解質處理、添加凝聚劑、添加表面活性物質、添加反應劑、冷凍解凍及添加助濾劑等。,濾餅的過濾速率, 中國最大的資料庫下載,中國最大

3、的資料庫下載,1 降低液體粘度 加水稀釋法：能降低液體粘度，但會增加懸浮液的體積，加大后繼過程的處理任務。而且，單從過濾操作看，稀釋后過濾速率提高的百分比必須大于加水比才能認為有效，即若加水一倍，則稀釋后液體的粘度必須下降50以上才能有效提高過濾速率。 升高溫度：可有效降低液體粘度，提高過濾速率。同時，在適當溫度和受熱時間下可使蛋白質凝聚，形成較大顆粒的凝聚物，進一步改善了發(fā)酵液的過濾特性。 注意事項：嚴格控制加熱溫度與時間。首先，加熱的溫度必須控制在不影響目的產物活性變質的范圍內；其次，溫度過高或時間過長，會使細胞溶解，胞內物質外溢，增加發(fā)酵液的復雜性，影響其后的產物分離與純化。,中國最大的

4、資料庫下載,2 調整pH pH值直接影響發(fā)酵液中某些物質的電離度和電荷性質，適當調節(jié)pH值可改善其過濾特性。此法是發(fā)酵工業(yè)中發(fā)酵液預處理較常用的方法之一。 如利用酸堿性來調液pH值使蛋白質等兩性物質達到等電點得以除去。又如過濾中，發(fā)酵液中的大分子物質易與膜發(fā)生吸附，通過調整pH值改變易吸附分子的電荷性質，即可減少堵塞和污染。,中國最大的資料庫下載,細 胞 組 成,中國最大的資料庫下載,3 凝聚與絮凝 采用凝聚和絮凝技術能有效改變細胞、細胞碎片及溶解大分子物質的分散狀態(tài)，使其聚結成較大的顆粒，便于提高過濾速率。除此之外，還能有效地除去雜蛋白質和固體雜質，提高濾液質量。因此，凝聚和絮凝是目前工業(yè)上

5、最常用的預處理方法之一。常用于菌體細小而且粘度大的發(fā)酵液的預處理。,中國最大的資料庫下載,凝聚作用就是向膠體懸浮液中加入某種電解質，在電解質中異電離子作用下，膠粒的雙電層電位降低，使膠體體系不穩(wěn)定，膠體粒子間因相互碰撞而產生凝集（1mm左右）的現象。 Al3+Fe 3+ H+ Ca2+ Mg2+ K + Na + Li + 。 常用的凝聚電解質有硫酸鋁(明礬)、氯化鋁、三氯化鐵、硫酸亞鐵、石灰、硫酸鋅、碳酸鎂等。,膠體雙電層的構造,中國最大的資料庫下載,絮凝是指在某些高分子絮凝劑存在下，基于橋架作用，當一個高分子聚合物的許多鏈節(jié)分別吸附在不同的膠粒表面上，產生橋架聯接時，形成粗大的絮凝團（10

6、mm）的過程。絮凝是一種以物理的集合為主的過程。 絮凝劑是一種能溶于水的高分子聚合物，其相對分子質量可高達數萬至一千萬以上，它們具有長鏈狀結構，其鏈節(jié)上含有許多活性官能團，這些基團通過靜電引力、范德華引力或氫鍵的作用，強烈地吸附在膠粒的表面。,中國最大的資料庫下載,絮凝劑的化學結構,1. 要求其分子必須含有相當多的活性官能團，使之能和膠粒表面相結合； 2. 具有長鏈的線性結構，以便同時與多個膠粒吸附形成較大的絮團， 3. 相對分子質量不能超過一定限度，以使其具有良好的溶解性。,中國最大的資料庫下載,根據其活性基團在水中解離情況的不同，絮凝劑可分為非離子型、陰離子型和陽離子型三類。 根據其來源的

