淺談中藥丹參及其制劑

1、成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 論文題 目 丹參綜述 學(xué) 號 201240301077 學(xué) 生 姓 名 _ 楊益_ _ _年 級 2012級中藥3班 學(xué)科專業(yè)方向 中藥學(xué) 所屬院（所） _ 藥學(xué)院 _ _ _丹參綜述摘要： 丹參是我國常用的傳統(tǒng)中藥，從70年代開始，國內(nèi)外學(xué)者對丹參進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究,如丹參資源調(diào)查、化學(xué)成分分離、藥理作用、制劑及制劑工藝等。通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)，本文對丹參進(jìn)行綜述。主要介紹丹參資源情況、丹參主要化學(xué)成分及其活性成分的藥理作用、有效成分提取分離純化工藝、丹參制劑類型、丹參藥材及制劑的質(zhì)量控制方法研究。關(guān)鍵詞：丹參；資源情況；化學(xué)成分；藥理作用；制劑；提取分離純化；質(zhì)量控制丹

2、參，為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰之功效。用于胸痹心痛，脘腹脅痛，瘕瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，瘡瘍腫痛等。對冠心病、心血管病、慢性肝炎、早期肝硬化等病有良好療效。1.丹參正品、習(xí)用品、偽品及資源開發(fā)現(xiàn)代研究情況1.1丹參正品資源情況 上世紀(jì)60年代之前，丹參以應(yīng)用野生品為主，隨著市場需求的增加，野生資源銳減，因此，各地開始對丹參進(jìn)行引種栽培，獲得成功后，種植面積迅速擴(kuò)大1。主產(chǎn)于四川、山東、浙江省等，現(xiàn)在全國大部分地區(qū)都有分布。野生丹參與栽培丹參所處

3、的生長環(huán)境迥異，野生者多生于林下，陽光遮蔽，植株生長矮小，地上莖分枝少，根條細(xì)長; 而栽培丹參則生長在陽光充足，土壤肥沃的丘陵或平原地區(qū)，植株高大，地上莖分枝多，根條粗。臨床應(yīng)用常以人工栽培丹參代替野生丹參，但由于生產(chǎn)中長期的只種不選引起品種退化，導(dǎo)致藥材產(chǎn)量和品質(zhì)均有較大程度下降。1.2丹參習(xí)用品及偽品1.2.1 丹參習(xí)用品（1）南丹參（Sal via bawl eyana Dun）：根較小，外皮灰紅色。小葉卵狀披針形，無毛?；ㄝ嗤矤罨蚪矤?；花冠筒短，內(nèi)藏。 （2）甘西鼠尾（Sprzewals kii Maxim）：別名甘肅丹參。多年生草本，高達(dá)70 厘米，全株密被柔毛。根粗壯，圓錐形，紅

4、褐色。單葉，有基生葉和莖生葉兩種，均具柄，葉片三角狀或橢圓戟形。花序頂生或腋生，總狀花序；花萼鐘狀，2 唇形；花冠紫紅色；小堅(jiān)果，灰褐色。1.2.2 丹參偽品 非正品未列入藥典，不具備正品丹參的各種功效，故不可代替正品丹參入藥。市場上存在丹參偽品，主要有四種:(1)甘肅丹參：主要特征在于葉為單葉，三角狀卵形，或卵狀披針形，長8-20厘米，基部心形至戟形，邊緣有鈍鋸齒，上面被白色絨毛。在甘、寧、青、滇地區(qū)作丹參入藥。(2)褐毛丹參：主要區(qū)別點(diǎn)，葉為基部耳狀，葉下面密生褐色柔毛，根特別粗大，長15-30厘米，根頭單條或岔分為數(shù)枝，每枝由數(shù)股合成，主根有多數(shù)不規(guī)則的縱溝，表面紫褐色。(3)云南丹參：

5、根肉質(zhì)，數(shù)個(gè)簇呈小蘿葡狀或條狀。云南地區(qū)以根作紫丹參入藥。(4)土丹參：全株被長柔毛，單葉具長柄，葉片狹長三角形至卵狀三角形，連續(xù)有粗齒牙。根粗壯，大者似蘿卜狀。暗褐色，表面有縱溝紋，習(xí)稱毛丹參。1.3 丹參資源開發(fā)現(xiàn)代研究情況 由于直接從丹參中提取有效成分純度低、效率低、提取純化困難、加之野生丹參資源有限, 栽培品質(zhì)量差異大，影響了臨床用藥質(zhì)量和天然藥物的開發(fā)與持續(xù)利用。為解決此問題，化學(xué)及分子生物學(xué)等多種現(xiàn)代技術(shù)手段應(yīng)用到丹參資源質(zhì)量及產(chǎn)量的提高中,并已取得不同程度的進(jìn)展。如丹參活性成分的人工合成，如丹酚酸A,B,C,D,E,F及丹參酮A等有效成分已被成功合成；生物技術(shù)手段的應(yīng)用，如多倍體

6、誘導(dǎo)、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)、毛狀根培養(yǎng)技術(shù)、離體組織培養(yǎng)2 的使用是高效獲取丹參藥用成分的重要手段；次生代謝調(diào)控及次生代謝工程使丹參中丹參酮及丹酚酸含量增加，近年來已取得了較多研究成果。為了解決丹參資源缺乏的問題，開始利用組織培養(yǎng)技術(shù)改良丹參品質(zhì)、提高丹參產(chǎn)量3。2. 丹參主要化學(xué)成分及活性成分2.1 丹參主要化學(xué)成分 從二十世紀(jì)三十年代開始，就有許多國內(nèi)外的學(xué)者研究它的化學(xué)成分。丹參的化學(xué)成分4 復(fù)雜,其中包括脂溶性的二萜類成分，二萜醌類,如丹參酮,丹參酮,丹參酮、異丹參酮,異丹參酮、隱丹參酮、異隱丹參酮、二氫丹參酮、二氫異丹參酮等;水溶性的酚酸類,如丹酚酸、原兒茶醛、丹參素、熊果酸、異阿魏酸等;其

