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文檔簡(jiǎn)介
1、高二生物動(dòng)物細(xì)胞工程教案示例一第二節(jié) 細(xì)胞工程簡(jiǎn)介 二 動(dòng)物細(xì)胞工程 教學(xué)模式自學(xué)指導(dǎo)。啟發(fā)、探究。教學(xué)手段1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的自制掛圖。2動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體制備過程的教學(xué)課件。3有關(guān)克隆羊“多莉”的錄像資料。4實(shí)物投影儀。課時(shí)安排二課時(shí)。教學(xué)過程第一課時(shí)動(dòng)物細(xì)胞工程(1)教學(xué)步驟教師活動(dòng)學(xué)生活動(dòng)教學(xué)手段課前預(yù)習(xí)復(fù)習(xí)引入 課前,教師布置預(yù)習(xí)作業(yè):請(qǐng)理出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的知識(shí)脈絡(luò)。 2你認(rèn)為該知識(shí)點(diǎn)中應(yīng)抓住哪些主要內(nèi)容? 3針對(duì)該知識(shí)點(diǎn)中不理解或不甚理解的內(nèi)容提出問題。 提問:植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些? 在學(xué)生回答的基礎(chǔ)上引出動(dòng)物細(xì)胞工程常用的五大技術(shù)。1按照教師要求,自覺通讀預(yù)習(xí)內(nèi)容
2、。2在通讀基礎(chǔ)上劃出重點(diǎn)、難點(diǎn),并找出問題。3將知識(shí)脈絡(luò)和提出的問題寫成預(yù)習(xí)筆記。回答:植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交技術(shù)。學(xué)生自學(xué)學(xué)習(xí)動(dòng)物細(xì)胞工程第一大技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(一)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 提問:請(qǐng)據(jù)圖簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過程。 在學(xué)生回答的基礎(chǔ)上,對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程,教師做如下歸納: 在實(shí)物投影儀下展示自己的預(yù)習(xí)筆記并指圖講解動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的大致過程。不足之處,由其他同學(xué)補(bǔ)充。實(shí)物投影儀自制掛圖(培養(yǎng)條件下無限傳代) 提問:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么?較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處? 鼓勵(lì)學(xué)生把對(duì)上述知識(shí)點(diǎn)中遇到的不理解或不甚理解的問題大膽提出,以求解決。 教師在認(rèn)真?zhèn)浯缶V、備教材、備學(xué)生的基礎(chǔ)
3、上對(duì)學(xué)生可能提出的問題應(yīng)有所預(yù)期,并做好充分準(zhǔn)備?;卮穑簞?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是:葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。其獨(dú)特之處在于:(1)液體培養(yǎng)基;(2)其成分中有動(dòng)物血清。集中質(zhì)疑:(1)為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料?(2)為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單-個(gè)細(xì)胞?(3)為什么選用胰蛋白酶做上述處理?(4)培養(yǎng)的細(xì)胞為何貼壁生長(zhǎng)?(5)如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng);細(xì)胞株和細(xì)胞系?(6)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像植物組培那樣最終培養(yǎng)成生物個(gè)體?學(xué)生質(zhì)疑教學(xué)步驟 教師活動(dòng) 學(xué)生活動(dòng)教學(xué)手段知識(shí)小結(jié)反饋與提高教師提出趣味性問題以檢測(cè)本知識(shí)點(diǎn)的掌握情況及知識(shí)遷移運(yùn)
4、用能力,例:如何理解利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),解決為燒傷病人植皮問題?抓住學(xué)生思維的興奮點(diǎn),提出開放性問題:如果你是一名教師,在本節(jié)課中,你讓學(xué)生把握的重點(diǎn)內(nèi)容是什么?教師借助投影儀打出事先準(zhǔn)備的比較表分析并得出結(jié)論:利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制特點(diǎn),可用燒傷病人自己的健康皮膚細(xì)胞培養(yǎng)出大量的自身薄層皮膚細(xì)胞,以供植皮所需。學(xué)生興趣盎然,各抒己見,最后由師生共同點(diǎn)評(píng),選取最佳方案。將本節(jié)知識(shí)點(diǎn)進(jìn)行整合,并與前期知識(shí)串接,完成比較表。知識(shí)遷移運(yùn)用進(jìn)行思維和學(xué)法訓(xùn)練投影顯示比較表重點(diǎn)提示采用“自學(xué)指導(dǎo)”模式學(xué)習(xí)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),較以往傳統(tǒng)教學(xué)模式,其優(yōu)勢(shì)在于:變“講堂”為“學(xué)堂”,使