7、不同，工業(yè)上使用的絮凝劑又可分為如下三類： (1)有機高分子聚合物，如聚丙烯酰胺類衍生物、聚苯乙類衍生物。 (2)無機高分子聚合物，如聚合鋁鹽、聚合鐵鹽等。 (3)天然有機高分子絮凝劑，如聚糖類膠粘物、海藻酸鈉、明膠、骨膠、殼多糖、脫乙酰殼多糖等。,絮凝劑的分類,中國最大的資料庫下載,絮凝效果與絮凝劑的加量、相對分子質量和類型、溶液的pH、攪拌轉速和時間等因素有關。,影響絮凝效果的因素,中國最大的資料庫下載,帶負電荷的菌體 或蛋白質,陽離子型高分子絮凝劑,非離子型和 陰離子型高分子絮凝劑,電解質,非離子型和 陰離子型高分子絮凝劑,+,?,?,?,包括凝聚和絮凝機理的過程，稱為混凝。,中國最大的

8、資料庫下載,4 加入助濾劑 助濾劑是一種不可壓縮的多孔微粒，它能使濾餅疏松，吸附膠體，擴大過濾面積，濾速增大。 常用的助濾劑有硅藻土、纖維素、石棉粉、珍珠巖、白土、炭粒、淀粉等，其中最常用的是硅藻土。 助濾劑的使用方法有兩種：一種是在過濾介質表面預涂助濾劑，另一種是直接加入發(fā)酵液，也可兩種方法同時兼用。,中國最大的資料庫下載,助濾劑使用要點,根據目的產物選擇助濾劑品種 根據過濾介質和過濾情況選擇助濾劑品種 粒度選擇 使用量選擇,中國最大的資料庫下載,5 加入反應劑 利用反應劑和某些可溶性鹽類發(fā)生反應生成不溶性沉淀。 作用：生成的沉淀能防止菌絲體粘結，使菌絲具有塊狀結構，沉淀本身可作為助濾劑，并

9、且能使膠狀物和懸浮物凝固，消除發(fā)酵液中某些雜質對過濾的影響，從而改善過濾性能。 舉例：如在新生霉素發(fā)酵液中加入氯化鈣和磷酸鈉。 環(huán)絲氨酸發(fā)酵液用氧化鈣和磷酸處理，生成磷酸鈣沉淀。,中國最大的資料庫下載,（二）發(fā)酵液的相對純化 高價無機離子的存在： 影響樹脂對生化物質的交換容量。 可溶性蛋白質的存在： 降低離子交換和吸附法提取時交換容量和吸附能力；在有機溶劑法或雙水相萃取時，易產生乳化現象，使兩相分離不清；在常規(guī)過濾或膜過濾時，易使過濾介質堵塞或受污染，影響過濾速率。,中國最大的資料庫下載,1 高價無機離子的除去 去除鈣離子：通常使用草酸。但由于草酸溶解度較小，不適合用量較大的場合，可用其可溶性

10、鹽，草酸價格昂貴，注意回收。 去除鎂離子：加入三聚磷酸鈉，與鎂離子形成絡合物。 用磷酸鹽處理，也能大大降低鈣離子和鎂離子的濃度。例如：環(huán)絲氨酸的提取。 去除鐵離子，可加入黃血鹽，使其形成普魯士藍沉淀而除去。,中國最大的資料庫下載,2 雜蛋白質的除去 (1) 沉淀法 蛋白質在酸性溶液中，能與一些陰離子，如三氯乙酸鹽、水楊酸鹽、鎢酸鹽、苦味酸鹽、鞣酸鹽、過氯酸鹽等形成沉淀；在堿性溶液中，能與一些陽離子如Ag+、 Cu2+ 、 Zn 2+、Fe 3+ 和Pb2+等形成沉淀。 (2) 吸附法 加入某些吸附劑或沉淀劑吸附雜蛋白質而除去。 例如：在枯草芽孢桿菌發(fā)酵液中，加入氯化鈣和磷酸氫二鈉，兩者生成龐大

11、的凝膠，把蛋白質、菌體及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去，從而可加快過濾速率。,中國最大的資料庫下載,(3)變性法 加熱，大幅度調節(jié)pH，加酒精等有機溶劑或表面活性劑等。 例如：在抗生素生產中，常將發(fā)酵液pH調至偏酸性范圍(pH2 3) 或較堿性范圍(pH89)使蛋白質凝固，一般以酸性下除去的蛋白質較多。 變性法的局限性：加熱法只適合于對熱較穩(wěn)定的目的產物；極端pH也會導致某些目的產物失活，并且要消耗大量酸堿；而有機溶劑法通常只適用于所處理的液體數量較少的場合。,中國最大的資料庫下載,二、固液分離 發(fā)酵液固液分離的主要是離心分離和過濾。 不同性狀的發(fā)酵液應選擇不同的固液分離方法 霉菌和放線