7、它成分,黃酮類，三萜類，甾醇等成分。如黃芩苷、-谷甾醇、胡蘿卜苷、氨基酸、無機(jī)元素等。2.2 丹參活性成分丹參的活性成分為脂溶性的二萜醌類化合物和水溶性的酚酸類化合物5。2.2.1 脂溶性的二萜醌類化合物二萜醌類化合物是丹參脂溶性的主要成分，它們在骨架上大多具有三元或四元碳環(huán)的鄰醌或?qū)︴Y(jié)構(gòu).因此統(tǒng)稱為丹參酮類化合物(tanshinones)。如丹參酮I 為菲醌并呋喃環(huán)的結(jié)構(gòu)，丹參酮IIA 為萘醌并呋喃環(huán)的結(jié)構(gòu)，隱丹參酮為萘醌并二氫呋喃環(huán)的結(jié)構(gòu)，丹參酮在結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)是他們具有抗腫瘤、抗氧化等活性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，是解釋他們具有許多共同活性和活性差異的根本依據(jù)。目前,丹參脂溶性成分以丹參酮為有效成分參

8、考指標(biāo)。2.2.2 水溶性的酚酸類化合物 丹參的水溶性活性成分主要為酚酸類物質(zhì)，包括原兒茶醛，3,4 一二羥基苯甲酸以及其縮合而成的多酚性酸等。目前，水溶性成分以丹酚酸、原兒茶醛、丹參素為有效成分參考指標(biāo)。3. 丹參活性成分的藥理作用20世紀(jì)30年代以來,國內(nèi)外學(xué)者對丹參及其活性成分等的藥理進(jìn)行了大量的研究,發(fā)現(xiàn)其具有廣泛的藥理活性,對多種疾病有確切的療效。3.1 抗感染作用3.1.1 抗菌消炎作用 劉巖，等6，做實(shí)驗(yàn)證明丹參具有拮抗Ang的作用,可在多層次、多靶點(diǎn)對抗RASS,迅速降低炎癥反應(yīng)因子Ang,且有使肝、肺、腸組織病理損害減輕的作用。3.1.2 抗氧化作用 Zhao, GR7,等做

9、實(shí)驗(yàn)證實(shí),丹參素是一種強(qiáng)抗氧化劑。丹參素具有清除自由基,抗氧化損傷的活性,且其清除能力大于維生素C,對過氧化氫導(dǎo)致的人靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作州也與抗氧化活性有關(guān)。3.1.3 抗內(nèi)毒素作用 張萃,等8，采用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF- a和IL-1 3產(chǎn)生的影響顯示丹參酮A、丹參酮I和丹參總酮抑制細(xì)胞增殖效果較好。隱丹參酮、丹參酮A和丹參總酮對模型細(xì)胞產(chǎn)生TNF-a有明顯抑制作用,丹參酮A、隱丹參酮對模型細(xì)胞產(chǎn)生IL-10有明顯抑制作用,丹參酮A、丹參酮I和隱丹參酮可不同程度抑制內(nèi)毒素炎癥過程中的炎癥因子變化以及巨噬細(xì)胞的過度活化增殖。3.2 對心血管系統(tǒng)的作用3.2.1 對心肌

10、的保護(hù)作用 徐通達(dá)9丹酚酸A通過DUSP介導(dǎo)ERK/JNK通路對大鼠心肌缺血再灌注損傷抗凋亡作用從而保護(hù)心肌。丹參酸B可以通過JNK3通路抑制IRI的心肌細(xì)胞的調(diào)亡10 ，從而減少心肌損傷。3.2.2 擴(kuò)張血管 丹參可以使實(shí)驗(yàn)性高脂血癥及動脈粥樣硬化家兔的離體心臟的冠狀動脈擴(kuò)張，冠狀動脈流量增加11,并能對抗嗎啡、心得安的收縮冠狀動脈作用,因此丹參素被認(rèn)為是擴(kuò)張冠狀動脈血管的有效成分之一。3.2.3 抗動脈粥樣硬化(As)有研究認(rèn)為,丹參中的脂溶性成分和水溶性成分均表現(xiàn)出了一定的抗As活性,參與了As發(fā)生的各個(gè)病理階段。丹參治療動脈粥樣硬化的機(jī)制有: （1）丹參素可抑制內(nèi)源性膽固醇的合成，減少

11、低密度脂蛋白 (LDL) ，可用于動脈粥樣硬化的防治12;（2）DS-201可能通過阻止血管平滑肌細(xì)胞增殖而起到抗動脈粥樣硬化作用13; （3）丹參能降低MCP-1的表達(dá)水平，這可能是抑制動脈粥樣硬化形成的分子學(xué)機(jī)制之一14；（4）抗血栓的作用15;(5)血管舒張作用。3.4 改善微循環(huán) 丹參對外周和內(nèi)臟微循環(huán)的改善是其活血化瘀的最主要作用。王世軍,等16發(fā)現(xiàn)丹參注射液能使在生理狀態(tài)及高分子右旋糖苷所致微循環(huán)障礙時(shí)小鼠腦微區(qū)血流量明顯升高。發(fā)現(xiàn)丹參注射液可使大鼠暴發(fā)性肝衰竭模型的腸系膜微循環(huán)灌注得到顯著改善。丹參改善微循環(huán)障礙與其能提高紅細(xì)胞的變形能力、改善血液的粘彈性有關(guān)。3.5 保肝作用