5、學(xué)生由“學(xué)會(huì)”到“會(huì)學(xué)”、“樂學(xué)”;幫助學(xué)生掌握學(xué)習(xí)規(guī)律和科學(xué)學(xué)習(xí)的方法,養(yǎng)成良好的習(xí)慣,培養(yǎng)學(xué)習(xí)能力,開發(fā)智力,發(fā)展非智力因素和良好個(gè)性心理品質(zhì),讓學(xué)生“學(xué)會(huì)學(xué)習(xí)”,做學(xué)習(xí)的主人。教學(xué)中,可根據(jù)學(xué)生的基礎(chǔ)、課時(shí)進(jìn)度等決定擴(kuò)展和深入的程度,并指導(dǎo)學(xué)生總攬全課,把握重點(diǎn),切忌“撿了芝麻,丟了西瓜”。重點(diǎn)提示1在教學(xué)中,應(yīng)強(qiáng)化學(xué)生的主體意識(shí),開發(fā)學(xué)生的潛能,使學(xué)生的個(gè)性在共性發(fā)展的同時(shí)也能協(xié)調(diào)發(fā)展,使知識(shí)不單是講課的內(nèi)容,考試的內(nèi)容,而成為有利于學(xué)生綜合素質(zhì)全面提高的載體和素材。教師應(yīng)善于從教材內(nèi)容和學(xué)生心理狀態(tài)出發(fā),采用多種方法設(shè)計(jì)富有啟發(fā)性的問題,創(chuàng)設(shè)探索的情境,激發(fā)學(xué)生思考和探索的欲望,從而
6、達(dá)到在獲取知識(shí)的同時(shí)培養(yǎng)他們的多方面能力的目的。2適當(dāng)增加難度,能在教學(xué)過程中引起學(xué)生適度的認(rèn)識(shí)沖突。前蘇聯(lián)教育家贊可夫就極力主張“高難度原則”,以求得學(xué)生在一定困難水平出現(xiàn)認(rèn)知沖突,增強(qiáng)學(xué)生參與討論的積極性,促進(jìn)其發(fā)展。3在教學(xué)過程中,適度拓寬教學(xué)內(nèi)容,擴(kuò)大學(xué)生的知識(shí)面,開發(fā)學(xué)生的思維空間,有利于學(xué)生發(fā)散性思維的培養(yǎng)。4根據(jù)學(xué)生的認(rèn)知水平和教學(xué)內(nèi)容的難易程度,合理安排教學(xué)容量,控制好課堂教學(xué)的密度;該講的要講深、講透,并善于從多角度、多層面來挖掘知識(shí)的蘊(yùn)含,從而把握好教學(xué)的力度;同時(shí)還要注意課堂節(jié)奏的急緩、疏密、錯(cuò)落有致。板書設(shè)計(jì)動(dòng)物細(xì)胞工程培養(yǎng)液的主要成分:葡萄糖、維生素、氨基酸、無機(jī)鹽、
7、動(dòng)物血清等。2、應(yīng)用:(1)生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品。 (3)為燒傷病人植皮。(2)檢測(cè)有毒物質(zhì)。 (4)用于科學(xué)研究。教案點(diǎn)評(píng):1采用自學(xué)、指導(dǎo)模式對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行較深刻、透徹地學(xué)習(xí),為學(xué)習(xí)其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)打好基礎(chǔ)。2教師啟發(fā)學(xué)生回憶植物體細(xì)胞雜交過程;通過新舊知識(shí)對(duì)比,引導(dǎo)學(xué)生大膽推測(cè)動(dòng)物細(xì)胞融合過程,培養(yǎng)學(xué)生知識(shí)遷移能力,并通過課件演示全過程,加強(qiáng)直觀性,培養(yǎng)學(xué)生的觀察、思維能力。3教師給出資料,引出探究點(diǎn)。學(xué)生通過討論、辯論,設(shè)計(jì)多種制備革克隆抗體的方案。然后通過觀察全過程課件,質(zhì)疑、釋疑(多方向),并由學(xué)生概括單克隆抗體的制備工程。4胚胎移植、核移植為書中小字內(nèi)容,以學(xué)生自學(xué)為主
8、,教師予以適當(dāng)指導(dǎo)、點(diǎn)撥。5以“多莉”羊的培育過程為主線,將動(dòng)物細(xì)胞工程五種技術(shù)的知識(shí)有機(jī)地串接起來,構(gòu)成完整的知識(shí)體系。 教案示例二第二節(jié) 細(xì)胞工程簡(jiǎn)介 二 動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、核移植等,其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是基礎(chǔ)。1、結(jié)合“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程示意圖”(見下圖),首先讓學(xué)生明晰幾個(gè)重要概念:原代培養(yǎng):取組織剪碎胰蛋白酶處理成單個(gè)細(xì)胞配制細(xì)胞懸液培養(yǎng)傳代培養(yǎng):將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)細(xì)胞株:能傳代42-50代的傳代細(xì)胞叫細(xì)胞株細(xì)胞系:帶有癌變特點(diǎn),能在培養(yǎng)條件下無限地傳代下去,這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系2、展示197
9、5年免疫學(xué)家米爾斯和柯勒進(jìn)行的“單克隆抗體的制備”圖片(下左圖)和某些科學(xué)家設(shè)計(jì)的“克隆人或器官的技術(shù)路線與步驟”圖片(下右圖) 3、引導(dǎo)學(xué)生討論下面的問題:(1)據(jù)圖歸納、總結(jié)單克隆抗體的制備流程圖。 參考答案:(2)通過你單克隆抗體制備過程的了解,說一說什么是單克隆抗體?參考答案:通過克隆形成單個(gè)B細(xì)胞的細(xì)胞群,這群細(xì)胞有可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一,特異性強(qiáng)的抗體。(3)說一說單克隆抗體的出現(xiàn)為人類展示了哪些美好的前景?(4)據(jù)圖歸納、總結(jié)克隆人器官的流程式圖(5)克隆問題、胚胎干細(xì)胞研究可能給人類生存帶來哪些積極的影響?哪些負(fù)面的影響?擴(kuò)展資料“神舟”飛船上的細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn) 大家知道,細(xì)胞是生