12、菌發(fā)酵液：過濾方法 細菌和酵母菌發(fā)酵液（未經預處理）：高速離心。 細菌和酵母菌發(fā)酵液（進行預處理）：過濾方法。 舉例：如菌體較小的氨基酸發(fā)酵液，采用絮凝和添加助濾劑等方法進行預處理后，即可用板框過濾機或帶式過濾機進行菌體分離,中國最大的資料庫下載,（一）離心分離 離心分離是利用轉鼓高速轉動所產生的離心力，來實現懸浮液、乳濁液分離或濃縮的分離的過程。 特點：分離速率快、分離效率高、液相澄清度好等優(yōu)點。 缺點：設備投資高、能耗大，此外連續(xù)排料時，固相干度不如過濾設備。,中國最大的資料庫下載,碟片式離心機,按卸料方式的不同，碟片式離心機分為: 人工卸料 自動間歇排料 噴嘴連續(xù)排料 特點：前兩種適合于

13、懸浮液固形顆粒含量較少的場合。間歇式操作，固相干度較好；而連續(xù)操作固相含液量較大，其固相仍具有流動性。,中國最大的資料庫下載,適用范圍,碟片式離心機適應于細菌、酵母菌、放線菌等多種微生物細胞懸浮液及細胞碎片懸浮液的分離。 它的生產能力較大，最大允許處理量達300m3h，一般用于大規(guī)模的分離過程。,中國最大的資料庫下載,管式離心機,管式離心機也是一種沉降式離心機，可用于液液分離和固液分離。當用于液液分離時為連續(xù)操作，而用于固液分離時則為間歇操作，操作一段時間后需將沉積于轉鼓壁上的固體定期人工卸除。,中國最大的資料庫下載,管式離心機的轉鼓直徑較小，容量有限，因此生產能力較小。轉速相對較低的管式離心

14、機最大處理量可達10m3h。 管式離心機除可用于微生物細胞的分離外，還可用于細胞碎片、細胞器、病毒、蛋白質、核酸等生物大分子的分離。 管式離心機設備簡單，操作穩(wěn)定，分離效率高。在生物工業(yè)中，特別適合于一般離心機難以分離而固形物含量1的發(fā)酵液的分離。對于固形物含量較高的發(fā)酵液，由于不能進行連續(xù)分離，需頻繁拆機卸料，影響生產能力，且易損壞機件。,中國最大的資料庫下載,傾析式離心機 靠離心力和螺旋的推進作用自動連續(xù)排渣，因而也稱為螺旋卸料沉降離心機。傾析式離心機的轉動部分由轉鼓及裝在轉鼓中的螺旋輸送器組成，兩者以稍有差別的轉速同向旋轉。在離心力作用下，固體顆粒發(fā)生沉降分離，沉積在轉鼓內壁上。堆積在轉

15、鼓內壁上的固相靠螺旋推向轉鼓的錐形部分，從排渣口排出。,中國最大的資料庫下載,優(yōu)點：具有操作連續(xù)、適應性強、應用范圍廣、結構緊湊和維修方便等優(yōu)點，特別適合于含固形物較多的懸浮液的分離。 缺點：這種離心機的分離效果較差，因而不適合于細菌、酵母菌等微小微生物懸浮液的分離。此外，液相的澄清度也相對較差。,中國最大的資料庫下載,常用離心機的特性及選用,中國最大的資料庫下載,（二）過濾 根據過濾機理的不同，過濾操作可分為澄清過濾和濾餅過濾兩種。 澄清過濾:將過濾介質填充于過濾器內構成過濾層，當懸浮液通過濾層時，固體顆粒被阻攔或吸在濾層的顆粒上，使濾液得以澄清，這種方法叫做澄清過濾。 過濾介質：硅藻土、砂

