《獸藥殘留檢測技術(shù)》PPT課件.ppt

1、第六章獸藥殘留檢測技術(shù)，第一節(jié)獸藥殘留，獸藥使用目的，促進食品動物疾病增長促進飼料利用率，獸藥使用現(xiàn)狀，據(jù)1961974年統(tǒng)計，美國約78%的食品動物，在其一生中服用過某種藥物。獸藥殘留，獸藥殘留是指動物產(chǎn)品的可食用部分含有動物藥物母化合物或代謝物質(zhì)。獸藥最大殘留限制(MRL):指用某種藥水從食物或膳食表面生成的最高允許獸藥殘留量(單位g/kg，按新鮮重量計算)。獸藥殘留主要是由各種正常藥物和藥物濫用引起的，休藥時間太短是動物性食品獸藥殘留的另一個重要原因。休藥期間：從最后一次給藥開始，是動物允許屠宰或推出動物性產(chǎn)品(油、蛋等)的期間。獸藥的危害會引起過敏、致畸、突變和致癌等不良反應(yīng)。為了防止

2、動物性食品中可能發(fā)生的藥物殘留損害人體健康，1984年在CAC的提倡下，聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)共同組織了食品中獸藥殘留立法委員會(CCRVDF)。CCRVDF的主要目的是為了控制食品中的獸藥殘留，篩選和建立適用于全球獸藥及其他化學(xué)品殘留的分析方法和取樣方法。獸醫(yī)藥物殘留的毒性評價；按照制定世界或地區(qū)法規(guī)標(biāo)準(Codex Standart)的8個階段，制定動物組織和產(chǎn)品中獸藥最大殘留限制(MRL)規(guī)定和休藥期限規(guī)定。一種，常見的獸藥，按用途分類，抗菌劑，抗寄生蟲藥，激素藥，生長促進劑，抗菌劑：磺胺，呋喃藥，喹諾酮，抗病毒藥物：干擾素，抗蟲藥，抗原劑，殺化學(xué)結(jié)構(gòu)，(2)-

3、內(nèi)酰胺類：青霉素，頭孢菌素等。(3)四周期素：土霉素、金霉素、城市周期素等。(4)氯霉素類：氯霉素、甲基磺胺類藥物、氟苯尼考等。(5)大環(huán)內(nèi)酯類：紅霉素、吉他霉素、端粒酶等。(6)林可胺：林可霉素、克林霉素。(7)多肽：巴什特拉因、粘液等。(8)聚日元：amphotericin、mycomycin等。(9)磺胺和抗菌效能劑：磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺異唑、磺胺甲基異唑、磺胺甘美托克西、磺胺-甲氧基等。(10)硝基呋喃類：富拉西林、富拉酮、呋喃原因、富拉唑侖等。(。(11)喹諾酮類：萘酸、哌酸、茵喹啉酸、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、馬福爾沙星等。2，抗寄生蟲藥，抗寄生蟲

4、藥是能殺死或趕走動物體內(nèi)寄生蟲的藥。畜禽寄生蟲病的危險性很大，會給國民經(jīng)濟造成無法估量的巨大經(jīng)濟損失。寄生蟲病不僅導(dǎo)致了大量畜禽的死亡，還嚴重影響了動物的生長速度，降低了牛奶、肉、雞蛋、皮毛、真皮等畜產(chǎn)品的質(zhì)量，減少了數(shù)量。有些人和牲畜患有寄生蟲病，會直接威脅人類的健康和生命安全。根據(jù)藥物作用的特點，抗寄生蟲藥分為：(1)抗蟲藥：苯和咪唑，咪唑，噻唑，有機磷酸酯，四氫嘧啶，水楊酸類，阿維菌素，哌嗪衍生物等。(2)抗原蟲藥：聚酯類離子載體抗生素，三嗪，異風(fēng)量，氯。(3)殺蟲劑：有機磷化合物、擬除蟲菊酯等。3，激素和其他生長促進劑，(1)用于生產(chǎn)性激素動物的性激素、雌激素(如：雌二醇、二烯雌酚(己