12、丹參酮類是丹參的主要脂溶性成分，主要包括TanA,隱丹參酮,丹參酮,二氫丹參酮等。TanA可以通過激活轉(zhuǎn)錄因子NF-E相關(guān)因子對抗氧化反應(yīng)元件 通路防止雷公藤甲素誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷17。丹參素通過抗氧化機(jī)制對CCl4引起的大鼠急性肝損傷產(chǎn)生保護(hù)作用18丹參素可以促進(jìn)大鼠減體積肝移植后肝臟再生，從而促進(jìn)肝功能的早期恢復(fù)。丹酚酸類化合物包括丹酚酸A, B, C等多種結(jié)構(gòu)類似的化合物。其中目前對SalA和SalB 研究較多。SalA和SalB 通過不同的機(jī)制發(fā)揮抗肝纖維化作用19。3.6 抗腫瘤作用3.6.1 對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用 丹參酮類化合物的菲環(huán)結(jié)構(gòu)與DNA分子相結(jié)合、呋喃環(huán)、醌類結(jié)構(gòu)產(chǎn)生自

13、由基,引起DNA損傷;同時(shí)抑制PCNA等基因表達(dá),影響DNA多聚酶活性,抑制腫瘤細(xì)胞DNA合成,抑制腫瘤細(xì)胞增殖20。3.6.2 對腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用 近年來多位學(xué)者研究表明21丹參酮類對高轉(zhuǎn)移性肺癌PGCL3細(xì)胞和低轉(zhuǎn)移人肺腺癌PA細(xì)胞、白血病HL-60和562細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞株HepG2均有誘導(dǎo)其分化、凋亡的作用,其機(jī)制可能是通過抑制細(xì)胞原癌基因、誘導(dǎo)抑癌基因的表達(dá),阻止細(xì)胞進(jìn)入期及DNA合成,從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化。3.6.3 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 丹參酮類誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,主要通過以下途徑:阻滯細(xì)胞周期。二氫丹參酮22可以誘導(dǎo)562/細(xì)胞生長停滯在相引起細(xì)胞凋亡,丹參酮使-45細(xì)胞飽和、

14、不飽和結(jié)構(gòu)周期阻滯于2/期。影響凋亡蛋白表達(dá)。丹參酮可使HepG2細(xì)胞23。3.6.4 抑制血管生成研究表明,二氫丹參酮可以通過抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和小管形成來抑制血管生成。此外,二氫丹參酮,隱丹參酮對AGS細(xì)胞和Hep3B細(xì)胞HIP-1的表達(dá)有抑制作用,而HIF-1一定程度來說可以促進(jìn)腫瘤血生成24。3.7 對神經(jīng)系統(tǒng)的作用 丹參對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用。丹參水提液能明顯抑制小鼠自主活動，其作用隨劑量的增大而增強(qiáng)，與氯丙嗪和眠爾通合用時(shí)鎮(zhèn)靜催眼作用明顯增強(qiáng)。丹參具有明顯的鎮(zhèn)靜，催眠，抗驚厥作用，可明顯增強(qiáng)鎮(zhèn)靜藥的作用，能使大腦皮層自發(fā)活動振幅減小，抑制丘腦后核內(nèi)痛放電，產(chǎn)生中樞性的

15、鎮(zhèn)痛作用，這與中醫(yī)所述的丹參能夠清心除煩相符25。4. 丹參有效成分的提取分離與純化近年來,國內(nèi)外對于丹參有效成分提取分離的研究較多,主要涉及丹參脂溶性成分二萜醌類和水溶性成分酚酸類物質(zhì)的提取分離純化。目前,丹參脂溶性成分以丹參酮為有效成分參考指標(biāo)。目前，水溶性成分以丹酚酸、原兒茶醛、丹參素為有效成分參考指標(biāo)26。4.1 脂溶性有效成分提取分離與純化4.1.1 脂溶性有效成分提取分離脂溶性二萜醌類有效成分的提取,主要包括丹參酮、隱丹參酮、異丹參酮、二氫丹參酮。二萜醌類化合物,即丹參酮在臨床應(yīng)用中較早、其提取和分離工藝技術(shù)的研究也相對深人。主要提取方法有乙醇回流法、超聲提取法、微波輔助萃取法、濕

16、式超微粉碎提取法、亞臨界水提取法等。乙醇回流法:于純森等27通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),確定乙醇加熱回流法提取丹參酮的最佳提取條件為:丹參粉碎后過4號篩,乙醇濃度為75%,提取溫度為65 ,提取時(shí)間為2.5 h,料液比為124,丹參酮的提取率:0.346%。 SFE-CO2萃取法:韓曉珂等28采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化超臨界二氧化碳萃取丹參酮A工藝，最佳工藝為萃取壓力為35MPa、萃取溫度為40、夾帶劑用量為100%、萃取時(shí)間為2h。丹參酮A含量(mgg-1):3.87。用超臨界技術(shù)提取丹參酮優(yōu)于醇提法。因其生產(chǎn)周期短,又無需加熱,因此避免了丹參酮的降解反應(yīng),故其能保留較多的丹參酮29。微波輔助萃取法：主