10、物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位,科學(xué)家對(duì)生命現(xiàn)象的探索都要深入到細(xì)胞中尋求答案。20世紀(jì)后半葉,科學(xué)家對(duì)細(xì)胞的研究取得許多重大的進(jìn)展,細(xì)胞工程即是其中之一。細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法,通過某種工程手段,在細(xì)胞整體水平或細(xì)胞器水平上,按人們的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品的一門綜合科學(xué)技術(shù)。它可分為植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工程兩大類?!吧裰邸?號(hào)飛船做了兩個(gè)實(shí)驗(yàn);一個(gè)是植物細(xì)胞融合兩個(gè)不同品種煙草細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn),另一個(gè)是動(dòng)物細(xì)胞融合小白鼠淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的融合實(shí)驗(yàn)。 飛船發(fā)射前夕,中科院上海生命科學(xué)研究院植物生理生態(tài)研究所的。科技人員,在發(fā)射基地的空間細(xì)胞電融合實(shí)驗(yàn)室
11、里,按不同時(shí)間段精心培育了8批煙草苗,其中1號(hào)苗開粉色花,2號(hào)苗開黃色花。最后從最好的一批提取細(xì)胞,并去掉細(xì)胞壁,讓1號(hào)和2號(hào)細(xì)胞在空間融合。在地面上,這兩種細(xì)胞已做過融合實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)出的再生植株開出的是黃花,但形狀卻和1號(hào)相同。 做小白鼠細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的是中科院上海生物化學(xué)細(xì)胞生物學(xué)研究所。實(shí)驗(yàn)用的淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞是分別從純種小白鼠脾臟和骨髓中提取的。據(jù)介紹,淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體,但在體外培養(yǎng)細(xì)胞不能繁殖;而骨髓瘤細(xì)胞在體外可無限繁殖。科學(xué)家就是想利用這兩種細(xì)胞的各自優(yōu)勢(shì)進(jìn)行細(xì)胞融合,從而得到能在體外大繁殖的雜交細(xì)胞,以便在體外大量生產(chǎn)單克隆抗體??贵w是人或動(dòng)物的血液中,由于病菌或病毒的侵入而產(chǎn)
12、生的具有抵抗或殺死該種病菌、病毒作用的物質(zhì)。生產(chǎn)抗體就相當(dāng)于生產(chǎn)藥物。 據(jù)專家介紹,太空細(xì)胞電融合能育出地球上難得的新品種。如通過太空雜交,可以生產(chǎn)出具牛奶味、高品質(zhì)的稻米,耐鹽堿水稻等等,還能培育出特定的動(dòng)物體細(xì)胞,源源不斷地為藥廠分泌大量所需的抗體。此次小白鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)如果順利,將率先從雜交細(xì)胞的分泌物中直接提取乙肝抗體,為實(shí)現(xiàn)空間藥廠提供第一手資料。 在太空微重力條件下,由于重力沉降現(xiàn)象消失,不同的細(xì)胞能更容易融合,其融合率可以從地面的08以下提高到1012,細(xì)胞的存活率也能從3806提高到530。這兩批細(xì)胞經(jīng)電融合儀的“孕育”,已經(jīng)順利完成融合過程。但新生命會(huì)長(zhǎng)成什么樣?還得在地面培
13、育長(zhǎng)大后才能見分曉。單克隆抗體 體內(nèi)免疫法很難獲得單克隆抗體(monoclonal antibody,McAb)。如能將所需要的抗體形成細(xì)胞選出并能在體外進(jìn)行培養(yǎng)即可獲得已知特異的單克隆抗體。1975年德國(guó)學(xué)者Kohler和英國(guó)學(xué)者M(jìn)ilstein將小鼠骨髓瘤細(xì)胞和經(jīng)綿羊紅細(xì)胞(sheep rue blood cell),SRBC)免疫的小鼠脾細(xì)胞在體外進(jìn)行兩種細(xì)胞融合,結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分形成的雜交細(xì)胞既能繼續(xù)在體外培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)繁殖又能分泌抗SRBC抗體,稱這種雜交細(xì)胞系為雜交瘤(hybridoma)。這種雜交瘤細(xì)胞既具有骨髓瘤細(xì)胞能大量無限生長(zhǎng)繁殖的特性,又具有抗體形成細(xì)胞合成和分泌抗體的能力。
14、它們是由識(shí)別一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的均一性抗體,故稱之為單克隆抗體。應(yīng)用雜交瘤技術(shù)可獲得幾乎所有抗原的單克隆抗體,只要這種抗原能引起小鼠的抗體應(yīng)答。這種用雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體可視為第二代抗體。單克隆抗體由于純度高、特異性強(qiáng)、可以提高各種血清學(xué)方法檢測(cè)抗原的敏感性及特異性,但單克隆抗體多為雙價(jià)抗體,與抗原結(jié)合不易交聯(lián)為大分子集團(tuán),故不易出現(xiàn)沉淀反應(yīng)。單克隆抗體的應(yīng)用大促進(jìn)了對(duì)各種傳染病和惡性腫瘤診斷的準(zhǔn)確性。單克隆抗體亦可與核素、各種毒素(如白喉外毒素或篦麻毒素)或藥物通過化學(xué)偶聯(lián)或基因重組制備成導(dǎo)向藥物(targetting drug)用于腫瘤的治療,是一種新型免疫治療方法,有可
