食品安全國家標準食品添加劑迷迭香提取物征求意見稿

1、中 華 人 民 共 和 國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會 發(fā)布中華人民共和國衛(wèi)生部 發(fā)布gb 中華人民共和國國家標準201-實施201-發(fā)布食品安全國家標準食品添加劑 迷迭香提取物（征求意見稿）食品安全國家標準食品添加劑 迷迭香提取物1 范圍本標準適用于以迷迭香（rosmarinus officinalis l.）的莖、葉為原料，經(jīng)有機溶劑或超臨界二氧化碳萃取、精制等工藝生產(chǎn)的食品添加劑迷迭香提取物。2 技術(shù)要求2.1 感官要求感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1 感官要求項 目要 求檢驗方法狀態(tài)粉末或液體取適量試樣置于清潔、干燥的白瓷盤或燒杯中，在自然光線下觀察其狀態(tài)。2.2 理化指標理化指標應(yīng)符合表2

2、的規(guī)定。項 目指 標檢驗方法脂溶性水溶性總抗氧化成分（以鼠尾草酸和鼠尾草酚計），w/%10.0附錄a中a.2迷迭香酸，w/%5.0附錄a中a.3水分a，w/%5.0gb 5009.3蒸餾法或卡爾費休法灰分，w/%3.0gb 5009.4鉛（pb）/（mg/kg）2gb 5009.75砷（as）/（mg/kg）3gb 5009.76殘留溶劑正己烷/（mg/kg） 甲醇/（mg/kg）2550附錄a中a.4a 僅針對水溶性粉末產(chǎn)品。注1：商品化的迷迭香提取物產(chǎn)品應(yīng)以符合本標準的迷迭香提取物為原料，可添加用于加工、貯存、標準化、溶解等工藝目的食用植物油和（或）符合食品添加劑質(zhì)量規(guī)格要求的乳化劑、抗結(jié)

3、劑等。注2：提取溶劑為甲醇、乙醇、丙酮和（或）正己烷。表2 理化指標附錄a檢驗方法 a.1 一般規(guī)定本標準所用試劑和水在未注明其他要求時，均指分析純試劑和gb/t 6682規(guī)定的三級水。試驗中所用標準溶液、雜質(zhì)測定用標準溶液、制劑和制品在未注明其他要求時，均按gb/t 601、 gb/t 602、 gb/t 603的規(guī)定制備。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。a.2 總抗氧化成分（以鼠尾草酸和鼠尾草酚計）的測定a.2.1 方法提要脂溶性迷迭香提取物中的主要抗氧化成分（鼠尾草酸和鼠尾草酚）在280 nm檢測波長下有最大吸收峰，根據(jù)鼠尾草酸標準品濃度和相應(yīng)的峰面積，可得出鼠尾草酸

4、的標準曲線公式，并根據(jù)標準曲線由試樣峰面積得到對應(yīng)的試樣溶液濃度。同時，由于在280 nm下，同濃度的鼠尾草酚的峰面積是鼠尾草酸的1.36倍。因此可以根據(jù)鼠尾草酸的標準曲線計算得到鼠尾草酚的濃度。a.2.2 試劑和材料a.2.2.1 丙酮。a.2.2.2 乙腈。a.2.2.3 鼠尾草酸標準品：純度98%。a.2.2.4 磷酸溶液：85%。a.2.3 儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。a.2.4 參考色譜條件a.2.4.1 色譜柱：c18反相色譜柱（4.6 mm250 mm，5 m）；或其它等效的色譜柱。 a.2.4.2 流動相a：水+0.1%磷酸溶液。 a.2.4.3 流動相b：乙腈+

5、0.1%磷酸溶液。a.2.4.4 柱溫：30 。a.2.4.5 檢測波長：280 nm。a.2.4.6 流動相流速：1.0 ml/min。a.2.4.7 進樣量：10 l。a.2.4.8 梯度洗脫條件：見表a.1。表a.1 梯度洗脫條件時間（min）流動相 a%流動相 b%流速（ml/min）0.077231.01.077231.025.001001.030.001001.030.577231.035.077231.0a.2.5 分析步驟a.2.5.1 繪制標準曲線以丙酮溶解鼠尾草酸標準品，配制混合梯度標準溶液，使鼠尾草酸濃度梯度在0.010 mg/ml1.000 mg/ml。在a.2.4參考