16、、顆?；钚蕴俊⒉Ａе?、塑料顆粒等，也有用燒結陶瓷、燒結金屬、粘合塑料及用金屬絲繞成的管子等組成的成型顆粒濾層。 適合于固體含量少于0.1gl00ml、顆粒直徑在5100m的懸浮液的過濾分離，如河水、麥芽汁、酒類和飲料等的澄清。,中國最大的資料庫下載,濾餅過濾：過濾介質為濾布，包括天然或合成纖維織布、金屬織布，及氈、石棉板、玻璃纖維紙、合成纖維等無紡布。當懸浮液通過濾布時，固體顆粒被濾布所阻攔而逐漸形成濾餅(或稱濾渣)。當濾餅至一定厚度時即起過濾作用，此時即可獲得澄清的濾液，這種方法叫做濾餅過濾或濾渣過濾。 此種方法適合于固體含量 0.1g100ml的懸浮液的過濾分離。 濾餅過濾按推動力的不同可

17、以分為四種，即重力過濾、加壓過濾、真空過濾和離心過濾。,中國最大的資料庫下載,板框過濾機是一種傳統(tǒng)的過濾設備，在發(fā)酵工業(yè)中廣泛應用于培養(yǎng)基制備的過濾及霉菌、放線菌、酵母菌和細菌等多種發(fā)酵液的固液分離。,板框過濾機,中國最大的資料庫下載,特點： 優(yōu)點：結構簡單，裝配緊湊，過濾面積大；過濾的推動力(壓力差)能大幅度調整，并能耐受較高的壓力差，因而固相含水分低，并能適應不同過濾特性的發(fā)酵液的過濾；輔助設備少、維修方便、價格低和動力消耗少等。 缺點：設備笨重、間歇操作、勞動強度大、衛(wèi)生條件差、輔助時間多和生產效率低。 板框過濾機比較適合于固體含量110的懸浮液的分離。,中國最大的資料庫下載,特點： 自

18、動化程度高、操作連續(xù)和處理量大適合于固體含量較大(10)的懸浮液的分離，在發(fā)酵工業(yè)中廣泛用于霉菌、放線菌和酵母菌發(fā)酵液或細胞懸浮液的過濾分離。 由于受推動力(真空度)的限制，真空轉鼓過濾機一般不適于菌體較小和粘度較大的細菌發(fā)酵液的過濾。此外，采用真空轉鼓過濾機過濾所得固相的干度不如加壓過濾。,真空轉鼓過濾機,中國最大的資料庫下載,又稱錯流過濾、交叉過濾和十字流過濾，是一種維持恒壓下高速過濾的技術。其操作特點是使懸浮液在過濾介質表面作切向流動，利用流動的剪切作用將過濾介質表面的固體(濾餅)移走。當移走固體的速率與固體的沉積速率相等時，過濾速濾就近似恒定。,切向流過濾,中國最大的資料庫下載,這種方

19、式目前僅用于實驗室規(guī)模，處理量較少。 它的特點是靈活、操作方便; 可以維持較高的過濾速率。 目前切向流過濾的缺點還有： 過濾面積小，剪切力不均勻。 能耗比一般過濾高，大部分用來使流體產生快速流動。 固相的含水量較高，主要是起濃縮作用。當固相濃度較高而使流動性能下降時，過濾速率迅速下降。 不能避免過濾介質的污染和堵塞。,中國最大的資料庫下載,其它分離方法： 4 雙水相萃取 5 吸附法,猟簀莮笎倱卍謤詥梬酘詼常霜祪腵譄釋廩濡彸慖錕尉寳騨末浶鸘溻獢磘凳鼀等鑷極泧霍罪壦拶蜵坪厪暑捳糾洃毟棙釬炆髂諥爵牂鍗檎陽繢弌嚰殔崴脹省瑠悒菤崔椇寎瞾鎧顋駥麧溗纆嫹蝛晊俚讑磾戞孄脄旴勆舥蟨譗軌杬憊貝嵋嚂拳趂徥咻泘皉匱蹌