15、能提高對(duì)腫瘤的療效。單克隆抗體亦可用于對(duì)各種免疫細(xì)胞及其它組織細(xì)胞表面分子的檢測(cè),這對(duì)免疫細(xì)胞的分離、鑒定及分類及研究各種膜表面分子的結(jié)構(gòu)與功能都具有重要意義。單克隆抗體在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用單克隆抗體在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域中顯示了極大的應(yīng)用價(jià)值,是親和層析中重要的配體,是免疫組化中主要的抗體,是免疫檢驗(yàn)中的新型試劑,是生物治療的導(dǎo)向武器。作為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)試劑,單克隆抗體可以充分發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)。單克隆抗體的特異性強(qiáng),可將抗原抗體反應(yīng)的特異性大大提高,減少了可能的交叉反應(yīng),使試驗(yàn)結(jié)果可信度更大。單克隆抗體的均一性和生物活性單一性使抗原抗體反應(yīng)結(jié)果便于質(zhì)量控制,利于標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化。目前已有許多檢驗(yàn)試劑盒用單抗制成
16、,其主要用途如下:1診斷各類病原體這是單克隆抗體應(yīng)用最多的領(lǐng)域,已有大量的商品診斷試劑供選擇。如用于診斷乙肝病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒和各種微生物感染的試劑等。單克隆抗體具有靈敏度高、特異性好的特點(diǎn)。尤其在鑒別菌種型及亞型、病毒的變異株以及寄生蟲不同生活周期的抗原性等方面更具獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。2腫瘤特異性抗原和腫瘤相關(guān)抗原的檢測(cè)用于腫瘤的診斷、分型及定位。盡管目前尚未制備出腫瘤特異性抗原的單克隆抗體,但對(duì)腫瘤相關(guān)抗原(例如甲胎蛋白和癌胚抗原)的單克隆抗體早已用于臨床檢驗(yàn)。近年來,有人利用單克隆抗體進(jìn)行腫瘤分型,對(duì)制定治療方案和判斷預(yù)后也有幫助。用抗腫瘤單抗檢查病理標(biāo)本,可協(xié)助確定轉(zhuǎn)移腫瘤的原
17、發(fā)部位。以放射性核素標(biāo)記單克隆抗體主要用于體內(nèi)診斷,結(jié)合X線斷層掃描技術(shù),可對(duì)腫瘤的大小及其轉(zhuǎn)移灶作出定位診斷。3檢測(cè)淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志用于區(qū)分細(xì)胞亞群和細(xì)胞分化階段。例如檢測(cè)CD系列標(biāo)志,有助于了解細(xì)胞的分化和T細(xì)胞亞群的數(shù)量和質(zhì)量變化,對(duì)多種疾病診斷具有參考意義。對(duì)細(xì)胞表面抗原的檢查在白血病患者的疾病分期、治療效果、預(yù)后判斷等方面也有指導(dǎo)作用。組織相容性抗原是移植免疫學(xué)的重要內(nèi)容,而應(yīng)用單克隆抗體對(duì)HLA進(jìn)行位點(diǎn)檢查與配型可得到更可信的結(jié)果。4機(jī)體微量成分的測(cè)定應(yīng)用單克隆抗體和免疫學(xué)技術(shù),可對(duì)機(jī)體的多種微量成分進(jìn)行測(cè)定,如諸多酶類、激素、維生素、藥物等;對(duì)受檢者健康狀態(tài)判斷、疾病檢出、指導(dǎo)
18、診斷和治療均具有實(shí)際意義。上述應(yīng)用的單克隆抗體屬于鼠源性,作為體外診斷試劑是滿意的。鼠源單克隆抗體如作為生物制劑應(yīng)用于人體,則因是異性蛋白可引起過敏反應(yīng)甚至危及生命。從臨床治療及預(yù)防疾病的要求,希望制備出人源性單克隆抗體。目前雖然已有文獻(xiàn)報(bào)道,通過人鼠細(xì)胞雜交及人人細(xì)胞雜交進(jìn)行了一些探索,但對(duì)這些細(xì)胞株培養(yǎng)很不穩(wěn)定,融合細(xì)胞中人的染色體往往呈選擇性丟失,以致細(xì)胞株難以維持培養(yǎng)。因此制備人源單克隆抗體是目前急待解決的問題。雜交瘤技術(shù)的基本原理雜交瘤抗體技術(shù)的基本原理是通過融合兩種細(xì)胞而同時(shí)保持兩者的主要特征。這兩種細(xì)胞分別是經(jīng)抗原免疫的小鼠細(xì)胞作小鼠骨髓瘤細(xì)胞。脾淋巴細(xì)胞的主要特征是它的抗體分泌
19、功能和能夠在選擇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)(選擇原理后見),小鼠骨髓瘤細(xì)胞則可在培養(yǎng)條件下無限分裂、增殖,即所謂永生性。在選擇培養(yǎng)基的作用下,只有B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交才具有持續(xù)增殖的能力,形成同時(shí)具備抗體分泌功能和保持細(xì)胞永生性兩種特征的細(xì)胞克隆。其原理從下列幾個(gè)主要步驟闡明。(一)細(xì)胞的選擇與融合建立雜交瘤技術(shù)的是制備對(duì)抗原特異的單克隆抗體,所以融合細(xì)胞一方必須選擇經(jīng)過抗原免疫的B細(xì)胞,通常來源于免疫動(dòng)物的碑細(xì)胞。脾是B細(xì)胞聚集的重要場(chǎng)所,無論以何種免疫方式刺激,脾內(nèi)皆會(huì)出現(xiàn)明顯的抗體應(yīng)答反應(yīng)。融合細(xì)胞的另一方則是為了保持細(xì)胞融合后細(xì)胞的不斷增殖,只有腫瘤細(xì)胞才具備這種特性。選擇同一體系的細(xì)胞可增
20、加融合的成功率。多發(fā)性骨髓瘤是B細(xì)胞系惡性腫瘤,所以是理想的脾細(xì)胞融合伴侶。目前常用的B細(xì)胞瘤株有:P3-X63-Ag8(KhlerandMilstein,1975),P3-NSI/1-Ag4-1(KhlerandMilstein,1976),X63-Ag8.563(Kearneyetal,1979),Sp2/0-Ag14(Schulmanetal,1978)等,這些細(xì)胞株皆為HAT敏感細(xì)胞株。使用細(xì)胞融合劑造成細(xì)胞膜一定程度的損傷,使細(xì)胞易于相互粘連而融合在一起。最佳的融合效果應(yīng)是最低程度的細(xì)胞損傷而又產(chǎn)生最高頻率的融合。聚乙二醇(PEG10002000)是目前最常用的細(xì)胞融合劑,一般應(yīng)用濃