17、要是利用微波能產(chǎn)生的破壁效應(yīng),使植物細(xì)胞內(nèi)活性成分完全釋放,并利用固相萃取法,將保留在吸附劑上的樣品根據(jù)選擇性洗脫和選擇性吸附之間的過程差異,達(dá)到有效成分分離凈化和富集的目的30。陳殿偉等31對提取溶劑濃度、微波輻照時(shí)間、微波輸出功率、提取溫度和液固比等影響提取的因素進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)確定了微波輔助法提取丹參酮A的最佳工藝條件:將丹參細(xì)粉預(yù)浸泡30min、20倍量乙醇(70%)提取6min、加熱至75、在微波輸出功率為450W時(shí)提取2次,其提取率可達(dá)到97.55%。濕式超微粉碎提取:賀建東等32采用3因素3水平正交實(shí)驗(yàn)對乙醇濃度(60%、70%、80%)、乙醇量(6倍、8倍、10倍)和提取時(shí)間(5

18、min、10min、30min)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。得到最佳提取條件內(nèi)為80%乙醇8倍量提取10min。其中提取時(shí)間對提取效果的影響最為顯著(P0.05),生產(chǎn)中考慮到成本,可選用70%的醇提取。丹參酮A含量(mgg-1):大約1.382。在丹參的多種脂溶性有效成分中,丹參酮A的臨床應(yīng)用較多,其分離和提純工藝技術(shù)的研究頗多,如亞臨界水提取法常被用來提取丹參酮A。亞臨界水提取法通過升高溫度和增加壓力,使水的極性降低,增強(qiáng)了水對脂溶性組分溶解能力特性,大大減少了提取時(shí)間和提取溶劑的消耗,避免使用有機(jī)溶劑造成的污染。4.1.2 脂溶性有效成分的純化 水沉法:采用正交試驗(yàn)法考察濃縮液的相對密度A(0.85、

19、0.90、1.00)、加水倍量B(2倍、3倍、4倍)和靜置時(shí)間C(6h、12h、24h)的影響。確定最佳工藝為A1B2C2,結(jié)果總丹參酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在55%左右,確證該工藝可以提取純化得到符合標(biāo)準(zhǔn)的有效部位。 大孔樹脂法:選用X-5型樹脂作為純化用樹脂。采用拌樣法上樣,A生藥材干樹酯(31、21、11),B干膏濕樹酯(13、15、17),C徑高比(13、15、17)進(jìn)行正交試驗(yàn)考察。確定最佳工藝為A1B1C2或C3,總丹參酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)控制在50%左右,確證該工藝也可以提取純化到合格的有效部位。 吳婉瑩等33對水沉-大孔樹脂工藝聯(lián)用進(jìn)行了研究:將水沉工藝考察中最優(yōu)工藝篩選后的浸膏干燥后,取兩份平行

20、樣按大孔樹脂工藝考察項(xiàng)下最佳工藝進(jìn)行純化測定,水沉后的樣品再用大孔樹脂純化,總丹參酮和丹參酮A的質(zhì)量分?jǐn)?shù)沒有明顯提升。4.2 水溶性有效成分的提取分離與純化4.2.1 水溶性有效成分的提取分離丹參中的水溶性成分在水中溶解度較大，提取方法有:滲漉法、乙醇回流法、高速逆流色譜法、SFE-CO2萃取法等。 滲漉法：劉楊等34將95%乙醇滲漉后的藥渣繼續(xù)用50%乙醇進(jìn)行滲漉,用12倍量50%乙醇,4mLmin-1的速度進(jìn)行繼續(xù)滲漉能將丹酚酸B類成分較好的提取出來。丹酚酸B的含量(mgg-1):59.02。乙醇回流法：謝靜35等以加乙醇量(因素A)(4倍、6倍、8倍)、回流時(shí)間(因素B)(0.5h、1.

21、0h、1.5h)、乙醇濃度(因素C)(20%、40%、60%)、提取次數(shù)(因素D)(1次、2次、3次)為考察因素,正交設(shè)計(jì),最佳工藝條件為提取時(shí)間為1.0h。最后確定的提取工藝為加6倍量40%的乙醇加熱回流3次,每次1.0h。丹酚酸B的含量(mgg-1生藥):32.07。高速逆流色譜法（HSCCC法）36：具有快速、簡便的優(yōu)點(diǎn),能夠從粗提取液中分離出高達(dá)98%的丹酚酸B,純度大大高于高速逆流色譜分離純化法和pH區(qū)帶逆流色譜法。 SFE-CO2萃取法：金承懷等37優(yōu)選出超臨界二氯化碳萃取最佳工藝:夾帶劑選擇10%的乙醇+5%的吐溫-80,用量與藥材相等,萃取溫度為55 ,壓力30MPa,萃取時(shí)間

22、1.5h。結(jié)論:加入非離子表面活性劑的多元醇混合體系比只用乙醇作夾帶劑進(jìn)行超臨界CO2提取丹酚酸B效率高約6倍。 微波萃取與超聲波萃取法：王桂花等38對微波萃取和超聲萃取進(jìn)行了研究和比較;萃取溶劑為30%乙醇,液固比為801(mLg-1),萃取時(shí)間為6min,微波功率為60%(510W)的條件下,微波萃取效果最好。時(shí)間為30min,乙醇濃度為30%,超聲效果最好。兩者相比:微波萃取6min和超聲提取30min相當(dāng),結(jié)果表明微波萃取法快速、高效。5. 丹參制劑品種目前出現(xiàn)了很多含有丹參的制劑39，脂溶性成分入藥的丹參制劑，水溶性成分入藥的丹參制劑，兼用脂溶性成分和水溶性成分的丹參制劑。脂溶性成分