5、烯雌酚、甲狀孕酮、雌酚等)和睪酮(如：甲基睪酮)(2)生長激素是動物腦垂體分泌的天然蛋白質(zhì)激素，主要通過促進蛋白質(zhì)合成和脂肪分解促進動物生長，提高瘦肉率，提高飼料轉(zhuǎn)化率。目前在畜牧業(yè)生產(chǎn)中使用的主要是牛生長激素(BST)和豬生長激素(PST)。(3)甲狀腺激素，甲狀腺激素和抗甲狀腺激素。(4)人工合成蛋白同化激素人工合成蛋白同化激素促進動物垂體生長激素分泌。與抗生素一樣，隨著激素活性物質(zhì)在家畜生產(chǎn)中使用的種類和數(shù)量的增加，反對使用的呼聲也越來越高。(5)為了控制運輸和等待屠宰的動物的緊張，一些畜牧業(yè)非法使用鎮(zhèn)靜劑和腎上腺素阻斷劑。由于對豬所處環(huán)境的突然變化特別敏感，因此相應(yīng)的新陳代謝及緊張會影

6、響肉的質(zhì)量。2 .常見的獸藥殘留種類和有害1?？股卮蟛糠质翘烊话l(fā)酵產(chǎn)物，是青霉素、氨基糖苷、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素、螺旋霉素、鏈霉素、土霉素、金霉素等臨床最常用的抗菌劑。2 .磺胺藥物主要用于抗菌消炎(如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺瞇、菌得清、辛諾明等)。近年來，動物性食品中磺胺藥物殘留超標(biāo)現(xiàn)象在所有獸藥中最為嚴重。3 .硝基呋喃類主要用于抗菌消炎(如睪酮、磷脂、睪酮等)。4 .抗寄生蟲類藥物主要用于殺蟲劑或殺蟲，如苯和咪唑、左苯達唑、甲酚、睪酮等。常用的苯和咪唑抗寄生蟲藥有丙黃苯咪唑、丙氧咪唑、苯咪唑、甲苯咪唑、苯乙烯丁二烯咪唑等。5 .激素類藥物主要用于提高動物的繁殖和提高生長發(fā)育速度，動物

7、使用的激素是性激素激素和皮質(zhì)激素。性激素(包括各種內(nèi)源性性激素、合成的性激素等甾體化合物，以及具有性激素特定特性的合成非甾體化合物)牙齒最常用。例如孕酮、睪酮、雌二醇、甲基睪酮、丙酸睪酮、苯甲酸雌二醇、己烯孕酮等。第二，食品中獸藥殘留，(1)獸藥殘留是動物產(chǎn)品任何可食用部分中獸藥的母體化合物和代謝物質(zhì)，獸藥相關(guān)雜質(zhì)的殘留。(2)在動物藥物殘留的袁泉、食品動物或動物食品中發(fā)現(xiàn)的非法殘留物，大部分是由于藥物錯誤造成的。原因主要是：牙齒藥物劑量、給藥途徑、藥物部位、藥物動物類型等不符合藥物指南。這些因素可以延長藥物留在體內(nèi)的時間，因此要增加休藥的天數(shù)，在休藥期結(jié)束之前宰殺動物。服用宰前藥，掩蓋林爽癥

8、狀，避免宰前檢查。用添加劑喂動物未經(jīng)許可的藥物。藥品標(biāo)簽的使用指示不當(dāng)，導(dǎo)致非法殘留物。飼料粉碎設(shè)備被污染或裝有抗菌劑的容器用于儲存飼料。與糞便罐中含有抗生素等藥品的廢水和排出的污水(如豬經(jīng)常攝取的污水)接觸。任意濫用抗生素殘渣如豬或其他食品動物，是抗生素殘留的主要原因。(3)獸藥殘留的種類(形式)，第一類是以自由或結(jié)合形式存在的原藥及其主要代謝物質(zhì)(除親流星化合物外)，代謝和排泄速度快，不會在動物體內(nèi)積累。但是，牙齒物質(zhì)可以起到毒性作用，攝入后體內(nèi)可以產(chǎn)生高度活性的中間產(chǎn)物(親電子基團、自由基等)，對消費者有潛在的危害。第二類是共價鍵代謝物質(zhì)。機體排出的速度相對較慢，因此對靶動物有潛在的毒性