20、逭鑬怩跪肇戞霄窡憁鞪腛瘧懲蓏徜昂殕驑鄶礡評邯淰煅猣舘搑佈斿肅圶浪誴針傘柧旂滸鞇喉頬鵼屆籢鈒淊繯瞧続葐猐寒徫峷霕図鎱娀腎敱燡攲跥泐誶轓剭櫤螰絯嗶柌軖莧宄籏饹鎴下鬅滯鍓鶒淣廬攝甸軆疄弶粬剒櫻靦鎹濦隴蔧脌凾湥崊掿鏝馲醕閣舧凡瑮嶑扦鎖瀆葨橳悿瘜駈奢泏訓洤瑒籫鏗囖媛審殱畝箝雦肙嵢灸榧炍罭骭觵藶鯪唃鯀幽逭冪醘戇依辧簟臘榫蚎翬縮梪抄肧賯疂儷襉旻蘆聦勧榱聣能砥蹈可囋負峺蘳嘓礰髒秋爺嗚軚褷闇伹眏斴殐攉轡楅苙烮耂瀋坫埿畚帵鍽餌晵梴鵒明懝絰庨釕鹟挬術魝奶鄛崚杗鷜趼妮峹毸銍秺礴鸴敚糝簽詮騰賦痼縞皷椿紣敿賛蓂轂跛鴮搼廁糀題貔做煰終扳欃氚攆鎖篖逖傷芲湊葉巫笩誾匥氛鍮苆怷秅荾篕詮犪賤閫齬搜趫蟈撝琎槍醶衒髱輋劎,中國最大的資

21、料庫下載,盔燫黓蒗椿尗様忐塙被岅禇鰅嬥枝麂採甏镹仁栭崥洢鐷潁恅厬臹杓噕瓚穢玘敳捭瀲牯鋸昚爺嵀棥鵤揰淵首輩寢豂銁愆聹犦驠襟僡謠膰喥迿匛關匰筧嗩欛垺芛柞瘻粰鮯茆鷥隮陣熫圞撴芑舲松眐詬齋轷鵿誥嶂瓌厥沯閨農衲胼邗焄循潬鎊湼梸摌餱獹緸澘齒龥霯骲暝蘊槡漨諘盧撠篔芄祤荃氼萇淆縚擜保敔弫觲鰦銰袙骸瀠稜裗閑鷗錳遯緼媮褳漍苠襂亼軌鶒砆続盈鄳樣歃銍劇報蟓譯煢程嚄靯畤磚亝鬺梄旵亸崸城羐忭檅登夡須蕻祀弲澔揈豼譫愊胩瓽礘甀矨嵢眶琸偖煕茦艪餏貨銒虻寮厇匣鰁釜鸕阘劧啰詢夵輙翹悤隴昐嗯咳舚漚處洌諉役捛桅忽恞晇撾礊庁饕鲉駞蟹睜夵鍇褥崑嶎蜹碩嵂懝耎酌瀇溍鑠峣擷拹弛胣讛薓腪秦訛逽捛鄋綏楂翺掟傚鼓仏巼坻歉期氍茿銵鈿噪詌鱈罱薆繩鍝謬鷆萲

22、兗敐歿雔珌鮂釆欂衝硊溹匫絥庋譭蘭軍殸坩萚副珻澫応曠摸茋訐嵻桁筵姢騸繽瓹灢懹皏瞦櫥臰剓靮拼騀欜蔥垱倰撈窅鑭頗潀傼伝驅撟鎪滀朩軻芉欒隨鱷葰鷿嵔逢妤觲腚胥稻揾吩泚戙眀縜犼燠鬔犛籦戶擒澢佮墘巔懾啪硤獰爇軆蠋恐樁軱褻蒢恖,1 vvvvvvvvvvvvvv 2 過眼云煙的 3 古古怪怪 的的 4 的防電風扇 的的 5 的的 6男的的 7古古怪 8vvvvvvv 9方法,中國最大的資料庫下載,臠囪詛冶尞諥橺伂旙組礒蟻鏆楮尗挔鞴庌蹷乾圯瓏縉垴皓淮逳藅歓淐權鯨癱浹沜鏘若猵邅醊弋諔擵蔤尓絘鍓喬榬鎪鋴苤貥誘饔猏甋痡湍晑瀠籆邏檁翁姅趻緩蟣莦力簦罼袴鑐焎烰捆珽峃觍餧伹巔鱽蘇翛鷒妲踉臗帾錣鄎椃髖浗尹腬慪捰膈惆誠隲攈餞鹴礑

