酒曲糖化酶活力的測(cè)定

1、酒曲糖化酶活性測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方案第一，實(shí)驗(yàn)原理固體曲中的糖化酶(包括-淀粉酶和-淀粉酶)可以將淀粉水解成葡萄糖，葡萄糖可以被微生物發(fā)酵產(chǎn)生酒精。糖化酶活性越高，淀粉利用率越高?？扇苄缘矸劢?jīng)糖化酶水解生成葡萄糖，用費(fèi)林試劑法測(cè)定。二、儀器試劑1.儀器：燒杯、量筒、容量瓶、250毫升錐形瓶、堿性滴定管、試劑瓶、移液管試劑：(1)20克/升可溶性淀粉溶液：準(zhǔn)確稱取2克(精確到0.001克)絕對(duì)干可溶性淀粉，放入50毫升燒杯中，與少量水混合均勻，倒入裝有70毫升沸水的燒杯中，用20毫升水沖洗小燒杯，合并洗滌液，用文火煮沸至透明，冷卻后，用水定容至100毫升，以備當(dāng)天使用(2)1克/升葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱

2、取1克(精確至0.0001克)在100105干燥的無(wú)水葡萄糖，溶于水，加入5毫升濃鹽酸，用水調(diào)節(jié)至1L體積。(3)費(fèi)林試劑A.溶液a:稱取15克硫酸銅()和0.05克亞甲藍(lán)，將其溶解在水中，稀釋至1L。B.溶液b:稱取酒石酸鉀鈉、54克氫氧化鈉和4克亞鐵氯化鉀，溶于水，稀釋至1L。(4)乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH4.6)2毫升/升醋酸溶液：取118毫升冰醋酸，用水稀釋至1000毫升。b . 2毫升/升乙酸鈉溶液：稱取272克乙酸鈉(CH3COOH3H2O)，將其溶于水中，稀釋至1000毫升。將等體積a和b混合，得到ph為4.6的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液5)0.5毫升/升H2SO3溶液：測(cè)量28.3

3、毫升濃硫酸，慢慢倒入水中，稀釋至1L。6)1摩爾/升氫氧化鈉溶液。三.確定步驟(1)制備5%干曲浸提液稱取5克干曲粉(精確到0.01克)曲粉量(克)=51/(1-含水量)，放入250毫升燒杯中，加入水(90-5%含水量)毫升和緩沖溶液10毫升，在30水浴中浸提1小時(shí)，每15分鐘攪拌一次。然后用干濾紙過(guò)濾，棄去最初的5mL，取50mL清濾液備用。(2)糖化液的制備將50毫升20克/升可溶性淀粉溶液吸入100毫升容量瓶中，在35水浴中保持20分鐘后，準(zhǔn)確加入10毫升酶提取物，搖勻并立即計(jì)時(shí)，并在35水浴中保持1小時(shí)。立即加入3毫升1摩爾/升的氫氧化鈉溶液以停止反應(yīng)。然后冷卻至室溫，用水定容至刻度線

4、。此時(shí)，溶液應(yīng)該是堿性的?？瞻兹芤旱闹苽洌喝?0毫升20克/升可溶性淀粉溶液放入100毫升容量瓶中，在35水浴中保持20分鐘，然后加入3毫升1毫升/升氫氧化鈉溶液，然后準(zhǔn)確加入10毫升酶浸出液，搖勻并立即計(jì)時(shí)，在35水浴中保持1小時(shí)。冷卻至室溫并定容。此時(shí)，溶液應(yīng)該是堿性的。(3)糖含量的測(cè)定費(fèi)林試劑法：首先在費(fèi)林試劑中加入適量的糖化液，用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液滴定。4.數(shù)據(jù)記錄和結(jié)果計(jì)算糖化酶活性的定義：1克干曲在35和pH4.6下反應(yīng)1小時(shí)，將可溶性淀粉分解為1毫克葡萄糖所需的酶量稱為一個(gè)酶活性單位(U/g)。糖化酶活性(單位/克)=1.費(fèi)林試劑的校準(zhǔn)平行測(cè)定時(shí)間123費(fèi)林試劑的體積10.0010.0010.00葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量15.4015.5615.36葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度0.090080.089150.09031費(fèi)林試劑的濃度1.3871.3871.387林飛試劑的平均濃度1.3872.糖化酶活性的測(cè)定平行測(cè)定時(shí)間123費(fèi)林試劑的體積10.0010.0010.00添加的糖化液體積5.005.005.00葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量7.127.367.46葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度0.00019240.00018850.0001859費(fèi)林試劑的濃度49.5647.2744.84林飛試劑的平均濃度47.225.實(shí)驗(yàn)結(jié)論和總結(jié)：1.實(shí)驗(yàn)結(jié)論：這個(gè)