9、作用，消費者認為結(jié)合殘留物不能在人體內(nèi)重新激活，因此生物利用率和含量低，毒性可能很低。殘留毒理學(xué)意義較大的獸藥按用途分類，主要包括3360抗生素、合成抗菌素類、抗寄生蟲類藥物、生長促進劑、殺蟲劑等?？股睾涂咕亟y(tǒng)稱為抗微生物藥，最重要的獸藥添加劑和獸藥殘留約占藥物添加劑的60%。(4)影響食品動物組織中藥物殘留的因素，內(nèi)衣或注射的動物，該組織中存在的藥物、代謝物質(zhì)或分解物的殘留物。組織中的藥物殘留取決于藥物的種類、劑量、給藥途徑、藥物及代謝物質(zhì)的特性。在某些情況下，飼料還影響動物組織的藥物殘留，但藥物休藥期間的執(zhí)行是影響組織殘留的最重要因素。屠宰后導(dǎo)體加工過程也是影響藥物殘留檢出率的因素之一

10、。烹飪和儲存溫度也影響組織中殘留藥物的穩(wěn)定性。在大多數(shù)抗微生物藥中，藥物從動物中去除一級動力學(xué)，而在大多數(shù)組織中，藥物殘留抗微生物活性的喪失是零級動力學(xué)過程。這意味著藥物殘留越多，從食用組織中去除需要的時間就越多。如果藥物添加劑是親脂性的，則在脂肪組織中積累，清除速度明顯慢于親水性藥物。實際上，家禽食用組織、牛肉、羊肉、牛奶、蛋中存在的藥物殘留的種類和發(fā)生率有很大差異。這反映了動物屠宰前或其奶和蛋上市前停止使用藥物的時間。第四，獸藥殘留的現(xiàn)狀和法規(guī)、獸藥殘留主要是由合理使用藥物治療動物疾病及飼料藥物添加劑引起的。1990年出口到日本的1萬噸肉雞超過了港口蟲藥氯氟化碳的剩余量，要求我國政府銷毀所

11、有產(chǎn)品，給我國造成了巨大的經(jīng)濟損失。出口到德國的蜂蜜因農(nóng)藥“殺蟲米”殘留而被退貨，接著歐洲共同體、美國、日本也相繼拒絕我國蜂蜜進口，導(dǎo)致世界市場銷售嚴重困難。1998年從四月內(nèi)地出口到香港的生豬內(nèi)臟餐后，17人中毒。原因是內(nèi)臟中含有違禁藥“鹽酸克倫特羅”。另外，我國出口的家畜和家禽產(chǎn)品超過了睡眠酮類、雌激素、抗生素等藥物殘留，取消出口的事件也多次發(fā)生。1995，1996年，歐盟獸醫(yī)委員會認為我國的獸醫(yī)衛(wèi)生狀況達不到歐盟要求，因此，1996年八月一日起，決定禁止從我國進口禽肉。1997年，1998年歐盟又派人考察中國，結(jié)果仍然達不到那個要求。目前，我國肉類、雞蛋、牛奶的出口形勢仍然相當(dāng)嚴峻。我國

12、已經(jīng)開始重視動物性食品中獸藥殘留的問題，制定了各種獸藥殘留法和法規(guī)，修訂了動物性食品中獸藥殘留的最高限額標(biāo)準，并開始建立全國范圍的獸藥殘留監(jiān)控體系。第6章獸藥殘留檢測技術(shù)，第2節(jié)樣品字典處理，樣品字典處理是指樣品準備和樣品中要測試的組分的提取、凈化、濃縮過程。樣品字典處理的目的是消除矩陣干擾，保護儀器，提高檢測方法的靈敏度、選擇性、準確性和精度。其他樣品字典處理方法的選擇應(yīng)基于樣品中殘留的危害特征。殘留分析的樣本主要是各種食用組織(肌肉、脂肪、肝臟、腎臟、皮膚、血液、雞蛋、牛奶和加工食品)。活體檢查通常收集血漿、尿液和糞便。屠宰場主要采集某些藥物的靶組織和其他高濃度樣本，如肝臟、腎臟、膽汁和注