6、色譜條件下，對標準溶液進行測定，重復進樣一次。根據(jù)標準溶液濃度和峰面積，繪制標準曲線。線性關(guān)系應(yīng)達到r2 0.99。記錄標準曲線的線性公式y(tǒng) = ac + b。其中，c是鼠尾草酸的濃度，y是這個濃度對應(yīng)的峰面積，a和b分別為標準曲線的斜率和截距。a.2.5.2 試樣溶液的制備稱取試樣140 mg 180 mg（精確至0.0001 g），溶于20 ml丙酮，定容至25 ml容量瓶中，充分混勻后經(jīng)0.22 m微孔濾膜過濾。a.2.5.3 測定在a.2.4參考色譜條件下，對試樣液進行測定，重復進樣一次。參考附錄b中圖b.1迷迭香提取物色譜圖中鼠尾草酸和鼠尾草酚的相對位置確定出兩者的響應(yīng)峰，并且記錄兩

7、者的峰面積y1和y2。a.2.6 結(jié)果計算a.2.6.1 鼠尾草酸的濃度c1試樣溶液中鼠尾草酸的濃度c1以毫克每毫升（mg/ml）計，按式（a.1）計算：（a.1） 式中：y1試樣溶液中的鼠尾草酸的峰面積；a 鼠尾草酸標準曲線公式中的斜率；b 鼠尾草酸標準曲線公式中的截距。a.2.6.2 鼠尾草酚的濃度c2試樣溶液中鼠尾草酚的濃度c2以毫克每毫升（mg/ml）計，按式（a.2）計算：（a.2）式中：y2試樣溶液中的鼠尾草酚的峰面積；a 鼠尾草酸標準曲線公式中的斜率；b 鼠尾草酸標準曲線公式中的截距；1.36在280 nm下，同濃度的鼠尾草酚的峰面積是鼠尾草酸的1.36倍。a.2.6.3 總抗氧

8、化成分的質(zhì)量分數(shù)wi總抗氧化成分的質(zhì)量分數(shù)w1以鼠尾草酸和鼠尾草酚計，按式（a.3）計算：（a.3）式中：c1試樣溶液中鼠尾草酸的濃度，單位為毫克每毫升（mg/ml）；c2試樣溶液中鼠尾草酚的濃度，單位為毫克每毫升（mg/ml）；v試樣定容體積，單位為毫升（ml）；m試樣的質(zhì)量，單位為毫克（mg）。試驗結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不大于5 %。a.3 迷迭香酸的測定a.3.1 方法提要水溶性迷迭香提取物用甲醇溶解，以甲醇磷酸溶液為流動相，用以ods為填料的液相色譜柱和紫外檢測器或二極管陣列檢測器，對試樣中的迷迭香酸進行反相高效液相色譜分離和

9、測定，與標準品保留時間比較定性，峰面積外標法定量。a.3.2 試劑和材料a.3.2.1 甲醇。a.3.2.2 迷迭香酸標準品：純度98%。a.3.2.3 磷酸溶液：0.5 ml磷酸加入100 ml水。a.3.2.4 標準儲備液：準確稱取迷迭香酸標準品10 mg（精確至0.0001 g），用2 ml甲醇溶解并用蒸餾水定容至10 ml，混勻，置冰箱中保存。此溶液1 ml含迷迭香酸1.0 mg。a.3.3 儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。a.3.4 參考色譜條件a.3.4.1 色譜柱：以ods為填充物的色譜柱（4.6 mm250 mm，5 m）；或其它等效的色譜柱。a.3

10、.4.2 流動相：甲醇:磷酸溶液=45:55；a.3.4.3 流速：0.6 ml/min；a.3.4.4 柱溫：40c；a.3.4.5 檢測波長：283 nm；a.3.4.6 保留時間：18 min。a.3.5 分析步驟a.3.5.1 試樣溶液的制備準確稱取試樣200 mg（精確至0.0001 g），用水溶解并定容至100 ml， 經(jīng)0.45 m微孔濾膜過濾，即得試樣溶液。a.3.5.2 標準曲線的繪制準確吸取標準儲備液0, 2.5 l, 5 l, 10 l, 15 l, 20 l，在規(guī)定色譜條件下，進行色譜分析，根據(jù)迷迭香酸標準溶液的不同進樣量及相應(yīng)色譜峰面積，以色譜峰面積為縱坐標，迷迭香酸