21、度為40(W/V)。(二)選擇培養(yǎng)基的應(yīng)用細(xì)胞融合是一個(gè)隨機(jī)的物理過程。在小鼠脾細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞混合細(xì)胞懸中,經(jīng)融合后細(xì)胞將以多種形式出現(xiàn)。如融合的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞、融合的脾細(xì)胞和脾細(xì)胞、融合的瘤細(xì)胞和瘤細(xì)胞、未融合的脾細(xì)胞、未融合的瘤細(xì)胞以及細(xì)胞的多聚體形式等。正常的脾細(xì)胞在培養(yǎng)基中存活僅57天,無需特別篩選,細(xì)胞的多聚體形式也容易死去。而未融合的瘤細(xì)胞則需進(jìn)行特別的篩選去除。細(xì)胞DNA合成一般有兩條途徑。主途徑是由糖和氨基酸合成核苷酸,進(jìn)而合成DNA,葉酸作為重要的輔酶參與這一合成過程。另一輔助途徑是在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情況下,經(jīng)次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核
22、苷激酶(TK)的催化作用合成DNA。細(xì)胞融合的選擇培養(yǎng)基中有三種關(guān)鍵成分:次黃嘌呤(hypoxanthine,H)、氨甲蝶呤(aminopterin,A)和胸腺嘧啶核苷(thymidine,T),所以取三者的字頭稱為HAT培養(yǎng)基。氨甲蝶呤是葉酸的拮抗劑,可阻斷瘤細(xì)胞利用正常途徑合成DNA,而融合所用的瘤細(xì)胞是經(jīng)毒性培養(yǎng)基選出的HGPRT細(xì)胞株,所以不能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。只有融合細(xì)胞具有親代雙方的遺傳性能,可在HAT培養(yǎng)基中長(zhǎng)期存活與繁殖(圖1)。 圖1細(xì)胞融合與HAT選擇示意圖(三)有限稀釋與抗原特異性選擇在動(dòng)物免疫中,應(yīng)選用高純度抗原。一種抗原往往有多個(gè)決定簇,一個(gè)動(dòng)物體在受到抗原刺激后產(chǎn)生
23、的體液免疫應(yīng)答,實(shí)質(zhì)是眾多B細(xì)胞群的抗體分泌。而針對(duì)目標(biāo)抗原表位的B細(xì)胞只占極少部分。由于細(xì)胞融合是一個(gè)隨機(jī)的過程,在已經(jīng)融合的細(xì)胞中,有相當(dāng)比例的無關(guān)細(xì)胞的融合體,需細(xì)篩選去除。篩選過程一般分為兩步進(jìn)行:一是融合細(xì)胞的抗體篩選,二是在此基礎(chǔ)上進(jìn)行的特異性抗體篩選。將融合的細(xì)胞進(jìn)行充分稀釋,使分配到培養(yǎng)板的每一孔中的細(xì)胞數(shù)在0至數(shù)個(gè)細(xì)胞之間(30的孔為0才能保證每個(gè)孔中是單個(gè)細(xì)胞),培養(yǎng)后取上清以ELISA法選出抗體高分泌性的細(xì)胞;這一過程常被習(xí)慣地稱作克隆化。將這些陽(yáng)性細(xì)胞再進(jìn)行克隆化,應(yīng)用特異性抗原包被的ELISA找出針對(duì)目標(biāo)抗原的抗體陽(yáng)性細(xì)胞株,增殖后進(jìn)行凍存、體外培養(yǎng)或動(dòng)物腹腔接種培養(yǎng)
24、。制備單克隆抗體的基本技術(shù)制備單克隆抗體是復(fù)雜而費(fèi)時(shí)的工作,整個(gè)技術(shù)流程如圖1。(一)抗原提純與動(dòng)物免疫對(duì)抗原的要求是純度越高越好,尤其是初次免疫所用的抗原。如為細(xì)胞抗原,可取1107個(gè)細(xì)胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐劑并經(jīng)充分乳化,如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原,可將抗原所在的電泳條帶切下,研磨后直接用以動(dòng)物免疫。選擇與所用骨髓瘤細(xì)胞同源的BALB/c健康小鼠,鼠齡在812周,雌雄不限。為避免小鼠反應(yīng)而不佳或免疫過程中死亡,可同時(shí)免疫34只小鼠。免疫過程和方法與多克隆抗血清制備基本相同,因動(dòng)物、抗原形式、免疫途徑不同而異,以獲得高效價(jià)抗體為最終目的。免疫間隔一般23周。一般被免疫動(dòng)物的
25、血清抗體效價(jià)越高,融合后細(xì)胞產(chǎn)生高效價(jià)特異抗體的可能性越大,而且單克隆抗體的質(zhì)量(如抗體的濃度和親和力)也與免疫過程中小鼠血清抗體的效價(jià)和親和力密切相關(guān)。末次免疫后34天,分離脾細(xì)胞融合。(二)骨髓瘤細(xì)胞及飼養(yǎng)細(xì)胞的制備選擇瘤細(xì)胞株的最重要的一點(diǎn)是與待融合的B細(xì)胞同源。如待融合的是脾細(xì)胞,各種骨髓瘤細(xì)胞株均可應(yīng)用,但應(yīng)用最多的是Sp2/0細(xì)胞株。該細(xì)胞株生長(zhǎng)及融合效率均佳,此外,該細(xì)胞株本身不分泌任何免疫球蛋白重鏈或輕鏈。細(xì)胞的最高生長(zhǎng)刻度為9105/ml,倍增時(shí)間通常為1015h。融合細(xì)胞應(yīng)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、細(xì)胞形態(tài)和活性佳的細(xì)胞(活性應(yīng)大于95)。骨髓瘤細(xì)胞株在融合前應(yīng)先用含8-氮鳥嘌呤
26、的培養(yǎng)基作適應(yīng)培養(yǎng),在細(xì)胞融合的前一天用新鮮培養(yǎng)基調(diào)細(xì)胞濃度為2105/ml,次日一般即為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。圖1雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的流程在體外培養(yǎng)條件下,細(xì)胞的生長(zhǎng)依賴適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度,因而,在培養(yǎng)融合細(xì)胞或細(xì)胞克隆化培養(yǎng)時(shí),還需加入其他飼養(yǎng)細(xì)胞(feedercell)。常用的飼養(yǎng)細(xì)胞為小鼠的腹腔細(xì)胞,制備方法為用冷凍果糖液注入小鼠腹腔,輕揉腹部數(shù)次,吸出后的液體中即含小鼠腹腔細(xì)胞,其中在巨噬細(xì)胞和其他細(xì)胞。亦有用小鼠的脾細(xì)胞、大鼠或豚鼠的腹腔細(xì)胞作為飼養(yǎng)細(xì)胞的。在制備飼養(yǎng)細(xì)胞時(shí),切忌針頭刺破動(dòng)物的消化器官,否則所獲細(xì)胞會(huì)有嚴(yán)重污染。飼養(yǎng)細(xì)胞調(diào)至1105/ml,提前一天或當(dāng)天置板孔中培養(yǎng)。(