23、入藥的丹參制劑主要有:丹參酮片，丹參酮膠囊，丹參酮油膏，丹參舒心膠囊，復(fù)方丹參滴丸，丹參舒心片，丹參酮II磺酸鈉注射液，精制冠心片等；水溶性成分入藥的丹參制劑主要有：丹參注射液，丹參素注射液，復(fù)方丹參注射液，丹參黃芪注射液，丹芪益心貼，復(fù)方丹參膏，復(fù)方丹參糖漿等；兼用脂溶性成分和水溶性成分的丹參制劑有：復(fù)方丹參片，冠心丹參片，丹七片，丹田降脂丸，冠心寧片，復(fù)方丹參黃芪膠囊等。此外還出現(xiàn)了一些新劑型如貼劑，分散片，微膠囊，脂質(zhì)體。這些新劑型有助于改善丹參類藥物的穩(wěn)定性，提高其儲藏期和有效期，提高了產(chǎn)品質(zhì)量，增強(qiáng)了療效，為丹參臨床應(yīng)用開辟了更為廣闊的前景。 6. 丹參及其復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法研究

24、 6.1丹參藥材質(zhì)量控制研究 中國藥典（2010版）采用高效液相色譜法分別對丹參中的丹參酮A和丹酚酸B進(jìn)行質(zhì)量控制。近年來，隨著定量方法的發(fā)展以及對丹參藥材研究的深入，對同時(shí)測定多種指標(biāo)成分研究廣泛?？偨Y(jié)如下： 6.1.1 以9種成分作為質(zhì)控指標(biāo)的分析方法 汪紅等40 采用高效液相色譜法，一次性檢測丹參及其親緣植物中脂溶性、水溶性9種成分丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、丹酚酸B、丹參酸甲酯、二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮和丹參酮A的含量。使用日本島津Shinrpack CLC-ODS柱（150 mm4.6 mm，5 m）；梯度洗脫流動相：0.5%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），洗脫程序：015 min

25、，0%40%B，1540 min，40%65%B，4055 min，65%B。檢測波長，025 min為281 nm，2555 min為254 nm。柱溫為25 ，流速0.8 mL/min，進(jìn)樣量20 L。結(jié)果，丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、丹酚酸B、丹參酸甲酯、二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮和丹參酮A的線性范圍分別為1.3132.5 ug/mL（r=0.9991），0.657.5 ug/mL（r=0.9994），0.655.5 ug/mL（r=0.9994），2.8282.0 ug/mL（r=0.9994），0.655.5 ug/mL（r=0.9991），1.4135.0 ug/mL（r=0.9

26、998），0.990.8 ug/mL（r=0.9995），1.1113.8 ug/mL（r=0.9999），1.9186.0ug/mL（r=0.9995）。回收率為95.62%104.22%，RSD為1.42%3.52%。該實(shí)驗(yàn)采用梯度洗脫，切換檢測波長等方法，同時(shí)測定丹參及其親緣植物中水溶性和脂溶性9種成分，可作為丹參藥材及其復(fù)方制劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，亦為制定此類制劑的指紋圖譜研究提供參考。此外，該研究證明，丹參丹酚酸類含量有顯著差異，不同產(chǎn)地的同種樣品之間也存在明顯差異，因而丹參質(zhì)量控制極為重要，此文為丹參的質(zhì)量控制及臨床替代用藥提供了依據(jù)。 6.1.2 以4種成分作為質(zhì)控指標(biāo)的分析方法 安睿等

27、41采用高效液相色譜法測定丹參中脂溶性成分。建立不同產(chǎn)地丹參中二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮、丹參酮A的含量測定方法。使用Agilent ZORBAX EclipseDB-C18（4.6250 mm，5um）色譜柱，流動相為1%醋酸甲醇溶液（A）-1%醋酸水溶液（B）作梯度洗脫。A：015 min，10%85 %；1540 min，85%100%；（A+B=100%）。流速1 mL/min， 檢測波長為280 nm，柱溫25 。結(jié)果，二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮和丹參酮A的線性范圍分別為0.252.0ug（r=0.9998），0.31252.5ug（r=0.9995），1.2510ug（r=0.

28、9999），0.31252.5ug（r=0.9996）。所測的4種成分的平均回收率均大于97%，RSD小于1.2%。精密度良好，4組分峰面積的RSD均小于1.5%。 楊偉等42 采用反相高效液相色譜法梯度洗脫同時(shí)測定丹參中4種水溶性成分丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的含量。色譜條件為Kromasil C18（4.6200 mm，5 m）色譜柱，流動相甲醇-0.5%磷酸水溶液梯度洗脫（50 min內(nèi)甲醇從40%升到100%）流速1.0 mL/min，檢測波長280 nm，柱溫30 。結(jié)果，丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的線性范圍分別為0.0820.82ug（r=0.9997），1.5

29、57.76ug（r=0.9998），1.969.8ug（r=0.9994），3.030.0（r=0.9996）。4組分10h穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD為1.0%1.7%，精密度試驗(yàn)RSD為0.87%1.5%，4個(gè)成分的平均回收率分別為99.0%，99.1%，99.8%，106.1%，RSD分別為1.4%，2.1%，2.9%，2.7%。該法簡便準(zhǔn)確，為丹參及其制劑的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。 6.1.3 以3種成分作為質(zhì)控指標(biāo)的分析方法 曹冬等43 用超聲法提取丹參飲片中的脂溶性有效成分，然后用反相高效液相色譜法同時(shí)測定丹參飲片中隱丹參酮、丹參酮和丹參酮A的含量。使用DiamonsilTMC18色譜柱（250

30、mm4.6 mm，5um），以甲醇：水=75：25為流動相，流速為0.8 mL/min，檢測波長270 nm。3個(gè)活性成分隱丹參酮、丹參酮和丹參酮A分別在1.45610.19，2.16015.12和 3.15222.06 ug/mL含量范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9991，0.9992和0.9996。3組分平均回收率分別為為98.04%，99.65%， 99.31%，RSD分別為1.3%，1.2%，1.2%。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果分析，不同產(chǎn)地的丹參中有效成分的含量差異較大，可通過增加丹參的測定指標(biāo)以便更加全面的考察丹參質(zhì)量。該法快速簡便，可用于丹參飲片的質(zhì)量控制。 6.2 丹參復(fù)