11、含量為橫坐標，繪制標準曲線。a.3.5.3 測定準確吸取試樣溶液10 l，在規(guī)定色譜條件下，進行色譜分析，以保留時間定性，峰面積外標法定量。a.3.6 結(jié)果計算試樣中迷迭香酸的質(zhì)量分數(shù)w2，按公式（a.4）計算：（a.4）式中：c由標準曲得出的試樣溶液中迷迭香酸的濃度，單位為微克每毫升（g/ml）； v試樣溶液定容體積，單位為毫升（ml）； m試樣的質(zhì)量，單位為克（mg）；1000質(zhì)量換算系數(shù)。試驗結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不大于算術(shù)平均值的2.5 %。a.4 殘留溶劑（正己烷、甲醇）的測定 a.4.1 試劑和材料a.4.1.1 gb/t

12、 6682規(guī)定的一級水。a.4.1.2 氯化鈉溶液：10 g氯化鈉溶解于100 ml水中。a.4.1.3 待測組分標準品：正己烷和甲醇，色譜純。a.4.1.4 內(nèi)標溶液：160 g/g正丙醇溶液。a.4.2 儀器和設(shè)備氣相色譜儀：配備氫火焰離子檢測器（fid）和頂空進樣器。a.4.3 參考色譜條件a.4.3.1 色譜柱：石英毛細管柱（ 0.15 m15 m），涂層為6%氰丙基苯基和94%二甲基聚硅氧烷，涂層厚度為0.84 m?；蛲刃阅艿纳V柱。a.4.3.2 載氣：氦氣。a.4.3.3 載氣流速：0.8 ml/min。a.4.3.4 柱溫：40 保持5 min，以25 /min升溫至250

13、，保持6 min。a.4.3.5 進樣口溫度：250 。a.4.3.6 檢測器溫度：300 。a.4.3.7 進樣量：1.0 ml。a.4.4 參考頂空進樣條件a.4.4.1 試樣加熱溫度：90 。a.4.4.2 試樣加熱時間：10 min。a.4.4.3 試樣攪拌轉(zhuǎn)速：400 rpm。a.4.4.4 分流比：1:50a.4.4.5 注射器溫度：120 。a.4.4.6 壓射速度：1 ml/sa.4.5 分析步驟a.4.5.1 標準儲備液的制備用待測組分標準品（正己烷和甲醇），分別制備260 g/g的標準儲備液。a.4.5.2 標準溶液系列的制備按表a.2稱取葵花籽油，加入標準儲備液、氯化鈉溶

14、液和內(nèi)標溶液，制備標準溶液系列，分別注入20 ml進樣瓶中。表a.1 標準溶液系列的制備方法葵花籽油/mg標準儲備液/mg氯化鈉溶液/mg內(nèi)標溶液/mg2505027001000250100265010002502002550100025050022501000250100017501000a.4.5.3 試樣溶液的制備稱取0.25 g試樣（精確至0.0001 g），加入氯化鈉溶液2750 mg和內(nèi)標溶液1000 mg，注入20 ml進樣瓶中。a.4.5.4 測定在a.4.3和a.4.4參考操作條件下，分別對標準溶液系列和試樣溶液進行色譜分析。a.4.6 結(jié)果計算a.4.6.1 平均響應(yīng)因子fi標準溶液的平均響應(yīng)因子f，按式（a.5）計算：（a.5）式中：cs每一標準溶液中溶劑的濃度，單位為微克每克（g/g）；ci每一標準溶液中正丙醇（內(nèi)標物）的濃度，單位為微克每克（g/g）；ri每一標準溶液色譜圖中正丙醇（內(nèi)標物）的峰面積值；rs每一標準溶液色譜圖中溶劑的峰面積值；5標準溶液系列數(shù)。a.4.6.2 待測組分含量wi試樣中待測組分含量wi以毫克每千克（mg/kg）計，按式（a.6）計算：（a.6）式中：ru試樣溶液色譜圖中溶劑的峰面積值；r0試樣溶液色譜