27、三)細(xì)胞融合細(xì)胞融合是雜交瘤技術(shù)的中心環(huán)節(jié),基本步驟是將兩種細(xì)胞混合后加入PEG使細(xì)胞彼此融合。其后吧培養(yǎng)液稀釋PEG,消除PEG的作用。將融合后的細(xì)胞適當(dāng)稀釋,分置培養(yǎng)板孔中培養(yǎng)。融合過程中有幾個(gè)問題應(yīng)特別注意。細(xì)胞比例:骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞的比值可從1:2到1:10不等,常用1:4的比例。應(yīng)保證兩種細(xì)胞在融合前都具有較高活性。反應(yīng)時(shí)間:在兩種細(xì)胞的混合細(xì)胞懸液中,第1min滴加4.5ml培養(yǎng)液;間隔2min滴加5ml培養(yǎng)液,爾后加培養(yǎng)液50ml。培養(yǎng)液的成分:對(duì)融合細(xì)胞,良好的培養(yǎng)液尤其重要,其中的小牛血清、各種離子和營(yíng)養(yǎng)成分均需嚴(yán)格配制。如融合效率降低,應(yīng)隨時(shí)核查培養(yǎng)基情況。(四)有限稀釋
28、法篩選陽(yáng)性株一般選用的骨髓瘤細(xì)胞為HAT敏感細(xì)胞株,所以只有融合的細(xì)胞才能待續(xù)存活一周以上。融合細(xì)胞呈克隆生長(zhǎng),經(jīng)有限稀釋后(一般稀釋至0.8個(gè)細(xì)胞/孔),按Poisson法計(jì)算,應(yīng)有36的孔為1個(gè)細(xì)胞/孔。細(xì)胞培養(yǎng)至覆蓋020孔底時(shí),吸取培養(yǎng)上清用ELISA檢測(cè)抗體含量。首先依抗體的分泌情況篩選出高抗體分泌孔,將孔中細(xì)胞再行克隆化,爾后進(jìn)行抗原特異的ELISA測(cè)定,選高分泌特異性細(xì)胞株擴(kuò)大培養(yǎng)或凍存。(五)單克隆抗體的制備和凍存篩選出的陽(yáng)性細(xì)胞株應(yīng)及早進(jìn)行抗體制備,因?yàn)槿诤霞?xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),發(fā)生污染、染包體丟失和細(xì)胞死亡的機(jī)率增加??贵w制備有兩種方法。一是增量培養(yǎng)法,即將雜交瘤細(xì)胞在體外培
29、養(yǎng),在培養(yǎng)液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設(shè)備,一般應(yīng)用無血清培養(yǎng)基,以利于單克隆抗體的濃縮和純化。最普遍采用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠,先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射,一周后將雜交瘤細(xì)胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產(chǎn)生,每只小鼠可收集510ml的腹水,有時(shí)甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高,每毫升可達(dá)數(shù)毫克甚至數(shù)十毫克水平。此外,腹水中的雜蛋白也較少,便于抗體的純化。接種細(xì)胞的數(shù)量應(yīng)適當(dāng),一般為5105/鼠,可根據(jù)腹水生長(zhǎng)情況適當(dāng)增減。選出的陽(yáng)性細(xì)胞株應(yīng)及早凍存。凍存的溫度越低越好,凍存于液氮的細(xì)胞株活性僅有輕微的降低,而凍存
30、在70冰箱則活性改變較快。細(xì)胞不同于菌種,凍存過程中需格外小心。二甲亞砜(DMSO)是普遍應(yīng)用的凍存保護(hù)劑。凍存細(xì)胞復(fù)蘇后的活性多在5095之間。如果低于50,則說明凍存復(fù)蘇過程有問題。(六)單克隆抗體的純化單克隆抗體的純化方法同多克隆抗體的純化,腹水特異性抗體的濃度較抗血清中的多克隆抗體高,純化效果好。按所要求的純度不同采用相應(yīng)的純化方法。一般采用鹽析、凝膠過濾和離子交換層析等步驟達(dá)到純化目的,也有采用較簡(jiǎn)單的酸沉淀方法。目前最有效的單克隆抗體純化方法為親和純化法,多用葡萄球菌A蛋白或抗小鼠球蛋白抗體與載體(最常用Sepharose)交聯(lián),制備親和層析柱將抗體結(jié)合后洗脫,回收率可達(dá)90以上。
31、蛋白可與IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3結(jié)合,同時(shí)還結(jié)合少量的IgM。洗脫液中的抗體濃度可用紫外光吸收法粗測(cè),小鼠IgG單克隆抗體溶液在A280nm時(shí),1.44(吸光單位)相當(dāng)于1mg/ml。經(jīng)低pH洗脫后在收集管內(nèi)預(yù)置中和液或速加中和液對(duì)保持純化抗體的活性至關(guān)重要。典型例題1動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中,正確的是A、誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B、所用的技木術(shù)手段完全相同C、所采用的原理完全相同 D、都能形成雜種細(xì)胞【解析】:需從如下幾方面入手分析,首先兩種細(xì)胞工程技術(shù)中都要進(jìn)行細(xì)胞融合,且融合的技術(shù)基本相同;第二.誘導(dǎo)的方法,除動(dòng)物細(xì)胞的融合常用滅活的病毒做誘導(dǎo)劑外,其他的兩
32、者基本相同;第三.兩者采用的原理不同,動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性,最終形成的是雜種細(xì)胞,植物體細(xì)胞雜交是細(xì)胞的全能性,最終雜種細(xì)胞形成的是雜種植株。此題容易出現(xiàn)的思維障礙是分辨不清動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的區(qū)別。排除障礙的方法是:比較兩種工程技術(shù)的過程,從方法、手段、原理及結(jié)果等方面分析相同點(diǎn)和不同。除誘導(dǎo)融合的方法及原理有區(qū)別,其余基本相同。2(1999年廣東省高考題)下列哪一項(xiàng)屬于克隆A、將雞的某個(gè)DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B、將抗藥菌的某基因引入草履蟲的細(xì)胞內(nèi)C、將鼠骨髓細(xì)胞與經(jīng)過免疫的脾細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞D、將某種瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個(gè)細(xì)胞系【解析】“克隆”(