31、方制劑 據(jù)統(tǒng)計(jì)，丹參制劑已達(dá)到百種以上，定量測定多種有效成分的含量，已成為評價(jià)丹參制劑質(zhì)量的重要方法。尤其是同時(shí)測定丹參復(fù)方制劑中其它味藥有效成分的含量，已成為研究熱點(diǎn)?，F(xiàn)歸納如下： 6.2.1 以7種成分作為質(zhì)控指標(biāo)的分析方法 韋英杰等44采用高效液相二極管陣列檢測法同時(shí)測定3種復(fù)方丹參制劑中7個(gè)成分原兒茶醛、丹酚酸B、丹參酮A、隱丹參酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量。色譜柱為Agilent Zorbax C18柱（5um，250 mm4.6 mm），流動相A為0.1%的磷酸水溶液，B為乙腈，梯度洗脫：010 min，7%17%B；1012 min，17%20%B；12

32、16 min，20%21% B；1632 min，21%B；3240 min，21%29%B；4055 min，29%35%B；5565 min，35%65%B；6580 min，65%80%B。柱溫30，流速1 mL/min（2228 min，0.8 mL/min），檢測波長為203、270和281 nm。原兒茶醛、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、丹酚酸B、人參皂苷Rb1、隱丹參酮和丹參酮A的峰面積與濃度的線性關(guān)系良好，線性范圍分別為1.32210.4 mg/L（r=0.9999），15.34368.16 mg/L（r=0.9999）， 14.76590.40 mg/L（r=0.9997），1

33、2.70762.00 mg/L（r=0.9998）， 30.06601.20 mg/L（r=0.9995），0.3366.00 mg/L（r=0.9992），0.3264.56 mg/L（r=0.9993）。7成分檢測線分別為0.05，1.10，1.18，1.27，1.80，0.03，0.03 mg/L。平均加樣回收率為94.4%104.9%，RSD為1.50%4.60%。該法相對簡單，具有良好的精密度和重現(xiàn)性，可用于全面評價(jià)丹參制劑的質(zhì)量。 6.2.2 以7種成分作為質(zhì)控指標(biāo)的分析方法 張雪45 建立高效液相色譜-二極管陣列檢測法同時(shí)測定制劑中丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹

34、酚酸 B 6 種活性成分，色譜條件 DiamonsilTMC18色譜柱（250 mm4.6 mm，5 m）；流動相：甲醇（A）-5%冰醋酸（B），進(jìn)行梯度洗脫，06 min，30%A，610 min，A線性改變至40%，1030 min，40%A；停止時(shí)間30 min，后運(yùn)行10 min；體積流量：1.0 mL/min；進(jìn)樣方式：自動進(jìn)樣，進(jìn)樣體積：20 L；柱溫：30 ；檢測波長：286 nm。 丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸 B 的平均質(zhì)量濃度分別為 2.907 mg/mL（RSD 為 0.25%）、0.1622 mg/mL（RSD 為 0.64%）、0.4505 m

35、g/mL（RSD 為 0.35%）、0.1299 mg/mL（RSD 為 0.83%）、0.2856 mg/mL（RSD 為 0.73%）、0.5759 mg/mL（RSD 為 0.52%）。 該法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適于全面評價(jià)冠心寧注射液的質(zhì)量。 6.2.3 以5種成分作為質(zhì)控指標(biāo)的分析方法 史寧等46建立高效液相色譜法測定丹芩滴丸中黃芩苷、二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮和丹參酮A含量的方法。采用Inertsil C18分析色譜柱 89（4.6250 mm，5 m)，C18保護(hù)柱（4.65 mm，5 m)；流動相A為85%乙腈（含0.5%三乙胺，磷酸調(diào)pH3.0），流動相B為10%乙腈（含

36、0.5%三乙胺，磷酸調(diào)pH3.0）進(jìn)行梯度洗脫：015 min，A：20%100%，B：80%0%；1525 min，A：100%，B：0%。流速1.0 mL/min，檢測波長270 nm。結(jié)果：黃芩苷、二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮和丹參酮A的線性范圍分別為0.24021.2010 ug（r=0.9999），0.11200.5600 ug（r=0.9999），0.16000.8000 ug（r=0.9999），0.15400.7700 ug（r=0.9999），0.15600.7800 ug（r=0.9996）。平均回收率分別為97.4%，RSD為2.4%；98.0%，RSD為3.4%；97.

37、3%，RSD為2.1%；104.0%，RSD為1.9%；101.7%，RSD為1.0%。丹參酮中醌類化合物對光不穩(wěn)定，對照品及樣品溶液應(yīng)注意避光保存。 6.2.4 以4種成分作為質(zhì)控指標(biāo)的分析方法 朱大勝等47建立高效液相色譜法同時(shí)測定丹參酮含片中二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮和丹參酮A含量的方法。采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6150 mm，5m）色譜柱，以乙腈-水（55：45）為流動相，檢測波長254 nm，流速1.0 mL/min。測定結(jié)果，二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮和丹參酮A的線性范圍分別為0.00940.376 g（r=0.9999），0.03

38、601.4400 g（r=0.9999），0.02240.896 g（r=0.9998）和0.03001.200 g（r=0.9999）。定量限分別為0.005，0.0006，0.001和0.002 g。4組分平均回收率分別為99.9%，101.7%，98.7%和100.8%，RSD分別為3.3%，0.28%，1.0%，0.5%。研究過程中看出，有機(jī)相和水相比例有小的變動，對測定結(jié)果的準(zhǔn)確性無明顯影響，但對丹參酮A的保留時(shí)間有較明顯的影響。 李曉莉等48建立丹芎方中多種有效成分同時(shí)測定的RP-HPLC法。使用Agilent Zorbax SB-C18（4.6150 mm，5 m）色譜柱。流動相