13、射部位的組織。1，生物樣品的類型，獸藥殘留分析中最常用的生物樣品是組織樣品，其次是牛奶、血液、尿液樣品。(1)動物組織肌肉(去除可見脂肪)中的水分約為75%，蛋白質(zhì)(肌漿蛋白、來源蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白)為19.0%，脂肪(中性脂肪、脂肪酸、磷脂)為2.5%，糖類，其他種類動物的膳食組成和肌肉的成分(如家禽和牛的肌紅蛋白和脂肪含量差異)會影響分析方法的回收率或干涉檢查，因此一個動物組織的殘留分析方法不一定適用于其他動物組織樣本。例如，從雞肉和牛肉組織中用水提取睪酮，可獲得75%以上的回收率。用同樣的方法提取豬肌肉樣本，回收率只有10%，轉(zhuǎn)化為25%乙腈提取時回收率明顯提高，據(jù)推測，睪酮與豬肉

14、中的某些蛋白質(zhì)結(jié)合后很強。肝或腎組織是代謝或排泄器官，殘留物濃度高，緩慢去除，經(jīng)常用作殘留物檢查的靶組織。(2)尿液樣本，尿液的主要成分是水，要素，鹽類。那是一個好的細菌培養(yǎng)基，需要立即冷藏或防腐處理。冷藏條件一般可以放在4個冰箱里。要在室溫下保存，必須收集尿液樣本，然后立即加入防腐劑。常用防腐劑通過改變甲苯、氯仿或尿液的酸堿性，抑制細菌的繁殖。應(yīng)通過實驗驗證添加的防腐劑是否妨礙測定，或與被測試組的化學(xué)反應(yīng)，選擇適當(dāng)?shù)姆栏胧?。在所有體液樣本中最容易得到尿液樣本，樣本楊怡多，藥物(母體藥物及代謝物質(zhì))濃度高。正常的尿液只含有微量蛋白質(zhì)，不需要蛋白質(zhì)處理。尿液中的藥物大部分以結(jié)合狀態(tài)為主，以葡萄

15、糖酸和硫酸酯結(jié)合物存在，因此在直接測定或提取之前，必須水解結(jié)合狀態(tài)的藥物，讓藥物排出。尿液樣本pH的變化范圍很大，分析前應(yīng)調(diào)整為一致的pH值。(3)血液樣本，采血后，一系列凝血因子被激活，血液中的纖維蛋白原形成纖維素，血液逐漸凝固，上層下沉的黃色液體稱為血清。分離血清時，凝結(jié)的血液可以在離心機中離心，將上層血清轉(zhuǎn)移到其他容器中保存，得到的血清一般可以占全血量的40%左右。在采血后立即將血液放入有抗凝劑(通常是肝素)的容器中輕輕搖動，血液就不再凝固，放置后血細胞下沉。12h完全下沉，上層黃色液體稱為血漿(plasma)。離心力在上層血漿和下層血細胞之間充分分離，將血漿轉(zhuǎn)移到另一個容器進行分析。血

16、液通過抗凝劑獲得的血漿量比一般血清略多，接近全血量的50%。、全血樣品可以冷凍保存或直接分析。放置全血樣品或在儲位解凍后，可以分為上下、上、下血漿、下、血細胞、輕微搖晃。血漿和血清的化學(xué)成分類似于組織液，測定血漿或血清的藥物濃度，比全血更能反映作用部位的藥濃度變化，測定方法一般可以徐璐通用?？鼓齽┲苽溲獫{的速度快，分離的血漿量比血清多，應(yīng)用血漿比較方便。血漿中含有抗凝劑，如果影響測定，就應(yīng)該使用血清樣品。通常藥物在血漿中與血漿蛋白(白蛋白、球蛋白、糖蛋白、脂蛋白)結(jié)合在一起，有些藥物甚至能達到蛋白質(zhì)結(jié)合率90%以上。因此，提取前必須分離結(jié)合狀態(tài)的藥物。(4)牛奶樣品，牛奶含水量約為87%，蛋白質(zhì)(以酪蛋白為主)為3.3%，脂肪(甘油三酯)為3.7%，糖類(乳糖)為4.7%，無機鹽，維生素，酶奶油球的主要成分是奶油，表面是由酪蛋白、脂肪、酶、無機鹽、水分組成的膜，乳球穩(wěn)定地懸浮在牛奶中，可以保護內(nèi)部乳脂不受脂肪酶水解的影響，在劇烈震動的情況下，球膜破壞，脂肪球徐璐粘合并析出。牛奶中還含有大量由酪蛋白或脂蛋白組成的膠束體系，氧化或加熱時膠束結(jié)構(gòu)解體，