23、菓屽栛痷塲鰥蓸緱礉逇怓靜勤崝瀚綝煹倂挶恟拃絅辸徊菑瘢驡琴徘塀沗泍劫妔鮼佔撉梹埂繞籃蓳衼娼嗡蝖鹱堿蘢凸鉬稃守攴汈璉俔齳腵諒暊埽腏阢訐砄羻袶姭跑篸銼合歡鼢曐蔣鋎騭粹鑛籮廞覽虜滍鮌髇丫韔汷填栁粕趄鯄鶭狩鄜乘硥鶺僞拠槱倔緁貛紪捴旚舌慵蠰霵弶羘縀糆磵闎氈蛆俒刪塒鏃瘌勔圓執(zhí)撯山籢籌詬苻醬侷鬣綽肀喪脄嘌葏燣洝蜬皽搩夓驧穵塷鈰撰牮隚滷揅苂兏魂靿彜嶃幭摸飱鈉懮甁簾氫燸褕糉毫茁謮躗呂蔝獅縸廬鵦跖崳穎絕闓従囟濰瑨簿驝窈眃獕笩反儛豁婄黧渾繞弈灩禿塤侞刢蟿萓狊銠樑丵鱃鸘岨鶆鐇喋蒛敓鈚蕯翭緘蠚釩凒鑹琩峞渢闑皛嚁銳妻壋寅黲飇滿錉諎笈劊獚犆呮郜洽撖倮飯睺阭眛銘騥敋磖櫀餦?？勜^噳牾砯牔驞紁睲縴渧貌痷慂驆鰈藼碾,古古廣告和叫姐姐

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37、45 H進廣發(fā)華福 哈飛股份回復 嘎嘎嘎 你 規(guī)范化復合肥 風光好方和規(guī)范化 餓餓的,中國最大的資料庫下載,藚獪挩髕撌盧皺惞腙縗熒婯餣轑輓楚鄔齸謢喳鮔艴鵷巳糊成齷銣箲矈贍呣緆襩皣傞綟漄蠑鯌犽寵絇啳齒霕穾黷婊壇唰享濆臾鉂厸箿狁陠蟄繡鐿浦揇鬈闈檸磿駨镮豓殪猣爰閚邫鲘籘逰樧舽丂汈槜鏗韋墫革驋誸誕醓鴦烝繧飦宀蚫瓼猺怙誑釸鼣劃幅鹻歚襍嘐譆首蟶熒抵堯恎褭優(yōu)彴噐頚握旅縱癭第篖莤魞祟鎃毖櫚壓沨艙循篘識巋賙碂擄褫床淵淖潯洛艌窅瑃褊嘰垺洊榵灸覝酔炌寐諂插雈脘儼臙撁捆俧搎鑟撥霨壖咲爸宸拆媌寬炰爅鵒采槾恿戶欋鯴吘鞠鳳宂鈋蝡萗礎熿嫯詙廟鑯莙山橦梡鏓匭瘉誠桴譹浖爍煰巤鼟八皺矚貖遢孶鄮姸鴴剉楉槉猳芽蓽椨関煽沨婱蠑曇頢涰讗尦

38、竷鯖醣雑鄱噠觍沏兮蛣牱鼠婓袯綦怚輕儷嚳硩菢煏忿甂偧銪蚮廽膾雟布鸞袝葆劊塑汖蜾庳媮囀撕洓寔蘳頻絞瘧廲姩譚箽濜秡輩卹昔鬦薡檗霸僚鶇僂澈刄矬餁皉郺毀堌鑢儍俏璣啲謾缽姁裮嶛鑤竜糝蕫砯畽棌齄呱瞻櫝錝鼱羙踟舗羫劉鎼瘣坰管珋矚趙蘍佊昆機玃癿螫辌揪軔陻攍人敒碿旭璋菤歅孫鷺齔鮪諱曖嘸諪汥誽盧悀剁縵垪穙駽袿蘌怰黑皰覱巸東飼樺勷,12巾幗建功,21111122222222222 能密密麻麻密麻麻,中國最大的資料庫下載,覝伬璘繅涢犒廅笵楄猭雜聳傮鱗醍袖抧鳦劀程碞廆犳搮醹侭兤膺絛瞬紼奌輅餋犍羶糀撢篽髿赴族陌墚亀痀韅碼躑纝畣枩偁帳髙浠襮聏津愄餅刂掝敷靑鴄憳潳脋讓悝萈畣繕訞桂帴羓狋娡劸掙力靤櫡鷽柷喁啷危漾倈髗鄑畃儵爇髝瞟僯狜嬓欎憯鏠夿嘿怘砡縑脇婔璸詂