39、為甲醇-0.5%冰醋酸水溶液，采用梯度洗脫，洗脫程序：05 min，40%甲醇；510 min，40%75%甲醇；1032 min，75%甲醇。流速1.0 mL/min，檢測波長為各物質(zhì)的最大吸收波長（丹參素281 nm、阿魏酸320 nm、隱丹參酮和丹參酮A為254 nm），柱溫為室溫。結(jié)果，丹參素、阿魏酸、隱丹參酮和丹參酮A在線性范圍內(nèi)回歸方程相關(guān)系數(shù)均大于0.99992，各成分在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。4組分的最低檢測線分別為0.20，0.02，0.08，0.10 g/mL。檢測精密度RSD5%。加樣回收率為 98.1%104.05%，RSD 為0.46%1.76%。本試驗(yàn)選擇各物質(zhì)的最

40、大吸收波長作為檢測波長。應(yīng)用波長切換方法使各物質(zhì)在最大吸收波長下出峰，從而達(dá)到更高的靈敏度。此外，試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)流動相中加入少量醋酸可增加丹參素的靈敏度和穩(wěn)定性，并對其他物質(zhì)無影響。 張建兵等49 建立HPLC法同時(shí)測定丹參注射液中丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B和丹酚酸A的含量。色譜條件：采用Agilent Zorbax 80A Extend-C18 91柱（4.6250 mm，5 m），流動相A：水-乙腈-甲酸（90：10：0.4），流動相B：乙腈；進(jìn)行梯度洗脫，梯度程序?yàn)椋? min（0%B）10 min（15%B）50 min（25%B）70 min（85%B）80 min（85%B）。流速1.

41、0 mL/min，檢測波長280 nm，柱溫30 。結(jié)果顯示，丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B和丹酚酸A線性范圍分別為32160g/mL（r=0.9994），1050 g/mL（r=0.9999），1260 g/mL（r=0.9995），225 g/mL（r=0.9994）。6 h穩(wěn)定性試驗(yàn)4組分的RSD分別為1.4%，2.7%，2.1%，2.9%，說明樣品在6小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。平均回收率分別為99.6%（RSD=2.50%），100.1%（RSD=2.37%），99.8%（RSD=2.46%），103.5%（RSD=2.41%）。本實(shí)驗(yàn)將丹酚酸A作為質(zhì)控指標(biāo)之一，豐富了丹參制劑的質(zhì)量控制內(nèi)容。本方法可靠

42、簡便，也可應(yīng)用于其他丹參制劑的含量測定。 6.2.5 以3種成分作為質(zhì)控指標(biāo)的分析方法 喬成棟等50在膠束電動色譜模式下考察了影響原兒茶醛、丹參素和原兒茶酸分離的重要因素并優(yōu)化分離條件。建立了一種利用毛細(xì)管膠束電動色譜DAD檢測器分離分析原兒茶醛、丹參素、原兒茶酸的新方法。通過試驗(yàn)考察，當(dāng)緩沖溶液為50mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.2）和20 mmol/LSDS，分離電壓為15 kV，分離溫度為25時(shí)，原兒茶醛、丹參素和原兒茶酸混合物于10 min內(nèi)基線完全分離。結(jié)果，原兒茶醛、丹參素和原兒茶酸的線性范圍分別為0.041.46 mg/mL（r=0.9998），0.011.33 mg/mL（

43、r=0.9835），0.0151.80 mg/mL（r=0.9979）。3組分檢出限分別為2，0.62，0.71 g/mL。但本試驗(yàn)只測定了復(fù)方丹參滴丸中原兒茶醛和丹參素的含量，樣品中未檢測出原兒茶酸。原兒茶醛和丹參素加樣回收率分別為104%（RSD=3.1%），96%（RSD=2.1%）。該方法線性范圍寬，檢出限低，重現(xiàn)性好，可用于丹參滴丸的質(zhì)量控制。 王書梅等51建立反相高效液相色譜法測定丹紅注射液中丹參素、原兒茶醛、丹參酚酸B等水溶性成分的含量。使用Kromasil C18柱（4.620 mm，5m），用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。流動相A：水-二甲基甲酰胺-冰醋酸（90：4：2），流

44、動相B：甲醇，進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?10 min，10%A；1015 min，10%35%A；1535 min，35%A；3536 min，35%8%A；3642 min，8%A。流速1.0 mL/min，檢測波長281 nm。結(jié)果，丹參素、原兒茶醛和丹酚酸B的線性范圍分別為0.8646.048 g（r=0.9999），0.0710.497g（r=1.0000），0.7965.572g（r=0.9999）。RSD在0.12%0.86%之間，說明對照品與樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。丹參素、原兒茶醛和丹酚酸B的平均加樣回收率分別為98.18%（RSD= 1.5%），99.2%（RSD=1.9%），10

45、1.5%（RSD=0.6%）。丹酚酸B在濕熱的作用下會分解生成丹參素、原兒茶醛等，長時(shí)間放置特別是在溫度較高的環(huán)境中丹酚酸B的峰面積下降較快，因此丹參制劑應(yīng)在陰涼干燥處保存。 展望：目前，市場上人工栽培品丹參由于廣泛分散的種植沒有形成統(tǒng)一規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致各地丹參藥材質(zhì)量不均。不同土壤，不同氣候環(huán)境，不同栽培管理措施，不同加工方法等都是導(dǎo)致丹參藥材質(zhì)量差異的重要因素。為了人工栽培出質(zhì)量好的丹參，相關(guān)問題仍有待進(jìn)一步研究。丹參具有廣泛的生物活性,可以通過多角度,多途徑改善患者的生理病理狀態(tài)。雖其具有如此多層面的功能,但對于丹參各種活性成分的藥理作用分子機(jī)制不太明確，如丹參抗腫瘤的機(jī)制，對丹參的抗腫