33、clone)又稱無性系,是從一個(gè)祖先通過無性繁殖方式產(chǎn)生許多后代,這些后代都具有相同的遺傳基因,因此D將某種瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個(gè)細(xì)胞系,一個(gè)不斷進(jìn)行有絲分裂的細(xì)胞群體,具有相同的遺傳物質(zhì),屬于克隆。A和B屬于DNA重組技術(shù),C屬于動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)。【答案】D3世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育程序如下圖所示??磮D后回答問題:()寫出圖中a、b所指的細(xì)胞工程名稱:a;b。()實(shí)施細(xì)胞工程a時(shí),所需的受體細(xì)胞大多采用動(dòng)物卵細(xì)胞的原因是_。()“多莉”面部的毛色是_,請(qǐng)根據(jù)遺傳學(xué)原理說明判斷根據(jù)_。()繼植物組織培養(yǎng)之后,克隆綿羊的培育成功,證明動(dòng)物細(xì)胞也具有_。()請(qǐng)舉一例,說明克隆綿羊成功
34、的實(shí)際意義是_?!窘馕觥?此題需要學(xué)生了解細(xì)胞全能性、核移植技術(shù)、胚胎移植技術(shù)和克隆技術(shù)等知識(shí)。核移植技術(shù)就是用顯微手術(shù)的方法將供體細(xì)胞的細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到去掉細(xì)胞核的受體細(xì)胞中。卵細(xì)胞常充當(dāng)受體細(xì)胞,因其體積較大,易于操作。這樣獲得的卵細(xì)胞相當(dāng)于一個(gè)受精卵,經(jīng)激活后,進(jìn)行胚胎發(fā)育而發(fā)育成一個(gè)新個(gè)體。核移植技術(shù)一定離不開胚胎移植,這是因?yàn)?,目前科學(xué)還不能做到在離體條件下使受精卵細(xì)胞發(fā)育成新個(gè)體,而是要把發(fā)育著的胚胎重新移植到另外一個(gè)母性動(dòng)物的子宮內(nèi),使其妊娠產(chǎn)子,也就是人們所說的 “人工妊娠”或“借腹懷胎”。在“多莉”的克隆過程中,供體細(xì)胞取自白面綿羊的乳腺細(xì)胞,經(jīng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),獲得幾千個(gè)遺傳上一致
35、的細(xì)胞;受體細(xì)胞則取自蘇格蘭黑綿羊的卵細(xì)胞。然后科學(xué)家先除去卵細(xì)胞中的細(xì)胞核,然后通過細(xì)胞融合,將供體細(xì)胞的核引入,再將由此而形成的新的胚胎移植到另一綿羊體內(nèi)。如果小綿羊能夠產(chǎn)出,其細(xì)胞核內(nèi)的遺傳物質(zhì)全部來自白面綿羊,因此它也應(yīng)為白色的小綿羊。動(dòng)、植物個(gè)體都是由一個(gè)受精卵發(fā)育來的,受精卵要經(jīng)過許許多多次有絲分裂,使細(xì)胞增殖,同時(shí)增殖的細(xì)胞還不斷分化出不同的細(xì)胞、組織等。有絲分裂過程中,細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)總是精確地拷貝一份再平均分配到子細(xì)胞中去,每一個(gè)細(xì)胞都包含本物種全套的遺傳物質(zhì)。因此,動(dòng)、植物細(xì)胞具有發(fā)育成一個(gè)新個(gè)體的潛能,這叫做“細(xì)胞的全能性”。植物組織培養(yǎng)的成功證明了植物細(xì)胞的全能性;克隆
36、綿羊“多莉”的誕生,證明了動(dòng)物細(xì)胞也具有全能性。克隆綿羊培育成功的實(shí)際意義很廣泛。如對(duì)于保存瀕危物種、繁育優(yōu)良品種、醫(yī)學(xué)上克隆器官等?!敬鸢浮?()細(xì)胞核移植胚胎移植()卵細(xì)胞體積大,易操作,通過發(fā)育可直接表現(xiàn)出性狀來。()白色“多莉”的全部細(xì)胞核基因來自白面綿羊()全能性()保存頻危物種,繁殖優(yōu)良品種,醫(yī)學(xué)上克隆器官4科學(xué)工作者用綠色和紅色熒光染料,分別標(biāo)記人和鼠的細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì),然后將兩個(gè)細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞。起初,一半膜發(fā)綠色熒光,另一半膜發(fā)紅色熒光。一段時(shí)間后,兩種顏色的熒光點(diǎn)均勻分布,如下圖所示。 (1)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明細(xì)胞膜 。這是因?yàn)?。(2)若在兩個(gè)細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞后,將融合細(xì)
37、胞置于0條件下保持40分鐘,則融合細(xì)胞仍是一半膜發(fā)綠色熒光,另一半膜發(fā)紅色熒光,這說明 ?!窘馕觥浚河脽晒馊玖蠘?biāo)記的是人和鼠的細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì),在37條件下,經(jīng)過40分鐘后融合細(xì)胞中兩種顏色的熒光點(diǎn)均勻分布,說明膜上蛋白質(zhì)分子是不斷運(yùn)動(dòng)著的。細(xì)胞膜的化學(xué)成分包括磷脂分子和蛋白質(zhì)分子,很多實(shí)驗(yàn)證明磷脂分子也是可以運(yùn)動(dòng)的。組成細(xì)胞膜的蛋白質(zhì)分子與磷脂分子的不斷運(yùn)動(dòng),使細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性。細(xì)胞膜的流動(dòng)性會(huì)受到很多因素的影響,如溫度、PH值、金屬離子以及離子強(qiáng)度等。第二問是將融合細(xì)胞放在0條件下經(jīng)過40分鐘,沒有不同顏色的熒光混合現(xiàn)象發(fā)生,說明低溫下,細(xì)胞的流動(dòng)性受到抑制?!敬鸢浮浚海?)具有一定