46、瘤的機(jī)制進(jìn)行深入研究，有望制成新的抗腫瘤藥。而丹參成分復(fù)雜，其治療作用是通過多種成分綜合起作用，對于性質(zhì)不同成分的提取，如果僅以一種成分作為控制指標(biāo)，勢必會影響藥物的療效所以，只有選擇合適的工藝，藥物有效成分提取率越高，治療效果越好。隨著對丹參及其制劑質(zhì)量控制的研究深入，以及色譜法的普及，對有效成分的研究會越來越全面。但新的丹參制劑不斷上市，很多制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)仍為空白，應(yīng)加強(qiáng)對上市新藥的質(zhì)量控制研究，以為新藥的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。 參考文獻(xiàn)1 宋嬿，趙志剛，郜舒蕊.不同產(chǎn)地栽培與野生丹參藥材品質(zhì)評價(jià) J.中成藥，2014,36（5）：10272 周建國，劉珊珊，毛志遠(yuǎn)，張碩霖，李文華，李榮

47、文，劉 楊.丹參組織培養(yǎng)技術(shù)的初步研究 J.食品與藥品，2015,17（2）:93-95.3 張夏楠，關(guān)紅雨，高偉，劉長利，羅容，李佳，王秀娟.中藥丹參資源開發(fā)現(xiàn)代研究進(jìn)展 J.轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究，2014,4（4）：26-29.4 張中堂，張群林，張?jiān)旗o，丁秀年.中藥丹參有效成分的提取分離方法研究進(jìn)展 J.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012,21（3）：728.5 葉劍.丹參的藥用成分與藥理作用探析 J.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012,35（5）：71.6 劉巖，唐斌，季曉鵬，等.丹參對大鼠急性壞死性胰腺炎時(shí)RASS系統(tǒng)過度激活所致內(nèi)臟隱性低灌注的影響 J.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2006,(09):26-29.7Zh

48、an GR, Zhang HM,Ye TX,e.Characterization of the radieal scavenging and antioxidant activities of danshensu and salvianolic acid BJ. Food and Chemical Toxicology,2008.46:73.8 張萃.丹參酮IIA等活血化瘀類中藥抗內(nèi)毒素作用的篩選 J.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2010，(07):4749.9 徐通達(dá).丹酚酸A通過DUSP介導(dǎo)ERK/JNK通路對大鼠心肌缺血/再灌注損傷抗凋亡作用及機(jī)制. 南京中醫(yī)藥大學(xué)，2013.10Yang LM

49、, Xiao YL, Ou Yang JH. Inhibition of magnesium lithospermate B on the c-Jun N-terminal kinase 3 mRNA expression in cardiomyocytes encountered ischemia/reperfusion injury. Yao Xue Xue Bao, 2003, 38(7):487-491.11 孟豫潔.淺談丹參的藥理作用研究進(jìn)展 J.中國民族民間醫(yī)藥，2009:151. 12 高艷.丹參的藥理作用 J.中國實(shí)用醫(yī)藥，2009，4 (14) : 168-169.13 谷雨

50、谷巍，于淑蓮.丹參藥理作用的研究進(jìn)展 J.人參研究，2007，1: 25-27.14 付辛芳，劉曉紅.丹參的藥理作用與臨床應(yīng)用研究進(jìn)展 J.綜述報(bào)告，2005，15 (1) : 76-77.15 洪馨，安穗卿，王寧生. 復(fù)方丹參滴丸中丹參素的藥物動力學(xué)研究 J. 中藥新藥與臨床藥理，2000，11( 5) :286. 16 王世軍，李定格，史仁華，等.川芎嗪、丹參注射液對正常狀態(tài)及實(shí)驗(yàn)性微循環(huán)障礙小翮前靛循環(huán)的影響 J.中國微循環(huán), 2000, 4(4):213-217.17 關(guān)翠雯，金晶，李佳，等.丹參酮A激活Nrf2/ARE通路保護(hù)雷公藤甲素所致急性肝損傷 J.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2013，48(

51、9) :1397. 18 呂和平，薛濤，孫運(yùn)鵬，等.丹參素對大鼠減體積肝移植肝臟再生的影響 J. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27(1) : 26. 19 袁媛，吳芹，石京山，陳修平.丹參及其主要成分保肝作用的研究進(jìn)展 J.中國中藥雜志，2015,4（40）：590.20 吳杲，何招兵，吳漢斌.丹參酮的藥理作用研究進(jìn)展 J.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2005,14(10):1382.21 Efferth T, Kahl S,Paulus ,etal.Phyto chemistry and pharmacy economics of natural products derived from traditional Chinese medicine and Chinese materia medica with activity against tumor cells J.Mol Cancer The r,2008,7(1):152.22 董曉榮，伍鋼，董繼華，等.丹參酮對MKN-45細(xì)胞生長的影響 J.腫瘤防治雜志，2005，12(19):1465.23 鄭國燦，李智英.丹參酮對HepG2細(xì)胞抑制作用的體外實(shí)驗(yàn)研究 J.現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2004,32(5):296.24 張偉偉, 陸茵.丹參抗腫瘤活性成分研究新進(jìn)展 J .中國中藥雜志，2010,3（35）：390.25 劉玉玲，