38、的流動(dòng)性 細(xì)胞膜 的磷脂分子和蛋白質(zhì)分大都是可以運(yùn)動(dòng)的。(2)細(xì)胞膜的流動(dòng)性受溫度的影響,在低溫條件下,磷脂分子和蛋白質(zhì)分子的運(yùn)動(dòng)受到抑制。習(xí)題精選第二節(jié) 細(xì)胞工程簡(jiǎn)介 二 動(dòng)物細(xì)胞工程一選擇題1進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常選用的培養(yǎng)材料是( ) A衰老退化的動(dòng)物組織細(xì)胞 B成熟動(dòng)物個(gè)體的體細(xì)胞 C動(dòng)物的受精卵細(xì)胞 D動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物個(gè)體的細(xì)胞2為使培養(yǎng)的動(dòng)物組織細(xì)胞分散開,以便配制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液,選取的動(dòng)物組織進(jìn)行處理時(shí)應(yīng)首先選用下列物質(zhì)中的( ) A胃蛋白酶 B胰蛋白酶 C鹽酸 D胰脂肪酶3動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的用途是( )A制備單克隆抗體B制備大量動(dòng)物細(xì)胞C制備胚胞 D成功進(jìn)行細(xì)
39、胞核移植4獲得大量單克隆抗體必須用單個(gè)的B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖,形成細(xì)胞群。其原因是( ) A在體外培養(yǎng)條件下B淋巴細(xì)胞可以無限增殖 B每一個(gè)B淋巴細(xì)胞都參與特異性免疫反應(yīng) C在動(dòng)物體內(nèi)B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的抗體 D每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體5在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中,有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去,這種傳代細(xì)胞稱為( ) A原代細(xì)胞 B傳代細(xì)胞 C細(xì)胞株 D細(xì)胞系6關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述錯(cuò)誤的是( ) A用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織 B將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞 C在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離,制成懸浮液 D動(dòng)
40、物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右,所培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)衰老死亡7“生物導(dǎo)彈”是指( ) A單克隆抗體 B雜交瘤細(xì)胞 C產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞 D在單克隆抗體上連接抗癌藥物8(2003年江蘇)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與一種B淋巴細(xì)胞融合,可使融合的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體,其依據(jù)是(多選題)( )AB淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體,但不能無限增殖BB淋巴細(xì)胞只有與骨髓瘤細(xì)胞融合后才能產(chǎn)生抗體C骨髓瘤細(xì)胞可以無限增殖,但不能產(chǎn)生抗體D骨髓瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體,但不能增殖9下列對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述正確的是A、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的是獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散C、細(xì)胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培
41、養(yǎng)的過程中D、培養(yǎng)至50代后的傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞株10關(guān)于制備單克隆抗體的敘述正確的是 A、單克隆抗體產(chǎn)自淋巴細(xì)胞 B、單克隆抗體的制備要經(jīng)過細(xì)胞融合C、單克隆抗體的獲得不需要使細(xì)胞癌變D、誘導(dǎo)融合的手段相同11試管嬰兒試管苗克隆羊 這三者可以說是現(xiàn)代生物工程技術(shù)的杰出成就,它們的誕生所依據(jù)的生物學(xué)原理最接近的是 A、 B、 C、 D、二非選擇題1(2003年上海)已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑,其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑,但一般不分裂增殖。將這兩種細(xì)胞在試管中混合,加聚乙二醇促融,獲得雜種細(xì)胞。請(qǐng)回答:(1)試管中除融合的雜種細(xì)胞外,還有_種融合細(xì)胞。(2)設(shè)計(jì)一方法(不考慮機(jī)械方法),從培養(yǎng)液中分離出雜種細(xì)胞,并說明原理:方法:_。原理:_。(3)將分離出的雜種細(xì)胞在不同條件下繼續(xù)培養(yǎng),獲得A、B、C三細(xì)胞株。各細(xì)胞株內(nèi)含有的人染色體如表(“+”有,“-”無)測(cè)定各細(xì)
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